新生儿溶血病的实验室检查

输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程1、目的：规范血液免疫学产前检查操作，确保试验过程及结果的准确性与可靠性。

2、范围：本规程适用于实验室血液免疫学产前检查试验操作。

3、职责：经授权的血型实验室试验人员负责血液免疫学产前检查试验过程及报告的发出。

4、原理孕妇和丈夫ABO血型不合（O/A、O/B、O/AB、A/B、A/AB、B/A、B/AB）时，孕妇体内的IgG抗A（B）可能会引起新生儿溶血病的发生。

本试验通过检测孕妇血清中有无IgG性质的抗A（B）抗体及其效价（应用巯基试剂破坏IgM抗体，检测IgG抗体效价）即可预测ABO系HDN发生的可能性。

应用筛选红细胞可检测孕妇血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，确定抗体的特异性，进一步检测非ABO系新生儿溶血病。

5、所需设备、材料或试剂：37℃恒温水浴箱、细胞洗涤离心机、抗-A抗-B血型定型试剂（单克隆抗体）、抗-D RH血型定型试剂（单克隆抗体）、凝聚胺介质试剂、抗人球蛋白试剂（抗-IgG、C3d）、（A、B、O）型标准红细胞悬液（2—5%）、商品化筛选细胞、谱细胞、2—ME试剂、12×75mm试管、塑料滴管。

6、检测环境条件：温度：18—25℃；湿度：30—70%7、标本要求7.1标本接收在接收标本时，应尽可能的了解、核对、记录患者的相关资料，包括受血者姓名、年龄、性别、临床诊断、输血史、用药史、妊娠史、标本编码等；7.2检验人员收到被检者产前检查申请按照申请单内容在试管上做标记(用记号笔在试管上标明被检者姓名、性别)，保留申请记录。

7.3按照要求进行血液采集。

将采好的血液沿试管壁注入已标识的抗凝试管中，反复颠倒混匀，放入2-8℃冰箱待用。

并填写《外来标本交接记录》及相关记录。

7.4标本的种类与数量：产前检查需送夫妇血样，血样均需抗凝（EDTA抗凝），女（母）5ml，男3ml。

7.5标本的保存与处理：完成所有试验内容后，要仔细核对实验结果，发出实验报告后，将实验所用的标本原始送检管存于2-8℃冰箱内至少7天以便进行查找和核对，之后交由单位相关部门统一处理。

新生儿溶血的诊断标准新生儿溶血的诊断标准主要包括以下几个方面：1. 症状诊断：如果新生儿出现贫血、黄疸、肝脾肿大等症状，应考虑新生儿溶血的可能性。

特别是当母亲是O型血，父亲是AB型血，或者母亲是Rh阴性血（熊猫血），父亲是Rh阳性血时，更应考虑新生儿ABO溶血或Rh 溶血的可能。

2. 血型检查：如果母子血型不合，可能存在新生儿溶血。

例如，母亲是O型血，父亲是AB型血，新生儿是A型或B型血，就可能发生ABO溶血。

3. 实验室检查：实验室检查包括改良Coombs试验和抗体释放试验等。

如果这些试验中有一项阳性，即可确诊新生儿溶血。

同时，血常规检查也可能发现白细胞偏高或正常，血红蛋白偏低，肝功明显升高，网织红细胞升高，以及抗人球蛋白试验阳性等表现。

4. 产前诊断：对于既往有不明原因死胎、流产、新生儿中毒黄疸史的孕妇及其丈夫，应进行ABO、Rh血型检查，不合者进行孕妇血清中IgG抗A或抗B检测。

如果孕妇血清中IgG抗A或抗B>1:64，提示有可能发生ABO溶血病。

Rh阴性孕妇在妊娠16周时应检测血中Rh血型抗体做为基础值，以后每2-4周检测一次，当抗体效价上升时，提示可能发生Rh溶血病。

5. 其他症状：新生儿溶血病还可能导致胎儿水肿，主要发生在Rh溶血病中。

在胎儿期有大量红细胞破坏，患儿全身水肿、苍白、皮肤瘀斑、胸腔积液、腹水、心音低、心率快、呼吸困难、肝脾肿大。

胎盘也明显水肿，胎盘重量与新生儿体重之比可达1∶(3～4)，严重者可发生死胎。

综上所述，新生儿溶血的诊断需要综合考虑临床症状、血型检查和实验室检查结果。

如有疑虑，请及时就医咨询专业医生。

新生儿溶血病的诊断与鉴别诊断发表时间：2019-08-09T13:52:14.520Z 来源：《中国蒙医药》2019年第4期作者：张如婧1 许梅花2 廖常希1[导读] 新生儿溶血病是指母胎血型不合而引起的胎儿或新生儿的免疫性溶血性疾病[1]。

张如婧1 许梅花2 廖常希11莆田学院附属医院福建省莆田市；2 莆田学院福建省莆田市新生儿溶血病是指母胎血型不合而引起的胎儿或新生儿的免疫性溶血性疾病[1]。

本文针对新生儿溶血病的发病机制、实验室相关诊断及新生儿黄疸鉴别诊断的现状作简要概述。

1.新生儿溶血病的发病机制在妊娠晚期，部分胎儿红细胞经胎盘进入母体循环，其红细胞表面抗原可刺激母体产生相应的IgG类免疫抗体，随后再次通过胎盘进入胎儿的血液循环，并与胎儿红细胞膜上的相应抗原结合，使红细胞发生凝集，于胎儿脾脏中被巨噬细胞破坏导致溶血[2]。

在人类30多个血型系统中，可引起新生儿溶血病的血型系统有ABO、RhD、Kidd、Duffry、Kell、MNS等血型系统，我国以ABO血型不合最常见，约占新生儿溶血病的85％，Rh血型不合约14.6％，MN血型不合约0.1％[3-5]。

ABO血型不合溶血病多见于O型孕产妇产非O型胎儿，第一胎即可发病，这是自然界的食物、植物、细菌中广泛存在类A、B抗原物质，孕妇在孕前接受过类A、B物质的刺激，机体针对该物质产生IgG抗A（B），因此在初次妊娠时体内的IgG抗A（B）即可通过胎盘导致胎儿或所产新生儿发生溶血病[6]。

与ABO血型系统不同的是，Rh血型系统中的Rh抗体必须由Rh抗原阳性红细胞免疫刺激后产生，因此第一胎不发病，往往从第二胎起发病。

由于D抗原在胎儿红细胞上表达较早且免疫原性强，Rh血型不合引起的新生儿溶血病症状较严重、预后差[7]。

新生儿溶血病的临床表现一般为贫血、黄疸、胎儿水肿、胆红素脑病、肝脾肿大，甚至死亡[8]，严重威胁新生儿的生命安全。

2.实验室检查2.1外周血常规检查外周血检查可见红细胞计数降低，血红蛋白降低（<145g/L），网织红细胞升高，研究表明RET%升高时提示患新生儿溶血病的概率大[9]。

336例新生儿溶血三项试验检测结果分析摘要】目的：了解高胆红素血症患儿的新生儿溶血病（HDN）发病情况。

分析常备溶血三项试验诊断HDN的临床价值。

方法：对2013年1月～2014年6月我院新生儿科收治的336例疑似HDN患儿的临床资料进行回顾性分析。

结果：抗体释放试验诊断HDN百分率为70.08%，直接抗人球蛋白试验为23.51%，游离抗体试验为47.92%。

直接抗人球蛋白试验和游离抗体试验诊断HDN敏感性仅为29.73%和61.39%，易漏诊。

0～2dHDN检出率为79.54%，3～5d为16.22%。

A型血患儿发生HDN百分率为82.86%，B型血患儿为70.81%，二者差异显著（P<0.05）。

结论：与抗体释放试验诊断HDN相比，直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验有漏诊风险。

抗体释放试验是诊断HDN主要依据。

临床对有症状或怀疑HDN患儿应在出生48h内进行检测。

【关键词】新生儿溶血病；溶血三项试验【中图分类号】R72 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）04-0117-01新生儿溶血病（HDN）并发黄疸较轻时与生理性黄疸相似。

实验室溶血三项试验（直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验、抗体释放试验）检测是区分HDN与生理性黄疸的重要手段，其中抗体释放试验可用于HDN的确诊[1]。

为进一步了解我院高胆红素患儿HDN发病率及溶血三项试验诊断HDN的临床价值，本研究回顾性分析了336例疑似患HDN的高胆红素患儿的溶血三项试验结果并对其进行分析，现报道如下。

1.资料与方法1.1 一般资料2013年1月～2014年6月我院新生儿科母婴血型不同且患高胆红素血症、疑似HDN患儿336例，年龄1～29d，男 158例，女 178例，其母亲血型均为O 型。

患儿出生天数0～2d、3～5d、6～9d、>10d的人数分别为248例（73.81%）、73例（21.72%）、5例（1.49%）和10例（2.98%）。

新生儿溶血病(HDN)实验室检查一、父母及新生儿血型鉴定目的：研究父母、新生儿血型与新生儿溶血病的关系原理：用已知的IgM类特异抗体与受检红细胞在室温条件下、盐水介质中反应，根据红细胞是否出现凝集来测定受检者细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定受检者的血型。

器材：小试管、记号笔、试管架、离心机、玻片、显微镜试剂：标准抗A、抗B血清、单克隆IgM型RhD抗血清（商品试剂）生理盐水标本：抗凝静脉血或末梢血实验步骤：制备受检者5%红细胞生理盐水悬液：抗凝血离心或红细胞自然沉降后取管底下层的红细胞大约10滴于小试管中，加入生理盐水2ml，充分混匀红细胞与生理盐水。

2500r/min离心3min后弃上清液，重复洗涤3次。

自管底吸取1滴压积红细胞加入19滴生理盐水混匀，此即为5%的红细胞生理盐水悬液。

1、玻片法（1）取洁净的玻片1块，用记号笔画出小格，标明A、B、D（2）在玻片已标记的区域内滴加抗A、抗B血清、RhD抗血清各1滴（3）在滴加抗血清的小格中分别加入受检者5%红细胞生理盐水各1滴；不断轻轻转动玻片，使抗血清与红细胞充分混匀，持续约1~5min（4）观察并判断结果肉眼观察有无凝集或溶血反应，再用低倍镜观察，判断阴性、阳性和阳性强度。

2、试管法（1）取小试管3支，分别标记A、B、D（2）分别滴加抗A、抗B血清、RhD抗血清于相应标记的试管中（3）分别滴加受检者5%红细胞生理盐水悬液1滴于试管中，混匀（4）以1000r/min离心1min（5）观察并判断结果取出试管，先观察上层清液有无溶血现象，再将试管轻轻摇动使沉于管底的红细胞浮起，肉眼观察有无凝集及凝集强度。

注意事项：1、器材：所用器材必须干燥洁净、防止溶血；为避免交叉污染，试管、尖滴管均一次性使用。

2、试剂：分型血清质量性能应符合合格实际要求。

3、标本：受检红细胞标本新鲜，无细菌污染。

4、标准抗血清从冰箱取出待其平衡致室温后在使用，用毕后应尽快放回冰箱保存，减少细菌污染。

新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程1、目的为规范输血科HDN血型血清实验诊断的技术操作，确保检测结果准确，明确HDN诊断及其原因，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。

2、适用范围本文件适用于本院输血科对HDN进行血型血清学实验诊断及其实验操作技术的规范化管理。

3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。

4、试验方法及原理4.1试验方法：微柱凝胶卡式法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。

当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。

离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。

5、样本采集和处理取患儿不抗凝血1-2ml及EDTA-K2抗凝血3〜4ml,24小时内送检。

将不抗凝血离心分离出血清备用。

6、试剂：5.10.9%的生理盐水；5.2戴安娜合血卡；5.3血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）、抗D标准血清；5.45%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；5.5长春博迅公司的血型定型试剂卡；7、仪器：1）XTL-4.7细胞洗涤离心机；2）DiaMed-IDIncubator37SI温育器；3）DiaMed-IDCentrifuge12SII7.5操作程序：7.5.1婴儿及母亲ABO血型鉴定是检查第一步，以便考虑以后进一步检查程序。

7.5.2如母子ABO不合（母。

子A、B,母A子B、AB,母B子A、AB）则按下列步骤进行患儿血液三项试验：⑴直接抗人球蛋白试验（DAT）（微柱凝胶卡式法）1）取患儿不抗凝血离心后，用0.9%的生理盐水配成0.8%的红细胞悬液。

2）在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，加入配好的患儿红细胞悬液50口1。

3）将卡放入戴安娜离心机离心10分钟后判读结果。

4）结果观察：5）阳性：红细胞凝集，在凝胶柱中或表面形成红线。

新生儿溶血三项试验检查及相关临床分析摘要】目的：了解新生儿溶血病(HDN)发病情况、分析溶血三项检测试验的重要性。

方法：对2012年4月~2013年8月广西区妇幼保健院448例母婴血型不合、高疸血症病例的临床资料进行回顾性分析。

结果： 448例患儿中排除HDN6例，确诊ABO-HDN392例，可疑56例，总阳性率875%，不同试验阳性率比较有显著差异(P<o．05),不同日龄患儿组间阳性率有显著差异(P<001)。

结论：溶血三项试验是新生儿溶血病的可靠诊断依据。

ABO-HDN在出生后0一2 d组高发于其他组别，且随着时间的延长其检出率逐渐降低。

【关键词】ABO 血型不合；新生儿溶血病；溶血三项试验【中图分类号】［R5566+3］【文献标识码】B【文章编号】1674-8999(2013)08-0258-01新生儿溶血病（HDN）［1］是由于母婴血型不合，母亲体内产生的 IgG 血型免疫抗体通过胎盘进入胎儿体内，使胎儿红细胞破坏。

临床上以ABO-HDN较为多见，血型血清学检查能为新生儿溶血病患儿的换血和治疗提供依据，现就对本院448 例新生儿黄疸患儿进行了溶血三项检测现报告如下。

1资料与方法11一般资料：2012年4月~2013年8月本院新生儿母婴血型不合、高胆血症患儿448 例，日龄0~41d，男 226 例，女222例；O-A型194例，O-B型228例，O-O型6例。

1 2 试剂与仪器：抗－A、抗-B、抗－D血清试剂、ABO标准红细胞由上海血液生物医药有限公司提供；微柱凝胶卡、DiaCidel 放散试剂、37℃孵育器、卡式离心机均为DiaMed公司生产。

13方法：标本进行ABO和Rh血型鉴定及溶血三项试验，具体操作参照文献［2］。

HDN的检验诊断标准：母婴血型不合，新生儿血浆和(或)红细胞放散液中检出了可致敏新生儿红细胞的血型抗体者可诊断为HDN，以抗体放散试验为最终诊断标准。

14统计学分析： PEMS31软件进行分析，P＜001有统计学意义。

新生儿溶血病血清学检查标准操作规程(一)检验目的检测孕妇产前与其丈夫ABO及Rh血型相容性、孕妇IgG 抗体效价、产后新生儿体内不相容抗体存在情况、新生儿与产妇之间血型相容性，为新生儿溶血病的预防、诊断及治疗提供可靠的实验室依据。

(二)检验原理新生儿溶血病是由母婴血型不合，母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内，破坏新生儿或胎儿红细胞而引起，可发生在胎儿期和新生儿早期，溶血严重者可出现死胎而流产，存活者则有不同程度的新生儿黄疸。

新生儿溶血病产前诊断方法主要包括检测胎儿父母的ABO及Rh血型、孕妇不规则抗体筛查、外周血抗A ／抗B或Rh抗体效价来判断新生儿溶血病发生的可能性及严重程度；新生儿溶血病产后诊断主要包括母子ABO及RhD 血型鉴定试验、新生儿标本三项试验，为临床诊断及进一步采取治疗手段提供可靠的依据。

(三)适用范围适用于新生儿溶血病产前、产后血型血清学试验。

(四)设备性能参数参见血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Ortho BioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书。

(五)器材与试剂1.器材血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Or-tho BioVue离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液枪、一次性移液枪头。

2.试剂DiaMed ABO／RhD血型卡、OrthoBioVueABO ／RhD血型卡、抗A、抗B血清、Rh分，型血清、生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆)、抗体筛查试剂红细胞、抗体鉴定试剂红细胞、致敏的阳性对照细胞(自制)。

(六)标本要求1.夫妇标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。

2.患儿标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无明显乳糜。

新生儿ABO溶血症ABO溶血病的*些轻型病例，可能早期病症不重，但到生后2～6周发生晚期贫血，或到生后8～12周"生理性贫血〞时期贫血表现得特别严重，这是因为抗体持续存在，发生慢性溶血所致。

血型抗体可使红细胞寿命缩短。

据报道，这类小儿红细胞的寿命仅35天左右，每天血红蛋白下降值约为同期正常小儿的4倍，红细胞破坏增加，而这时骨髓造血功能生理性低下，不能有效地代偿，终致发生新生儿晚期贫血(neonatal late anemia)。

2.生后诊断(1)临床表现：观察新生儿有无贫血、水肿、黄疸和肝脾大等溶血病症，假设有应考虑新生儿溶血病。

(2)实验室检查：对于出生时有水肿、贫血、出生后24h内出现黄疸及母亲为Rh阴性的新生儿应考虑新生儿溶血病，需做血常规、母婴血型、血清胆红素和Coombs试验。

新生儿ABO溶血病应该做哪些检查？1.血液学检查红细胞及血红蛋白多数在正常范围，血红蛋白在100g/L 以下者仅占5%左右，网织红细胞常增多，重型病例有核红细胞可达10%以上。

红细胞形态特点是出现球形红细胞，而且红细胞盐水渗透脆性和自溶性都增加。

2.血清学检查(1)胆红素测定：由于ABO溶血病的程度差异较大，故血清胆红素增高的程度也不一致，血清总胆红素超过342"mol/L(20mg/dl)以上约占1/4。

总之，ABO溶血病的黄疸程度较轻。

有人统计86例AO溶血病新生儿胆红素值，其平均值为(131.7±83.8)"mol/L[(7.7±4.9)mg/dl];BO溶血病新生儿66例，其平均胆红素值为(126.5±71.8)"mol/L[(7.4±4.2)mg/dl]。

在血清胆红素中，以未结合胆红素增高为主。

(2)抗体测定：在新生儿红细胞或血清中查出对抗其自身红细胞的血型抗体，是诊断ABO溶血病的主要实验根据。

一般进展3种试验：第一是改良Coombs试验，这是用"最适稀释度〞的抗人球蛋白的血清查出附着在患儿红细胞上的抗体;第二是抗体释放试验，这是用加热的方法，使患儿红细胞上的抗体释放出来，再检查释放液中的抗体。