从西洋参中提取分离纯化人参皂苷Rb1和人参皂苷Re 的研究
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人参与西洋参皂苷类成分的比较研究【摘要】目的:研究人参和西洋参中人参皂苷含量的差异性。
方法:采用高效液相法测定人参与西洋参中的各单体皂苷含量。
结果:西洋参中人参总皂苷大约是人参中的2倍以上;西洋参中人参皂苷rb1含量远高于人参中rb1的含量,人参皂苷re含量是人参中re 的4.8倍,人参皂苷rd含量是人参中rd的2倍。
而人参中人参皂苷rg1含量是西洋参中rg1的2.4倍,人参皂苷rf、rg2、rb2的含量明显高于西洋参中相应单体皂苷的含量,而人参单体皂苷rc、rb3在人参和西洋参中的含量相差不大。
结论:人参与西洋参的总皂苷和各单体皂苷的含量差异性较大,期望结合人参单体皂苷的药理活性,更合理地指导临床应用。
【关键词】人参;西洋参;人参单体皂苷;hplc法人参(panax ginseng c.a.mey.)和西洋参(panax quinquefolius l.)均为五加科人参属植物,具有大补元气、补脾益肺、生津、安神益智的功效[1]。
人参和西洋参均为同科同属不同种植物的根,而且主要活性成均分为人参皂苷类物质,但两者的皂苷类成分存在差异性,致使人参和西洋参的药效也不相同。
陈英杰等[2]研究表明人参的特征性成分为人参皂苷rf,而西洋参的特征性成分为拟人参皂苷f11。
西洋参中人参单体皂苷rb1为首,且含量远高于人参,致使西洋参具有明显的抑制中枢神经的作用[3]。
人参中人参单体皂苷rb2、re、rg1的含量明显高于西洋参中相应的单体皂苷,研究证明其与人参具有兴奋中枢神经,强壮筋骨及抗疲劳的作用相关[4]。
人参和西洋参现广泛应用于临床,本实验对两者的单体皂苷类成分做进一步深入的比较研究,期望作为人参和西洋参鉴别的一项重要手段,同时为人参和西洋参的活性成分和药理作用的研究提供理论依据,更合理地指导临床用药。
1实验材料、仪器及试剂1.1实验材料:人参( panax ginseng c. a. mey )和西洋参(panax quinquefolius l.)的3批样品均为4年生园参,于2009年10月采集,经吉林农业大学中药材学院张连学教授鉴定均为人参和西洋参正品,样品洗净烘干至恒重,并粉碎过60目筛,备用。
西洋参中皂苷类成分的研究作者:鲍建材、刘刚、郑友兰、张崇禧西洋参(Panax quinquefolius L.)系五加科人参属植物,原产于加拿大和美国,由于其具有广泛的生物活性和独特的药理作用,多年来一直深受世界各国人民的喜爱。
西洋参中的化学成分比较复杂,包括皂苷类、挥发油类、氨基酸类、糖类和聚炔类等,但主要是皂苷类成分。
人类对西洋参的研究可追溯到19世纪,早在1854年美国一学者便从西洋参中分离得到了第一个皂苷类成分,但对西洋参全面深人的研究却始于20世纪70年代。
迄今为止,中外学者已从西洋参中分离鉴定出的皂苷类成分有3种:达玛烷型(Dammarane),齐墩果烷型(Oleanane),奥克梯隆醇型(Ocotillol)。
而分离出的人参皂苷40余种。
根中皂苷的研究1976年,李向高从美国产西洋参中分离得到3种皂苷元,即人参二醇、人参三醇和齐墩果酸皂苷元。
1978年日本学者真田修一等从日本长野引种的西洋参中分离出人参皂苷Ro、Rb1、Rb2、RC、Rd、Re。
1982年Besso,H.等分离出7种皂苷,即Rg1、Rg2、Rb3、Rb1、F2,绞股蓝皂苷Ⅺ和西洋参皂苷R1(quenquinoside-R1)。
张崇禧从国产西洋参中分得人参皂苷RO、Rb1、Rb3。
Rc、Rd、Re等。
1983年魏均娴等从西洋参根中分得Ro、Rb1、Rg1、Re和pseudo-ginsenoside-F11(简称P-F11),P-F11是西洋参中的特有成分,是鉴别西洋参和人参的显著标志。
1985年松浦等从西洋参根中分离出13种皂苷,包括人参皂苷Rb1。
Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2、F2。
拟人参皂苷F11(pseudoginsenoside-F11),绞股蓝苷XVⅡ(gynostenoside-XV Ⅱ)和一种新的皂苷,即西洋参皂苷R1。
1987年徐绥绪等从辽宁栽培的西洋参根中分得:RO、Rb1、Rb2、Rd、Re、Rg1。
基于人参皂苷含量的西洋参等级规格标准研究周海燕;赵润怀;付建国【摘要】目的:分析不同产地、不同等级规格西洋参中人参皂苷的含量,评价西洋参的化学信息,为其行业标准的制定提供实验依据.方法:采用UPLC测定主要活性成分人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg2含量,用SPSS16.0软件进行统计分析.结果:建立了不同产地西洋参样品人参皂苷分布特征图谱;西洋参中Rg1、Re、Rb1的含量之和符合《中国药典》标准;方差分析表明产地、长度对同一个规格的西洋参中人参皂苷的含量影响具有统计学意义(P<0.01).结论:由于西洋参中人参皂苷含量受产地、长度、重量等多因素影响,在等级规格评价中,符合《中国药典》标准基础上不宜采用人参皂苷含量为指标进行等级规格划分.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2014(016)006【总页数】5页(P454-458)【关键词】西洋参;等级规格;人参皂苷【作者】周海燕;赵润怀;付建国【作者单位】中国药材公司,北京 102600;中国药材公司,北京 102600;黑龙江东度参业科技发展有限公司,黑龙江海林157100【正文语种】中文西洋参Panax quinquefolium L.为五加科植物,味甘、微苦,性凉;入心、肺、肾经;具有补气养阴、清热生津的功能[1],原产于美国东部和加拿大,我国已有大面积栽培[2],现国产栽培西洋参主产于吉林、黑龙江、北京、山东等地。
根据目前西洋参市场状况、消费者的习惯及国产栽培西洋参精加工后的形态特征,依据长度、单支重量可将西洋参商品划分成不同规格,例如8 g长支、8 g中支、15 g 短支。
人参皂苷(ginsenosides)是西洋参的主要活性成分和重要质量控制指标[3],其含量是人参的3~4倍,具有抗肿瘤、抗癌、降血压、降血脂、抗疲劳等多方面的药理活性[4]。
本文应用UPLC测定主要活性成分人参皂苷含量,详细分析了不同产地、同一等级规格西洋参以及同一产地、不同等级规格西洋参中人参皂苷的含量,为全面系统评价不同产地、不同等级规格西洋参的质量提供了科学依据。
不同方法测定不同产地西洋参中人参皂苷含量高晖富;姜丽萍;姜志辉;丛众正;鞠晓东;张瑞瑞;林一飞;张崇禧【摘要】目的比较研究不同产地西洋参中人参皂苷含量.方法采用HPLC和比色法.结果不同产地西洋参中人参皂苷含量相近.结论该方法分离效果好、准确、快速、样品制备简单.【期刊名称】《人参研究》【年(卷),期】2017(029)004【总页数】3页(P6-8)【关键词】人参皂苷-Rg1;人参皂苷-Re;人参皂苷-Rb1;人参总皂苷;不同测定方法【作者】高晖富;姜丽萍;姜志辉;丛众正;鞠晓东;张瑞瑞;林一飞;张崇禧【作者单位】环翠楼红参生物科技股份有限公司,威海264211;环翠楼红参生物科技股份有限公司,威海264211;环翠楼红参生物科技股份有限公司,威海264211;环翠楼红参生物科技股份有限公司,威海264211;环翠楼红参生物科技股份有限公司,威海264211;环翠楼红参生物科技股份有限公司,威海264211;环翠楼红参生物科技股份有限公司,威海264211;山东大学(威海)海洋学院,威海 264209【正文语种】中文西洋参(Panax quinquefolius L.),又称花旗参、洋参、美国人参等,美国旧称为花旗国,花旗参由此得名。
西洋参,顾名思义就是从西方国家飘洋过海来的参。
西洋参作为药用时间并不长,而它的药用开发还得益于我国人参的“提醒”。
18世纪初,加拿大传教士根据中国人参的有关资料及其标本,在当地印地安人的参与下,于加拿大南部森林中发现了与中国人参极为近似的同属植物西洋参。
之后这种植物在美国东部与南部也相继发现。
西洋参原产于美国北部和加拿大南部一带,通常照产地分成花旗参与加拿大参;加拿大是目前北美洲最大的西洋参生产国,约90%的加拿大西洋参出产于安大略省的西姆康(Simcoe)地区。
加拿大西洋参品质出众,口味和气味无与伦比。
自18世纪开始,安大略省出产的西洋参就主要出口到中国,他的卓越品质和甘甜口味深受赞誉。
人参中人参皂苷的提取、分离和测定一、本文概述二、人参皂苷的提取方法人参皂苷的提取是从人参原材料中分离和纯化目标化合物的重要步骤。
提取方法的选择直接影响皂苷的得率和纯度。
常用的提取方法包括溶剂提取法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法以及超临界流体提取法等。
溶剂提取法:这是最常见且相对简单的方法,主要利用人参皂苷在不同溶剂中的溶解度差异进行提取。
常用的溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮等。
通过浸泡、回流或渗漉等方式,使人参皂苷从原材料中溶解到溶剂中,再通过蒸发溶剂得到粗提物。
微波辅助提取法:微波提取是利用微波对溶剂和原材料的加热作用,提高提取效率和速度。
微波产生的热能可以使细胞壁破裂,加速溶剂对人参皂苷的渗透和溶解,从而缩短提取时间。
超声波辅助提取法:超声波提取是通过超声波产生的空化效应、机械效应和热效应等作用,增加溶剂对原材料的穿透力,提高人参皂苷的提取率。
同时,超声波还可以破坏细胞结构,使皂苷更容易释放到溶剂中。
超临界流体提取法:超临界流体提取是利用超临界状态下的流体(如二氧化碳)作为溶剂,通过调节压力和温度来控制流体的溶解能力,从而实现对人参皂苷的高效提取。
这种方法具有提取效率高、操作温度低、对原料破坏小等优点。
在实际应用中,可以根据人参原材料的性质、目标皂苷的特点以及实验条件等因素,选择最合适的提取方法。
为了提高提取效果,还可以结合使用多种提取方法,如先用溶剂提取法得到粗提物,再用超声波或微波辅助提取法进行进一步的纯化。
三、人参皂苷的分离技术人参皂苷的分离是提取过程后的关键步骤,其主要目标是从复杂的混合物中分离出单一或特定类型的人参皂苷。
这通常涉及到一系列的色谱技术,包括液-液分配色谱、固相萃取、柱色谱、薄层色谱以及高效液相色谱(HPLC)等。
液-液分配色谱,也称为液-液萃取,是基于不同物质在两种不相溶溶剂中的溶解度差异进行分离的。
这种方法对于初步分离人参皂苷和其他杂质非常有效。
固相萃取是一种基于吸附和解吸原理的分离技术。
不同时期人参、西洋参根中单体皂苷Rg1、Re、Rb1、Rb2含量的比较李乐;张春阁;李小沛;吕林;赵立春;张亚玉【期刊名称】《特产研究》【年(卷),期】2017(039)002【摘要】采用超高效液相色谱法测定了不同年生、不同时期的人参和西洋参根中Rg1、Re、Rb1、Rb24种主要单体皂苷的含量.结果表明,同年生、同生育期人参根中皂苷Rg1、Rb2的含量均高于西洋参根,皂苷Re、Rb1的含量低于西洋参根;3年生红果期人参根中皂苷Rg1、Rb1、Rb2含量低于3年生绿果期人参根,皂苷Re、Rb1、Rb2含量高于2年生红果期人参.3年生红果期西洋参根中皂苷Rg1、Rb1含量均低于3年生绿果期西洋参根,皂苷Re、Rb2含量高于3年生绿果期西洋参,皂苷Rg1、Rb1、Rb2含量均高于2年生红果期西洋参.【总页数】5页(P38-41,46)【作者】李乐;张春阁;李小沛;吕林;赵立春;张亚玉【作者单位】中国农业科学院特产研究所,长春130112;中国农业科学院特产研究所,长春130112;中国农业科学院特产研究所,长春130112;中国农业科学院特产研究所,长春130112;中国农业科学院特产研究所,长春130112;中国农业科学院特产研究所,长春130112【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.西洋参中人参皂苷Rg1人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量测定 [J], 刘莉;程龙琼;周世玉2.HPLC法测定不同产地西洋参中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量 [J], 李岚;陈华3.人参茎叶中提取分离人参皂苷F2、Rg1、Rb1、Rb2、Rb3单体化合物的方法[J], 王和宇;徐芳菲;王国明;李蕾;谢丽娟;郭畅冰;曹志强4.不同产地西洋参总皂苷及单体皂苷Rb1、Re、Rg1的含量测定 [J], 魏晓雨;陈增松;田义新;赵智灵;魏伟5.长芦人参、西洋参中总皂苷及单体皂苷Re,Rg1,Rb1的含量测定 [J], 姜婷;刘婷婷;李春雷;任跃英;骆长林;康岩因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
人参皂苷Rg1、Rb1及Re对人皮肤胶原代谢作用的研究李骏飞;周大兴;洪先业;蔡苗【期刊名称】《同济大学学报(医学版)》【年(卷),期】2011(032)003【摘要】目的以人成纤维细胞为载体对三种皂苷Rg1、Rb1、Re进行研究.方法MTT法测定三种药物在不同浓度下对人成纤维细胞增殖的影响,消化法检测羟脯氨酸含量.ELISA法测定细胞分泌Ⅰ型前胶原、基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制酶-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的蛋白表达情况,RT-PCR法观察上述三种蛋白的mRNA表达水平.结果与空白组比较,三种单体均能显著提高细胞增殖水平,羟辅氨酸含量、Ⅰ型前胶原的蛋白质及mRNA表达量,显著降低MMP-1蛋白质及mRNA表达量.结论人参皂苷Rg1、Re、Rb1通过影响成纤维细胞的基因及蛋白质的表达,均显著促进胶原合成、抑制胶原降解,从而提高胶原蛋白总量,改善胶原代谢.【总页数】5页(P28-32)【作者】李骏飞;周大兴;洪先业;蔡苗【作者单位】浙江省中医药大学药学院,杭州310053;浙江省中医药大学药学院,杭州310053;浙江省中医药大学药学院,杭州310053;浙江大学医学院附属第二医院神经科,杭州310009【正文语种】中文【中图分类】R961【相关文献】1.HPLC法测定人参须中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1的含量 [J], 周兰2.HPLC测定温阳振衰颗粒中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量[J], 杨磊;张曼华;蔡虎志;石继连3.UPLC-MS/MS MRM模式同时测定参白方中人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1以及Siderin 4种成分含量 [J], 石慧;谢静;宋宏伟;闫广利;韩莹;孟祥才;王喜军4.HPLC法测定含三七类保健食品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量 [J], 张治军;钟名诚;黄秋华5.HPLC法测定活血通络片中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量[J], 张松涛因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
从西洋参中提取分高纯化人参皂苷Rb1和人参皂苷Re的研究2.1 西洋参粗提液的制备
称取100g西洋参,粉碎成粗粉,用70%乙醇12倍量水浴加热回流提取3次(400mL×3),每次时间2h。
提取液减压浓缩至50mL,得西洋参粗提液。
HPLC检测发现,提取液中含有大量杂质,其主要成分有两种:人参皂苷Re(保留时间29.1min左右)和人参皂苷Rb1(保留时间50.3min左右)。
人参皂苷Re与Rb1的质量分数分别为10%和60%。
见图2。
2.2 人参皂苷Re与Rb1的初步纯化
西洋参粗提液用15倍量水(V/W)溶解上已处理好D101大孔吸附树脂柱(50×4cm,树脂为200g)。
先用水洗柱,以去除大部分杂质, 再用2%NaOH溶液洗柱以除去色素,后用2% HCl溶液洗柱,再用水洗柱至流出液中性。
最后用90%乙醇淋洗,收集流出液。
回收溶剂至干,60℃减压干燥,得干燥疏松黄白色粉末6.0g,为西洋参总皂苷。
HPLC检测, 人参皂苷Re与Rb1的质量分数分别为12.5%和65% 。
2.3 人参皂苷Re与Rb1的进一步纯化
西洋参总皂苷6.0g,用30mL70%乙醇溶解,加300mL丙酮搅拌, 析出大量沉淀,放置,过滤,沉淀干燥,得棕黄色干燥疏松粉末4.2g,为A部分。
母液回收溶剂至干,得棕黄色疏松粉末1.8 g,为B部分。
A部分中人参皂苷Rb1的质量分数提高到80%(人参皂苷Re下降为4.5% ),B部分中人参皂苷Re的质量分数提
高到40% (人参皂苷Rb1下降为30% )。
见图3、图4。
2.4 人参皂苷Re和Rb1的再进一步纯化
A部分用20mL水溶解,加200mL丙酮搅拌,析出大量沉淀,静置, 过滤, 沉淀再用20mL水溶解,加200mL丙酮同法处理,静置过滤,60℃减压干燥,得黄白色干燥疏松粉末2.6g,为人参皂苷Rb1。
HPLC 检测, 人参皂苷Rb1的质量分数为95% (人参皂苷Re为0.2% ), 见图6。
A部分丙酮沉淀的母液回收溶剂至干, 得量1. 6 g, 与B 部分合并,用30mL95%乙醇溶解,加300mL丙酮搅拌, 析出沉淀,静置,过滤,母液回收至干,再用20 mL95%乙醇溶解,加200mL丙酮同法处理,过滤,溶液回收至干, 再用丙酮同法处理一次,过滤,回收溶液至干,60℃减压干燥, 得黄白色干燥疏松粉末0.5g, 为人参皂苷Re。
HPLC 检测,人参皂苷Re的质量分数为92% (人参皂苷Rb1为3% ),见图7。
2.5 人参皂苷Re和Rb1晶体的制备
取质量分数为95%的人参皂苷Rb1 2.6 g, 用甲醇少量加热溶解, 冰箱放置析晶, 过滤, 甲醇再重结晶一次, 过滤, 60℃减压干燥,得2.0g白色沙状粉末。
HPLC检测,质量分数为98.5% (收率2.0%)。
取质量分数为92%的人参皂苷Re 0.25 g,用70%乙醇少量加热溶解,冰箱放置析晶,过滤,甲醇再重结晶一次,过滤,60℃减压干燥,得0.25g无色结晶。
HPLC 检测, 质量分数为97.5%(收率0.25%)。
四川省中医药科学院, 成都610041 HSCCC 法从人参总皂苷中分高制备人参皂苷Re与Rg1 配制乙酸乙酯- 正丁醇- 水(4∶1∶5)的溶剂系统,充分摇匀,静置分层时间26s(小于30s,可用)。
分层后将上、下相分开,以上相为固定相,下相为流动相。
先以较大流速将固定相(上相)注满管柱,开启主机,主机转速为
800r·min-1,UV 检测仪显示基线平稳后,以恒定流速1.50 mL·min-1 通入流动相(下相),待体系平衡进样。
进样量为120mg,以2mL上相+2mL下相充分溶解,在计时开始后,分离时间为4h,每10min收集一个流分。
1.1TLC鉴定条件
分别以氯仿-甲醇-水(69∶27∶4),乙酸乙酯-正丁醇-水(4∶1∶5)上相,正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶1)为展开剂。
将分高组分别加以TLC 鉴定,展开距高为7~8 cm,以10% H2504 乙醇液作为显色剂。
1. 2 鉴定结果展开剂乙酸乙酯-正丁醇-水(4∶1∶5)上相。
合并流分13和14以及16~18,二者除采用上述溶剂系统外
还采用氯仿-甲醇-水(69∶27∶4)和氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(2∶2∶4∶1,下相)与人参皂苷Re及Rg1标准品共薄层,点样量为50μg以上,二者都呈现单点并且分别和人参皂苷Re及Rg1的Rf值一致。
因此鉴定为人参皂苷Rg1(18mg)和Re(25 mg)。
(沈阳药科大学中药学院,辽宁沈阳 110016)
高效液相色谱法一重结晶法分高人参皂苷
单体Re
1.1制备用流动相的配制
配制甲醇与水体积比为40:60的流动相4000mL, 再配制甲醇与水体积比为50:50 的流动相5000mL, 纯甲醇2000ml。
以上流动相超声脱气处理。
1.2 含人参皂苷Re段组分的制备
准确称取人参皂苷粗原料10.0g, 用40mL纯甲醇超声溶解, 用流动相平衡制备柱; 然后用制备洗脱泵向柱中进原料样品, 最后用流动相洗脱, 接取馏分段, 将各馏分段收集液用薄膜旋转蒸发器在60℃浓缩, 用纯甲醇溶解收集, 在真空干燥箱中60℃烘干备用。
其中,甲醇与水体积比为50:50 的流动相冲洗段只含有人参皂苷Re和Rgl的混合物。
1.3 重结晶法制备人参皂苷Re
称量1,0g人参皂苷Re和Rg1的混合物,用20:80的V乙腈:V水
6mL超声至完全溶解后20℃下静置5h,结晶。
将白色结晶经微孔滤膜过滤,阴干,称量,收集待测,滤液放入真空干燥箱中
浓缩备用。
1.4人参皂苷Re的结构分析
对2.5中所得晶体运用核磁共振分析、高效液相色谱一质谱分析、紫外分析和红外分析进行结构分析。
2 结果与讨论
2.1 高效液相色谱法纯化人今皂苷Re和Rg1
在所选的分离条件下, 对甲醇与水体积比为50:50的流动相冲洗段色谱图如图1所示,谱图中只出现了人参皂苷Re 和Rg1 2个峰, 说明应用上述分离条件是可行的。
以
18:82-22:78 的乙腈:水为流动相进行梯度洗脱, 可以将Re 和Rg1分离,且保留时间较短,适于实际操作。
2.2 重结晶法分离人参皂苷Re
实验中分别尝试了萃取方法HPLC方法和重结晶的的方法进行人参皂昔Re的分离。
通过对各种方法的应用,发现乙酸乙醋萃取、正丁醇萃取方法萃取效果不明显且溶剂消耗较大。
应用HPLC方法中, 使用侧备柱分离人参皂昔Re 流动相消耗较多, 馏分收集比较困难。
使用重结晶方法操作简便, 节省溶剂, 避免了设备的损耗和色谱柱填料的消耗, 还可以得到纯度较高的人参皂昔单体Re。
确定了结晶溶剂为V乙腈:V 水=20:8O的混合溶液; 结晶温度为20℃、结晶时间为5h、混合物与重结晶溶荆的固液比为1:6(g/mL)的结晶条件。
如图2 所示,谱图中去掉手动更换流动相带来的干扰后, 谱图只出现2个峰, 其中时间稍长的为人参皂昔Re,含量为91%,同时结晶液中人参皂普Rg1的含量提高了。
(1
.1 辽宁科技大学分离技术中心, 辽宁鞍山n4051 ;
2. 辽宁科技大学化学工程学院应化2 仪洲〕, 辽宁鞍山n4051)。