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高效液相色谱法测定白芷维生素E乳膏中维生素E 的含量何荣芬
【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2013(017)003
【摘要】目的建立高效液相色谱法测定白芷维生素E乳膏中维生素E 的含量.方法Waters e2695 HPLC色谱系统;Empower Waters 工作站;Waters 2489 UV检测器;Platisil ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流速:1.0 mL·min-1 ;流动相:甲醇;检测波长284 nm,进样量为20 μL.结果维生素E在82.76～1 655.2 mg·L-1 的范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9).维生素E的平均加样回收率为
100.5%(n=9),RSD=0.87%.结论该方法操作简便、准确、稳定、灵敏度高,适用于白芷维生素E乳膏中维生素E的质量控制.
【总页数】2页(P399-400)
【作者】何荣芬
【作者单位】安徽省淮北市人民医院,安徽,淮北,235000
【正文语种】中文
【相关文献】
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无水乙醇: 检查是否含有醛类物质，方法: 加一定量的氨水于硝酸银溶液(50g/L) 中，直至生成的沉淀重新溶解，再加入几滴氢氧化钠溶液(100g/L) ，如再产生沉淀，则再加入氨水直至沉淀消失，此溶液则为银氨溶液。
吸取2ml 银氨溶液于干净试管中，加入0.5ml 乙醇，摇匀，再加入几滴氢氧化钠溶液(100g/L) ，于沸水浴上加热，放置冷却后，试管壁出现少量片状银镜，则乙醇需经过处理后使用。
脱醛方法：称取4g硝酸银溶解于少量水中，称取8g氢氧化钠溶于温热的乙醇中，然后将两者倒入1L的乙醇中，充分震摇后，放置暗处2d(期间不时摇动)，过滤后，于水浴中蒸馏，弃去初滤液，收集滤液，然后再检查。
1.1.3 仪器与设备Waters高效液相色谱仪e2695配2489紫外检测器美国沃特斯有限公司色谱柱 C 柱(150mm< 4.6mm 5um) 181.2 试验方法1.2.1 标准溶液的配制天然维生素 E 同系物通常为透明、淡黄色粘稠油状物，无臭无味，比重为0.950(25?) ，不溶于水，可溶于油、丙酮、乙醇、三氯甲烷和乙醚等脂溶[8] 性溶剂。
因为乙醇要进行脱醛处理，故选择甲醇配制标准溶液。
将100m①-生育酚、100m a -生育酚、25mgr -生育酚用甲醇分别定容至100ml、100ml、50ml棕色容量瓶中，将其作为1mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml 的储备液，放置冰箱保存;移取一定体积的三种生育酚储备液，配制成1mg/ml、10mg/ml，40ug/ml，60mg/ml，100mg/ml, 140mg/ml的浓度梯度的混合标准溶液。
1.2.2 单因素试验1.2.2(1 波长的确定试验以色谱条件为流动相：甲醇+水(V+V)=98+2,柱温:30?，流速:1.0ml/min ，，在紫外检测波长为280nm 290nm 292nm 294nm 300nm条件下进样量10uL做单因素试验。
实验六高效液相色谱法分离和测定α-ＶE一、实验目的1. 了解高效液相色谱仪的基本结构，掌握液相色谱仪的基本操作方法。
2. 掌握液相色谱分析的定性及外标定量方法。
二、原理1. 高效液相色谱的特点高压泵输送流动相，梯度洗脱，可在柱后直接检测流出液成分，通过改变溶剂极性或强度进而改变色谱柱效能，分离选择性和组分的容量因子，实现改善色谱系统分离度的目的。
2. 高效液相色谱仪(1) 高压输液系统，是提供足够恒定的高压，使流动相以稳定的流量快速渗透通过固定相。
(2) 进样系统，一般采用旋转式六通阀在高压下进样。
(3) 分离系统，在液相色谱柱中完成。
(4) 检测系统，液相色谱常见检测器有：紫外光度检测器，示差折光检测器、荧光检测器电化学检测器。
3. 高效液相色谱的类型根据固定相和分离机理的不同，高效液相色谱如下几种类型(1) 液—固吸附色谱：基于各组分在固体吸附剂表面上具有不同吸附能力而进行分离。
(2) 液—液分配色谱：组分在两相间经过反复多次分配各组分间产生差速迁移，从而实现分离。
(3) 化学键合相色谱：通过共价键将有机固定液结合到硅胶载体表面得到各种性能的固定相。
(4) 离子交换色谱：离子交换树脂上可电离的离子与流动相中带相同电荷的组分离子进行可逆交换，由于亲和力的不同彼此分离。
(5) 离子色谱：用离交换树酯作为固定相，电解质溶液为流动相，用电导检测器检测。
(6) 凝胶色谱：基于试样中各组分分子的大小和形状不同来实现分离。
4. 实验原理反向色谱与正相色谱组成相反，是以非极性或弱极性的固定液制成的固定相，以极性或相对强的极性溶剂作为流动相组成的液—液分配色谱。
但目前多是采用化学反应的方法将非极性或弱极性的有机物分子键合到载体表面，制成键合相的固定相，所以也称键合相色谱。
这种色谱的分离机理比较复杂，一般认为是液—固吸附和液—液分配并存。
在反向HPLC中常用的键合相有十八烷基硅烷(Ｃ18）、辛基硅烷(Ｃ8)氰基硅烷、氨基硅烷等。
前美国药典24版大部分采用细菌内毒素检查法,两年后,基本上不再利用热原检查法。
英国、意大利、德国药典、欧洲药典以及日本药局方都已收载细菌内毒素法,我国2000年版药典对细菌内毒素检查法已作了更进一步的修订,使之更合理,更与国际标准接轨。
3.2 通过对浙江三九邦而康药业有限公司生产的注射用盐酸普鲁卡因连续三个批号分别用三个厂家生产的鲎试剂进行干扰试验,结果表明注射用盐酸普鲁卡因无干扰作用。
认为可用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法。
细菌内毒素检查法具有快速、简便、费用低且灵敏度高、重现性好的优点,尤其是在药品生产过程中可快速准确地检测出中间体热源,缩短检验时间,节约成本,值得推广应用。
3.3 根据实验结果,确定注射用盐酸普鲁卡因细菌内毒素检查方法如下:取本品,依法检查(中国药典2000年版二部附录XIE ),每1mg 注射用盐酸普鲁卡因中含细菌内毒素不得超过0.6EU 。
收稿日期:2003205227高效液相色谱法测定复方维胺酯维E 乳膏中维生素E 的含量基金项目:国家药典会地标升国标课题郑国钢1,王一微2(1.浙江省药品检验所,浙江 杭州310004;2.台州医药有限公司,浙江 台州318000)摘要:目的 采用HPLC 测定复方维胺酯维E 乳膏中维生素E 的含量。
方法 以Symmetry C 18为分析柱,甲醇为流动相,检测波长为285nm 。
结果 平均回收率分别为99.8%。
结论 方法简便,结果准确,可用于该制剂质量控制。
关键词:维胺酯;维生素E ;高效液相色谱法中图分类号:R286;R917.01 文献标识码:B 文章编号:100727693(2004)0420321202Determination of vitamin E in compound viaminate and vitamin E creamZHEN G Guo 2gang 1,WAN G Y i 2wei 2(1.Zhengjiang Institute f or Drug Cont rol ,Hangz hou 310004,China )ABSTRACT :OB JECTIVE To establish a method for the determination of vitamin E in compound viaminate and vitamin E cream by HPLC.METH OD The Symmetry C 18column was used.The mobile phase was methanol.The detection wavelength was set at 285nm.RESU LTS The average recovery was 99.82%.CONC L USION Results obtained showed that it ’s a reliable and accurate method for the quality control of compound viaminate and vitamin E cream .KE Y WOR DS :viaminate and vitamin E cream ;vitamin E ;HPLC 复方维胺酯维E 乳膏用于痤疮,颜面播散性粟粒狼疮,毛发红糠疹,毛囊角化症等皮肤病。
高效液相色谱法测定VE胶囊中α-VE的含量一、目的要求1．了解高效液相色谱仪的基本构造和工作原理。
2．掌握高效液相色谱仪的正确操作方法。
3．学习维生素E的定量分析方法。
二、实验原理色谱法的分离原理是：溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号被检测。
高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)。
按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。
液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。
RPC一般用非极性固定相（如C18、C8），在现代液相色谱中应用最为广泛，约占整个HPLC应用的80%左右。
维生素E又称生育酚，目前已经确认的有8种异构体，αβγδ生育酚和αβγδ生育三烯酚，天然存在的α-生育酚的维生素E活性最强。
α-生育酚醋酸酯是α-生育酚的酯化产品，常用在维生素胶囊中，具有很强的氧化稳定性。
样品以乙醇溶解，采用RPC法，以乙醇为流动相，C18色谱柱分离，紫外检测器284 nm 波长检测，外标法定量，测定维生素E胶囊中α-生育酚醋酸酯的含量。
三、仪器和试剂维生素E醋酸酯标准品、色谱纯乙醇、分析纯四氢呋喃、无水乙醇。
HPLC高效液相色谱仪（日本岛津，LC-10A 泵，SPD-20A 紫外双波长检测器）、KQ5002B型超声波清洗器、、紫外可见分光光度计。
四、实验条件色谱柱为Eclipse XDB-C18柱( 150 mm × 4. 6 mm，5 μm i. d. ) ; 流动相为乙醇，流速0.5 mL /min; 进样量20 μL; UV 检测器，检测波长为284 nm(通过紫外分光光度计扫描确定)。
饲料中维生素E的测定高效液相色谱法1范围本文件描述了饲料中维生素E的高效液相色谱测定方法。
本文件中“第一法皂化提取法”适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、复合预混合饲料和维生素预混合饲料中维生素E（dl-α-生育酚）的测定，“第二法直接提取法”适用于维生素预混合饲料、复合预混合饲料中维生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）的测定。
本文件“第一法皂化提取法”的定量限为1mg/kg，“第二法直接提取法”的定量限为20mg/kg。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。
4第一法皂化提取法注意：使用的器皿不含有氧化性物质；分液漏斗活塞玻璃表面不涂油，处理过程在避光下操作；提取过程在通风柜中操作。
4.1原理试样用碱溶液皂化后，经液液萃取或固相萃取净化后，用高效液相色谱仪分离测定，外标法定量。
4.2试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
4.2.1水：GB/T6682，一级。
4.2.2无水乙醇：色谱纯。
4.2.3无水乙醇。
4.2.4石油醚（沸程30℃-60℃）。
4.2.5甲醇：色谱纯。
4.2.6乙腈：色谱纯。
4.2.7甲酸。
4.2.8L-抗坏血酸。
4.2.9二丁基羟基甲苯（BHT）。
4.2.10无水硫酸钠。
4.2.11氢氧化钾溶液（500g/L）：称取500g氢氧化钾，加水溶解，冷却后用水定容至1000mL，混匀。
4.2.1270%乙醇溶液：取无水乙醇70mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。
4.2.1310%甲醇溶液：取甲醇10mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。
4.2.140.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水稀释，定容至1000mL，混匀。
实验四高效液相色谱法测定V E含量
1 实验目的
1.1了解高效液相色谱仪的基本操作；
1.2了解高效液相色谱仪测定V E的原理。
2 实验原理
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
V E（维生素E）又名生育酚或产妊酚，在食油、水果、蔬菜及粮食中均存在。
有抗氧化作用，能增强皮肤毛细血管抵抗力，并维持正常通透性；有改善血液循环及调整生育功能、抗衰老作用等。
V E通过高效液相色谱柱进行分离，PDA检测器检测，外标法定量。
3实验器材
3.1 实验样品
V E样品溶液
3.2 实验试剂
浓度为50µg/ml的V E标样
3.3 实验仪器
高效液相色谱仪附PDA检测器
4 色谱条件
色谱柱：C18柱；流动相速度：0.3ml/min；
进样量：5µl；柱温：30℃。
5 实验结果与讨论
5.1实验结果
本次实验采用的是单点法测定。
实验结果见表1。
表1. 液相色谱仪测定苹果的VE含量
样品中VE的浓度=乙烯标样的总量×苹果的峰面积/乙烯标样的峰面积
=5µl×50μg/mL×17369/（5µl×42217）=20.57μg/mL
5.2实验讨论
本次实验中，测定标样溶液V E含量时，在指定的保留时间内并未出峰。
讨论分析原因：样品溶液在上周实验后，一直置于离心管中，未避光低温保存，导致样品中V E氧化，液相测定时没有在相应的时间出峰。
本次实验时间较短，且主要目的是了解高效液相色谱仪的基本操作，以及液相色谱仪测定V E的原理，故结合前组同学对V E含量的测定数据进行讨论与分析。
因时间有限，实验采用了单点法进行测量分析，且无平行重复，这样误差较大。
我们以后实验时，V E标样可以选择5个浓度，每个浓度分别测定3-4次，取其峰面积的平均值后作标准曲线，这样误差更小。
6知识扩展
6.1高效液相色谱仪包括哪几个部分组成？
答：高效液相色谱仪主要由输液系统、进样系统、色谱分离系统、检测器这四个部分组成，其流程图见图1。
输液系统包括贮液槽和输液管道、高压泵和梯度洗脱装置。
贮液槽，通常是由玻璃或不锈钢等材料制成的，用来存贮足够数量、符合分析要求流动相的容器。
输液管道是管道内径很小的用于连接高效液相色谱仪各主要流路系统。
高压泵是将流动相在高压下连续送入色谱柱，使样品在色谱柱内完成分离过程。
高效液相色谱仪采用的是往复式恒流泵，是具有输出压力高、流量稳定、流量可调范围宽、泵内死体积小、具有梯度洗脱及耐酸碱腐蚀、溶剂更换迅速等性能。
梯度洗脱装
置是在分离过程中，随时间函数程序改变流动相组成，有分低压梯度和高压梯度两种装置。
图1 高效液相色仪流程图
进样系统有由进样口、注射器、流通阀和定量管等组成，其作用是使样品有效地送入色谱柱。
进样系统是柱外效应的重要来源之一，为了减少对柱高的影响，避免由柱外效应而引起峰展宽。
进样口要求死体积小，这样能使样品各组分几乎同时进入色谱柱。
色谱分离系统由色谱柱、柱恒温器组成。
色谱柱由柱管和固定相构成，分为普通分析柱（内径大约4~5mm）、半制备或制备柱（内径大于8mm）、窄柱（内径在2mm左右）以及微径柱（内径小于1mm），内径小的色谱柱相对更省溶剂，相对灵敏度更高。
柱恒温箱是另一个重要的组成，柱温是液相色谱的重要操作参数。
高精度的温度控制对保证色谱柱性能，进行高精度、高重现性的分析是比不可少的。
高效液相色谱仪的检测器有紫外-可见光检测器、荧光检测器、示差折光检测器和二极管阵列检测器。
6.2操作高效液相色谱仪时需要注意哪些问题？
答：操作高效液相色谱仪时应注意：
1）配置样品时要严格按照标准配制对照品浓度（低浓度），不可超过或低于一倍。
2）所需玻璃仪器和容器，尽量选用棕色容量瓶进行配制。
每次临用前需要用纯水清洗干净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后方可使用。
3）实验前要检查仪器是否存在漏液现象、压力是否稳定、柱子是否安反。
检查完毕后，打开电脑、工作站电源开关后，再打开泵电源开关、控制面板上泵
开关。
先用色谱甲醇冲洗柱子，等待机器平稳后，再打开检测器电源开关、控制面板上检测器开关。
30分钟后方可进针做实验。
4）对照品与样品进样量要尽量保持一致，样品峰面积与对照品峰面积尽量保持一致（不要超过一倍，可适当调整进样量或稀释倍数）。
5）注意系统评价：理论板数（达到标准要求）、分离度（大于1.5）、拖尾因子（0.95-1.05之间）。
6）平行进针要求RSD<2％，进样针每次改进不同样品或对照品时，需用色谱甲醇涮洗五次以上，涮洗位置要超过进样量位置。
7）操作过程中，应注意机器异常情况的发生（声音），压力是否过高（超过200Bar 不可再做实验），流动相是否流空、废液瓶是否已满等等。
8）实验结束后，用甲醇冲洗一小时，如果流动相中含有酸或缓冲盐，则先用新鲜纯水冲洗0.5小时，再用甲醇冲洗一小时。
9）由于实验时间加长，导致对照品与样品保留时间不一致时，在实验最后加进一针对照品，或采用对照品加样品同时进样的叠加法进样，对照峰面积是否为两者之和。
6.3 简述高效液相色谱仪常用的检测器及其特点。
答：高效液相色谱仪常用的检测器有紫外-可见光检测器、荧光检测器、示差折光检测器和二极管阵列检测器。
其具有：①灵敏度高；②对各类组分化合物都有响应或有特殊的选择性；③线性范围宽；④死体积小；⑤不破坏样品；⑥性能稳定，对温度和流速的变化不敏感；⑦能连续工作，可靠方便。
紫外-可见光检测器是高效液相色谱中应用最广的的检测器，它对许多样品具有高的灵敏度，最小检测量可达10-9g。
荧光检测器是选择性检测器，用于测定能发出荧光的物质。
示差折光检测器是通用型检测器，其利用纯流动相与含有被测组分的流动相之间折射率的差别进行检测。
凡具有与流动相折射率不同的组分，均可适用这种检测器。
二极管阵列检测器是一种新型检测器相当于紫外-可见光检测器，进入流动池的不是单色光，得到的信号是在所有波长上的三维色谱光谱信号。
用以判别色谱分离的状况及强化定量和定性分析。
6.4高效液相色谱的应用——氨基酸分析
答：氨基酸分析是生命科学研究中最重要的技术之一。
多数氨基酸无紫外吸收和荧光发射特性，示差折射检测器对氨基酸也无足够的灵敏度，为提高分析灵敏度和分离选择性，需氨基衍生，衍生的方式有柱前衍生和柱后衍生。
因此，反相高效液相色谱法与各种柱前衍生相结合的氨基酸分析技术，构成了具有广泛适
用性的现代氨基酸分析技术
柱后衍生离子交换色谱仪具备很高的自动化水平，分离氨基酸在特有柱后氧化及衍生中按固定程序与衍生试剂迅速反应并检测，消除由衍生时间、温度等因素的差异带来的测试误差。
衍生试剂不直接进入色谱柱使柱寿命延长，同时还可再生延长离子交换树脂固定相的使用时间。
衍生中最常用的是茚三酮柱后衍生法，这种方法几乎能分析所有氨基酸和氨基酸衍生物，蛋白质水解氨基酸之间不存在明显的衍生后灵敏度变化，该法分析技术手段繁多，对样品中存在的杂质适应性好，不足是分析周期时间长。
柱前衍生反相分配色谱分析法突出的优点是灵敏度高，分析时间短。
