WWOX基因在脑胶质瘤中的表达

福建医药杂志２００７年第２９卷第４期　Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄ　Ｊ　Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．４　２００７　７９　ａｂｌｅ　ｅｌｅｍｅｎｔ　ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ　ｉｎ　ｉｎｔｒｏｎ　９　ｏｆ　ｔｈｅ　ＨＳＦ４　ｇｅｎｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎ　ａｕ　ｔｏｓｏｍａｌ　ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ　ｃａｔａｒａｃｔｓ　ｉｎ　ｌｏｐｌ　１　ａｎｄ　ｌｄｉｓｌ　ｍｉｃｅ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，　２００６，８８（１）：４４—５１．　１２　Ｋｅ　Ｔ，Ｗａｎｇ　ＱＫ，Ｊｉ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｎｏｖｅｌ　ＨＳＦ４　ｍｕｔａｔｉｏｎ　ｃａｕｓｅｓ　ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ　ｔｏｔａｌ　ｗｈｉｔｅ　ｃａｔａｒａｃｔ　ｉｎ　ａ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｆａｍｉｌｙ．Ａｍ　Ｊ　Ｏｐｈ—　ｔｈａｌｍｏｌ，２００６，１４２（２）：２９８—３０３．　１　３　Ｍｅｌｌｅｒｓｈ　ＣＳ，Ｐｅｔｔｉｔｔ　Ｌ，Ｆｏｒｍａｎ　ＯＰ，ｅｔ　ａ１．　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉ０ｎ　０ｆ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ＨＳＦ４　ｉｎ　ｄｏｇｓ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂｒｅｅｄｓ　ｗｉｔｈ　ｈｅｒｅｄｉ　ｔａｒｙ　ｃａｔａｒａｃｔｓ．　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２００６，９（５）：　３６９　３７８．　１　４　Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ　ＭＭ，Ｌｕ　Ｌ，Ｗａｎｇ　Ｘ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　１ｄｉｓｌ　ｌｅｎｓ　ｍｕｔａｔｉｏｎ　ｉｎ　ＲＩＩＩＳ／Ｊ　ｍｉｃｅ　ｍａｐｓ　ｔｏ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　８　ｎｅａｒ　ｃａｄｈｅｒｉｎ　１．Ｍｏｌ　Ｖｉ—　ｓｉｏｎ，２００４，１０：５５７－５８７．　ＷＷＯＸ基因与肿瘤关系的研究进展　福建医科大学附属第二医院妇产科（３６２０００）　花文玲　综述　张鹏飞　审校　【中图分类号】Ｒ３９２．１１　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１００２—２６００（２００７）０４—００７９—０３　ｗｗ０Ｘ基因是新近发现的抑癌基因，研究表明，在大　多数恶性肿瘤中ＷＷＯＸ基因表达下调或缺失，而该基因上　调或恢复将抑制肿瘤的生长。　１　ｗｗ０ｘ的结构和功能　ｗｗ０Ｘ基因位于人类普通的染色体脆性位点一　ＦＲＡ１６Ｄ（１６ｑ２３．３－ｑ２４．１），跨越ｌ，１１３，８２２　ｂＰ大小的巨　大基因组区域，跨越微卫星体标记Ｄ１６Ｓ５１５一Ｄ１６Ｓ５０４，由９　个外显子组成，其外显子本身的编码并不大，但其内含子５　和８非常大，仅内含子８就有７７９，６３９　ｂｐ　ｌ　。ｗｗ０ｘ编　码一个含４１４个氨基酸的蛋白，该蛋白含有两个限制性蛋白　域，其氨基末端的８８个氨基酸与ｗｗ域蛋白家族高度保守　的序列同源。ｗｗ域是指两个糖基化的色氨酸区域，也被　称为ｗｗＰ或ｒｓｐ５区域，大概含有４Ｏ个氨基酸，参与蛋白一　蛋白相互作用，其本质是传递信号转导信息，能与特殊的富　含脯氨酸的序列相结合，但与其他的肽识别蛋白如抗体、受　体相比，其亲和力较低。ｗｗ域有五组不同的识别含脯氨　酸序列的基序：ＰＰＸＹ基序、ＰＰＬＰ基序、ＰＧＭ基序、ＰＳＰ　基序或ＰＴＰ基序、ＰＲ基序。羧基末端的３２６个氨基酸与脱　氢酶／还原酶（ＳＤＲ）的短链同源．故命名为包含氧化还原　酶的　ｗｗ　域　（ＷＷ　ｄｏｍａｉｎ—ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ，　ｗｗ０ｘ）ｌ＿３“ｊ。基于ＷＷＯＸ在激素调节的组织（如睾丸、　前列腺和卵巢）中呈高表达及其氨基酸序列与特异的氧化还　原酶同源的认识，所以认为ＷＷＯＸ可能是一个参与性激素　新陈代谢的酶　］。研究表明在大多数的恶性肿瘤中ＷＷＯＸ　基因表达缺失或下调，而增加ＷＷＯＸ基因的表达水平可以　抑制肿瘤细胞的增殖，所以目前认为ＷＷＯＸ基因是一个抑　癌基因，它与肿瘤的发生、发展、预后有密切的关系。　２　ｗｗ０Ｘ与肿瘤　在卵巢癌、乳腺癌等肿瘤的研究中，发现ｗｗ０ｘ基因　纯合性和杂合性的缺失，多数的缺失在基因的内含子区域。　这种缺失将使该基因所在的染色体脆性位点的不稳定性增　高，使该染色体易于断裂，从而诱发癌肿的发生　］。　在一些癌细胞株和３Ｏ　以上的原发乳腺肿瘤中，发现　了异常的ｗｗ０ＸｍＲＮＡ的转录。转录的异常主要是外显子　５－８或６－８的缺失，这些外显子编码ｗｗ０ｘ蛋白的氧化还　原酶区，异常转录的ＷＷＯＸ在正常的乳腺组织中没有表　达。外显子５－８或。６－８的缺失导致了ｗｗ０ｘｍＲＮＡ的异常　拼接，由异常拼接的染色体编译的异常蛋白质定位于细胞核　中，而野生型的ＷＷＯＸ蛋白定位于胞浆的高尔基复合体或　线粒体中。外显子５－８或６－８的缺失加上在正常细胞定位中　的改变，改变了ＷＷＯＸ在细胞中的作用¨６］。　Ｃｈａｎｇ等¨６　发现ＷＷＯＸ可能参与Ｐ５３在线粒体启动细　胞凋亡的分子途径，ＷＷＯＸ参与结合和稳定Ｐ５３，在应激　反应中，Ｐ５３和ｗｗ０ｘ分别在Ｓｅｒ４６和Ｔｙｒ３３上进行磷酸　化，这种磷酸化对于它们的结合是必要的，Ｓｅｒ４６的磷酸化　参与Ｐ５３介导的细胞凋亡和基因转录，ｗｗ０ｘ和Ｐ５３以相　同的方式诱导细胞凋亡。当ＷＷＯＸ的磷酸化或蛋白表达被　阻断时，Ｐ５３诱导的细胞凋亡被阻断，缺乏功能性的　ＷＷＯＸ，Ｐ５３的表达消失，这表明ＷＷＯＸ在刺激诱发的凋　亡应激中发挥重要作用。在ｃｏｓ７成纤维细胞株和结直肠的　ＨＣＴ１１６细胞株中，ｗｗ０Ｘ蛋白Ｃ一末端的短链乙醇脱氢酶　还原酶区域和ＭＤＭ２结合，Ｎ一末端的ｗｗ区和Ｐ５３相结　合，从而形成一个ＷＷＯＸ—Ｐ５３一ＭＤＭ２复合体，这种结合在　于控制Ｐ５３的活性、结构的变化、核转录等，抑制凋亡的发　生，可能是肿瘤发生的途径之一。而且，ｗｗ０ｘ基因还增　强了细胞对肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ，ＴＮＦ）细　胞毒的敏感性，其增强作用是通过显著下调凋亡抑制者Ｂｃｌ一　２和Ｂｃｌ—ｘＬ，但上调促凋亡者Ｐ５３的表达来实现的口］。　综上所述，ｗＷ０Ｘ基因是一个潜在的肿瘤生长的抑制　者。ＷＷＯＸ基因是肿瘤抑制基因的理由如下：（１）在人类　肿瘤中ＷＷＯＸ基因图谱显示出区域的杂合性缺失（ＬＯＨ）　和纯合性缺失＿４ｊ；　（２）ｗｗ０Ｘ蛋白可与Ｐ５３结合，增强　ｇ　ｈ　ｍ、　ｅ　一～～　一～一　一～一　一　一　∞　Ⅲ　“一一一　一＝主～　～　～～一一～～一一　一一一　，∞　∽　ｄ　毗　．：Ⅲ　．　，一～一～～一　一一～　一～～一　一一一一一一～～～　．一　临　Ⅲ　ｍ　邶　ｍ　～～～～一一一一一～维普资讯 ８０　ＴＮＦ—ａ介导的细胞死亡；（３）ＷＷＯＸ外显子的纯合性缺失　导致了ＷＷＯＸｍＲＮＡ的异常拼接，由异常拼接的染色体编　译的异常蛋白质在细胞的定位改变。（４）外显子５－８或６－８　缺失，使ＷＷＯＸ蛋白的氧化还原酶区域被破坏，蛋白　失活　。　２．１　ＷＷＯＸ基因与乳腺癌：Ａｎｄｒｚｅｊ　Ｋ等　应用ＲＴ　ＰＣＲ　的方法检测到在一些乳腺癌细胞株中ＷＷＯＸ表达水平很低　或基本检测不出来，特别是在ＭＤＡ￣ＭＢ－４３５、ＭＤＡ—Ｍ　２３１、ＢＴ一５４９和Ｔ４７Ｄ细胞株中。进一步的研究表明这些细　胞株有很高的成瘤率，这种形成肿瘤的能力在裸鼠身上得以　进一步证实。相比之下，有着较高ＷＷＯＸ表达水平的细胞　株如ＭＣＦ　７和ＢＴ一２０，其成瘤率低得多。王甜甜等　］应用　ＲＴ　ＰＣＲ方法检测５１例乳腺癌及癌旁组织标本中染色体脆　性位点抑癌基因ＦＨＩＴｍＲＮＡ和ｗｗＯＸｍＲＮＡ的表达，发　现两者在乳腺癌组织、癌旁组织中均有表达，两者在乳腺癌　组织中的表达低于癌旁组织。研究表明ＷＷＯＸ蛋白在晚期　乳腺癌标本中表达显著降低，说明ＷＷＯＸ与乳腺癌的发展　有一定的关系。　２．２　ＷＷＯＸ基因和呼吸系统肿瘤：周玉龙　在探讨　ＷＷＯＸ在肺腺癌细胞株Ａ５４９中的表达的研究中，采用　ＲＴ—ＰＣＲ技术、聚合酶链反应结合二核苷酸重复序列多态性　方法、免疫印迹分析方法检测ＷＷＯＸ基因在肺腺癌细胞株　中的变化，发现Ａ５４９细胞中存在ＷＷＯＸ基因６－８外显子　的丢失，而且Ａ５４９细胞中ＷＷＯＸ蛋白的表达明显低于原　代培养人气道上皮细胞中ＷＷＯＸ蛋白的表达。在Ａ５４９细　胞株中ｄ１６ｓ　３０２９及ｄ１６ｓ　３０９６均出现杂合性缺失（ＬＯＨ），　而作为对照的原代培养人气道上皮细胞中未发现ＬＯＨ，说　明Ｌ０Ｈ也是ＷＷＯＸ基因在肺腺癌中的重要失活方式。　２．３　ＷＷＯＸ基因和妇科肿瘤：ＷＷＯＸ在肿瘤的发生和进　展中发挥着重要作用，在许多有关卵巢癌的研究中发现染色　体１６ｑ区域显性基因的缺失，而且在卵巢癌晚期，１６ｑ２１～　ｑ２４基因缺失的频率很高，说明该基因杂合性缺失与肿瘤的　转移和发展有关。采用免疫组化方法研究ＷＷＯＸ基因在卵　巢癌上的表达，发现该蛋白在卵巢癌上的表达水平与癌肿的　病理类型和肿瘤的分期有关。Ｍａｒｉａ　Ｉ　Ｎａｎｅｚ　研究４４４例　卵巢癌病例发现，在３Ｏ　的卵巢黏液性囊腺癌中ＷＷＯＸ蛋　白的表达明显下调，而在７１　的浆液性囊腺癌和７７　的子　宫内膜样癌中，ＷＷＯＸ蛋白的表达正常或升高。研究还发　现，卵巢癌组织中ＷＷＯＸ基因的表达与孕激素受体（ＰＲ）　有相关性。在ＷＷＯＸ阴性的病例中８５　ＰＲ阴性，只有　ｌ５％ＰＲ表达阳性，而ｗｗ０Ｘ的表达与雌激素受体（ＥＲ）　无相关性。进一步的研究还发现在卵巢上皮癌患者中，　ＷＷＯＸ蛋白表达水平高的，其带癌生存的时间长于ＷＷＯＸ　蛋白表达水平低者，这说明ＷＷＯＸ与卵巢癌的预后有关。　有关ＷＷＯＸ基因在宫颈癌、子宫内膜癌等其他妇科肿瘤中　的研究报道甚少。　２．４　ＷＷＯＸ基因与其他肿瘤的关系：Ｔａｍｏｔｓｕ　ＫｕｒｏｋｉｌＩ　等采用ＰＣＲ的方法检测到ｗｗ０Ｘ基因在食道鳞状细胞癌　中杂合性缺失的频率很高，表明ＷＷＯＸ基因与食道癌的发　生有关。Ｒａｍｉ　Ｉ　Ａｑｅｉｌａｎ［１　使用免疫印迹法和免疫组化的方　法检测发现ＷＷＯＸ蛋白在３３％胃癌细胞株中的表达缺失或　下调。众多研究表明在前列腺癌、肝细胞癌、直肠癌、口腔　福建医药杂志２００７年第２９卷第４期Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄ　Ｊ　Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．４　２００７　鳞状细胞癌中ＷＷＯＸ基因杂合性缺失及ＷＷＯＸ蛋白表达　下调或缺失的频率也很高。　３　ｗｗ０ｘ与其他肿瘤因子的关系　在最近的研究中，Ｒａｍｉ博士　利用Ｃｙｔｏｇｅｎ数据库发　现了一种新的转录因子——ＡＰ一２｛７），这种转录因子由　ＡＰ－２｛ｙ）基因编码，在８Ｏ　乳腺癌中的表达水平上升，而　且这种上升模式与低的病人存活率相对应。这项研究还揭示　ｗｗＯｘ蛋白的表达能够促使细胞核中的ＡＰ一２｛７）转录因　子重新分配到细胞质中，从而抑制它的转移活化刺激功能。　这些结果意味着ＷＷＯＸ蛋白能够通过将ＡＰ一２｛７）转录因　子由细胞核转移到细胞质中，从而抑制有致癌性的转录因子　——ＡＰ一２｛７）的活性。因此，影响ｗｗ０Ｘ和ＡＰ一２｛７）　转录因子反应的遗传突变可能是导致侵略性乳腺癌的一个重　要原因。　４　ｗｗ０ｘ与肿瘤的治疗　显而易见，ＷＷＯＸ基因是一个潜在的肿瘤生长的抑制　者。Ｈｕｅｂｎｅｒ＿１　和她的同事分析三种不同的丢失了ＷＷＯＸ　蛋白在实验室培养的肺癌细胞系，他们利用一种改造病毒将　ｗｗ０ｘ基因拷贝传递进三种细胞系中，５天后发现一个具　有活性ｗｗ０Ｘ基因的细胞死亡了。一方面，这些细胞通过　凋亡过程进行自我毁灭；另一方面，缺少ｗｗ０Ｘ基因的肺　癌细胞则继续生长且数量增加了５～６倍。因此，如果能恢　复癌肿组织中ＷＷＯＸ基因的表达，将为以后肿瘤的治疗提　供一种新的方法。Ｑｉｎ　ＨＲ［１　在研究中发现在前列腺癌中　ｗｗＯｘ基因的表达下调归因于ｗｗ０ｘ基因调节带的ＤＮＡ　超甲基化，用Ａ２Ａ——一种ＤＮＡ甲基转移酶抑制剂进行治　疗，增加了前列腺癌细胞中ＷＷＯＸｍＲＮＡ和蛋白的表达，　结果发现肿瘤的生长停止。这是临床上通过ｗｗ０ｘ基因对　癌肿进行治疗的初步尝试。我们相信，经过不断地更为深入　的研究，利用ＷＷＯＸ基因治疗癌肿将成为一种有效的治疗　方法，为人类攻克癌症这个医学难题开辟一条全新的道路。　５展望　然而，新近有研究者对ｗｗ０Ｘ基因作为肿瘤抑制基因　的角色提出相反的见解。Ａｋｉｒａ等　用单克隆抗体分析　ＷＷＯＸ的表达，用免疫印迹法检测４９个肿瘤细胞系，虽然　一些细胞系出现异常的ｗｗＯＸｍＲＮＡ转录，但仅检测到正　常结构的ＷＷＯＸ蛋白。用免疫组化方法检测胃和乳腺肿瘤　细胞发现，ＷＷＯＸ蛋白的水平没有减少，反而增加，从而　对ＷＷＯＸ作为一种经典的肿瘤抑制基因的观点提出挑战。　因此，ｗｗＯｘ作为候选抑癌基因的地位还存在争议。　ｗｗ域及其蛋白一蛋白相互作用机制正在成为一个新的　热点。ＷＷＯＸ蛋白和Ｐ５３形成的蛋白复合体抑制凋亡的发　生，可能是肿瘤发生的途径之一。脆性位点的异常转录及其　基因组的不稳定性是肿瘤发生的原因还是结果　是尚要解决　的问题，而最终要确定的是异常拼接的转录物是否编码蛋白　结构，因此，需要发展识别抗原决定簇内部ｗｗ域的抗　ＷＷＯＸ抗体，检测异常拼接ｍＲＮＡ编码的蛋白，了解该蛋　白在各种肿瘤中的表达水平，确定ＷＷＯＸ基因作为抑癌基　因的地位。将来研究的焦点将集中在ｗｗ０ＸｍＲＮＡ及其表　达蛋白在肿瘤发生、进展中的改变情况。　参考　文　献　１　Ｐａｉｓｅ　ＡＪ，Ｔａｙｌｏｒ　ＫＪ，Ｓｔｅｗａｒｔ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ａ　７００一ｋｂ　ｐｈｙｓｉｃａｌ

床与实验病理学杂志Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｅｘｐ　Ｐａｔｈｏｌ　２０１１　Ｊａｎ；２７（１）　・６７・　脑胶质瘤中Ｊａｂｌ和ｐ２７的表达与意义　王东林　，张明阳　，王奕丹。，邹　琳　，何　飞　，李家荣　，陈　莉　，韩新华　摘要：目的探讨Ｊａｂｌ和ｐ２７在脑胶质瘤中的表达、意义以及相互关系。方法运用免疫组化方法检测７０例胶质瘤和８例　对照脑组织标本中Ｊａｂｌ、ｐ２７蛋白的表达。Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测６例新鲜胶质瘤标本中相应分子的表达。结果Ｊａｂｌ在对照脑组　织中表达不明显，在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中阳性率分别为２１．２％、６５．４％、９１．７％，三者之间的表达水平差异有统计学意义（Ｐ＜　０．００１）。ｐ２７在对照脑组织中表达明显，在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中阳性率分别为９３．８％、５３．８％、２５．Ｏ％，三者之间的表达差异　有统计学意义（Ｐ＜０．００１）。Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ结果显示Ｊａｂｌ与ｐ２７在胶质瘤中的表达水平与肿瘤细胞的恶性程度相关。相关分　析显示：胶质瘤中Ｊａｂｌ蛋白表达与增殖指标Ｋｉ一６７表达呈正相关，与ｐ２７蛋白表达呈负相关；ｐ２７蛋白表达与Ｋｉ一６７表达呈负　相关（Ｐ＜０．００１）。结论胶质瘤中Ｊａｂｌ的异常高表达可能是抑制ｐ２７表达的重要因素。Ｊａｂｌ与ｐ２７的异常表达可能在胶质　瘤的发生发展过程中起促进作用。　关键词：神经胶质瘤；脑肿瘤；Ｊａｂｌ；ｐ２７　中图分类号：Ｒ　７３０．２６４；Ｒ　７３９．４１；Ｒ　３４１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１—７３９９（２０１１）０１—００６７—０４　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｊａｂｌ　ａｎｄ　ｐ２７　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｉｎ　ｂｒａｉｎ　ｇｌｉｏｍａｓ　ＷＡＮＧ　Ｄｏｎｇ—ｌｉｎ　，ＺＨＡＮＧ　Ｍｉｎｇ—ｙａｎｇ　，ＷＡＮＧ　Ｙｉ—ｄａｎ　，ＺＯＵ　Ｌｉｎ　，ＨＥ　Ｆｅｉ　，ＬＩ　Ｊｉａ—ｒｏｎｇ　，ＣＨＥＮ　Ｌｉ。，ＨＡＮ　Ｘｉｎ—ｈｕａ。　（　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｎａｎｔｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｔｏｎｇ　２２６００１，Ｃｈｉｎａ；。Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｎｓｉｃ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍｅｄ—　ｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｎａｎｔｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｔｏｎｇ　２２６００１，Ｃｈｉｎａ；　Ｃｌａｓｓ　２　ｏｆ　Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ，Ｎａｎｔｏｎｇ　２２６００１，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｕｒｐｏｓｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｊａｂｌ　ａｎｄ　ｐ２７　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ　ｇｌｉｏｍａｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｊａｂｌ　ａｎｄ　ｐ２７　ｉｎ　７０　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｇｌｉｏｍａｓ　ａｎｄ　８　ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｏｒｍａｌ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｊａｂｌ　ａｎｄ　ｐ２７　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｒｅｓｈ　ｔｕｍｏｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｊｕｓｔ　ｒｅ—　ｍｏｖｅｄ　ｆｒｏｍ　６　ｇｌｉｏｍａｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｊａｂｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｉｎ　ａｌｌ　ｃａｓｅ　ｏｆ　ｎｏｒｍａｌ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｗｈｉｌｅ　ｉｎ　７０　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｇｌｉｏｍａｓ，ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　Ｊａｂｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｇｒａｄｅｓ　１Ｉ，Ⅲ，ａｎｄ　ＩＶ　ｗｅｒｅ　２１．２％，６５．４％，ａｎｄ　９１．７％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．　Ａｓ　ｆ０ｒ　ｐ２７，ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　９３．８％，５３．８％ａｎｄ　２５．０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖ—　ｅｌｓ　ｏｆ　ｂｏｔｈ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｍｏｎｇ　ｎｏｒｍａｌ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅｓ，ｌｏｗ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｇｒａｄｅ　ｇｌｉｏｍａｓ（Ｐ＜０．００１）．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ａ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　Ｊａｂｌ　ａｎｄ　Ｋｉ一６７．［ｎｖｅｒｓｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　Ｊａｂｌ　ａｎｄ　ｐ２７，ａｌｓｏ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｐ２７　ａｎｄ　Ｋｉ一６７（Ｐ＜０．００１）．Ｃｏｎｃｌｕ－　ｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｏｖｅｒ—ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｊａｂｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｌｉｏｍａｓ　ｍａｙ　ｂｅ　ａｎ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｆａｃｔｏｒ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐ２７　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ａｂｎｏｒｍａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｊａｂｌ　ａｎｄ　ｐ２７　ｍａｙ　ｈａｖｅ　ｐｒｏｍｏｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｌｇｅｎｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｌｉｏｍａｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｇｌｉｏｍａ；ｂｒａｉｎ　ｎｅｏｐｌａｓｍｓ　Ｊａｂｌ；ｐ２７　脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤，占成　人颅内肿瘤的５０％，呈侵袭性生长并且术后容易复　发，病死率较高，其发生机制迄今不明。随着分子病　理学的发展，对胶质瘤细胞周期改变、信号转导和效　应有了进一步认识。ｐ２７基因定位于人染色体　收稿日期：２０１０—０２—０５　基金项目：江苏省高校自然科学研究项目（０７ＫＪＤ３１０１７２）　作者单位：　南通大学医学院病理学教研室，南通２２６００１　南通大学医学院法医学教研室，南通２２６００１　南通大学公共卫生学院预防医学专业２班，南通　２２６００１　作者简介：王东林，男，教授，硕士生导师。Ｔｅｌ：（０５１３）８５０５１７３０，Ｅ—　ｍａｉｌ：Ｄｏｎｇｌｉｎ＠ｎｔｕ．ｅｄｕ．ｃａ　韩新华，男，主任医师，通讯作者　１２ｐ１３，包含２个有编码功能的外显子和１个无功能　的外显子及１个内含子。人类ｐ２７ｃＤＮＡ长５９４　ｂｐ，　编码１９８个氨基酸，有高度保守性¨Ｊ，是ＣＩＰ／ＫＩＰ家　族的主要成员，具有阻滞细胞通过Ｇ　期或Ｓ期的关　卡作用，其蛋白表达水平及活性改变与肿瘤形成有　关　。Ｃｌａｒｅｔ等　于１９９６年用酵母双杂交系统从　人淋巴细胞ｃＤＮＡ文库中筛选到一种蛋白，因这种　蛋白与ｃ—Ｊｕｎ激活区结合，故命名为Ｊｕｎ激活区域一　连接蛋白１（ｅ—Ｊｕｎ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｄｏｍａｉｎ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１，Ｊａｂ１）。目前研究发现，Ｊａｂｌ能特异性地与ｐ２７发　生相互作用，使ｐ２７由胞核穿梭移动到胞质，通过泛　素一蛋白酶体系统加速ｐ２７的降解而降低细胞内　

山东医药２０１２年第５２卷第２６期　

脑胶质瘤组织中Ｒ１３２Ｈ突变型ｈｌＤＨ１基因　

双顺反子真核表达载体的构建及鉴定　

朱剑　，许期年　，王秀云　，左剑玲　，周岱　，王中　，伏林山　。陈旭仁　

（１苏州大学附属第一医院，江苏苏州２１５００６；２盐城市第一人民医院）　

摘要：目的　以ｐｃＤＮＡ３．１（＋）为骨架，构建并鉴定人脑胶质瘤组织中含Ｒ１３２Ｈ突变的人源异柠檬酸脱氢酶１　基因（ｈｌＤＨ１Ｒ１３２Ｈ）和增强型绿色荧光蛋白（ＥＧＦＰ）序列的双顺反子真核表达载体。方法　以内部核糖体进入位　点（ＩＲＥＳ）／ＥＧＦＰ片段为模板，扩增出ＩＲＥＳ／ＥＧＦＰ片段，并在５　末端引入３　Ｘ　Ｆｌａｇ标签；通过ＰＣＲ介导的定点突变　

法，以ｐＣＭＶ—ｓｐｏｒｔｓ６一ｈｌＤＨ１为模板，扩增ｈｌＤＨ１Ｒ１３２Ｈ基因片段，并在３　末端引入３×Ｆｌａｇ标签；通过ＰＣＲ连接两　种产物后经双酶切定向克隆入ｐｃＤＮＡ３．１（＋）骨架；转化大肠杆菌后挑取阳性克隆，提取质粒进行ＰＣＲ检测及基　

因序列测定。结果ＰＣＲ检测７个菌落中有６个阳性克隆，ＤＮＡ测序发现引入了ｈｌＤＨ１基因。结论成功构建了　双顺反子真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）一ｈＩＤＨ１Ｒ１３２Ｈ／３×Ｆｌａｇ／ＩＲＥＳ／ＥＧＦＰ，为研究人胶质瘤组织中Ｒ１３２Ｈ突变的　作用机制奠定了基础。　关键词：颅内肿瘤；胶质瘤；异柠檬酸脱氢酶１；双顺反子；质粒；基因突变　中图分类号：Ｒ７３９．４１　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２—２６６Ｘ（２０１２）２６－００１０－０４　

Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｂｉｃｉｓｔｒｏｎｉｃ　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｌ　ｖｅｃｔｏｒ　ｃａｒｒｙｉｎｇ　

ｔｈｅ　Ｒ１　３２Ｈ　ｍｕｔａｔｅｄ　ｈｉＤＨ１　ｇｅｎｅ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｇｌｉｏｍａｓ　

ＺＨＵ　Ｊｉａｎ　，ＸＵ　Ｑｉ—ｎｉａｎ，ＷＡＮＧ　Ｘｉｕ—ｙｕｎ，ＺＵＯ　Ｊｉａｎ—ｌｉｎｇ，ＺＨＯＵ　Ｄａｉ，　ⅣＧ　Ｚｈｏｎｇ，　

MARVELD1在脑胶质瘤中表达的实验研究

目的：探讨人脑胶质瘤组织中MARVELD1 的表达。方法：RT-PCR和Western blot技术检测33例脑胶质瘤组织蛋白和mRNA的表达，并以11例正常脑组织为对照。结果：相较于正常脑组织，Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级脑胶质瘤组织中MARVELD1蛋白和mRNA的表达水平差异均有统计学意义（P＜0.05），Ⅲ级、Ⅳ级脑胶质瘤组织中MARVELD1蛋白和mRNA的表达水平低于Ⅰ～Ⅱ级脑胶质瘤组织和正常脑组织（P＜0.05）。结论：MARVELD1对脑胶质瘤恶性程度判断有一定的指导意义，并为脑胶质瘤临床治疗提供了新的靶标。

脑胶质细胞瘤是来源于神经上皮的颅内最常见的原发性肿瘤，占颅内肿瘤的40%～50%，胶质细胞瘤患者的治疗主要以积极的手术、放、化疗等治疗措施为主，但该肿瘤多呈浸润性生长，手术不易全切[1-2]。患者预后仍较差，WHO分级Ⅲ级的胶质细胞瘤患者平均生存期约3～5年，多形性胶质母细胞瘤患者平均生存期尚不足1年[3-4]，因此寻找新的脑胶质瘤治疗靶点成为当前亟待解决的难题。MARVELD1基因是定位于人类10号染色体长臂10q24.2的一个新的候选抑癌基因，该基因在多种正常组织中表达，而在乳腺癌、肺癌、肾癌等多种癌症中

MARVELD1基因的表达呈明显下调[5-6]。因此本研究通过对不同病理级别脑胶质瘤组织中MARVELD1的表达，以期从MARVELD1在其发病机制中的调控作用，为脑胶质瘤的靶向治疗提供新思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年1月-2014年4月入住本院神经外科的符合脑胶质瘤的患者33例。患者均为初发，术前未接受放、化疗等治疗，其中男18例，女15例，年龄7～70岁，平均（40.2±19.3）岁；星形胶质细胞瘤20例，少突胶质细胞瘤3例，室管膜细胞瘤5例，髓母细胞瘤3例，多形性胶质母细胞瘤1例，胶质肉瘤1例；按照2007年WHO神经肿瘤分类标准进行病理分级，其中I～II级15例，III级10例，IV级8例。另取11例来自同期收治的脑外伤或脑出血患者的正常脑组织标本作为对照，患者男6例，女5例，年龄16～47岁，平均（32.3±12.3）岁。两组患者在性别、年龄方面比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。