MolecularProbes流式细胞分析-ThermoFisherScientific
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流式细胞术分析的工作原理及应用1. 工作原理流式细胞术(Flow Cytometry)是一种广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域的细胞分析技术。
它基于细胞在流式细胞仪中通过单个细胞传感器单元的原理,可以实时、快速地检测和分析细胞的各种特性。
1.1 流式细胞仪原理流式细胞仪是流式细胞术分析的核心工具。
它将细胞悬浮液注入到一个窄小的液流中,并通过雷射束(Laser Beam)对细胞进行激发。
当细胞经过激发光束时,会发射出特定波长的荧光信号。
流式细胞仪通过光学设备收集并分析这些信号,从而获得关于细胞的信息。
1.2 细胞荧光标记在流式细胞术分析中,细胞通常会被标记上特定的荧光染料,以便测量其特定特征。
这些标记可以是单一的,也可以是多重的,用于同时分析多个参数。
1.3 数据分析流式细胞仪在测量细胞荧光信号的同时,还会记录细胞的大小、形状和荧光强度等参数。
这些数据可以通过特定的软件进行分析和解释,以获得关于细胞数量、细胞类型和细胞功能等方面的信息。
2. 应用领域流式细胞术分析具有广泛的应用领域,在生物医学研究和临床诊断中发挥着重要作用。
2.1 免疫学研究流式细胞术在免疫学研究中广泛应用,可以用于分析免疫系统中不同类型的细胞数量和功能。
通过对白细胞表面标记物的检测,可以检测特定细胞亚群的存在,并研究其在疾病和免疫反应中的作用。
2.2 肿瘤学研究流式细胞术在肿瘤学研究中也扮演重要角色。
它可以用来研究肿瘤细胞的增殖、存活和死亡等关键特性,进而评估药物治疗对肿瘤细胞的影响。
此外,流式细胞术还可以检测循环肿瘤细胞,从而提供肿瘤早期诊断和治疗监测的手段。
2.3 微生物学研究流式细胞术被广泛应用于微生物学研究中,可以用于分析微生物的数量和生物学特性。
通过对细菌、真菌和病毒等微生物的荧光标记,可以确定它们的种类、数量和活性,从而研究其生长规律和致病机制。
2.4 干细胞研究流式细胞术在干细胞研究中也扮演重要角色。
thermo流式细胞表面和细胞内染色方案流式细胞表面染色方案:1. 细胞准备:将待染色的细胞进行离心,去除培养基,用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次,离心沉淀后去除上清液。
2. 细胞固定:将细胞用4%的冷甲醛溶液进行固定,固定时间一般为15-30分钟。
3. 细胞洗涤:用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次,离心沉淀后去除上清液。
4. 细胞孵育:将细胞悬浮于含有特定抗体的PBS缓冲液中,孵育时间一般为30-60分钟。
5. 细胞洗涤:用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次,离心沉淀后去除上清液。
6. 细胞荧光标记:将细胞悬浮于含有荧光标记的二抗的PBS缓冲液中,孵育时间一般为30-60分钟。
7. 细胞洗涤:用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次,离心沉淀后去除上清液。
8. 细胞检测:将细胞悬浮于PBS缓冲液中,通过流式细胞仪进行细胞表面染色的检测。
流式细胞内染色方案:1. 细胞准备:将待染色的细胞进行离心,去除培养基,用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次,离心沉淀后去除上清液。
2. 细胞固定和渗透:将细胞用4%的冷甲醛溶液进行固定,固定时间一般为15-30分钟。
然后使用0.1%的Triton X-100或0.5%的Saponin进行细胞渗透,渗透时间一般为10-20分钟。
3. 细胞洗涤:用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次,离心沉淀后去除上清液。
4. 细胞孵育:将细胞悬浮于含有特定抗体的PBS缓冲液中,孵育时间一般为30-60分钟。
5. 细胞洗涤:用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次,离心沉淀后去除上清液。
6. 细胞荧光标记:将细胞悬浮于含有荧光标记的二抗的PBS缓冲液中,孵育时间一般为30-60分钟。
7. 细胞洗涤:用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次,离心沉淀后去除上清液。
8. 细胞检测:将细胞悬浮于PBS缓冲液中,通过流式细胞仪进行细胞内染色的检测。
流式细胞术详解一. 流式细胞术概述流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,•它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。
它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA 含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度>95%。
在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。
国内使用的流式细胞仪主要由美国的两个厂家生产:BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D 公司)。
流式细胞仪主要有两型:临床型(又称小型机、台式机)和综合型(又称大型机、分析型)。
BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL, B-D•公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。
EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是综合型,除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能,•多用于科学研究。
二.流式细胞仪主要技术指标1.流式细胞仪的分析速度:一般流式细胞仪每秒检测1000~ 5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。
2.流式细胞仪的荧光检测灵敏度:一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差>5%即可区分。
3.前向角散射(FSC)光检测灵敏度:前向角散射(FSC)反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm~0.5μm。
4.流式细胞仪的分辨率:通常用变异系数CV值来表示,,一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。
流式细胞术检验白血病的基本原理与流程Flow cytometry is a technique used to analyze the physical and chemical characteristics of particles in a fluid as it passes through at least one laser. 流式细胞术是一种用于分析液体中颗粒的物理和化学特征的技术,它通过至少一个激光来实现。
This technique is commonly used in the diagnosis of various medical conditions, including leukemia. 这种技术通常用于诊断多种疾病,包括白血病。
Flow cytometry is based on the principle that cells, when suspended in a fluid and passed through the path of a laser beam, scatter light in patterns that correlate with specific properties of the cells. 流式细胞术的基本原理是,当细胞悬浮在液体中,并通过激光束路径时,它们以与特定细胞特性相关的方式散射光线。
This allows for the identification and analysis of different types of cells, including cancerous cells. 这使得可以鉴定和分析不同类型的细胞,包括癌细胞。
In the context of leukemia, flow cytometry plays a crucial role in the diagnosis and classification of the disease. 在白血病的背景下,流式细胞术对于该疾病的诊断和分类起着至关重要的作用。
流式细胞术整体解决方案Attune流式细胞仪|16,000+种流式抗体|60+种荧光染料|明星样品制备试剂|细胞功能试验|PrimeFlow 流式RNA分析2流式细胞术能够从单细胞水平同时分析细胞样本中的基因表达和蛋白表达,还可以检测细胞活性、细胞周期、细胞凋亡、细胞增殖和细胞氧化等细胞功能。
该技术不仅能获得在单个细胞水平上具有统计学意义的海量数据,还可以更加深入地了解异质性细胞群的详细信息。
无论进行细胞亚群鉴定还是细胞功能研究,流式细胞术都发挥着重要作用,大大推动了科学研究的发展。
前言图1. 流式细胞术实验流程。
合理进行实验设计是保证流式实验成功的关键。
• 免疫学• 炎症• 肿瘤免疫• 实体肿瘤• 神经炎症• 基因编辑• 微生物学了解更多多色流式实验相关信息,请访问 thermofi/flowcytometry完成流式实验通常需要将多种抗体搭配成多色流式实验方案。
这本流式细胞术整体解决方案手册不仅介绍了Invitrogen ™ eBioscience ™ 流式抗体和Invitrogen ™ 流式细胞功能检测试剂,还展示了Invitrogen ™ Attune ™ 流式细胞仪在以下不同研究领域中的应用:流式细胞术整体解决方案实验流程样品制备确定免疫分型抗体选择缓冲液细胞功能检测活细胞死细胞实验对照上机检测3免疫细胞通常需要刺激活化后才能快速增殖或分化为成熟细胞(图2)。
处于活化状态的细胞经常高表达转录因子、细胞因子、趋化因子以及其他调节因子,这些指标均可通过流式细胞术进行检测。
选择合适的激活剂/刺激剂需要根据细胞类型、目的蛋白的表达水平和表达动力学以及具体实验条件而定。
样品制备:免疫细胞刺激试剂图2. 各种免疫细胞刺激试剂。
(A) 功能级抗体(如CD3抗体和CD28抗体)可用于T 细胞的活化和扩增。
(B) eBioscience 细胞刺激剂(Cell stimulation cocktail ),包括PMA 和离子霉素(ionomycin ),可刺激T 细胞产生γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-2(IL -2)和白介素-4(IL -4)。
Applied Research Laboratories, ARL, Thermo ARL元素分析Baird 元素分析Baker CAC/Envirotech Controls 散装材料处理Barnant离心机;密度、流量和物位测量;流体处理; 加热设备;材料表征及测试;样品制备;水质分析Barnstead冷水机,循环器,水浴;色谱;冷藏设备;加热设备;组织学设备;培养箱及环境控制箱;实验室耗材及移液器;分子光谱仪;样品制备;水纯化Bicron 辐射测量和保护BioImage 高内涵筛选与分析仪器Brandt, Brandt Instruments, Thermo Brandt 流量, 物位和密度测量Cahn, Thermo Cahn 材料表征Carlo Erba, CE Instruments 色谱, 质谱Cellomics 高内涵筛选与分析仪器CIDTEC, Thermo CIDTEC CID 摄影机及成像技术Clinical Labsystems, Thermo ClinicalLabsystems临床化学及自动化系统Consolidated Technologies 临床化学试剂CRS Robotics, Thermo CRS 实验室自动化及一体化Cryonix 样品储存和运输Cytomat 实验室一体化Damon/IEC, IEC, Thermo IEC 离心机Data Medical Associates, DMA, Thermo DMA 临床化学试剂Denley, Thermo Denley 冷藏设备Detection, Thermo Detection 散装材料处理Dharmacon RNA 干扰(RNAi)研究EC, Thermo EC 样品制备Eberline, ESM Eberline, Thermo Eberline 辐射测量和保护EFM 流量、物位和密度测量, 气体测量EGS Gauging, Inc. Web 测量Environmental Instruments, ThermoEnvironmental Instruments空气质量EnviroTech Measurement and Control 散装材料处理EPD, Siemens EPD 辐射测量和保护EPM Environmental 空气质量Erie Scientific临床化学试剂;细胞学设备, 实验室自动化及一体化;实验室耗材和移液器Euroglas, Thermo Euroglas 元素分析Eurotherm Web 测量Eutech Eutech 电化学水质分析仪器Finnigan, Finnigan MAT, Thermo Finnigan 色谱, 质谱Fisher Diagnostics 临床化学试剂Fisher Scientific International生命科学, 食品安全诊断, 化学药品, 自然科学, 科学教育, 卫生保健, 保险, 国家安全Flow Automation, Thermo Flow Automation 流量, 物位和密度测量, 气体测量Fluid Data 流量, 物位和密度测量, 气体测量Forma Scientific, Thermo Forma 冷藏设备Galactic, Thermo Galactic LIMS 和实验室软件Gamma-Metrics, Thermo Gamma-Metrics 核反应堆检测系统GasTech, Thermo GasTech 工业卫生Gebruder Haake, Haake, Thermo Haake 温度控制, 材料表征Gerhard Menzel, Menzel-Gl?zer 细胞学设备, 组织学设备Goring-Kerr, Thermo Goring-Kerr 散装材料处理H + P 振荡器, 搅拌器, 反应器, 灭菌锅, 蒸汽罐, 蒸汽发生器Haake, Gebruder Haake, Thermo Haake 温度控制, 材料表征Harris 冷冻柜, 冰箱Harshaw 辐射测量和保护Heraeus 离心机, 培养箱和冷藏柜Heto 样品制备Holten 生物安全柜Houston Atlas 分析仪Hybaid, Thermo Hybaid 分子生物HyClone 细胞培养与生物反应器Hydril PTD 流量, 物位和密度测量, 气体测量Hypersil, Hypersil-Keystone, ThermoHypersil-KeystoneHPLC 色谱柱IEC, Thermo IEC, Damon/IEC 离心机Innaphase LIMSInteractiva, Thermo Interactica 分子生物Ionalytics FAIMSJarrel-Ash, Thermo Jarrel-Ash, TJA Solutions 元素分析Jewett 冷冻柜, 冰箱Jouan 样品制备LabSystems, Thermo LabSystems LIMS 和实验室软件Labsystems, Thermo Labsystems 微孔板仪器或者实验室耗材和移液器LabVision/Neo Markers 临床化学试剂LFE Corporation Web 测量Life Sciences, Thermo Life Sciences 生命科学和实验室科学Lindberg Blue M 水浴, 马弗炉, 烘箱LMSi LIMS 和实验室软件MAT 振荡器, 空气净化系统Matrix Technologies临床化学及自动化系统;实验室自动化及一体化;实验室耗材及移液器;微孔板仪器Mattson, Thermo Mattson 分子光谱Measure Tech, Thermo Measure Tech 流量, 物位和密度测量Menzel-Gl?zer, Gerhard Menzel 细胞学设备, 组织学设备Metrika Systems 在线元素分析MF Physics, Thermo MF Physics 中子发生器MIE, Thermo MIE 工业卫生或者空气质量Moisture Systems, Thermo Moisture Systems 过程仪表Napco 加热设备National Nuclear 辐射测量和保护NERL Diagnostics 临床化学试剂NESLAB, Thermo NESLAB 温度控制Nicolet Instrument Corporation, NicoletIndustrial Solutions, Thermo Nicolet, ThermoNicolet Industrial Solutions分子光谱NITON LLC 便携式元素分析仪NORAN Instruments, Thermo NORAN 微区分析及成像ONIX, Thermo ONIX 分析仪Orion, Thermo Orion 水质分析Owl Separation Systems 样品制备Peek Measurement 流量, 物位和密度测量Pierce 蛋白质研究Polysonics, Thermo Polysonics 流量, 物位和密度测量Precision 加热设备PRISM, Thermo PRISM 材料表征Puffer Hubbard 冰箱Quest, Thermo Quest 色谱, 质谱Queue 培养箱和冷冻柜Radiometrie, Thermo Raidiometrie 平板测量Ramsey, Thermo Ramsey 散装材料处理Ranger 数据采集与管理Reactor Experiments 辐射测量和保护Reax, Thermo Reax 辐射测量和保护Revco 冰箱, 培养箱和冷冻柜Rhombix 蛋白质结晶Richard-Allan Scientific 临床化学试剂Rupprecht & Patashnick 环境监测Russell, Thermo Russell 水质分析Sarasota 流量, 物位和密度测量Savant, Thermo Savant 样品制备Scintag 元素分析Sentron, Thermo Sentron 检重秤,金属检测及 X 射线检测Seradyn 临床化学试剂Shandon, Thermo Shandon 解剖病理学Siemens EPD, EPD 辐射测量和保护Sorvall 离心机Spectrace Instruments 元素分析Spectra-Tech, Thermo Spectra-Tech 分子光谱Spectronic, Thermo Spectronic 紫外-可见分光光度计, 荧光TC Tech 细胞培养及生物反应器Teleshake 振荡器Texas Nuclear 元素分析, 流量, 物位和密度测量Thermedics Detection 散装材料处理Thermo Automation Systems 水质分析Thermo Detection 散装材料处理Thermo Elemental 元素分析Thermo Environmental Instruments 空气质量Thermo Flow Systems 流量, 物位和密度测量Thermo Jarrel-Ash, TJA Soultions 元素分析Thermo Measurement 流量, 物位和密度测量Thermo Optek 元素分析Thermo Quest, TMQ 色谱, 质谱Thermo Rheo 材料表征Thermo Separation Products 色谱, 质谱Thermo VG Scientific 微区分析及成像Thru-Put Systems LIMS 实验室软件Tokheim 流量, 物位和密度测量, 气体测量, Gas Measurement TN Technologies 流量, 物位和密度测量Trace Scientific, Thermo Trace 临床化学Tracor Northern 微区分析及成像Tracor, Tracor Westronics 数据采集和管理Tremetrics 色谱, 质谱Unicam 分析仪USCS LIMS 和实验室软件Vacuum Generators, Thermo VacuumGenerators真空和超高真空组件VG Elemental 元素分析VG Gas Analysis 分析仪VG Scientific, Thermo VG Scientific 微区分析及成像Westronics, Thermo Westronics 数据采集和管理。
流式细胞数分析的工作原理及应用1. 引言流式细胞数分析(Flow Cytometry)是一种广泛应用于细胞生物学和免疫学研究的技术。
它可以快速、准确地分析细胞的物理和化学特性,如大小、形态、颜色、表面标记物、细胞内蛋白等。
本文将介绍流式细胞数分析的工作原理,并探讨其在不同领域中的应用。
2. 工作原理流式细胞数分析主要基于细胞在流动系统中的物理性质和光学特性。
它包括以下几个基本步骤:2.1 细胞样品的制备在流式细胞数分析中,首先需要制备待测细胞的样品。
通常,细胞样品可以来自于血液、组织等来源。
样品应通过适当的方法进行预处理,如溶解红细胞、固定细胞、标记细胞等。
2.2 细胞的注射和流动制备好的细胞样品被注入到流式细胞仪中,其中带有一个细长通道。
样品中的细胞会以一定的速度通过通道,在流动过程中,细胞单个地经过激光束。
2.3 激光的照射和散射光信号的收集经过激光束照射后,细胞会散射出不同的光信号。
根据光的散射角度和强度,可以获得细胞的物理和形态参数。
激光束还可以与样品中的荧光物质发生作用,从而获得细胞内部的荧光信号。
2.4 光信号的检测和分析散射光信号和荧光信号会被流式细胞仪的光学系统捕获,并将其转换为电信号。
转换后的信号被放大、测量和分析。
这些信号可以提供有关细胞的信息,如细胞的数量、细胞周期、表面标记物的表达等。
3. 应用领域流式细胞数分析在生物医学研究中广泛应用,以下是几个常见的应用领域:3.1 免疫学研究在免疫学研究中,流式细胞数分析是一种常用的技术,可以帮助科研人员研究免疫细胞的数量、亚群分布和功能。
通过检测细胞表面标记物和细胞内蛋白的表达水平,可以了解免疫细胞的状态和功能。
3.2 肿瘤学研究流式细胞数分析在肿瘤学研究中扮演重要角色。
它可以帮助科研人员检测肿瘤细胞的表面标记物和细胞内信号分子,进一步了解肿瘤的发展和进展。
此外,流式细胞数分析还可以用于检测肿瘤组织中的免疫细胞浸润情况,评估肿瘤免疫环境的状态。
流式细胞术实验报告实验报告:流式细胞术一、实验目的本实验的目的是通过流式细胞术技术进行细胞的分析和定量的测定,研究细胞的物理与化学性质,同时对其进行分类鉴定。
二、实验原理流式细胞术是利用细胞本身特有的荧光素和荧光物质来进行细胞分析的一种方法,其基本原理是将待检测的细胞样品通过加荧光素和荧光物质,使细胞样品产生荧光信号,并利用激光束扫描进行荧光信号的测定,根据信号的强度和时间对细胞进行分类和测定。
三、实验步骤1.准备样品:取细胞样品进行悬液处理,去除其中的杂质。
2. 加荧光素和荧光物质:在样品中加入荧光素和荧光物质,使细胞样品产生荧光信号。
3. 流式细胞术仪:将样品注入流式细胞术仪,并通过激光束扫描进行荧光信号的测定。
4. 分析结果:根据测定结果进行数据处理,对细胞进行分类鉴定。
四、实验结果通过测定发现,本实验的细胞样品产生了明显的荧光信号,通过激光束扫描进行测定,得出了一组详细的细胞数据结果。
根据测定结果,我们可以对样品进行分类鉴定,得出了准确的实验数据结果。
五、实验结论通过本实验的结果分析,流式细胞术技术可以对细胞样品进行高效、准确的分析和测定,具有重要的科学研究意义和应用前景。
六、实验注意事项1. 在实验室操作时要注意安全,佩戴好相应的防护用具,避免意外伤害的发生。
2. 在加荧光素和荧光物质时,要掌握好药品和样品的使用量,避免荧光信号出现过度强度,否则会影响实验的结果。
3. 流式细胞术仪的操作需要掌握好相应的操作技能和流程,避免操作失误或损坏仪器设备。
四、实验器材和试剂1.细胞样品,可以是细胞悬液或组织细胞。
2. 荧光素和荧光物质,可以根据需要选择相应的荧光剂。
3. 流式细胞术仪,包括激光束扫描仪和电脑数据处理系统等。
5.实验操作时间本实验的操作时间大概需要2-3小时左右,其中包括样品准备、荧光素添加和细胞测量等步骤。
6.参考文献1.罗一驹, 刘思成, 陈艳妮. 流式细胞术[J]. 临床检验杂志, 2018,36(1):159-161.2.王婷婷, 王斌, 陈永瑞. 流式细胞术在癌症检测中的应用研究进展[J]. 华西药学杂志, 2018, 33(7):703-706.3.刘志俊, 吴德福, 于炜. 流式细胞术在肿瘤治疗中的应用研究[J]. 中国实用医学, 2018, 13(8):201-202.。