下载文档原格式
流式细胞术分析的工作原理及应用1. 工作原理流式细胞术（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域的细胞分析技术。
它基于细胞在流式细胞仪中通过单个细胞传感器单元的原理，可以实时、快速地检测和分析细胞的各种特性。
1.1 流式细胞仪原理流式细胞仪是流式细胞术分析的核心工具。
它将细胞悬浮液注入到一个窄小的液流中，并通过雷射束（Laser Beam）对细胞进行激发。
当细胞经过激发光束时，会发射出特定波长的荧光信号。
流式细胞仪通过光学设备收集并分析这些信号，从而获得关于细胞的信息。
1.2 细胞荧光标记在流式细胞术分析中，细胞通常会被标记上特定的荧光染料，以便测量其特定特征。
这些标记可以是单一的，也可以是多重的，用于同时分析多个参数。
1.3 数据分析流式细胞仪在测量细胞荧光信号的同时，还会记录细胞的大小、形状和荧光强度等参数。
这些数据可以通过特定的软件进行分析和解释，以获得关于细胞数量、细胞类型和细胞功能等方面的信息。
2. 应用领域流式细胞术分析具有广泛的应用领域，在生物医学研究和临床诊断中发挥着重要作用。
2.1 免疫学研究流式细胞术在免疫学研究中广泛应用，可以用于分析免疫系统中不同类型的细胞数量和功能。
通过对白细胞表面标记物的检测，可以检测特定细胞亚群的存在，并研究其在疾病和免疫反应中的作用。
2.2 肿瘤学研究流式细胞术在肿瘤学研究中也扮演重要角色。
它可以用来研究肿瘤细胞的增殖、存活和死亡等关键特性，进而评估药物治疗对肿瘤细胞的影响。
此外，流式细胞术还可以检测循环肿瘤细胞，从而提供肿瘤早期诊断和治疗监测的手段。
2.3 微生物学研究流式细胞术被广泛应用于微生物学研究中，可以用于分析微生物的数量和生物学特性。
通过对细菌、真菌和病毒等微生物的荧光标记，可以确定它们的种类、数量和活性，从而研究其生长规律和致病机制。
2.4 干细胞研究流式细胞术在干细胞研究中也扮演重要角色。
thermo流式细胞表面和细胞内染色方案流式细胞表面染色方案：1. 细胞准备：将待染色的细胞进行离心，去除培养基，用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次，离心沉淀后去除上清液。
2. 细胞固定：将细胞用4%的冷甲醛溶液进行固定，固定时间一般为15-30分钟。
3. 细胞洗涤：用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次，离心沉淀后去除上清液。
4. 细胞孵育：将细胞悬浮于含有特定抗体的PBS缓冲液中，孵育时间一般为30-60分钟。
5. 细胞洗涤：用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次，离心沉淀后去除上清液。
6. 细胞荧光标记：将细胞悬浮于含有荧光标记的二抗的PBS缓冲液中，孵育时间一般为30-60分钟。
7. 细胞洗涤：用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次，离心沉淀后去除上清液。
8. 细胞检测：将细胞悬浮于PBS缓冲液中，通过流式细胞仪进行细胞表面染色的检测。
流式细胞内染色方案：1. 细胞准备：将待染色的细胞进行离心，去除培养基，用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次，离心沉淀后去除上清液。
2. 细胞固定和渗透：将细胞用4%的冷甲醛溶液进行固定，固定时间一般为15-30分钟。
然后使用0.1%的Triton X-100或0.5%的Saponin进行细胞渗透，渗透时间一般为10-20分钟。
3. 细胞洗涤：用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次，离心沉淀后去除上清液。
4. 细胞孵育：将细胞悬浮于含有特定抗体的PBS缓冲液中，孵育时间一般为30-60分钟。
5. 细胞洗涤：用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次，离心沉淀后去除上清液。
6. 细胞荧光标记：将细胞悬浮于含有荧光标记的二抗的PBS缓冲液中，孵育时间一般为30-60分钟。
7. 细胞洗涤：用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次，离心沉淀后去除上清液。
8. 细胞检测：将细胞悬浮于PBS缓冲液中，通过流式细胞仪进行细胞内染色的检测。
流式细胞术详解一. 流式细胞术概述流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,•它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。
它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA 含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。
在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。
国内使用的流式细胞仪主要由美国的两个厂家生产:BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D 公司)。
流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。
BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL, B-D•公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。
EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能,•多用于科学研究。
二.流式细胞仪主要技术指标1．流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～ 5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。
2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。
3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～０.5μm。
4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，,一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。
流式细胞术检验白血病的基本原理与流程Flow cytometry is a technique used to analyze the physical and chemical characteristics of particles in a fluid as it passes through at least one laser. 流式细胞术是一种用于分析液体中颗粒的物理和化学特征的技术，它通过至少一个激光来实现。
This technique is commonly used in the diagnosis of various medical conditions, including leukemia. 这种技术通常用于诊断多种疾病，包括白血病。
Flow cytometry is based on the principle that cells, when suspended in a fluid and passed through the path of a laser beam, scatter light in patterns that correlate with specific properties of the cells. 流式细胞术的基本原理是，当细胞悬浮在液体中，并通过激光束路径时，它们以与特定细胞特性相关的方式散射光线。
This allows for the identification and analysis of different types of cells, including cancerous cells. 这使得可以鉴定和分析不同类型的细胞，包括癌细胞。
In the context of leukemia, flow cytometry plays a crucial role in the diagnosis and classification of the disease. 在白血病的背景下，流式细胞术对于该疾病的诊断和分类起着至关重要的作用。
流式细胞术整体解决方案Attune流式细胞仪|16,000+种流式抗体|60+种荧光染料|明星样品制备试剂|细胞功能试验|PrimeFlow 流式RNA分析2流式细胞术能够从单细胞水平同时分析细胞样本中的基因表达和蛋白表达，还可以检测细胞活性、细胞周期、细胞凋亡、细胞增殖和细胞氧化等细胞功能。
该技术不仅能获得在单个细胞水平上具有统计学意义的海量数据，还可以更加深入地了解异质性细胞群的详细信息。
无论进行细胞亚群鉴定还是细胞功能研究，流式细胞术都发挥着重要作用，大大推动了科学研究的发展。
前言图1. 流式细胞术实验流程。
合理进行实验设计是保证流式实验成功的关键。
• 免疫学• 炎症• 肿瘤免疫• 实体肿瘤• 神经炎症• 基因编辑• 微生物学了解更多多色流式实验相关信息，请访问 thermofi/flowcytometry完成流式实验通常需要将多种抗体搭配成多色流式实验方案。
这本流式细胞术整体解决方案手册不仅介绍了Invitrogen ™ eBioscience ™ 流式抗体和Invitrogen ™ 流式细胞功能检测试剂，还展示了Invitrogen ™ Attune ™ 流式细胞仪在以下不同研究领域中的应用：流式细胞术整体解决方案实验流程样品制备确定免疫分型抗体选择缓冲液细胞功能检测活细胞死细胞实验对照上机检测3免疫细胞通常需要刺激活化后才能快速增殖或分化为成熟细胞（图2）。
处于活化状态的细胞经常高表达转录因子、细胞因子、趋化因子以及其他调节因子，这些指标均可通过流式细胞术进行检测。
选择合适的激活剂/刺激剂需要根据细胞类型、目的蛋白的表达水平和表达动力学以及具体实验条件而定。
样品制备：免疫细胞刺激试剂图2. 各种免疫细胞刺激试剂。
(A) 功能级抗体（如CD3抗体和CD28抗体）可用于T 细胞的活化和扩增。
(B) eBioscience 细胞刺激剂（Cell stimulation cocktail ），包括PMA 和离子霉素（ionomycin ），可刺激T 细胞产生γ-干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-2（IL -2）和白介素-4（IL -4）。
