HPLC法测定石榴皮提取物中鞣花酸的含量

编号FZD0130 石榴皮提取物中鞣花酸(Ellagic Acid)含量测定方法
一、色谱条件
色谱柱：Supelco LC-18-DB 15cm×4.6mm 5μm
流动相：50%甲醇∶磷酸（100∶0.1，V/V）
流速：1mL/min
检测波长：255nm
柱温：室温
进样量：5μL
二、溶液制备
1．对照品溶液制备精密称取鞣花酸对照品约5mg于50mL容量瓶中，加入甲醇超声40min后冷却至室温定容即得。

2．样品溶液制备精密称取石榴皮提取物样品15mg（样品含量约为40%）于50mL容量瓶中，加入甲醇超声振荡40min后冷却至室温定容，用0.45μm微孔滤膜过滤,即得样品溶液。

三、样品测定
在上述色谱条件下，待仪器稳定后进样测定，逆没食子酸保留时间约7min，用外标法计算含量。

HPLC法测定藏药石榴莲花散中鞣花酸和胡椒碱的含量潘遐; 才让草; 李魁; 高晓昱; 才让三知; 张骞【期刊名称】《《中国民族民间医药》》【年(卷),期】2019(028)019【总页数】5页(P37-41)【关键词】石榴莲花散; 鞣花酸; 胡椒碱; 含量测定; 高效液相色谱法【作者】潘遐; 才让草; 李魁; 高晓昱; 才让三知; 张骞【作者单位】甘肃省定西市药品检验检测中心甘肃定西 743000; 甘肃省甘南藏族自治州药品检验检测中心甘肃甘南 747000; 甘肃省甘南藏族自治州藏医医院甘肃甘南 747000; 甘肃省甘南藏族自治州食品检验检测中心甘肃甘南 747000【正文语种】中文【中图分类】R284.1民族医药学是我国传统医药的重要组成部分，藏医药是我国医药宝库中的瑰宝之一，在藏族人民的防病治病中发挥了不可磨灭的作用，以其独特的疗效越来越被大家关注。

石榴莲花散由石榴子、肉桂、豆蔻、荜茇、波棱瓜子、黑冰片(炭)、诃子、蔷薇花八味中藏药材组成，具有温中健胃，消食[1]的功效，用于“培根甲布”病，积食不化，“赤巴”病，“木布”病，胃肠传染病等[2]。

从藏成药发展概况及现行质量标准研究存在的局限性和相关问题、方剂理论在藏成药质量标准研究中的指导意义进行探讨。

当前藏药标准体系建设相对比较滞后，导致藏药材生产、加工、管理过程不规范、不统一，优质、稳定、有效、可控的藏药材原料供给不足，严重制约了我省藏成药产业实现整体转型升级和提质增效。

藏成药石榴莲花散现行质量标准收载于《卫生部药品标准(藏药第一册)》(1995年版)，但该标准中只有【性状】和【检查】项[3]，缺乏【鉴别】、【含量测定】项目，不能有效控制各组成成分的质量，从而不能有效控制藏药制剂的质量。

本实验方法采用HPLC法对制剂中石榴子和诃子中鞣花酸进行含量测定，采用HPLC法对制剂中荜茇的胡椒碱进行含量测定，从而更加有效的控制藏成药石榴莲花散的质量。

鞣花酸的生产制备工艺研究鞣花酸是一种天然的多酚组分,具有抗氧化、抗癌、抗HIV、抗菌抗炎抗病毒,预防肥胖和糖尿病等功效,具有广阔的应用前景。

本论文研究了以石榴皮、五倍子、石榴皮提取液为原料来制备鞣花酸的工艺,并且研究了鞣花酸的提纯、脱铅工艺,对鞣花酸的生产应用具有重大意义,其主要的研究结果如下：1各地石榴皮中鞣花酸含量存在一定差异,含量从5.27%-8.16%不等；只进行一次碱溶酸沉和一次水洗就可以使鞣花酸纯度达到40%-50%左右,再增加碱溶酸沉或水洗步骤可以提高纯度,但产品质量有所下降；酸水解后的鞣花酸粗品不干燥直接用于提纯,不会影响提纯效果；对整个碱溶酸沉过程做物料衡算,发现碱溶过程损失的鞣花酸最少,损失量最多的是两次水洗过程,其次是酸沉过程；研究了利用亚硫酸酸水解石榴皮来制备鞣花酸的方法,得出了最佳水解条件：亚硫酸浓度5%,料液比为1：10,水解温度为120℃,反应时间为14h,得到的鞣花酸粗品的纯度是27.71%,收率是6.66%。

2研究了五倍子中单宁酸提取的工艺参数,发现浸取次数和料液比对浸取效果影响较大,浸取时间和浸取温度对浸取效果影响相对较小。

且当浸取次数为3次,浸取温度为60℃,料液比1：10,浸取时间2h,可约把五倍子中单宁总量的98%提取出来。

另外得出了反应体系pH对单宁酸氧化反应有极大影响,当初始pH为8.5,并保持pH不变,鞣花酸得率可达到44.13%,并确定了16h为单宁酸氧化反应的终点,以及当把酸沉终点pH设为4和2时,鞣花酸产品的纯度、收率、结构无明显差别,但pH为4时,鞣花酸外观更为良好。

3研究并优化了以石榴皮提取液为原料硫酸高温酸水解制备鞣花酸的工艺参数,当硫酸浓度为3%,水解时间为12h,料液比1：8,水解温度90℃,鞣花酸的得率为4.76%。

将此实验方案做相关改进后中试放大,最终处理石榴皮提取液约6000 L,得到鞣花酸粗品1.1t；对原有的提纯工艺进行了优化和改良,将原有的一步酸沉步骤分为两步,先将pH调至8使鞣花酸析出,离心之后对鞣花酸进行第二次酸沉,将pH调至4,使鞣花酸结构完整。

RP-HPLC法同时测定石榴皮和石榴汁中鞣花酸的含量范高福;付恩桃;汤洁;刘修树;王玮【摘要】目的:建立同时检测石榴皮、汁中鞣花酸的含量测定方法.方法:采用反相高效液相色谱法,Hyperil C18(250 mm ×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.3％TFA(20∶80)为流动相,梯度洗脱,流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长254nm.结果:鞣花酸0.1048 ～ 20.96 μg/mL之间线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为99.55％(RSD=1.44％,n=9).结论:此方法灵敏快速、准确易行,可用于石榴皮、汁中鞣花酸含量的同时检测.【期刊名称】《安徽科技学院学报》【年(卷),期】2016(030)005【总页数】4页(P67-70)【关键词】鞣花酸;石榴皮;石榴汁;反相高效液相色谱法;含量测定【作者】范高福;付恩桃;汤洁;刘修树;王玮【作者单位】合肥职业技术学院生物应用技术系,安徽合肥238000;合肥职业技术学院生物应用技术系,安徽合肥238000;合肥职业技术学院生物应用技术系,安徽合肥238000;合肥职业技术学院生物应用技术系,安徽合肥238000;合肥市食品药品监督检验所,安徽合肥238000【正文语种】中文【中图分类】S132石榴(Punica granatum L.)，别名安石榴，为石榴科石榴属落叶灌木或小乔木，具有药食同源价值，可以离体种植培养[1]，主要分布于安徽怀远、山东枣庄、陕西临潼、四川会理、云南蒙自、新疆叶城等地区。

石榴皮和石榴汁分别为石榴的干燥果皮和新鲜果汁，均含有丰富的多酚类、类黄酮、花色素等生物活性物质[2]，其中多酚类鞣花酸(ellagic acid, EA)成分研究较多，呈多酚二内酯结构特征，是没食子酸的二聚衍生物，具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎及抗菌等多种药理作用[3]。

据文献报道以石榴皮提取物测定鞣花酸含量方法较多，而以石榴汁为原料测定少见，未见对安徽地区石榴皮、汁中鞣花酸含量同时测定方法具体报道，本实验采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)，建立石榴皮、汁提取物中鞣花酸含量同时测定方法，为安徽本地石榴提取物的深加工研究与开发提供参考。

石榴皮中鞣花酸的提取工艺研究作者：李海霞王彩芳张红岭方晓燕董保国来源：《中国医药导报》2008年第24期[摘要] 目的：考察石榴皮中鞣花酸的提取工艺。

方法：选用4因素3水平正交表L9(34)，以薄层扫描法测定鞣花酸含量，考察4个因素（溶剂类型，提取时间，提取次数，溶剂用量）、3个水平对鞣花酸提取率的影响。

结果：鞣花酸的最佳提取工艺为用1 mol/L的盐酸水溶液、8倍量、回流提取60 min、提取2次；结论：溶剂类型对鞣花酸的提取率影响最大，本研究确定的鞣花酸提取工艺合理、可行。

[关键词] 石榴皮；鞣花酸；提取工艺；正交试验[中图分类号] R927[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）08（c）-050-02Study on extract technology of ellagic acid in the peels of Punica granatumLI Hai-xia1,WANG Cai-fang1, ZHANG Hong-ling1, FANG Xiao-yan2,DONG Bao-guo3(1. College of Pharmacy, Zhengzhou University, Zhengzhou450051，China;2. Henan College of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou450003，China;3.Technology Limited Company of Zhengzhou Times Flagship, Zhengzhou450008，China)[Abstract] Objective:To investigate the extract technology of ellagic acid in the peels of Punica granatum. Methods:The thin layer scanning method was used to determine the content of ellagic acid. The orthogonal design with three levels of four factors (the solvent, the extracting time, the extracting times and the amount of solvent) was adopted, using ellagic acid as index to evaluate the results. Results: The best extracting condition for ellagic acid was to add 8 times amounts of the water solution of 1 mol/L hydrochloric acid, and to reflux for 60 min and extract twice. Conclusion: The solvent has the maximal influence to the dissolutions of ellagic acid. The extract technology of ellagic acid was feasible and reasonable.[Key words] Peels of Punica granatum.;Ellagic acid;Extract technology;Orthogonal test石榴皮为石榴科植物石榴（Punica granatum.L）的干燥果皮，在传统中药及临床上较为常用。

石榴皮中活性成分鞣花酸的平衡溶解度与油水分配系数的测定施洋;孙芸;谢莉;田莉【摘要】目的：考察鞣花酸在25℃和37℃下不同 pH 磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度与表观油水分配系数（P app ）。

方法采用紫外-可见分光光度法测定鞣花酸在不同 pH 缓冲液中的平衡溶解度；采用摇瓶法测定鞣花酸的 P app 值。

结果25℃时鞣花酸在 pH 值为1．2、2．5、5．0、5．8、6．8、7．4、7．8～8．0的磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度分别为2．77、4．97、8．14、6．16、1．22、1．33、1．01 g／mL，相应条件下 P app 值分别为－3．20、－2．36、－2．49、－2．50、－2．48、－2．37、－2．22；37℃时鞣花酸在上述 pH 缓冲液中的平衡溶解度为3．25、5．08、8．04、6．39、1．02、1．54、1．14 g／mL，相应条件下的 P app 值分别为－2．38、－2．32、－2．38、－2．41、－2．44、－2．38、－2．18。

结论鞣花酸在酸性溶液中的平衡溶解度随 pH 值的升高而增大，在中性及弱碱性溶液中其溶解度较小。

在 pH 值为1．2～8．0时，鞣花酸的 P app 值均＜－2，表明鞣花酸不易透过生物膜，推测其在胃肠道的吸收不好，且温度对鞣花酸的 P app 值几乎无影响。

%Objective To determine the equilibrium solubility and the apperent oli/water partion coefficient (Papp )of ellagic acid in different pH phosphate buffer solutions in 25℃ and 37℃.Methods Ultraviol et spectrophotometry was employed to determine the equilibrium solubility of ellagic acid in phosphate buffer solutions of different pH value,and the P app values of ellagic acid were determined by shaking flask. Results At 25℃ the equilibrium solubility o f ellagic acid in different phosphate buffer solutions of pH 1.2, 2.5,5.0,5.8,6.8,7.4,7.8 - 8.0 were 2.77,4.97,8.14,6.16,1.22,1.33,1.01 g/mL,and the P app values of ellagicacid were - 3.20,- 2.36,- 2.49,- 2.50,- 2.48,- 2.37,- 2.22 respectively;At 37℃ the equilibrium solubility of ellagic acid in different phosphate buffer solutions of pH 1.2,2.5,5.0,5.8,6.8,7.4, 7.8-8.0 were3.25,5.08,8.04,6.39,1.02,1.54,1.14 g/mL,and the P app values of ellagic acid were -2.38,-2.32,- 2.38,- 2.41,- 2.44,- 2.38,- 2.18 respectively.Conclusion The equilibrium solubility of ellagic acid is increasing with pH increases in acidic solution and its solubility is less in neutral and weak al-kaline solution.The P app values of ellagic acid were <-2 at the pH range from 1.2 to 8.0,which shows it is not easy to through the biological membrane and the absorption is poor in the gastrointestinal tract.The temperature has little influence on the P app values of ellagic acid.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2016(000)002【总页数】4页(P145-148)【关键词】鞣花酸;平衡溶解度;表观油水分配系数【作者】施洋;孙芸;谢莉;田莉【作者单位】新疆医科大学学报编辑部，乌鲁木齐 830011; 新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐 830011;新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐 830011; 新疆医科大学新疆名医名方与特色方剂学重点实验室，乌鲁木齐 830011;新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐 830011;新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐 830011; 新疆医科大学新疆名医名方与特色方剂学重点实验室，乌鲁木齐 830011【正文语种】中文【中图分类】R943鞣花酸是石榴皮中的主要多酚类成分，属于没食子酸的二聚体衍生物，化学名为联二没食子酸内酯，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗诱变、抗癌变等作用，被广泛应用于医疗、化妆品、食品等领域[1-2]。

h t t p ://X B Y Z ．c b pt ．c n k i ．n e t 新疆不同产地石榴花中总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量测定李建梅１,李㊀颖２,希尔艾力 吐尔逊１∗(１．新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所维吾尔医方剂学重点实验室,乌鲁木齐㊀８３００４９;２．中国科学院大学,北京㊀１０００３９)摘要:目的㊀测定新疆不同产地石榴花中总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量.方法㊀采用紫外Ｇ可见分光光度法测定总鞣质的含量,H P L C 法测定没食子酸和鞣花酸的含量.结果㊀不同产地石榴花中总鞣质(３８．４４~１１３．９８m g g －１)㊁没食子酸(２．３９~３ ８１m g g －１)和鞣花酸(２．３７~５．３４m gg －１)含量差别均较大,和田皮山县石榴花中３种成分含量相对较高.结论㊀该方法准确㊁专属性强,可用于石榴花药材的质量控制.关键词:石榴花;总鞣质;没食子酸;鞣花酸D O I :１０．３９６９/j．i s s n ．１００４Ｇ２４０７．２０１９．０３．００４中图分类号:R ２８２㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:１００４Ｇ２４０７(２０１９)０３Ｇ０２９８Ｇ０４D e t e r m i n a t i o no f t o t a l t a n n i n s ,g a l l i ca c i da n de l l a g i ca c i d i n p o m e g r a n a t e f l o w e r s f r o m X i n j i a n g di f f e r e n t a r e a s L I J i a n m e i １,L IY i n g ２,X i r a l iT U R S U N １∗(１．K e y L a b o r a t o r y o fT r a d i t i o n a lU y g h u rM e d i c i n eP r e s c r i p t i o no f I n s t i t u t eo fX i n j i a n gT r a d i t i o n a lU y g h u rM e d i c i n e o fX i n j i a n g U y g u rA u t o n o m o u sR e g i o n ,U r u m q i ８３００４９,C h i n a ;２．U n i v e r s i t y o f C h i n e s eA c a d e m y of S c i e n c e s ,B e i j i ng １０００３９,C h i n a )A b s t r a c t :O b j e c t i v e T o c o m p a r e t h e c o n t e n t s o f t o t a l t a n n i n ,g a l l i c a c i d a n d e l l a g i c a c i d i n p o m e g r a n a t e f l o w e r s f r o mX i n j i a n g di f f e r Ｇe n t a r e a s ．M e t h o d s U l t r a v i o l e t a n dv i s i b l e s p e c t r o p h o t o m e t r y m e t h o dw a su s e df o rd e t e r m i n i n g th ec o n t e n t so f t o t a l t a n n i n s ,a n d H P L C m e t h o dw a su s e d f o r d e t e r m i n i n g t h e c o n t e n t o f g a l l i c a c i da n de l l a gi c a c i d ．R e s u l t s T h e c o n t e n t so f t o t a l t a n n i n s (３８．４４Ｇ１１３．９８m g g －１),g a l l i c a c i d (２．３９Ｇ３．８１m g g －１)a n de l l a g i c a c i d (２．３７Ｇ５．３４m g g －１)i n p o m e gr a n a t e f l o w e r s f r o md i f f e r e n t a r e a sw e r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t ,a n d t h e c o n t e n t s o f t h e ３c o m p o n e n t s i n s a m p l e s f r o mP i s h a n i nH e t i a nw e r e t h e h i gh e s t ．C o n c l u Ｇs i o n T h em e t h o d i s a c c u r a t e a n d r e l i a b l e ．I t c a nb eu s e da s t h e q u a l i t y c o n t r o lm e t h o do f p o m e gr a n a t e f l o w e r s ．K e y wo r d s :p o m e g r a n a t e f l o w e r s ;t o t a l t a n n i n s ;g a l l i c a c i d ;e l l a g i c a c i d 基金项目:新疆维吾尔自治区中医民族医药科技人才培养项目(编号:２０１６Ｇ０３Ｇ０５);新疆地产中药民族药新药研发培育项目(编号:Q ２０１５Ｇ０２Ｇ０４)作者简介:李建梅,女,副研究员∗通信作者:希尔艾力 吐尔逊,男,主任药师㊀㊀石榴花为石榴科植物石榴P i n i c a g r a n a t u m L ．的干燥花瓣,含有多酚类㊁黄酮类和三萜类等多种成分[１],在«中华人民共和国卫生部药品标准»(维吾尔药分册)中有记载[２],具有止泻收敛和止血止汗等功效,主治腹泻日久,外用治疗出血不止㊁口舌生疮㊁脱肛痔疮㊁口臭牙痛和皮肤瘙痒等,还可用于治疗中耳炎和糖尿病等[３].我国新疆和田㊁喀什和阿图什等地石榴品质较好,是新疆特产[４].石榴花资源丰富,含有丰富的活性物质,具有很高的保健及药用价值.文献报道,石榴整株植物活性物质的研究和开发多集中于石榴籽㊁叶和果皮,相对而言石榴花的研究内容较少,主要集中在黄酮类或多酚类物质的研究[５Ｇ１０],其资源开发也受到局限.本文采用紫外Ｇ可见分光光度法和H P L C法,首次测定了９个新疆不同产地的石榴花药材中的总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量,对其质量控制提供了数据支持,以期为开发利用石榴花资源提供科学依据.１㊀仪器与试药１．１㊀仪器㊀W a t e r s e ２６９５高效液相色谱仪,W a t e r s２４８９紫外检测器(美国沃特斯公司);C i n t r a ２０紫外Ｇ可见分光光度计(澳大利亚G B C 科学仪器公司);S E C U R A １２４Ｇ１C N 电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司);R U P T Ｇ１０ＧW 超纯水机(滕州新瑞分析仪器有限公司);D F T Ｇ２００手提式高速万能粉碎机(温岭市林大机械有限公司);P T HW 调温电热套(巩义市予华仪器有限责任公司);S K ８２１０H P 超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限公司).１．２㊀试药㊀没食子酸对照品(中国食品药品检定研究院提供,供含量测定用,批号１１０８３１Ｇ２００３０２);鞣花酸对照品(北京世纪奥科生物技术有限公司提供,供含量测定用,批号４７６Ｇ６６Ｇ４);甲醇㊁乙腈均为色谱纯[西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司];水为超纯水;磷酸㊁乙酸均为分析纯[赛默飞世尔科技(中国)有限公司];磷钼钨酸㊁碳酸钠和干酪素,均为分析纯(天津市大茂化学试剂厂);药材分别来自新疆和田皮山县㊁和田县㊁和田于田县㊁喀什叶城县㊁喀什疏附县和阿图什市等９个产地当年产的石榴花,并经希尔艾力 吐尔逊主任药师鉴定为石榴科植物石榴P i n i c a gr a n a t u m L ．的干燥花瓣.２㊀方法与结果２．１㊀总鞣质的测定２．１．１㊀对照品溶液的制备㊀精密称取没食子酸对照品１２．６m g,置于２５m L 棕色量瓶中,加水定容至刻度,使完全溶解,精密量取５．０m L,置于５０m L棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度为０ ０５０４m g m L－１的没食子酸对照品溶液.２．１．２㊀供试品溶液的制备㊀精密称取石榴花药材粉末(过６０目筛)０．４g,置于２５０m L棕色量瓶中,加水１５０m L,室温下放置２４h,超声处理１０m i n,冷却至室温,用水稀释至刻度,摇匀后滤过,弃初滤液,精密量取续滤液２０m L,置于１００m L棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得[１１Ｇ１５].２．１．３㊀检测波长的确定㊀取２．１．１项下制备的对照品溶液和２．１．２项下制备的供试品溶液各２．０m L,分别置于２５m L棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液１．０m L,再加水１０m L,以质量浓度为２９０g L－１的碳酸钠溶液定容,摇匀,室温下放置３０m i n,同法制备空白对照溶液,全波长扫描４００~９００n m.结果对照品溶液和供试品溶液均在７６０n m波长处有最大吸收,因此选择样品的检测波长为７６０n m.２．１．４㊀样品的测定㊀总酚的检测:精密吸取２．１．２项下制备的供试品溶液２．０m L,置于２５m L棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液１．０m L,摇匀,再加水１０m L,摇匀,用质量浓度为２９０g L－１的碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,室温下放置３０m i n,同时设置空白对照溶液,测定各溶液吸光度值并计算含量.未被吸附多酚的检测:称取０．６g干酪素,置于１００m L具塞锥形瓶中,精密加入２．１．２项下制备的供试品溶液２５m L,密塞,３０ħ水浴中保温１h,期间时时振摇,取出放冷至室温,摇匀,滤过,弃初滤液,精密量取续滤液２．０m L,按照总酚检测方法中自 加入磷钼钨酸试液１．０m L 起,制备样品,依法测定吸光度值,计算总鞣质含量,公式:总鞣质含量＝总酚含量－未被吸附的多酚含量.２．１．５㊀方法学考察２．１．５．１㊀线性关系考察㊀精密量取２．１．１项下制备的对照品溶液０．５,１．０,２．０,３．０,４．０和５．０m L,分别置于６个２５m L棕色量瓶中,先分别加入磷钼钨酸试液１．０m L,再加水定容至１３m L,以质量浓度为２９０g L－１体积分数为２９％的碳酸钠溶液定容,摇匀,室温下放置３０m i n,同时设置空白对照溶液,依法测定吸光度值A.以对照品质量浓度为横坐标(x)㊁吸光度值A为纵坐标(y),绘制标准曲线,计算回归方程为y１＝０．１００２x１－０．００３３,r１＝０．９９９６(n ＝６).说明没食子酸质量浓度在１．０００８~１０．０８００μg m L－１范围内与吸光度值的线性关系良好.２．１．５．２㊀精密度实验㊀精密吸取２．１．２项下制备的供试品溶液２．０m L,按照２．１．４项下方法测定供试品溶液的吸光度值,连续测定６次.结果６次吸光度R S D值为０．７７％(n＝６),表明该仪器精密度良好.２．１．５．３㊀重复性实验㊀精密称取同一批石榴花药材粉末６份,按照２．１．２项下方法制备供试品溶液,按照２．１．４项下方法检测总酚与未被吸附的多酚,计算样品中总鞣质的含量.结果６份样品的平均总鞣质含量为４９．６７m g g－１,R S D值为２．４３％(n＝６),说明该检测方法重复性良好.２．１．５．４㊀稳定性实验㊀取２．１．２项下制备的供试品溶液,在显色后的０,１５,３０,４０,５０和６０m i n测定吸光度值A.结果溶液在１h内吸光度R S D值为２．８６％(n ＝６),表明供试品溶液在配制后１h内稳定性良好.２．１．５．５㊀加样回收实验㊀精密称取石榴花药材粉末０．４g,置于２５０m L棕色量瓶中,加水１５０m L,室温下放置２４h后,超声处理１０m i n,冷却至室温,用水稀释至刻度,摇匀后滤过,弃初滤液,精密量取续滤液５．０m L,６份,分别置于５０m L棕色量瓶中,精密加入２．１．１项下制备的没食子酸对照品溶液８．０m L,用水稀释至刻度,摇匀.按照２．１．４项下样品检测方法测定吸光度值,计算总鞣质含量及回收率.结果６份样品的平均回收率为９９．１０％,R S D值为２．００％.２．２㊀没食子酸和鞣花酸的含量测定２．２．１㊀对照品溶液的制备㊀精密称取没食子酸与鞣花酸对照品适量,分别置于２５m L棕色量瓶中,加甲醇溶解并制成质量浓度分别为０．４５２和０．２４２m g m L－１的没食子酸对照品储备液和鞣花酸对照品储备液.精密吸取上述没食子酸对照品储备液２ ０和５．０m L,加甲醇分别定容至２５m L量瓶中,制成质量浓度为０ ０３６１６和０．０９０４m g m L－１的没食子酸对照品溶液;精密吸取鞣花酸对照品储备液１．０m L,置于１０m L量瓶中,用甲醇稀释至刻度,制成质量浓度为０ ０２４２m g m L－１的鞣花酸对照品溶液.２．２．２㊀供试品溶液的制备㊀没食子酸测定样品的制备:精密称取石榴花药材粉末０．３g,加水４０m L,回流提取４５m i n,定容至５０m L量瓶中,用０．４５μm微孔滤膜过滤,即得[１６Ｇ１７].鞣花酸测定样品的制备:精密称取石榴花药材粉末０．１g,加甲醇４０m L,回流提取１５m i n,定容至５０m L量瓶中,用０．４５u m微孔滤膜过滤,即得[１８Ｇ１９].２．３㊀色谱条件㊀色谱柱:W a t e r sX B r i d g eC１８(２５０m mˑ４．６m m,５μm);没食子酸测定流动相:乙腈Ｇ２m L L－１甲酸水溶液(１ʒ９９);鞣花酸测定流动相:乙腈Ｇ２m L L－１甲酸水溶液(２４ʒ７６);检测波长:２５４n m;流速:１．０m L m i n－１;进样量:１０μL;柱温:３０ħ[１５Ｇ２０].色谱图见图１.h t t p://X B Y Z．c b p t．c n k i．n e th t t p ://X B Y Z ．c b pt ．c n k i ．n et 图１㊀H P L C 图A．没食子酸对照品;B ．没食子酸样品;C ．鞣花酸对照品;D．鞣花酸样品;１．没食子酸;２．鞣花酸.F i g ．１H P L Cc h r o m a t o g r a m s A．r e f e r e n c e s u b s t a n c eo f g a l l i ca c i d ;B ．s a m pl eo f g a l l i ca c i d ;C ．r e f e r e n c e s u b s t a n c e o f e l l a g i c a c i d ;D．s a m p l e o f e l l a gi c a c i d ;１．g a l l i c a c i d ;２．e l l a gi c a c i d ．２．４㊀标准曲线的绘制与线性关系考察㊀精密吸取２．２．１项下制备的没食子酸对照品溶液２．０,５．０,８ ０,１１．０和１４．０μL ,鞣花酸对照品溶液１．０,３．０,５．０,７．０和９．０μL ,分别按照２．３项下色谱条件进样分析,以对照品峰面积为纵坐标(y )㊁进样量为横坐标(x )进行线性回归,得没食子酸和鞣花酸的回归方程分别为:y２＝３８８６３１１．６３x ２－２５１６．４４(r ２＝０ ９９９９)和y ３＝１０５４５５７０．２５x ３－４６２２４．００,(r ３＝０ ９９９９).结果表明,没食子酸与鞣花酸含量分别在０．０７２３２~０．５０６２０和０．０２４２０~０．２１７８０μg 范围内,进样量与峰面积线性关系良好.`２．５㊀精密度实验㊀精密吸取２．２．１项下制备的没食子酸和鞣花酸对照品溶液,按照２．３项下色谱条件注入液相色谱仪,重复进样６次,记录各自峰面积,没食子酸峰面积的R S D 值为０．５８％,鞣花酸峰面积的R S D 值为０．５３％.２．６㊀重复性实验㊀精密称取石榴花药材粉末(和田皮山县),按照２．２．２项下方法平行制备６份供试品溶液,按照２．３项下色谱条件分别测定没食子酸和鞣花酸的含量,结果６份样品中没食子酸和鞣花酸的平均含量分别为２．５１和３．３７m gg －１,R S D 值分别为２．０６％和１．７９％(n ＝６).２．７㊀稳定性实验㊀精密称取石榴花药材细粉(和田皮山县),按照２．２．２项下方法制备供试品溶液,分别在相应色谱条件下于０,２,４,６,８,１２和２４h 进样１０μL ,测定没食子酸和鞣花酸峰面积R S D 值分别为１ ０２％和１ ８７％(n ＝６).２．８㊀回收率测定㊀结果见表１.２．８．１㊀没食子酸㊀精密称取石榴花(和田皮山县)药材细粉６份,每份０．２５g ,加入２．２．１项下制备的质量浓度为０．０９０４m gm L －１的没食子酸对照品溶液３．５m L ,置于圆底烧瓶中,加１５m L 水回流提取４５m i n ,放冷至室温,定容至２５m L 量瓶中,平行制备６份供试品溶液,按照２ ３项下色谱条件进样测定,结果没食子酸的平均回收率为１００．９２％,R S D 值为１ ８５％.２．８．２㊀鞣花酸㊀精密称取石榴花(和田皮山县)药材细粉６份,每份０．０６g ,加入质量浓度为０ ２４２m gm L －１的鞣花酸对照品储备液０．８m L ,置于圆底烧瓶中,加入４０m L 甲醇回流提取１５m i n ,放冷至室温,定容至５０m L ,平行制备６份供试品溶液,按照２．３项下色谱条件进样测定,鞣花酸的平均回收率为１０１．３０％,R S D 值为１．７８％.表１㊀回收率测定结果T a b ．１R e s u l t s o f r e c o v e r y t e s t (n ＝６)成分样品量/μg 加入量/μg 测得量/μg 回收率/％平均回收率/％R S D/％没食子酸６４１．５６３１６．４０９７０．６７１０１．９８１００．９２１．８５６３８．０４３１６．４０９８０．８２１０４．１３６２８．００３１６．４０９３８．１８９９．０１６３４．７８３１６．４０９５３．２１１００．３２６４７．８３３１６．４０９６１．８２９９．６３６５０．５９３１６．４０９６９．７３１００．４２鞣花酸１７６．９３１９３．６０３６８．９７９９．１２１０１．３０１．７８１７３．２２１９３．６０３６９．２８１０１．４２１８６．３６１９３．６０３８６．４７１０３．４９１７３．８９１９３．６０３７３．３１１０３．３５１９１．７５１９３．６０３８６．３７１００．５３１８２．３２１９３．６０３７５．７１９９．８９２．９㊀样品的含量测定㊀按照２．２．２项下方法分别制备没食子酸和鞣花酸含量测定用供试品溶液,分别测定总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量,结果见表２.表２㊀不同产地石榴花含量测定结果T a b．２D e t e r m i n a t i o no f t h ec o n t e n t so f p o m e g r a n a t e f l o w e r s f r o md i f f e r e n t a r e a s产地总鞣质含量/m g g－１没食子酸含量/m g g－１鞣花酸含量/m g g－１库车县６２．７９２．３９５．３４和田于田县８５．６２２．６３３．０９喀什叶城县５８．３７３．８１２．３７和田洛浦县４５．４５２．６３３．２９和田皮山县１１３．９８３．１８５．２２和田墨玉县４２．６２２．５５４．４５和田县３８．４４２．５１３．２３喀什疏附县６０．４３３．４１３．０４阿图什市６０．９８３．６３４．３２３㊀讨论石榴花药材收载于«中华人民共和国卫生部药品标准(维吾尔药分册)»１９９９年版中,原标准仅有药材的显微鉴别项,未对其含量进行说明.本研究通过收集新疆不同产地的石榴花,检测其总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量,为新疆石榴花的质量控制提供理论依据.本研究采用梯度洗脱同时测定没食子酸与鞣花酸的含量,但由于石榴花中没食子酸与鞣花酸含量差异较大,同时检测峰面积差异较大,为了尽可能减小２种成分相互间含量的误差,且２种成分的样品制备条件亦不同,故选择以不同色谱条件㊁分别制备样品进行检测.所得各峰的分离度与拖尾因子均符合«中国药典»２０１５年版要求,峰形更好㊁干扰较小.该方法灵敏度高㊁分离度好㊁测定迅速㊁结果准确,为石榴花的质量控制提供了实验依据.本研究对新疆维吾尔自治区内不同产地石榴花进行检测发现,石榴花中总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量各有差异,和田皮山县石榴花的３种成分含量均显著高于其他产区石榴花,这一研究结果可能与新疆皮山县的 皮亚曼石榴 的久负盛名有关.同时对于开发利用石榴花提供了一定的参考依据.若利用这部分资源开发新制剂,可增加石榴的附加值,提高经济效益.参考文献:[１]㊀吴立军．天然药物化学[M]．５版．北京:人民卫生出版社,１９８８:３Ｇ１６．[２]㊀中华人民共和国卫生部药典委员会．中华人民共和国卫生部药品标准:维吾尔药分册[M]．乌鲁木齐:新疆人民卫生出版社,２０１４:１６．[３]㊀H u a n g T H W,P e n g G,K o t aB P,e ta l．P o m e g r a n a t ef l o w e r i m p r o v e s c a r d i a c l i p i dm e t a b o l i s m i n a d i a b e t i c r a tm o d e l:r o l e o f l o w e r i n g c i r c u l a t i n g l i p i d s[J]．B r i t J P h a r m,２００５,１４５:７６７Ｇ７７４．[４]㊀陈孝娟,顾正一,徐芳,等．不同产地的石榴皮总多酚的含量测定[J]．时珍国医国药,２０１１,２２(３):５４１Ｇ５４３．[５]㊀陈志伟,程鹏,王如刚,等．石榴花挥发油化学成分的G CＧM S分析及体外抗氧化活性测定[J]．中国医院药学杂志,２０１３,３３(４):２８０Ｇ２８２．[６]㊀钱世兵,开伟华,金家宏,等．不同产地石榴皮总黄酮含量及抗氧化活性比较研究[J]．首都医药,２０１４,(１２):８７Ｇ８８．[７]㊀张立华,张元湖,孙蕾,等．鞣花酸和三萜类物质在石榴不同器官中的分布[J]．食品科学,２０１５,３６(６):１３６Ｇ１３９．[８]㊀崔园园,陈志敏,张美,等．石榴皮炮制前后总鞣质及鞣花酸㊁安石榴苷含量变化研究[J]．亚太传统医药,２０１５,１１(２１):３８Ｇ４０．[９]㊀楚红英,罗晓,李瑜．石榴花中黄酮类成分的提取与含量测定[J]．中国酿造,２０１６,３５(２):１２７Ｇ１３０．[１０]杨彦霞,闫福林,王翔．石榴花化学成分研究[J]．中药材,２０１４,３７(５):８０４Ｇ８０７．[１１]张媛媛,刘福雪,乾康,等．正交试验优选诃子中总鞣质提取工艺研究[J]．江西中医药,２０１６,４７(４):６７Ｇ７０．[１２]周本宏,易慧兰,王耀华,等．地榆中总鞣质超声提取工艺研究[J]．中国民族民间医药,２０１５,(１):２７Ｇ２９．[１３]娄华勇,刘亚洲,张文芳,等．拳参中没食子酸和总鞣质的含量测定[J]．广西植物,２０１６,３６(６):７５２Ｇ７５７．[１４]朱林燕,孔子铭,谢建峰,等．藏药二十一味寒水石丸中的总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量测定[J]．西南民族大学学报:自然科学版,２０１４,４０(３):３８８Ｇ３９３．[１５]黄耀广,陈小雪,陈秀英．诃子㊁西青果和毛诃子的含量比较研究[J]．西北药学杂志,２０１７,３２(２):１５４Ｇ１５７．[１６]周小雅,梁光毅,刘雪梅．高效液相色谱法测定草龙中没食子酸的含量[J]．西北药学杂志,２０１４,２９(３):２３５Ｇ２３７．[１７]王奉悦,李汝卓,汪敏,等．西青果总鞣质中没食子酸和没食子酸乙酯含量测定及抗菌作用研究[J]．吉林医药学院学报,２０１７,３８(４):２４３Ｇ２４６．[１８]盛达成,陈凌,王文茂,等．高效液相色谱法同时分析五倍子提取物中的没食子酸和鞣花酸[J]．中国农学通报,２０１３,２９(４):１４８Ｇ１５４．[１９]杨小玲,刘地发,刘伟,等．山香圆叶药材中鞣花酸的提取分离与含量测定[J]．中国实验方剂学杂志,２０１４,２０(１０):５４Ｇ５７．[２０]李建梅,吐鲁洪 卡地尔,希尔艾力 吐尔逊．高效液相色谱法测定伊提日非力３种剂型中没食子酸和鞣花酸的含量[J]．医药导报,２０１８,３７(１):９１Ｇ９４．(收稿日期:２０１８Ｇ０６Ｇ３０)h t t p://X B Y Z．c b p t．c n k i．n e t。

石榴皮、石榴瓤及石榴籽的化学成分比较研究为比较石榴皮、石榴内瓤和石榴籽化学成分的差异，研究建立了石榴皮饮片的HPLC指纹图谱，对三者的化学成分进行了比较，并对没食子酸和鞣花酸含量进行测定。

结果表明，HPLC图谱可见石榴皮与石榴瓤之间化学成分无明显差别，仅成分含量有所不同，而石榴籽与其他二者化学成分存在较大的差异。

石榴皮中没食子酸和鞣花酸的质量分数分别为0.33%，0.59%，石榴瓤中没食子酸和鞣花酸的质量分数分别为0.52%，0.38%。

石榴籽中仅检测到鞣花酸，质量分数为0.01%。

由此可见，在石榴皮饮片净制过程中应去净石榴籽，以免影响饮片质量和临床疗效。

内瓤在保证充分干燥的前提下，可以保留。

标签：石榴皮；石榴瓤；石榴籽；HPLC指纹图谱；没食子酸；鞣花酸石榴皮始载于《雷公炮炙论》，为石榴科植物石榴Punica granatum L.的干燥果皮，具有涩肠止泻、止血、驱虫等功效，是临床常用的传统中药之一。

石榴皮约占到石榴质量的20%～30%[1]，石榴皮饮片的制备方法，2010年版《中国药典》描述如下“除去杂质，洗净，切块，干燥”[2]。

《全国中药炮制规范》中要求“除去杂质，去净残留的内瓤及种子，洗净，切块，干燥，或洗净，干燥后捣碎”[3]。

然而在对市场销售的石榴皮饮片调研中发现，市售石榴皮饮片中往往都含有大量石榴瓤和石榴籽，有一些样品中瓤和籽的量甚至超过了15%。

掺杂了大量内瓤和种子的石榴皮饮片是否会对其质量产生影响，石榴瓤和种子中化学成分与石榴皮又有何差异呢？针对上述问题，本研究建立了石榴皮饮片HPLC指纹图谱，采用该色谱条件对三者化学成分进行了比较，同时测定了石榴皮主要成分没食子酸和鞣花酸在三者中的含量情况，初步探讨了石榴皮、内瓤和籽化学成分的异同，本研究可为石榴皮饮片的净制提供一定的试验依据。

1 材料Waters 2695高效液相色谱仪；Waters 2996 DAD检测器；R200D 1/10万电子天平（德国Sartorius）；LC-350A超声波中药处理机（济宁市中区鲁超仪器厂）。