实验八血型鉴定及交叉配血试验

第1篇一、实验目的1. 了解交叉配血实验的基本原理和操作方法。

2. 掌握交叉配血实验在临床输血中的应用和意义。

3. 培养实验操作技能，提高实验观察和分析能力。

二、实验原理交叉配血实验是输血前相容性检测的重要环节，目的是检查受血者和供血者血液中是否含有不相配合的抗原、抗体成分，以避免输血不良反应和输血性溶血反应的发生。

交叉配血实验包括主侧配血和次侧配血。

主侧配血：将受血者血清与供血者红细胞混合，观察有无凝集现象，以发现受血者血清中是否含有与供血者红细胞起反应的抗体。

次侧配血：将供血者血清与受血者红细胞混合，观察有无凝集现象，以发现供血者血清中是否有与受血者红细胞引起反应的抗体。

三、实验材料1. 受血者血液样本：A型Rh阳性2. 供血者血液样本：A型Rh阳性3. 抗凝剂：EDTA-K24. 配血试剂：凝聚胺试剂、生理盐水、抗A、抗B试剂5. 仪器：离心机、移液器、显微镜等四、实验步骤1. 准备工作：将受血者和供血者的血液样本分别采集，加入抗凝剂，离心分离血清和红细胞。

2. 主侧配血：a. 将受血者血清与供血者红细胞各取适量，分别加入试管中。

b. 加入凝聚胺试剂，混匀，室温下放置15分钟。

c. 观察有无凝集现象。

3. 次侧配血：a. 将供血者血清与受血者红细胞各取适量，分别加入试管中。

b. 加入凝聚胺试剂，混匀，室温下放置15分钟。

c. 观察有无凝集现象。

4. 结果判断：a. 主侧配血和次侧配血均无凝集现象，表示配血相合。

b. 主侧配血或次侧配血有凝集现象，表示配血不合。

五、实验结果受血者和供血者的血液样本经过交叉配血实验后，主侧配血和次侧配血均无凝集现象，表示配血相合。

六、实验分析本次交叉配血实验结果显示，受血者和供血者的血液样本配血相合，说明两者在ABO血型和Rh血型方面没有不相配合的抗原、抗体成分。

这为临床输血提供了重要依据，有助于保证输血安全。

七、实验结论1. 交叉配血实验是输血前相容性检测的重要环节，对于保证输血安全具有重要意义。

血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤一.1. 血型鉴定排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型试管、患者RhD定型试管。

2.标本准备分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者 2%-5%红细胞悬液。

3.加样ABO正定型： 1 滴（ 50ul ）抗 A、抗 B 试剂加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。

ABO反定型： 1 滴（ 50ul ）患者血清加 1 滴（ 50ul ）反定型试剂红细胞。

RhD定型： 1 滴（ 50ul ）抗 D 血清加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。

4.二. 结果判断离心（ 2 档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。

不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法）1.排管标记 01、 02、 03 及自身对照管2. 加样各试管分别加入相应的患者血清 2 滴（ 100ul ）及筛选细胞 1 滴（ 50ul ）。

3.结果观察离心（ 2 档），观察结果先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。

各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心先观察上清液有无溶血弃去上清液，留约，轻轻混匀肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀肉眼观察凝集是否在1min 内消失显微镜检查三. 交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法）1.标本准备分离供血者血浆与红细胞三次洗涤，制备供血者 2%-5%红细胞悬液2.排管标记排管，主侧、次侧及自身对照管3.加样各试管分别加入相应的备检血清 2 滴（ 100ul ）及 2%-5%备检红细胞悬液 1 滴（ 50ul ）4.结果观察离心（ 2 档），观察结果先看上清液有无溶血轻轻混匀，肉眼观察有无凝集结果判断并记录各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心先观察上清液有无溶血弃去上清液，留，轻轻混匀肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀肉眼观察凝集是否在1min 内消失肉眼观察阴性者，显微镜检查记录交叉配血结果A、 B、O试验红细胞悬液的制备1.分别采取已知A、 B、O 三种血型的红细胞，经盐水洗涤 3 次，以压紧红细胞配成不同浓度的红细胞悬液（见表格）红细胞悬液的配置悬液浓度（ %）压实红细胞（滴）盐水（滴）2 1 （ 40）5 1 （ 16）10 1 （ 8）20 1 （ 4）2.为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取 3 个以上健康成人血液，按A、B、O 型分别混合后，按上法制备。

实验八交叉配血试验交叉配血就是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合,观察有无凝集现象(见图4-3-1-1)。

输血时,一般主要考虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集;其次才考虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。

前者叫交叉配血试验的主侧(也叫直接配血),后者叫交叉配血的次侧(也叫间接配血)。

只有主侧与次侧均无凝集,称为“配血相合”,才能进行输血;如果主侧凝集,称为“配血不合”或“配血禁忌”,绝对不能输血;如果主侧不凝集,而次侧凝集,可以认为“基本相合”,但输血要特别谨慎,不宜过快过多,密切注视有无输血反应。

【实验目的】学习交叉配血的三种常用方法。

【实验对象】人体(学生自愿者)。

【实验器材与药品】1.仪器显微镜,离心机。

2.器械采血针,消毒注射器,双凹玻片,小试管,竹签,棉球,腊笔。

3.药品标准A血清,标准B血清,生理盐水,75％酒精,碘酒。

【实验步骤与观察指标】图4-3-1-1 交叉配血示意图(一)红细胞悬浮液的配制按需要型别,取全血1ml,加等渗盐水2 ～3ml,充分摇匀离心沉淀,弃去上清液,然后再加生理盐水2 ～3ml按上述方法洗涤,共三次,取压积红细胞5 滴,加新鲜等渗盐水4 ml ,即成5 ％红细胞悬液。

(二)交叉配血基本原理见图4-3-1-1示。

盐水介质交叉配血试验实验原理天然IGM类血型抗体与对应的红细胞抗原在室温下盐水介质中发生凝集现象。

可以检查供、受者血清中就是否存在破坏对方RBC 的IgM抗体(ABO血型中抗A抗B抗体以IgM抗体为主)。

实验步骤取二试管,分别注明“主”、“次”字样,主侧滴入供血者红细胞悬液一滴与受血者血清一滴;次则滴入受血者红细胞悬液一滴与供血者血清一滴。

混匀后1000rpm离心1min,取出观察结果。

如两侧均无凝集现象,可多量输血;如主侧无凝集而次侧有凝集只可考虑少量输血;如主侧凝集则不能输血。

低离子聚凝胺介质交叉配血试验实验原理红细胞表面带有大量的负电荷,以避免其产生自发性聚集,当红细胞悬浮在电解质时,阳离子会被红细胞的负电荷所吸引,形成Zeta电位,Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。

一、实训目的通过本次实训，了解和掌握血型鉴定的基本原理和方法，熟悉交叉配血的操作步骤和注意事项，提高对输血安全性的认识。

二、实训时间2023年11月15日三、实训地点XX医学院检验科实验室四、实训人员XXX、XXX、XXX五、实训材料1. 血液样本：A型、B型、AB型、O型2. 试剂：抗A、抗B、抗D标准血清，生理盐水，玻片，竹签等3. 仪器：显微镜，离心机等六、实训内容1. 血型鉴定（1）操作步骤1）取玻片一张，用蜡笔将其分为三等份，分别标记为A、B、D。

2）分别加入抗A、抗B、抗D标准血清。

3）分别滴入待测血液样本。

4）用洁净竹签将试剂和血液充分混匀。

5）轻轻连续倾斜转动玻片25分钟，观察并记录。

（2）结果分析根据红细胞凝聚类型，可鉴别出A型、B型、AB型、O型。

2. 交叉配血（1）操作步骤1）取玻片一张，分为三等份，分别标记为主侧、次侧、对照。

2）主侧：分别滴入献血者红细胞和受血者血清。

3）次侧：分别滴入受血者红细胞和献血者血清。

4）对照：分别滴入生理盐水和抗A、抗B、抗D标准血清。

5）轻轻连续倾斜转动玻片25分钟，观察并记录。

（2）结果分析1）主侧、次侧均无红细胞凝聚，为配血相合。

2）主侧或次侧有红细胞凝聚，为配血不合。

七、实训结果1. 血型鉴定结果（1）待测样本1：A型（2）待测样本2：B型（3）待测样本3：AB型（4）待测样本4：O型2. 交叉配血结果（1）献血者A型，受血者B型：配血不合（2）献血者B型，受血者A型：配血不合（3）献血者AB型，受血者O型：配血相合（4）献血者O型，受血者AB型：配血相合八、实训总结1. 血型鉴定和交叉配血是输血安全的重要保障，必须严格按照操作规程进行。

2. 实训过程中，应注意观察红细胞凝聚情况，确保配血准确性。

3. 交叉配血实验结果对输血安全至关重要，必须严格执行。

4. 通过本次实训，加深了对血型鉴定和交叉配血的理解，提高了操作技能。

九、实训建议1. 增加实训次数，提高操作熟练度。

⾎型鉴定、交叉配⾎操作规程ABO、Rh-D⾎型鉴定操作规程1.⽬的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集：静脉采⾎2ml抗凝⾎,避免溶⾎试剂3. 试剂：长春博讯⽣物技术有限责任公司4.⽅法原理【原理】:标准⾎清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表⾯相应的抗原在盐⽔介质中发⽣特异性的凝集反应。

根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。

5. 操作:⼀、玻⽚法(⼀般只能做正定型)【正定型】:1、取⼀张玻⽚,⽤蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每⼀等份左上⾓标明A、B、D,2、对应加⼊抗A和抗B抗D标准⾎清⼀滴;3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);4、⽤洁净⽵签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2⼤⼩;5、轻轻地连续倾斜转动玻⽚2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型⾎;B端凝集为B型⾎;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,⽆凝集则为RH阴性。

备注:玻⽚法可作为ABO⾎型初筛或复检;不适⽤于抗体鉴定和交叉配⾎;不适合检测ABO亚型。

⼆、试管法(盐⽔介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者⾎清(⾎浆)中相应的抗体发⽣特异性结合,形成⾁眼可见的凝集反应,从⽽可推断出受检者的⾎型。

【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可⾃⾏新鲜配制);2、受试者⾎清或⾎清;3、洁净康⽒试管。

【正定型】:1、取⼆⽀洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加⼊抗A和抗B⾎清1滴;3、分别加⼊病⼈红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型⾎;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型⾎;抗A管凝集则为A型⾎;抗B管凝集则为B型⾎。

【反定型】:1、取⼆⽀试管分别记上AC和BC;2、分别加⼊病⼈⾎清;3、对应加⼊A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果;【解释】:⾸先检查上清液有⽆溶⾎,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型⾎;A、B管均不凝集则为AB型⾎;A管凝集则为B型⾎;B管凝集则为A型⾎。

实验八交叉配血试验交叉配血就是将受血者得红细胞与血清分别同供血者得血清与红细胞混合,观察有无凝集现象(见图4311)。

输血时,一般主要考虑供血者得红细胞不要被受血者得血清所凝集;其次才考虑受血者得红细胞不被供血者得血清所凝集。

前者叫交叉配血试验得主侧(也叫直接配血),后者叫交叉配血得次侧(也叫间接配血)。

只有主侧与次侧均无凝集,称为“配血相合”,才能进行输血;如果主侧凝集,称为“配血不合”或“配血禁忌”,绝对不能输血;如果主侧不凝集,而次侧凝集,可以认为“基本相合”,但输血要特别谨慎,不宜过快过多,密切注视有无输血反应。

【实验目得】学习交叉配血得三种常用方法。

【实验对象】人体(学生自愿者)。

【实验器材与药品】1.仪器显微镜,离心机。

2.器械采血针,消毒注射器,双凹玻片,小试管,竹签,棉球,腊笔。

3.药品标准A血清,标准B血清,生理盐水,75％酒精,碘酒。

【实验步骤与观察指标】图4311 交叉配血示意图(一)红细胞悬浮液得配制按需要型别,取全血1ml,加等渗盐水2 ～3ml,充分摇匀离心沉淀,弃去上清液,然后再加生理盐水2 ～3ml按上述方法洗涤,共三次,取压积红细胞5 滴,加新鲜等渗盐水4 ml ,即成5 ％红细胞悬液。

(二)交叉配血基本原理见图4311示。

盐水介质交叉配血试验实验原理天然IGM类血型抗体与对应得红细胞抗原在室温下盐水介质中发生凝集现象。

可以检查供、受者血清中就是否存在破坏对方RBC 得IgM抗体(ABO血型中抗A抗B抗体以IgM抗体为主)。

实验步骤取二试管,分别注明“主”、“次”字样,主侧滴入供血者红细胞悬液一滴与受血者血清一滴;次则滴入受血者红细胞悬液一滴与供血者血清一滴。

混匀后1000rpm离心1min,取出观察结果。

如两侧均无凝集现象,可多量输血;如主侧无凝集而次侧有凝集只可考虑少量输血;如主侧凝集则不能输血。

低离子聚凝胺介质交叉配血试验实验原理红细胞表面带有大量得负电荷,以避免其产生自发性聚集,当红细胞悬浮在电解质时,阳离子会被红细胞得负电荷所吸引,形成Zeta电位,Zeta电位决定红细胞之间得排斥作用。

血型鉴定与交叉配血试验（1）ABO血型鉴定：正反定型标准血清+被检者红细胞标准红细胞+被检者血清被鉴定的血型抗A 血清抗B 血清抗AB血清（O型血清）A型红细胞B型红细胞O型红细胞+-+-+-A型-+++--B型+++---AB型---++-O型用标准血清及标准红细胞鉴定ABO血型结果正定型反定型（2）交叉配血试验：输血前必须进行交叉配血试验，其目的主要是进一步验证供者与受者的ABO血型鉴定是否正确，以避免血型鉴定错误导致输血后严重溶血反应。

Ø交叉配血试验常采用试管法进行Ø受血者血清加供血者红细胞悬液相配的一管称为主侧Ø供血者血清加受血者红细胞相配的一管称为次侧（一）ABO血型系统（一）ABO血型系统交叉配血的结果判断：Ø同型血 主侧管与次侧管均无凝集反应，表示配血完全相合，可以输血；不论何种原因导致主侧管有凝集时，则绝对不可输用。

Ø异型血 主侧管无凝集及溶血，而次侧管出现凝集，但凝集较弱，效价<1∶200，可以试输少量（不超过200ml）该型血液。

理论上可以，但实际上不允许这样做，并且做的临床实际价值不大。

配血方法的选择：ABO血型系统 Ø对无输血史及妊娠史者，可只作盐水介质凝集试验。

Ø对有反复输血史及妊娠史者，则应作间接抗球蛋白配血法。

Ø在48小时内输入5L或更多量的大量输血时，因需同时输入多名供血者的血液，因此除了进行受血者与各供血者的交叉配血外，还应坚持作供血者之间的交叉配血试验，只有相互交叉配合完全相合时才能输用。

（一）ABO血型系统一、红细胞血型系统受血者有输血史、妊娠史或短期内要大量输血时按规定要进行意外抗体的筛查4.ABO血型系统的临床意义（1）在输血上的意义Ø输血在临床上的应用颇为广泛，如严重失血或某些手术时，输血常是治疗和抢救的重要措施。

Ø为防止输血反应必须坚持同型输血。

实验八交叉配血试验交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合，观察有无凝集现象（见图4-3-1-1）。

输血时，一般主要考虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集；其次才考虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。

前者叫交叉配血试验的主侧（也叫直接配血），后者叫交叉配血的次侧（也叫间接配血）。

只有主侧和次侧均无凝集，称为“配血相合”，才能进行输血；如果主侧凝集，称为“配血不合”或“配血禁忌”，绝对不能输血；如果主侧不凝集，而次侧凝集，可以认为“基本相合”，但输血要特别谨慎，不宜过快过多，密切注视有无输血反应。

【实验目的】学习交叉配血的三种常用方法。

【实验对象】人体（学生自愿者）。

【实验器材和药品】1．仪器显微镜，离心机。

2．器械采血针，消毒注射器，双凹玻片，小试管，竹签，棉球，腊笔。

3．药品标准A 血清，标准B 血清，生理盐水，75％酒精，碘酒。

实验步骤和观察指标】红细胞红细胞血清血?I图4-3-1-1交叉配血示意图（一）红细胞悬浮液的配制按需要型别，取全血Iml ,加等渗盐水2〜3ml ,充分摇匀离心沉淀，弃去上清液，然后再加生理盐水2〜3ml按上述方法洗涤，共三次，取压积红细胞5滴，加新鲜等渗盐水4 ml ,即成5 %红细胞悬液。

（二）交叉配血基本原理见图4-3-1-1示。

盐水介质交叉配血试验实验原理天然IGM类血型抗体与对应的红细胞抗原在室温下盐水介质中发生凝集现象。

可以检查供、受者血清中是否存在破坏对方RBC的IgM抗体（ABo血型中抗A抗B抗体以IgM抗体为主）。

实验步骤取二试管，分别注明“主”、“次”字样，主侧滴入供血者红细胞悬液一滴和受血者血清一滴；次则滴入受血者红细胞悬液一滴和供血者血清一滴。

混匀后100OrPm离心Imin，取出观察结果。

如两侧均无凝集现象，可多量输血；如主侧无凝集而次侧有凝集只可考虑少量输血；如主侧凝集则不能输血。

低离子聚凝胺介质交叉配血试验实验原理红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，形成Zeta 电位，Zeta 电位决定红细胞之间的排斥作用。