微生物-金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌1 简述金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为葡萄球菌属中的一种，广泛分布于自然界，空气、土壤、水及物品上，人和动物皮肤及与外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。

本菌可产生多种毒素及酶，这些毒性物质引起局部及全身化脓性炎症，严重时可发展成为败血症和脓毒血症，是人类化脓性感染中重要的病原菌。

本菌抵抗力较强，干燥情况下能生存数月，80℃30min的条件下尚能存活，5%石炭酸或0.1%升汞溶液10～15min才会被杀死。

金黄色葡萄球菌检查按增菌、分离、纯培养、革兰染色、镜检和血浆凝固酶试验等步骤进行。

本法使用于外用药品及一般滴眼剂、眼膏剂的检查。

2 仪器、设备及用具（见大肠埃希菌2）。

3 试液、指示液3.1 0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2无菌磷酸盐缓冲液[附录3.1，3.5]。

3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液[附录3.2]。

3.3 革兰染色液[附录2.4，2.10，2.16]。

3.4 无菌枸橼酸纳氯化钠溶液[附录2.7]。

3.5 血浆的制备以无菌注射器吸取灭菌的5%枸橼酸纳的0.9%的氯化钠溶液1ml，用无菌操作采取家兔（或羊、人）血9ml，轻轻混匀数分钟。

待血液不凝固时，徐徐放入灭菌离心管中，及时离心（500r/min离心5min0，分离血浆，用灭菌吸管将血浆转移至灭菌试管中，置冰箱备用。

临用前必须用已知血浆凝固酶试验阳性的金黄色葡萄球菌（如金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]测试，证明血浆合格后，方可用于试验。

3.6 1%酚磺酞指示液[附录4.4]。

4 培养基4.1 营养肉汤培养基[附录5.1]。

4.2 营养琼脂培养基[附录5.2]。

4.3 亚碲酸盐肉汤培养基[附录5.15]。

4.4 卵黄氯化钠琼脂培养基[附录5.16]。

4.5 甘露醇氯化钠琼脂培养基[附录5.17]。

5 对照用菌液取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基中，36℃±1℃培养18～24h，用0.9%无菌氯化钠溶液，按10倍递增稀释至1:106，加入含10～100cfu的对照菌菌液（一般用量为1:1060.1ml），同时用营养琼脂平板计数。

金黄色葡萄球菌的检查同学们，这一节我们一起来学习一下第四章微生物限度检查法中的金黄色葡萄球菌的检查。

金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属中的一种。

本菌在自然界分布甚广，空气、土壤、水和日常用具，人的皮肤。

看，这就是金黄色葡萄球菌，它是一种革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。

该菌是葡萄球菌中致病力最强的一种，可经皮肤、粘膜侵入人体引起化脓性病变等局部及全身化脓性炎症，严重时可导致败血症。

所以，国家规定外用药品和一般滴眼剂、眼膏剂、软膏剂等规定不得检出金黄色葡萄球菌，检验金黄色葡萄球菌有重要意义。

金黄色葡萄球菌的操作流程如图所示，与之前讲述过的其他控制菌的检查一样：在完成培养基的配制和供试品的处理后，用营养肉汤于30～35℃增菌培养18～24小时，必要时可延至48小时。

增菌培养的目的使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检。

接着，进行分离纯化，其目的是使被检菌从混合菌中分离出来。

以接种环沾取以接种环沾取1～2环培养液，划线接种于卵黄氯化钠琼脂平板或甘露醇氯化钠琼脂平板上，置30～35℃培养24～72小时。

当阳性对照平板呈典型菌落生长时，供试品分离平板无菌落生长，或有菌落生长但不同于表中所列特征，可判为未检出金黄色葡萄球菌。

若供试品分离平板生长的菌落与表中所列特征相似疑似时，应选取2～3个以上菌落，分别接种于营养琼脂斜面上，于30～35℃培养18～24小时，取其培养物做以下检查。

1. 革兰染色镜检革兰染色镜检观察显微镜下的细菌结构是否符合金黄色葡萄球菌的形态特征：金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，无芽孢，无荚膜。

排列呈不规则的葡萄状，亦可呈单个、成双或短链状排列，菌体较小。

2. 血浆凝固酶试验金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，能将血浆里的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，使血浆凝固。

检查时，轻轻将试管倾斜（动作勿大），仔细观察，阴性对照管血浆应流动自如，阳性对照管血浆应凝固状，若试验管液血浆凝固为血浆凝固酶试验阳性；否则为阴性。

金黄色葡萄球菌（牛肉膏蛋白胨培养基）一、生物学特性典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 ^m左右，显微镜下排列成葡萄串状。

金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。

金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37。

C，最适生长pH7.4。

平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。

血平板菌落周围形成透明的溶血环。

金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15% NaCI肉汤中生长。

可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。

甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。

许多菌株可分解精氨酸，水解尿素, 还原硝酸盐，液化明胶。

金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。

二•流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。

因而，食品受其污染的机会很多。

近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。

金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占4 5% ,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。

金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。

此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。

上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83% ,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。

一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。

肠毒素形成条件：存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。

金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验的原理是通过培养和鉴定来确定细菌是否为金黄色葡萄球菌。

具体步骤如下：
1. 培养：将样本在含有富含营养物质的培养基上进行培养。

金黄色葡萄球菌在常见的琼脂培养基上能够快速生长并形成典型的黄色菌落。

2. 鉴定：通过一系列的生化反应和特征性实验来确认细菌的身份。

金黄色葡萄球菌一般具有以下特征：
- 革兰氏染色：呈阳性，即菌体呈紫色。

- 非运动性：无鞭毛或鞭毛不活跃。

- 产生黄色色素：金黄色葡萄球菌能够产生一种特殊的黄色色素，使得菌落呈现金黄色。

3. 确认：通过进一步的检测，如凝胶酶试验和DNA鉴定等，来进一步确认菌株是否为金黄色葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，可以引起多种感染，如皮肤感染、呼吸道感染和食物中毒等。

通过对其进行准确快速的检验可以帮助医生进行针对性治疗和控制传播。

金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界中，同时也是人体皮肤和黏膜的正常微生物。

金黄色葡萄球菌也是人体病原微生物中的一种，并且可以引起一系列的感染疾病，包括皮肤感染、肺炎、败血症等严重疾病。

及时、准确地检测金黄色葡萄球菌对于预防和控制与该菌相关的疾病具有重要意义。

金黄色葡萄球菌的检验技术主要包括细菌培养、生化鉴定、药敏试验等，下面将对这些技术进行介绍。

一、细菌培养1. 培养基金黄色葡萄球菌主要可在营养琼脂、大豆肉汤琼脂、牛肉心脏培养基等细菌培养基上生长。

营养琼脂是最常用的培养基，可用于对金黄色葡萄球菌的初步筛查。

2. 培养条件金黄色葡萄球菌在37°C下培养24-48小时，产生充分的菌落。

3. 形态特征金黄色葡萄球菌在琼脂培养基上可形成金黄色的圆形菌落，直径一般在1-2mm左右。

二、生化鉴定1. 皮肤试验皮肤试验是金黄色葡萄球菌的特异性鉴定方法之一，又称为凝集素试验。

通过皮肤试验，可以判断金黄色葡萄球菌是否具有产生凝集素的能力。

2. 协和试验协和试验又称凝集酶试验，是用于检测金黄色葡萄球菌产生凝集酶的一种生化试验。

该试验通过将金黄色葡萄球菌的培养液加入到含有凝集酶专一底物的试管中，观察底物被溶解的情况，用于判断金黄色葡萄球菌是否产生凝集酶。

3. 床旋试验床旋试验又称为巯基甲酸盐试验，是一种利用巯基甲酸盐来检测金黄色葡萄球菌的特异性试验。

通过观察琼脂培养基上金黄色葡萄球菌菌落周围出现的红色环的形成情况，判断金黄色葡萄球菌是否产生巯基甲酸盐酶。

4. 溶血酶试验溶血酶试验是一种通过检测金黄色葡萄球菌产生的溶血酶来鉴定其特性的生化试验。

溶血酶试验主要有两种方法：血凝素试验和牛血红蛋白试验。

这两种方法都是通过观察金黄色葡萄球菌对红细胞造成的溶血现象来判断其产生的溶血酶。

三、药敏试验药敏试验是检测金黄色葡萄球菌对抗生素的敏感性的一种方法。

金黄色葡萄球菌【微生物特征】金黄色葡萄球（Staphylococcus aureus）菌隶属于萄球菌属，为凝固酶阳性葡萄球菌，革兰染色阳性，呈单、双、短链或不规则葡萄串样排列（图1A，XXX倍下电镜照片）。

在血琼脂平板上菌落通常呈金黄色（图1B，37℃条件下平板培养几天），周围有明显的β溶血环（图1C）。

C图1. 金黄色葡萄球菌图1-1-1 A: 金黄色葡萄球菌。

B：血琼脂平板培养菌落照片；C：血琼脂平板培养菌落的β溶血环【临床意义】金黄色葡萄球菌主要寄生在人鼻腔，尤其是鼻前庭后部，是一种重要的机会性病原菌，其引起的人类疾病主要包括化脓性和毒素性两种类型：1.化脓性感染以脓肿形成为主，多数发生在皮肤组织，可表现为毛囊炎、疖、痈、伤口化脓以及脓肿等。

也可以引起深部脏器的脓肿或化脓性感染，如气管炎、肺炎、脓胸、中耳炎、骨髓炎等。

若皮肤原发化脓灶受到外力挤压或机体抵抗力下降，则会引起败血症，脓毒血症等；2.金黄色葡萄球菌产生外毒素可引起人体毒素性疾病。

如果摄入产生肠毒素的金黄色葡萄球菌污染的食物后，可造成急性胃肠炎的症状，即食物中毒。

其他还可引起烫伤样皮肤综合征以及毒性休克综合征，若不及时治疗病死率均较高。

【常见感染部位】皮肤、软组织、骨骼肌肉系统等。

【药物敏感性】“CHINET中国细菌耐药监测网”2021数据显示：甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的检出率为30%，该菌对青霉素、左氧氟沙星、克林霉素的耐药率为92.2%、14.2% 和32.6%，未发现对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药的金黄色葡萄球菌。

【主要耐药机制】耐甲氧西林金黄色葡萄球（MRSA），因其获得mecA基因或其它同系物，编码青霉素结合蛋白（PBP）、形成PBP2a，降低β-内酰胺抗生素活性，表现出对所有β-内酰胺类药物包括青霉素类、碳青霉烯类和头孢菌素类（除外具有抗MRSA活性的第五代头孢菌素如头孢罗膦）耐药。

【临床治疗】1.葡萄球菌的治疗包括迅速予以抗菌治疗和控制感染源，如去除与感染有关的血管导管和在有脓肿时行手术引流等操作；2.甲氧西林(苯唑西林)敏感葡萄球菌认为对下列抗菌药物也敏感：（1）β-内酰胺合剂(阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦)；（2）口服头孢烯类(头孢克洛、头孢地尼、头孢氨苄、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢呋辛、氯碳头孢)；（3）注射头孢烯类包括一、二、三和四代头孢菌素类(头孢孟多、头孢唑林、头孢吡肟、头孢美唑、头孢尼西、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢替坦、头孢唑肟、头孢曲松、头孢呋辛、头孢罗膦、拉氧头孢)；（4）碳青霉烯类(多立培南、厄他培南、亚胺培南、美罗培南)；3.除头孢罗膦外，甲氧西林(苯唑西林)耐药金黄色葡萄球菌对目前所有β-内酰胺类药物耐药，其所致感染的治疗首选万古霉素，次选治疗药物包括替考拉宁、利奈唑胺、达托霉索、特拉万星，头孢罗膦等。

食品微生物之檢驗方法－金黃色葡萄球菌之檢驗1. 適用範圍：本方法適用於食品中金黃色葡萄球菌及其腸毒素（enterotoxins）之檢驗。

2. 檢驗方法2.1. 工作環境：工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。

每15分鐘落菌數不得超過15 CFU／培養皿。

2.2. 器具及材料2.2.1. 乾熱滅菌器。

2.2.2. 高壓滅菌釜。

2.2.3. 冰箱：能維持5 ±3℃者。

2.2.4. 培養箱：能維持內部溫度溫差±1.0℃以內者。

2.2.5. 水浴：能維持水溫溫差±0.2℃以內者。

2.2.6. 攪拌均質器（Blender）或鐵胃（Stomacher）：能適用於無菌操作者。

2.2.7. 天平：可稱量到2000 g，靈敏度為0.1 g；可稱量到120 g，靈敏度為5 mg。

2.2.8. 顯微鏡：能放大至1000倍之一般光學顯微鏡。

2.2.9. 旋渦混合器（Vortex mixer）。

2.2.10. 離心機：轉速可達3000 rpm以上。

2.2.11. pH測定儀。

2.2.12. 加熱器。

2.2.13. 吸管輔助器（Pipette aid）。

2.2.14. 微量吸管（Micropipette）：10 μL、20 μL、200 μL及1000 μL。

2.2.15. 吸管（Pipette）：已滅菌。

1 mL吸管應有0.01 mL之刻度、5及10 mL吸管應有0.1 mL刻度。

2.2.16. 吸管尖（Tip）：可滅菌。

10 µL、20 µL、200 µL及1000 µL。

2.2.17. 培養皿：已滅菌，內徑約90 mm，深度約15 mm，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮痕或其他缺點。

2.2.18. 稀釋用容器：無菌袋或有1000 mL、500 mL、99 m及90 mL標記附蓋（栓）之可滅菌廣口瓶。