HPLC 法测定米拉贝隆原料药中有关物质

米拉贝隆有关物质的合成鲍雨贤;张为;陈波;张庆华;徐广宇【摘要】To strengthen the quality control of mirabegron API , eight related substances of mirabegron were synthesized from nitrophenylacetonitrile and mandelic acid .The structures of impuritie A~H were confirmed by 1 H, 13 C NMR and MS, and their purities were determined by HPLC analysis .The impurities synthesized could be used as the reference substances of the related substances in the quality control of mirabegron .%为加强对米拉贝隆原料药的质量控制,以硝基苯乙腈和扁桃酸为原料合成了米拉贝隆的8个有关物质A~H,所合成的化合物结构经1 H-NMR,13 C-NMR与MS谱确证,其纯度经HPLC法检测,表明有关物质A~H可作为米拉贝隆质量控制的杂质对照品.【期刊名称】《湖南师范大学自然科学学报》【年(卷),期】2017(040)005【总页数】8页(P51-58)【关键词】米拉贝隆;工艺;杂质;合成【作者】鲍雨贤;张为;陈波;张庆华;徐广宇【作者单位】湖南师范大学化学化工学院,中国长沙 410081;湖南师范大学医学院,中国长沙 410013;湖南方盛制药股份有限公司,中国长沙 410205;湖南方盛制药股份有限公司,中国长沙 410205;湖南师范大学化学化工学院,中国长沙 410081【正文语种】中文【中图分类】TQ463Abstract To strengthen the quality control of mirabegron API, eight related substances of mirabegron were synthesized from nitrophenylacetonitrile and mandelic acid. The structures of impuritie A～H were confirmed by 1H, 13C NMR and MS, and their purities were determined by HPLC analysis. The impurities synthesized could be used as the reference substances ofthe related substances in the quality control of mirabegron.Key words mirabegron; process; related substances; synthesis米拉贝隆(Mirabegron)由日本安斯泰来制药公司开发，于2011年在日本上市，2012年美国食品药品监督管理局批准用于治疗成年人膀胱过度活动症[1].米拉贝隆可以选择性地与膀胱肌肉的β3-肾上腺能受体相结合，将其激活而松弛膀胱肌肉、提高膀胱的容量，利于储尿，可以减少尿频、遗尿、尿急等症状，有良好的疗效和耐受性，不良反应少[2-3].药物不良反应是指用药过程中出现的与治疗作用无关的不良结果，它与药品自身的药理活性相关外，亦与其含有的杂质有关，将杂质控制在一个安全合理的范围内，关系到药品的质量和安全[4].因此制备米拉贝隆的杂质对照品，用于米拉贝隆的原料药生产过程中的质量控制研究具有重要实用价值.米拉贝隆的制备方法有很多相关的文献报道[5-13]，适合工业化生产的合成路线如图1[9]：该路线以4-硝基苯乙胺和D-扁桃酸为原料，首先缩合得到酰胺4a，再经硼烷还原酰胺得化合物5a，然后5a用钯碳加氢还原得化合物6a，最后6a与2-氨基噻唑-4-乙酸7缩合得到米拉贝隆.笔者对此合成路线进行分析并定向合成了工艺过程中产生的8个有关物质Imp. A～H(图2).2.1 仪器与试剂高效液相色谱仪(岛津SPD-15C)，超导核磁共振仪(Brücker Avance-500)，质谱仪(Waters Xevo).用于合成的试剂均为市售分析纯.HPLC条件，色谱柱：C18柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流动相A：V(0.01 mol/L磷酸氢二钾溶液)∶V(0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液)=1∶1；流动相B：乙腈；梯度洗脱(0 min，B 20%；10 min，B 50%；15 min，B 80%；30 min，B 20%)；流速：0.8 mL/min；检测波长210 nm；柱温40 ℃.2.2 2-(2-氨基噻唑-4-基)-N-4-(2-(苯乙基氨基)乙基)苯乙酰胺(Imp.A)的合成如图3，将(R)-2-((4-硝基苯乙基)氨基)-1-苯基乙醇盐酸盐5a [9](2.00 g，6.2 mmol)，0.4 g Pd/C(10%，含水68.14%)，浓硫酸(0.74 g，7.4 mmol)与40 mL 冰乙酸混合，常压通入氢气，加热至38 ℃反应5 h.原料反应完毕后过滤，滤液减压抽除溶剂，加入20% 碳酸钠溶液调节溶液pH至9，乙酸乙酯(3×20 mL)萃取，合并有机相，30 mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压抽除溶剂，粗品用甲醇-异丙醚重结晶得1.24 g化合物8，黄色固体，收率83.3%.1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.17 (brs, 2H), 7.35～7.32 (m, 2H), 7.27～7.24 (m, 3H), 6.95 (d, J=8.0 Hz, 2H), 6.63 (d, J=8.0 Hz, 2H), 5.99 (brs, 2H), 3.13 (s, 2H),3.05 (s, 2H), 3.00～2.96 (m, 2H), 2.84～2.80 (m, 2H); 1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 7.36～7.25 (m, 5H), 7.07 (d, J=8.0 Hz, 2H), 6.79 (d, J=8.0 Hz, 2H), 3.27～3.19 (m, 4H), 3.01～2.88 (m, 4H); ESI-MS(m/z): 241.2[M+H]+.将化合物8(1.24 g，5.2 mmol)，2-氨基噻唑-4-乙酸7(1.06 g，6.7 mmol)，1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI·HCl)(1.29 g，6.7 mmol)和浓盐酸(0.66 g，6.7 mmol)溶于19 mL水中，在15 ℃下搅拌反应3 h.原料反应完毕后，缓慢滴加2 mol/L氢氧化钠溶液调节pH至9，过滤，粗品用乙醇-水重结晶，得到1.76 g杂质A，白色固体，收率89.3%.纯度99.01%(相对1的保留时间为1.17).1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7.56 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.35～7.32 (m,2H), 7.28～7.22 (m, 5H), 6.36 (s, 1H), 3.56 (s, 2H), 3.27～3.23 (m, 4H), 3.01～2.95 (m, 4H); 13C NMR (125 MHz, CD3OD): δ 170.23, 169.36, 144.39,137.58, 136.34, 132.04, 128.78, 128.62, 128.37, 126.91, 120.34, 103.72, 48.71, 48.67, 38.86, 31.98, 31.41; ESI-MS (m/z): 381.3[M+H]+.2.3 (R)-2-(2-氨基噻唑-4-基)-N-3-(2-((2-羟基-2-苯乙基)氨基)乙基)苯乙酰胺(Imp.B)的合成如图4，将3-硝基苯乙腈9a(1.50 g，9.3 mmol)置于100 mL圆底烧瓶中，加入30 mL THF，冰盐浴下搅拌降温至-5 ℃以下，滴加1 mol/L BH3的THF溶液(20.5 mL，20.5 mmol)，滴加完毕后升温至回流反应5 h.原料反应完后，缓慢滴加16.09 g 3%盐酸-甲醇溶液，滴完加热回流1 h.40 ℃下减压抽除溶剂，残余物加入7.5 mL异丙醇，室温搅拌0.5 h，过滤，少量异丙醇洗涤，干燥，得到1.30 g 3-硝基苯乙胺盐酸盐2b，白色固体，收率69.5%.1H NMR (500 MHz, D2O):δ 8.18～8.14 (m, 2H), 7.71 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.59 (t, J=8.0 Hz, 1H), 3.33 (t,J=7.5 Hz, 2H), 3.12 (t, J=7.5 Hz, 2H); 13C NMR (125 MHz, D2O): δ 148.05, 138.44, 135.70, 130.01, 123.67, 122.38, 40.04, 32.31.在25 mL圆底烧瓶中加入化合物2b(1.30 g，6.4 mmol)，D-扁桃酸3a(0.98 g，6.4 mmol)，1-羟基苯并三氮唑(0.87 g，6.4 mmol)，EDCI·HCl(1.23 g，6.4 mmol)，三乙胺(0.65 g，6.4 mmol)和6.5 mL DMF，在40 ℃下加热搅拌5 h.原料反应完毕后，加30 mL水稀释，乙酸乙酯(3×20 mL)萃取.有机相依次用30 mL 2 mol/L盐酸、饱和Na2CO3溶液、饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥.40 ℃下减压抽除溶剂，得淡黄色油状物，粗品用甲苯重结晶得到1.37 g化合物4b，白色固体，收率71.1%.1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.06 (d, J=8.0 Hz, 1H),7.97 (s, 1H), 7.42～7.31 (m, 7H), 6.21 (brs, 1H), 5.00 (s, 1H), 3.64～3.51 (m,2H), 2.89 (td, J=7.0, 1.5 Hz, 2H).将化合物4b(1.37 g，4.6 mmol)置于100 mL圆底烧瓶中，加入25 mL THF，冰盐浴下搅拌并降温至-5 ℃以下，滴加1 mol/L BH3的THF溶液(10.0 mL，10.0 mmol)，滴加完毕后升温至回流反应5 h.原料反应完后，缓慢滴加14.24 g 4%盐酸-甲醇溶液，滴完加热回流1 h.40 ℃下减压抽除溶剂，加入7.0 mL异丙醇，室温搅拌析晶，过滤，少量异丙醇洗涤，干燥，得到1.15 g化合物5b，白色固体，收率78.1%.1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.52 (brs, 1H), 9.02 (brs, 1H), 8.17 (t, J=2.0 Hz, 1H), 8.13 (dd, J=8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.76 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.65 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.41～7.37 (m, 4H), 7.33～7.30 (m, 1H), 6.23 (brs, 1H), 5.03 (d, J=9.5 Hz, 1H), 3.27～3.26 (m, 2H), 3.21～3.17 (m, 3H), 3.06～3.00 (m, 1H).在25 mL三口烧瓶中，加入化合物5b(1.15 g，3.6 mmol)，0.06 g Pd/C(10%，含水68.14%)和10 mL甲醇.抽真空，氢气置换3次.常压通入氢气，室温搅拌10 h.原料反应完毕后过滤，少量甲醇洗涤.50 ℃减压抽除溶剂，得白色油状物.乙酸乙酯重结晶，干燥，得到1.03 g化合物6b，白色固体，收率98.7%.1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.17 (brs, 1H), 8.89 (brs, 1H), 7.40～7.37 (m, 4H), 7.33～7.30 (m, 1H), 6.95 (t, J=7.5 Hz, 1H), 6.44～6.41 (m, 2H), 6.36 (d, J=7.5 Hz,1H), 6.20 (d, J=4.0 Hz, 1H), 5.08 (brs, 2H), 4.98 (dt, J=10.5, 3.0 Hz, 1H),3.17～3.09 (m, 3H), 3.04～2.99 (m, 1H), 2.89～2.78 (m, 2H).将化合物6b(1.03 g，3.5 mmol)，2-氨基噻唑-4-乙酸7(0.72 g，4.6 mmol)，浓盐酸(0.45 g，4.6 mmol)，EDCI·HCl(0.88 g，4.6 mmol)和10 mL水混合，室温搅拌3 h.原料反应完毕后滴加2 mol/L氢氧化钠溶液调节pH至9，滴完室温搅拌1 h.加10 mL水稀释，二氯甲烷萃取(3×20 mL)，40 ℃下减压抽除溶剂，以V(乙酸乙酯)/V(石油醚)=3/1为洗脱剂经硅胶柱层析分离得到1.08 g杂质B，淡黄色固体，收率77.4%.纯度97.62%(相对1的保留时间为1.10).1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7.45～7.41 (m, 2H), 7.33～7.28 (m, 4H), 7.25～7.20 (m, 2H), 6.95 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.36 (s, 1H), 4.74 (dd, J=8.0, 5.0 Hz, 1H), 3.56 (s, 2H), 2.93～2.86 (m, 2H), 2.82～2.77 (m, 4H); 13C NMR (125 MHz, CD3OD): δ 170.22, 169.29, 144.51, 142.99, 140.15, 138.60, 128.61, 128.02, 127.20, 125.57, 124.22, 120.00, 117.83, 103.61, 71.79, 56.42, 50.11, 38.98, 35.20; ESI-MS (m/z): 397.3[M+H]+.2.4 (R)-2-(2-氨基噻唑-4-基)-N-2-(2-((2-羟基-2-苯乙基)氨基)乙基)苯乙酰胺(Imp.C)的合成如图5，以2-硝基苯乙腈9b为原料(1.50 g，9.3 mmol)，参照杂质B合成路线的方法，合成得到1.42 g杂质C，淡黄色固体，总收率38.7%.纯度99.76%(相对1的保留时间为1.12).1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7.57 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.34～7.29 (m, 4H), 7.25～7.19 (m, 3H), 7.13 (t, J=7.5 Hz, 1H), 6.37 (s, 1H), 4.75 (dd, J=8.5, 4.0 Hz, 1H), 3.59 (s, 2H), 2.86～2.73 (m, 6H); 13C NMR (125 MHz, C D3OD): δ 170.43, 169.92, 144.49, 143.12, 135.62, 133.39, 129.90, 128.02, 127.17, 126.63, 125.78, 125.64, 125.09, 103.79, 71.87, 56.61, 49.27, 38.75, 31.51; ESI-MS (m/z): 397.3[M+H]+.2.5 (S)-2-(2-氨基噻唑-4-基)-N-4-(2-((2-羟基-2-苯乙基)氨基)乙基)苯乙酰胺(Imp.D)的合成如图6，以4-硝基苯乙胺盐酸盐2a(1.50 g，9.9 mmol) 和L-扁桃酸3b(2.00 g，9.9 mmol)为原料，参照杂质B合成路线的方法合成得到2.58 g杂质D，淡黄色固体，总收率65.9%，纯度99.32%(相对1的保留时间为1.00).1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7.48 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.32～7.28 (m, 4H), 7.24～7.21 (m, 1H), 7.14 (d, J=8.5 Hz, 2H), 6.35 (s, 1H), 4.73 (dd, J=8.0, 4.5 Hz, 1H), 3.55 (s,2H), 2.88～2.73 (m, 6H); 13C NMR (125 MHz, CD3OD): δ 170.21, 169.20, 144.55, 143.06, 136.68, 135.35, 128.63, 128.03, 127.20, 125.58, 120.05, 103.62, 71.90, 56.50, 50.29, 38.92, 34.70; ESI-MS(m/z): 397.3[M+H]+.2.6 2-(2-(2-(2-氨基噻唑-4-基)乙酰氨基)噻唑-4-基)乙酸(Imp.E)的合成如图7，将硫脲(20.0 g，262.7 mmol)溶于100 mL水中，0～5 ℃下滴加4-氯乙酰乙酸乙酯(44.5 g，270.1 mmol)，滴完继续搅拌5 h.原料反应完毕后，滴加浓氨水调节pH至9，搅拌0.5 h后过滤，滤饼用10 mL水洗，干燥得42.92 g化合物10，淡黄色固体，收率87.7%.1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 6.34 (s, 1H), 5.33 (brs, 2H), 4.18 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.56 (s, 2H), 1.27 (t, J=7.0 Hz, 3H).将化合物10(20.00 g，107.4 mmol)和4-二甲氨基吡啶(4.00 g，32.7 mmol)溶于二氯甲烷100 mL，室温搅拌下滴加二碳酸二叔丁酯(28.13 g，128.9 mmol)，滴完室温搅拌.反应完毕后依次用30 mL 1 mol/L 盐酸、饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，减压抽除溶剂，所得残余物和LiOH一水物(9.01 g，214.8 mmol)、乙醇50 mL及水25 mL混合，40 ℃下搅拌2 h.反应完毕后，加60 mL 水稀释，冰浴下滴加冰醋酸调节pH至5～6，继续搅拌1 h后过滤，5 mL水洗，干燥，得到21.81 g化合物11，白色固体，收率88.4%.1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.22 (brs, 1H), 11.47 (brs, 1H), 6.88 (s, 1H), 3.54 (s, 2H), 1.47 (s, 9H).将化合物11(10.40 g，40.3 mmol)，2-氨基噻唑-4-乙酸乙酯10(5.00 g，26.9 mmol)和EDCI·HCl(6.18 g，32.2 mmol)溶于20 mL DMF中，于50 ℃加热搅拌48 h.反应完毕后加60 mL水稀释，乙酸乙酯萃取(3×30 mL)，有机相依次用 20 mL 1 mol/L 盐酸、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压抽除溶剂，得到8.73 g化合物12，黄色固体，收率76.2%.1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 11.56 (brs, 1H), 10.55 (brs, 1H), 6.80 (d, J=7.0 Hz, 2H), 4.13 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.83 (s,2H), 3.69 (s, 2H), 1.56 (s, 9H), 1.21 (t, J=7.0 Hz, 3H).取化合物12(8.70 g，20.4 mmol)，加入LiOH一水物(2.23 g，53.0 mmol)、乙醇20 mL和水10 mL，于40 ℃下加热搅拌2 h.反应完毕后加30 mL水稀释，冰浴下滴加冰醋酸调节pH至5～6，继续搅拌1 h后过滤，5 mL水洗，干燥，得到7.14 g化合物13，淡黄色固体，收率87.9%.1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.28 (brs, 1H), 11.42 (brs, 1H), 6.92 (d, J=4.0 Hz, 2H), 3.74 (s, 2H), 3.58 (s,2H), 1.45 (s, 9H).在25mL圆底烧瓶中，加入化合物13(1.22 g，3.5 mmol)与3 mL三氟乙酸，40 ℃下搅拌2 h后减压抽除溶剂，加入 5 mL 饱和碳酸钠溶液，室温搅拌0.5 h，过滤，滤液用1 mol/L盐酸调节pH至5，析出固体，过滤，少量水洗滤饼，干燥得0.89 g杂质E，淡黄色固体，收率97.4%.纯度95.68%(相对1的保留时间为0.18). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.38 (brs, 1H), 8.64 (brs, 2H), 6.97 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 3.76 (s, 2H), 3.60 (s, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6): δ 172.01, 170.18, 167.19, 159.23, 157.65, 144.81, 110.79, 105.53, 37.29, 35.36; ESI-MS (m/z): 299.0[M+H]+.2.7 (R)-2-(2-氨基噻唑-4-基)-N-((4-(2-(4-(2-((2-羟基-2-苯乙基)氨基)乙基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)噻唑-2-基)乙酰胺(Imp.F)的合成如图8，在25 mL圆底烧瓶中，加入杂质E(65 mg，0.16 mmol)、化合物6a[9](60 mg，0.23 mmol)、EDCI·HCl (60 mg，0.3 mmol)和10 mL水，用浓盐酸调节溶液pH至3，室温搅拌3 h后补加EDCI·HCl(60 mg，0.3 mmol)，室温搅拌过夜，滴加2 mol/L 氢氧化钠溶液调节pH至9，继续搅拌0.5 h后过滤，少量水洗，干燥，粗品以V(乙酸乙酯)/V(石油醚)/V(甲醇)=20/10/1的洗脱剂经硅胶柱层析分离得到78.0 mg 杂质F，淡黄色固体，收率62.1%.纯度95.21%(相对1的保留时间为1.22).1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7.40 (d, J=8.5 Hz, 2H),7.24～7.19 (m, 4H), 7.14～7.12 (m, 1H), 7.05 (d, J=8.0 Hz, 2H), 6.82 (s, 1H), 6.28 (s, 1H), 4.68 (t, J=6.5 Hz, 1H), 3.64 (s, 2H), 3.56 (s, 2H), 2.86～2.68 (m,6H); 13C NMR (125 MHz, CD3OD): δ 170.35, 169.28, 168.71, 158.36, 144.61, 143.31, 142.71, 136.77, 134.96, 128.66, 128.08, 127.31, 125.60, 120.12, 110.37, 104.20, 71.42, 56.07, 50.03, 38.95, 37.65, 34.18; ESI-MS(m/z):537.2[M+H]+.2.8 (R)-2-(2-氨基噻唑-4-基)-N-(4-(2-(2-氨基噻唑-4-基)乙酰氨基)苯乙基)-N-(2-羟基-2-苯乙基)乙酰胺(Imp.G)的合成如图9，在50 mL圆底烧瓶中加入化合物11(8.80 g，34.1 mmol)和20 mL二氯甲烷，冰盐浴下滴加7.86 g草酰氯(62.0 mmol)，滴完继续搅拌1 h，减压抽除溶剂，所得淡黄色固体加入10 mL二氯甲烷溶解待用.将化合物5a(10.00 g，31.0 mmol)、碳酸钾(8.56 g，62.0 mmol)和20 mL二氯甲烷混合，冰盐浴下滴加上述酰氯的二氯甲烷溶液，滴完继续在室温下搅拌3 h，加10 mL水稀释，分液，有机相用水洗，无水硫酸钠干燥，减压抽除溶剂，得16.16 g化合物14，黄色固体，收率99.1%.1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 11.36 (s, 1H), 8.16 (d,J=8.5 Hz, 1H), 8.09 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.50 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.38～7.28 (m, 5H), 6.76 (s, 0.35H), 6.67 (s, 0.55H), 5.67 (s, 0.65H), 5.46 (s, 0.36H), 4.81～4.76 (m, 1H), 3.72～3.51 (m, 6H), 2.97～2.88 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).在250 mL三口烧瓶中加入化合物14(10.00 g，19.0 mmol)，3.00 g Pd/C(10%，含水68.14%)和150 mL甲醇，减压抽除空气，常压通入氢气，室温搅拌过夜，过滤，减压抽除溶剂后得到9.25 g化合物15，黄色固体，收率98.1%.1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 11.40 (s, 1H), 7.45～7.22 (m, 7H), 6.82 (dd, J=15.5, 8.0 Hz, 2H), 6.70 (s, 0.62H), 6.63 (s, 0.38H), 6.49 (t, J=6.5 Hz, 2H), 5.67 (s,0.48H), 5.45 (s, 0.53H), 4.81～4.78 (m, 1H), 3.72～3.20 (m, 6H), 2.62～2.52 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).将化合物15(1.70 g，3.4 mmol)、化合物11(1.33 g，5.1 mmol)和EDCI·HCl(0.79 g，4.1 mmol)溶于20 mL DMF中，于50 ℃加热搅拌48 h，反应完毕后加50 mL水稀释，乙酸乙酯萃取(3×30 mL)，有机相依次用 20 mL 1 mol/L 盐酸、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压抽除溶剂，往残余物中加入3 mL三氟乙酸，于40 ℃下搅拌2 h后减压抽除溶剂，加入10 mL 饱和碳酸钠与30 mL 乙酸乙酯，室温搅拌0.5 h，乙酸乙酯萃取(2×30 mL)，20 mL水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，减压抽除溶剂，残余物以V(乙酸乙酯)/V(石油醚)/V(甲醇)=20/10/1的洗脱剂经硅胶柱层析分离得1.02 g杂质G，淡黄色固体，收率57.3%，纯度95.1%(相对1的保留时间为0.95).1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7.48 (dd, J=16.5, 8.0 Hz, 2H), 7.37～7.30 (m, 4H), 7.29～7.24 (m, 1H), 7.12 (dd, J=8.0, 6.5 Hz, 2H), 6.35 (s, 1H), 6.16 (s, 0.53H), 6.10 (s, 0.45H), 4.89 (ddd, J=12.5, 8.0, 4.5 Hz, 1H), 3.73～3.23 (m, 8H), 2.84～2.74 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, CD3OD): δ 171.81, 170.21, 170.04, 169.21, 144.74, 142.74, 141.32, 136.76, 135.18, 129.04, 127.99, 127.43, 125.77, 120.08, 103.63, 103.19, 71.32, 56.07, 51.39, 38.93, 36.15, 29.27; ESI-MS (m/z): 537.3[M+H]+.2.9 (R)-2-(2-氨基噻唑-4-基)-N-(4-(2-(2-(2-(2-氨基噻唑-4-基)乙酰氨基)噻唑-4-基)乙酰氨基)苯乙基)-N-(2-羟基-2-苯乙基)乙酰胺(Imp.H)的合成如图10，将化合物15(1.00 g，2.0 mmol)、化合物13(1.20 g，3.0 mmol)和EDCI·HCl(0.46 g，2.4 mmol)溶于20 mL DMF中，于50 ℃加热搅拌48 h，反应完毕后加50 mL水稀释，乙酸乙酯萃取(3×30 mL)，有机相依次用20 mL 1 mol/L盐酸、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压抽除溶剂，往残余物中加入3 mL三氟乙酸，40 ℃下搅拌2 h后减压抽除溶剂，往残余物加入10 mL 20%碳酸钠溶液与30 mL乙酸乙酯，室温搅拌0.5 h，乙酸乙酯萃取(2×30 mL)，20 mL水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，减压抽除溶剂，残余物以V(乙酸乙酯)/V(石油醚)/V(甲醇)=20/10/1的洗脱剂经硅胶柱层析分离得0.83 g杂质H，淡黄色固体，收率60.8%.纯度95.9%(相对1的保留时间为1.19).1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 7.48 (dd, J=17.0, 8.5 Hz, 2H), 7.37～7.24 (m, 5H), 7.16～7.10 (m,2H), 6.91 (s, 1H), 6.38 (s, 1H), 6.14 (s, 0.44H), 6.10 (s, 0.36H), 4.89 (ddd,J=12.5, 7.5, 4.5 Hz, 1H), 3.72 (s, 2H), 3.66 (s, 2H), 3.60～3.23 (m, 6H), 2.90～2.74 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, CD3OD): δ 171.80, 170.33, 170.04,169.25, 168.65, 158.31, 144.71, 143.32, 142.66, 142.30, 137.02, 134.36, 129.06, 128.18, 127.25, 125.79, 120.12, 110.37, 104.20, 103.21, 71.34, 56.02, 51.28, 38.98, 37.63, 35.99, 32.47; ESI-MS (m/z): 677.2[M+H]+.杂质A～H除A已有文献[14-15]报道外，其余7个杂质都为新合成.文献报道杂质A由苯乙酸或苯乙酰氯为原料和4-硝基苯乙胺反应后，再经硼烷还原、催化氢化，最后与2-氨基噻唑-4-乙酸缩合经4步反应合成得到，步骤长、收率低、成本高、操作复杂.笔者利用米拉贝隆合成工艺中的中间体5a为原料经两步反应即可合成得到杂质A，路线简洁，收率高.杂质A是在还原酰胺化合物4a和还原硝基化合物5a时生成的脱羟基副产物随后续反应带入.笔者发现通过对产品进行重结晶纯化不能去除杂质A，但可以对6a的合成反应条件(如反应温度和溶液的pH值)进行控制以有效地降低脱羟基副产物产生.杂质B与杂质C由起始原料4-硝基苯乙胺中的间、邻位硝基苯乙胺杂质随后续合成反应得到.可以通过对终产品进行重结晶去除.杂质D是原料D-扁桃酸中L-异构体随后续反应产生的对映异构体杂质，可以选择合适的供应商将杂质降低到药典规定检测限以下.杂质E是最后一步反应两分子的2-氨基噻唑-4-乙酸缩合产生，杂质F由米拉贝隆中芳伯胺基与2-氨基噻唑-4-乙酸缩合产生，杂质G是米拉贝隆中脂肪仲胺基与2-氨基噻唑-4-乙酸缩合产生的，杂质H是米拉贝隆与两分子2-氨基噻唑-4-乙酸缩合产生的.对最后一步缩合反应的条件如投料比例和反应温度等进行控制即可降低杂质E～H的含量.本文合成了米拉贝隆的8个有关物质并进行了结构表征.杂质的来源及去除方法在本文中也进行了简要的讨论.本研究可为米拉贝隆的研制与生产提供杂质对照品的技术方法，对于系统建立米拉贝隆原料药及其制剂的有关物质分析控制具有重要的参考价值.【相关文献】[1] YAO S. FDA approves myrbetriq for overactive bladder[EB/OL].[2012-06-28]./NewsEvents/Newsroom/PressAnnouncements/ucm310096.htm.[2] KHULLAR V, AMARENCE G, ANGULO J C, et al. Efficacy and tolerability of mirabegron,a β3-adrenoceptor agonist, in patients with overactive bladder: results from a randomised european-australian phase 3 trial[J]. Eur Urol, 2013,63(2):283-295.[3] KRAUWINKEL W, DIJK J V, SCHADDELEE M, et al. Pharmacokinetic properties of mirabegron, a β3-adrenoceptor agonist: results from two phase I, randomized, multiple-dose studies in healthy young and elderly men and women[J]. Clin Ther,2012,34(10):2144-2160.[4] 国家食品药品监督管理总局. 化学药物杂质研究的技术指导原则[Z]. 2005-03-18.[5] MARUYAMA T, SUZUKI T, ONDA K, et al. Amide derivatives or salts thereof: US, 6346532[P]. 2002-02-12.[6] 张华，李杨，陈仕杰，等. 米拉贝隆的合成方法: CN, 103896872[P]. 2014-07-02.[7] 岑均达，黄伟，李强. 一种米拉贝隆及其中间体的制备方法: CN, 103387500[P]. 2013-11-13.[8] 葛德培，吴其华. 米拉贝隆的合成方法: CN, 104230840[P]. 2014-12-24.[9] KAWAZOE S, SAKAMOTO K, AWAMURA Y, et al. Alpha-form or beta-form crystal of acetanilide derivative: EP, 1440969[P]. 2004-07-28.[10] THIRUMALAI R S, ESWARAIAH S, RAGHURAM S. Process for the preparation of 2-(2-aminothiazol-4-yl)-N-[4-(2-{[(2R)-2-hydroxy-2-phenylethyl]amino}ethyl)phenyl]acetamide monohydrochloride, its intermediates and polymorph thereof: WO, 2014132270[P]. 2014-09-04.[11] LAL B, SHENOY G, DAVE R, et al. Novel process for preparation of mirabegron and its intermediate: WO, 2015162536[P]. 2015-10-29.[12] 范文进，曾正英，吴之波，等. 米拉贝隆合成工艺改进[J]. 精细化工中间体, 2016,46(4):42-47.[13] 毛龙飞，苑李双，颜茗彦，等. 米拉贝隆的合成研究[J]. 化学研究与应用, 2016,28(4):521-524.[14] 章磊，谭支敏，焦慧荣，等. 米拉贝隆有关物质的合成[J]. 中国医药工业杂志, 2014,45(1):9-12.[15] 郑亚东，和龙，贾志丹，等. 米拉贝隆和去羟基米拉贝隆的合成[J]. 山东化工, 2016,45(1):3-5,9.。

HPLC法测定枸橼酸莫沙比利片的含量
董芳;马传江
【期刊名称】《药学研究》
【年(卷),期】2005(024)012
【摘要】目的建立测定枸橼酸莫沙比利片含量的HPLC方法.方法采用ODS色谱柱,磷酸二氢钾、庚烷磺酸钠溶液(取磷酸二氢钾2.72g与庚烷磺酸钠1.0g加水溶解并稀释成1000ml)-乙腈(50:50)为流动相,检测波长为274nm.结果枸橼酸莫沙比利在5μg·ml-1～50μg·ml-1范围内峰面积与浓度呈良好线性关系(r=0.9998),平均回收率为98.8%(RSD=1.3%)n=6.结论HPLC法测定枸橼酸莫沙比利含量,方法准确,重复性好,回收率高.
【总页数】2页(P724-725)
【作者】董芳;马传江
【作者单位】临沂市药品检验所,临沂,276001;山东中医药大学附属医院,济
南,250011
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
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5.HPLC法测定枸橼酸莫沙必利分散片的有关物质 [J], 孙亚敏;栾会妮;徐勤娟;李锡勇
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HPLC法测定佐匹克隆片的含量及有关物质
董莉;陈雨
【期刊名称】《中国药品标准》
【年(卷),期】2009(010)004
【摘要】目的:用高效液相色谱法测定佐匹克隆片的含量及有关物质.方法:用C18柱;流动相:pH3.5缓冲溶液(取十二烷基硫酸钠8.1 g和磷酸二氢钠1.6 g,加水1 000 mL使溶解,用磷酸调pH3.5)-乙腈(55:45);检测波长:303nm.采用外标法测定含量,加校正因子的自身对照法测定已知杂质,自身对照法测定未知杂质.结果:佐匹克隆浓度在19.04～152.29mg·L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9997.平均加样回收率为99.6%,RSD=0.8%(n=5).有关物质各杂质峰与主峰之间的分离度良好;结论:本方法灵敏度高,专属性强、准确可靠,适合于佐匹克隆片含量及有关物质的测定.
【总页数】3页(P288-290)
【作者】董莉;陈雨
【作者单位】大连市药品检验所,大连,116021;大连市药品检验所,大连,116021【正文语种】中文
【中图分类】R921.2
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HPLC法测定呋塞米片中有关物质B
黄萍;刘萍
【期刊名称】《广州化工》
【年(卷),期】2017(45)15
【摘要】采用高效液相色谱法对呋塞米片中有关物质B (4-氯-5-氨磺酰邻氨苯甲酸)进行检测,以氰基柱ZORBAX Eclipse XDB-CN(150×4.6 mm 5 μm)为色谱柱,检测波长为254 nm,水:四氢呋喃:冰醋酸(80:19:1)为流动相,柱温:35 ℃.结果,呋塞米与有关物质B (4-氯-5-氨磺酰邻氨苯甲酸)分离良好,该方法检测限为0.12
μg/mL,有关物质B在1.0~12.0 μg/mL浓度范围,线形关系良好(r=0.9998).平均回收率为97.2%,RSD=2.3%.本方法简便、准确、重复性好,可提高呋塞米片的质量标准.
【总页数】3页(P151-153)
【作者】黄萍;刘萍
【作者单位】四川省食品药品检验检测院,四川成都 611731;四川健能制药有限公司,四川自贡 643020
【正文语种】中文
【中图分类】R917
【相关文献】
1.HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量[J], 周燕丽;余永华;马佳丽;顾超群;谢明华
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5.HPLC法测定巯嘌呤咀嚼片中有关物质 [J], 沈舒;肖颖倩;赵亚男;徐成
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HPLC法测定盐酸非那嗪奈原料药含量及有关物质
张绍静;黄丽瑛;李建其
【期刊名称】《中国药科大学学报》
【年(卷),期】2008(39)3
【摘要】目的：建立测定盐酸非那嗪奈原料药的含量及其有关物质的HPLC法，为盐酸非那嗪奈原料药制定质量控制标准。

方法：采用Waters Spherisorb苯基柱（250mm×4．6mm，5μm），0．01mol／L磷酸氢二铵和0．01mol／L五水合氢氧化四甲基铵缓冲液（磷酸调pH至3．0）-甲醇-乙腈（1：2：4）为流动相；检测波长为254nm；柱温30℃；流速1．0mL／min。

结果：主峰能与相邻杂质峰较好分离，盐酸非那嗪奈的浓度在1．0～200μg／mL范围内线性关系良好，r为0．9999。

结论：该法简便、准确、专属性好，可用于盐酸非那嗪奈原料药的含量及有关物质的测定。

【总页数】3页(P282-284)
【关键词】盐酸非那嗪奈;高效液相色谱法;有关物质;含量测定
【作者】张绍静;黄丽瑛;李建其
【作者单位】上海医药工业研究院
【正文语种】中文
【中图分类】R917
【相关文献】
1.HPLC法测定利奈唑胺原料药中有关物质的含量 [J], 林晓兵
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3.HPLC法测定不同厂家盐酸曲美他嗪原料药及其制剂中的有关物质含量 [J], 华莲;唐素芳
4.HPLC法测定盐酸双苯氟嗪原料药和注射用粉针剂的含量及其有关物质 [J], 孙倩;张兰桐;王永利
5.HPLC法测定盐酸非索非那定缓释片中盐酸非索非那定及有关物质含量 [J], 马雷;殷莉莉;孙进;何仲贵;
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托拉塞米中有关物质的HPLC测定张政【摘要】建立梯度洗脱反相高效液相色谱法测定托拉塞米中的有关物质.方法:采用高效液相色谱,色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填充柱,以0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至3.0)为流动相A,1％四氢呋喃甲醇溶液为流动相B,进行梯度洗脱,进样量10μL,检测波长291nm.结果:各有关物质与主成分均达到基线分离,对托来赛米中4-(3-甲基苯氨基)-3-吡啶磺酰胺的含量进行定量分析.结论:本法灵敏、专属,可有效分离有关物质及降解产物,可用于有关物质及降解产物检查.【期刊名称】《黑龙江科技信息》【年(卷),期】2013(000)015【总页数】3页(P126-128)【关键词】托来塞米;有关物质;高效液相色谱法【作者】张政【作者单位】上海新亚药业邗江有限公司,江苏扬州225127【正文语种】中文托拉塞米是德国贝林格尔·曼汉姆制药公司研制开发的利尿药，1993年首次在德国、意大利和比利时上市。

本品特点是利尿作用强、起效缓和、吸收完全、生物利用度高、持续时间长、使用方便，且电解质紊乱少（钾的排泄少）、不良反应低、耐受性好。

作者建立了用高效液相色谱法测定托拉塞米有关物质，取得了较好的结果，可用于托拉塞米原料药的质量控制。

1 仪器与试药高效液相色谱仪，包括LC-10AT、SPD-10AVP。

托来赛米由本公司提供。

样品来源：本公司自制。

批号：100411、100510、100513、100517。

对照品来源：南京新港医药有限公司。

2 方法与结果2.1 色谱条件参考欧洲药典现行版中托拉塞米有关物质检查项下的方法，配制粗品溶液进行试验，同时参考托拉塞米国家药品试行标准YBH08422004转正征求意见稿中此项下的方法进行试验。

试验结果显示：欧洲药典的等度洗脱方法不能将粗品中最后的两个杂质洗脱出（见图1），但征求意见稿中的梯度洗脱方法可以（见图2）；调整欧洲药典等度洗脱中有机相与水相的配比，直到将粗品中最后的两个杂质洗脱出，但主峰保留太短，无法很好的检测出主峰前的杂质。

RP—HPLC法测定盐酸帕洛诺司琼原料药中有关物质的含量【摘要】目的：建立测定盐酸帕洛诺司琼原料药中4种有关物质杂质A、杂质B、杂质C和杂质D的方法。

方法：采用梯度洗脱的反相高效液相色谱法。

色谱柱为VP-ODS，以六氟磷酸钾的缓冲盐溶液-乙腈组成流动相体系进行梯度洗脱，流速为每分钟1.0ml；检测波长为215nm；柱温为45℃。

检测3批样品中的有关物质。

结果：盐酸帕洛诺司琼与各有关物质分离良好，各线性关系良好，检测限分别为0.0123、0.0058、0.0289、0.0126、0.0243?g。

3批样品中检出已知杂质均小于0.05%。

【关键词】反相高效液相色谱法；盐酸帕洛诺司琼；有关物质；梯度洗脱盐酸帕洛诺司琼（Palonosetron Hydrochloride ）由美国Syntex公司（现属瑞士Roche Biosicence公司）Berger，J等人在1991年合成。

然后由瑞士Helsinn Healthcare开发成功，MGI Pharma买入了该药在北美的市场销售权，于2003年获得FDA批准，同年9月在美国上市。

用于预防由中度或高度致呕性化疗引发的急性或迟发性恶心呕吐。

本品为高选择性的5-HT3受体拮抗剂，作用效果明显。

目前盐酸帕洛诺司琼尚未载入《中国药典》2010年版。

本研究依据ICH指导原则，再结合实际生产工艺路线和产品有关物质检查结果，建立了有效可控的检查盐酸帕洛诺司琼中有关物质的方法。

1 材料1.1 仪器LC-20AT型HPLC仪，HPLC系统，LC-solution色谱工作站等；XS205型分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；PHS-3C型酸度计（天津大学精密仪器厂）。

1.2 药品与试剂盐酸帕洛诺司琼原料药（重庆华邦制药有限公司，批号：PAL-20100701、PAL-20100702、PAL-20100703，纯度99.9%、99.9%、99.9%）；杂质A 2-[1-氮杂双环（2.2.2）辛-3S-基]-2，4，5，6-四氢-1H-苯并[de]异喹啉-1-酮盐酸盐对照品（批号：PAL -Z4d-100401，纯度：99.5%）、杂质B （S）-N-（（（S）-1，2，3，4-四氢萘-1-基）甲基）-奎宁-3-胺对照品（批号：PAL -Z2-100301，纯度：96.0%）、杂质C 2-[1-氮杂双环（2.2.2）辛-3S-基]-2，3，3aR，4，5，6-六氢-1H-苯并[de]异喹啉-1-酮盐酸盐对照品（批号：PAL -Z4c-100201，纯度：94.8%）、杂质D 3-（（S）-1-氧代-3aS，4，5，6-四氢-1H-苯并[de] 异喹啉-2（3H）-基）奎宁-1-氧化物对照品（批号：PAL -D-131001，纯度：98.4%）均来自重庆华邦制药有限公司；乙腈为色谱纯，水为自制纯化水。

中国医药工业杂志Chinese Jo啪al of Ph猢aceuticals2叭4，45(1) 9米拉贝隆有关物质的合成章磊，谭支敏，焦慧荣，裘鹏程，张福利术(中国医药工业研究总院上海医药工业研究院，创新药物与制药工艺国家重点实验室，上海200437)摘要：在膀胱过度活动症治疗药米拉贝隆的合成工艺研究中发现易生成脱羟基副产物。

为了对米拉贝隆的有关物质进行定量控制，本研究以苯乙酸和对硝基苯乙胺盐酸盐为原料，经酰胺缩合、硼烷还原、催化氢化后再与2一氨基噻唑一4一乙酸缩合，制得有关物质去羟基米拉贝隆盐酸盐，即2-(2一氨基噻唑一4一基)一Ⅳ_[4一[2一(苯基乙基氨基)乙基]苯基]乙酰胺盐酸盐，并经MS、1HNMR和”CNMR确证结构。

关键词：米拉贝隆；有关物质；去羟基米拉贝隆盐酸盐；合成中图分类号：R979．9 文献标志码：A 文章编号：100l-8255(2014)01-0009-04Synthesis of Related Substance of Mirabe铲onZ H A N G Lei，TAN Zhimin，JIA0 Huirong，QIU Pengcheng，ZHANG Fuli+岱tnle K e y Lab．《New DⅢg＆Phnmdc删ticnl Process．sh硼ghni jnstnule《Phdn_nncetltic础In幽stry．Chin d stnte institute《PharmQceHticnl IndHst阱Shnnghni 20043∞ABSTR ACT：The dehydroXyl imp嘶t)，was foulld in me synthesis of oVeractiVe bladder(0AB)dmg mhbegron．In order to perfom the qual时con仃01 of mirabegron，dehydroXymirabegron hydrochloride，i．e．，2-(2一锄inothiaz01—4- y1)·Ⅳ_[4一[2一(phenylethyl锄ino)emyl]phenyl]acet锄ide hydmchloride，was synmesized in four steps 丘om phenylaceticacid and ni仃Ophenyle thanamin e hydro chloride by am ide conden sation，borane reduction，catalytic hydrogenation andconde nsat ion wim 2．aminothiaz01．4_acetic acid．The snucture was con矗med by MS，1H NMR a nd13C NMR．Key Words：mirabe铲on；related substance；dehy(hxymirabegmn hydmchloride；s)rIlthesis米拉贝隆(mirabegron，1)，化学名为∽)-2一(2一中介导膀胱松弛的B，肾上腺素能受体而改善膀胱氨基噻唑．4一基)．Ⅳ-[4一[2一[(2一羟基．2一苯基乙储尿容量，进而减轻OAB症状，但不影响膀胱收基)氨基]乙基]苯基]乙酰胺，是日本安斯泰缩排尿功能。