动物实验的基本技术和方法(1)

动物实验的基本知识和操作技术第⼆章动物实验的基本知识和操作技术第⼀节实验动物药理学实验常⽤的动物有蛙、蟾蜍、⼩⽩⿏、⼤⽩⿏、豚⿏、家兔、猫和⽝等。

常根据实验⽬的和要求选⽤不同的实验动物。

由于不同的动物具有不同的特点，故所选⽤的动物应能较好地反映试验药物的选择性作⽤，并符合节约的原则。

（⼀）、实验动物的选择原则1、尽量选择与⼈体结构、机能、代谢及疾病特征相似的动物；2、选⽤的实验动物的解剖、⽣理特点应符合实验⽬的；3、根据⼈与实验动物对同⼀刺激的反应差异，选⽤具有明显反应的动物；4、根据⽣物医学研究必须达到的精确度，选⽤结构功能简单⼜能反映研究指标的动物；5、选⽤患有⼈类类似疾病的近交系或突变系动物；6、选⽤与实验设计、技术条件、实验⽅法等相适应的标准化动物；7、在不影响实验⽬的与结果的前提下，选择最易获得、最经济、便于操作管理的动物；8、供实验⽤的动物应具备质量合格证。

（⼆）、常⽤实验动物的特点1、蛙和蟾蜍离体⼼脏能较持久地有节律地搏动，常⽤于观察药物对⼼脏的作⽤；坐⾻神经和腓肠肌标本可⽤来观察药物对周围神经、神经肌⾁或横纹肌的作⽤；蛙的腹直肌还可以⽤于鉴定胆碱能药物的作⽤。

2、⼩⽩⿏是实验室最常⽤的⼀种动物。

易于⼤量繁殖，且价廉，适⽤需要⼤量动物的实验，如药物筛选、半数致死量测定、药物效价⽐较、抗感染、抗肿瘤药物及避孕药物的研究等。

3、⼤⽩⿏与⼩⽩⿏相似。

⼀些在⼩⽩⿏⾝上不便进⾏的实验可选⽤⼤⽩⿏，如药物抗炎作⽤的实验常选⽤⼤⽩⿏踝关节制备关节炎的模型。

此外，也可⽤⼤⽩⿏直接记录⾎压、作胆管插管，或⽤⼤⽩⿏观察药物的亚急性或慢性毒性。

⼤⽩⿏的⾎压和⼈相近，且稳定，现常⽤于抗⾼⾎压药物实验。

4、豚⿏是实验室常⽤动物之⼀。

对组织胺很敏感，容易致敏，常⽤于平喘药和抗组胺药的实验。

对结核菌亦敏感，故也⽤于抗结核药的研究。

此外还⽤于离体⼼脏及平滑肌实验，其乳头肌和⼼房常⽤于电⽣理特性及⼼肌细胞动作电位实验，研究抗⼼律失常药物的机理。

动物实验基本操作技术动物实验作为一种科学研究手段，常用于医学、生物学等领域的实验研究。

为了确保实验的可靠性和安全性，研究人员需要正确掌握基本的动物实验操作技术。

下面将介绍一些常用的动物实验基本操作技术。

首先，动物实验前，需要对动物进行适当的饲养管理，确保其健康状态。

这包括提供适宜的饲料和饮水，保持合适的环境温度和湿度，以及定期清洁和消毒动物饲养环境。

此外，研究人员还需对动物进行身体检查，以排除可能影响实验结果的健康问题。

其次，对于需要进行手术的实验，研究人员需要具备相关的手术技术。

例如，动物麻醉技术是必不可少的，可以采用静脉注射麻药、局部麻醉或气管插管麻醉等方法。

在动物手术过程中，需要准确切割皮肤或组织，处理血管、神经和器官，以及进行缝合和止血等操作。

因此，研究人员需要熟练掌握相关手术技术，确保手术过程的顺利进行。

此外，动物实验中还常使用动物注射技术。

注射技术包括口服给药、皮下注射、肌肉注射和静脉注射等。

研究人员需要准确计量给药剂量，选择合适的注射部位和注射器具，并注意注射速度和注射途径的选择。

在实验中，研究人员还需要掌握注射后的观察和记录技巧，及时发现和处理可能的不良反应。

另外，动物实验还涉及到采集和处理生物样本的技术。

例如，研究人员需要采集血液、组织或其他体液样本，以进行生化分析、细胞培养或组织学检查等。

采样时需要注意卫生与无菌操作，避免交叉污染。

采样后，研究人员需要合理保存和处理样本，以保证实验结果的可靠性。

此外，动物实验中的数据记录与分析也是十分重要的。

研究人员需要仔细记录实验过程的各种参数，包括实验开始时间、操作步骤、药物剂量、实验结果等。

此外，研究人员还需要进行数据分析，以得出科学合理的结论。

在数据分析过程中，研究人员可以使用统计学方法，如平均值、标准差、方差分析等。

最后，动物实验的伦理与法规也是非常重要的。

研究人员需要遵守相关的伦理规范和动物保护法律法规，保证动物实验的道德性和合法性。

第二章动物实验的基本操作与技术动物实验方法是多种多样的，在医学的各个领域内都有其不同的应用，其中一些基本方法都是共同性的，如动物的选择、抓取、固定、麻醉、脱毛、给药、采血、采尿、急救、处死、尸检等，不管是从事何种课题的医学研究都要用这套基本方法，因此，动物实验基本方法，已成为医学科技工作者必须掌握的一项基本功。

第一节实验动物的抓取固定方法一、小鼠抓取固定方法小鼠温顺，一般不会咬人，抓取时先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤（见图2-1之一），将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可（图2-1之二）。

有经验者可直接用左手小指钩起鼠尾，迅速以拇指和食指、中指捏住其耳后颈背部皮肤亦可。

这种在手中固定方式，能进行实验动物的灌胃、皮下、肌肉和腹腔注射以及其他实验操作。

如进行解剖、手术、心脏采血和尾静脉注射时，则需将小鼠作一定形式的固定，解剖手术和心脏采血等均可使动物先取背卧位（必要时先行麻醉），再用大头针将鼠前后肢依次固定在腊板上。

尾静脉注射时，可用小鼠尾静脉注射架固定（图2-2），先根据动物大小选择好合适的固定架，并打开鼠筒盖，手提鼠尾巴，让动物头对准鼠筒口并送入筒内，调节鼠筒长短合适后，露出尾巴，固定筒盖即可进行尾静脉注射或尾静脉采血等操作。

图2-1 小鼠的抓取固定方法图2-2 小鼠尾静脉注射方法二、大鼠的抓取固定方法大鼠的抓取方法基本同小鼠，只不过大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用袭击方式抓取，否则会被咬伤手指。

抓取时为避免咬伤，可带上帆布手套。

如果进行腹腔、肌肉皮下等注射和灌胃时，同样可采用左手固定法，只是用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指紧捏鼠背皮肤，置于左掌心中，这样右手即可进行各种实验操作。

也可伸开左手之虎口，敏捷地从后一把抓住。

若做手术或解剖等，则需事先麻醉或处死，然后用细棉线绳活结缚腿，背卧位绑在大鼠固定板上；尾静脉注射时的固定同小鼠（只需将固定架改为大鼠固定盒）。

动物实验的基本技术和方法动物实验是科学研究中常用的一种手段，通过对动物进行实验，可以了解生物体的生理、病理、药理等信息，对人类疾病的预防和治疗起到重要作用。

下面将介绍动物实验的基本技术和方法。

1.动物选择：选择适合进行实验的动物是进行动物实验的首要任务。

常用的实验动物有小鼠、大鼠、兔子、猪、狗等。

根据研究目的的不同，可以选择不同品种、不同年龄、不同性别的动物进行实验。

2.动物养护：对于实验动物的养护是确保实验结果可靠的重要环节。

动物应在适宜的温度、湿度和光照条件下饲养，并提供适宜的饲料和水源。

为了防止交叉感染，需要实施严格的无菌操作和动物消毒。

3.动物注射：动物注射是常用的动物实验技术之一、通过针筒和注射器将药物或其他物质注射到动物体内，以研究其作用机制。

常见的注射方式有皮下注射、肌肉注射和静脉注射。

4.动物手术：动物手术是进行生理、病理研究的重要手段。

常见的动物手术包括造模手术、器官移植手术和腹腔镜手术等。

在进行动物手术时，需要注意术前麻醉、手术操作的细节和术后的护理。

5.动物观察：动物观察是动物实验中重要的实验方法之一、通过观察动物行为、体征和疾病发展等，了解其生理和病理状态。

动物观察可以采用直接观察和间接观察的方法，比如记录动物的活动情况、进食量、体重变化等。

6.动物取样和检测：在动物实验中，需要采集动物的组织、血液、尿液等样本进行检测。

常用的动物取样方式有穿刺、切片、摘取组织等。

取样后，可以进行生化分析、免疫表型分析等检测方法进行进一步研究。

7.数据统计和分析：对于动物实验的结果，需要进行数据统计和分析，以得出科学的结论。

常用的统计分析方法有t检验、方差分析、回归分析等。

通过数据的处理和分析，可以确定实验结果的可靠性和显著性。

8.动物伦理：在进行动物实验时，需要遵循动物伦理原则，确保动物的福利和权益。

包括动物的合理饲养和管理、注重动物的生理和心理健康、减少动物的痛苦和不适等。

同时，需要通过伦理审查机构的审批，确保实验符合伦理要求。

三、动物实验的基本技术(一)实验动物的捉持方法1．青蛙和蟾蜍通常用左手握持，以食指和中指夹住左前肢，大拇指压住右前肢，右手将下肢拉直并固定于无名指和小指之间。

毁脑和脊髓时，左手食指和中指夹持青蛀或蟾蜍的头部，右手将探针经枕骨大孔向前刺入颅腔，左右摆动探针捣毁脑组织。

如需破坏脊髓，毁脑后退回探针刺入椎管即可。

2．小鼠右手提起鼠尾，放在鼠笼(或其它粗糙面)上，向后轻拉其尾，小鼠即固定于鼠笼上，迅速用左手拇指和食指捏住小鼠头颈部皮肤，并以左手小指、无名指压其尾部于手掌尺侧。

另一方法是只用左手，先用食指和拇指抓住小鼠尾巴后用手掌尺侧和小指夹住尾根部，然后用左手拇指和食指捏住头颈部皮肤。

3．大鼠捉持方法与小鼠相似。

因大鼠容易被激怒咬人，捉持时左手应戴防护手套。

右手抓住鼠尾，再用左手拇指和食指握住头部，其余手指与手掌握住脊部和腹部。

注意不要捏其颈部，以防用力过大、过久，造成窒息死亡。

4．豚鼠以左手直接从背侧握持前部躯干，右手托住臀部或抓住两后肢。

体重小者，可用单手捉持。

5．家兔一只手抓住兔颈背部皮肤，将兔轻轻提起，另一只手托住臀部，使兔呈蹲坐姿势。

切不可用手握持双耳提起兔子。

(二)实验动物的性别辨认、标记和去毛方法1．性别辨认鼠类：雄性小鼠和大鼠性器官与肛门距离较远，其间有被毛，阴囊明显可见。

雌性小鼠和大鼠性器官与肛门距离较近，其间无被毛，腹部乳头明显可见。

豚鼠性别辨认方法与小鼠和大鼠相同；家兔：雄兔泄殖孔附近，可见阴囊，用拇指和食指挤压泄殖孔部位，可露出阴茎。

雌兔腹部5对乳头明显可见。

2．标记小鼠、大鼠和兔多采用染色法，一般用1％的苦味酸溶液(黄色)或5％中性红溶液(红色)涂于动物体表不同部位的皮毛处，代表不同号码。

编号原则是先左后右，自前到后。

例如1号涂左前肢；2号涂左侧腹部；本号涂后肢；4号涂右前肢；5号涂右侧腹部；6号涂右后肢；7号涂头部；8号涂背部；9号涂尾部；10号不涂色。

如10只以上动物作标记时，可用两种不同颜色溶液，一种颜色作为个位数，另一种颜色作为十位数，涂在不同部位。

动物实验基本技术和方法
细胞培养与分离
细胞培养技术是实验室中使用最广泛的技术之一，在分子生物学领域中，它是可以在实验室环境控制的条件下培养活细胞的技术。

它是将细胞
及其产物从原始组织中分离出来，使细胞生长、增殖、繁殖，明确细胞形态、核型和功能结构．
细胞培养的基本技术包括：
1.细胞收集技术：通常是用生化组织学技术，以腹腔注射、血液抽取、经鼻粘膜术等从动物身体中取得细胞，在此过程中要避免注射液等外界刺
激引起的炎症反应带来的细胞损伤。

2.细胞的解剖分离：利用生化操作，如断裂、打散等，获得单细胞或
少量细胞的集合。

3.细胞培养和培养条件：细胞培养采用两种培养方式，即细胞培养皿
和玻片培养，一般就细胞培养瓶选用50mlPA金属瓶，玻片培养的固有形
态较好，容易观察到细胞的形态、核型、细胞器以及胞质的结构。

在培养
液中添加一定量的葡萄糖、酮类、低聚糖以及多种微量元素等，另外，还
要控制培养瓶或玻片中使用的氧气浓度，使培养条件趋于理想。

4.细胞实验的操作：此部分包括一些相关技术，如PH信号检测、染
色检测、血清学检测、冷冻封存及免疫检测等。