抗原与抗体反应免疫检测实验原理和方法-PPT精选文档

比例性
抗原抗体反应具有比例性，即当抗原和抗体比例适当时，反应最完全，形成的免疫复合物 最多。当抗原或抗体过量时，反应则不完全，形成的免疫复合物也较少。这种比例性是由 抗原和抗体的浓度以及它们之间的比例关系决定的。
02
抗原抗体反应机制
抗原识别与结合机制
抗原表位识别
T细胞通过TCR识别抗原肽-MHC分子复合物，B细胞通过BCR识 别抗原表位。
抗原抗体反应特点
特异性
抗原抗体反应具有高度的特异性，即一种抗体只能与相应的抗原发生反应，形成免疫复合 物。这种特异性是由抗原决定簇和抗体结合部位的互补性决定的。
可逆性
抗原抗体反应是可逆的，即在一定条件下，免疫复合物可以解离成游离的抗原和抗体，再 次相遇时仍可重新结合。这种可逆性是由抗原抗体结合的亲和力决定的，亲和力越高，结 合越牢固，解离越困难。
优化抗体药物设计
通过机器学习技术对抗体进行优化设计，提高抗 体的亲和力和特异性。
抗原抗体反应模拟
利用深度学习技术模拟抗原抗体反应过程，为药 物筛选和开发提供新工具。
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自身免疫性疾病检测及诊断
01
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检测方法
介绍常见的自身免疫性疾 病相关抗体检测方法，如 ELISA、免疫印迹技术等 。
临床意义
阐述自身抗体检测在自身 免疫性疾病诊断、病情监 测和预后评估中的应用价 值。
病例分析
通过具体病例展示自身免 疫性疾病抗体检测的临床 应用，如系统性红斑狼疮 、类风湿性关节炎等。
药物开发中抗原抗体反应的意义
01
阐述药物开发中抗原抗体反应的研究意义，包括药物安全性、
有效性等方面。
药物抗原性的研究方法
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凝集反应种类 ⑴直接凝集反应 ⑵间接凝集反应 是将可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关的 载体上，使之成为致敏载体颗粒，然后与相 应抗体或抗原作用，在电解质参与下出现的 凝集反应 ⑶间接凝集抑制反应 将可溶性抗原与相应抗体预先作用，然后再 加入致敏载体悬液，由于抗体已被可溶性抗原 结合，因而致敏颗粒不发生凝集现象，称为 间接凝集抑制试验
2 沉淀反应 可溶性抗原（如细菌浸出液，组织浸出 液和 动物血清等）与相应抗体结合后， 在电解质存在条件下，经过一定时间作 用后，可出现肉眼可见的沉淀物，称为 沉淀反应
⑴ 单向扩散试验 是一种定量试验，使抗原在含有抗体的琼脂 介质中扩散，经一定时间后即可见抗原孔周 围出现由抗原抗体复合物形成的沉淀环。沉 淀环的直径与抗原浓度成正比。故试验前应 用已知不同浓度标准抗原制成标准曲线（纵 座标为沉淀环直径，横座标为抗原浓度）， 可根据沉淀环直径的大小从标准曲线中查出 待检样品中抗原的含量。临床上常用于测定 IgG、IgM、IgA的含量
*酶联免疫斑点试验
*BSA-ELISA
⑶免疫组化技术 ⑷放射免疫测定法 ⑸化学发光免疫分析 ⑹免疫印迹法
二免疫细胞检测
㈠免疫细胞及其亚类计数
㈡淋巴细胞功能测定
1 体外试验
⑴淋巴细胞增殖试验 ⑵细胞毒试验 ⑶分泌功能测定 2 体内试验
三免疫分子检测 ㈠免疫球蛋白测定 ㈡补体测定 ㈢细胞因子检测 ㈣CD分子、表面受体和黏附分子的检测 ㈤HLA分型
免疫学检测原理 及临床应用
一、基于抗原抗体反应的检测方法 ㈠ 抗原抗体结合反应的特点 1.高度特异性 2.抗原抗体结合的带现象与可见性 3.可逆性 ㈡ 影响抗原抗体反应的因素 1.电解质 2.酸碱度 3.温度 4.抗原和抗体的性质
前 带 现 象

4. 疏水作用力 抗原抗体分子侧链上的非极性氨基酸（亮、缬、丙）在 水溶液中与水分子间不 形成氢键。当抗原表位与抗体结合点靠近时，相互间正、负极性消失，静电引力 形成的亲水层也消失、排斥两者之间的水分子，促进抗原抗体结合。疏水作用提 供的作用力最大，约占总结合力的50%。
第二节 抗原抗体反应的特点
抗原抗体复合物浓度 亲和常数=
游离抗原浓度×游离抗体浓度
K值表示亲和力，大表示结合牢固，不易解离。
二、亲水胶体转化为疏水自然沉淀， 其蛋白质含大量氨基与羧基残基，带电荷，静电作用下，其 周围形成带相反电荷的电子云、水化层，不致自行聚合、产 生沉淀。疏水胶体 — 抗原抗体结合 — 电荷减少，电子云消 失，再加入电解质，使疏水胶体相互靠拢，形成可见抗原抗 体复合物。
抗体预滴定，找出最适反应浓度。
二、环境因素
1.电解质 Ag+Ab结合后无电解质参与，不出现可见反应 常用0.85%的Nacl促使沉淀和凝集物的形成。 2. 酸硷度 抗原抗体反应一般在pH 6~8间。 pH达到或接近抗原的等电点，即使无相应抗体，也会引起颗粒性抗原非特异 的凝集，造成假阳性反应。 3. 温度 温度升高，分子运动加速，碰撞机会增多，抗原抗体反应加速 常为37℃，高于56℃，抗原抗体解离，甚至变性或破坏。 有 些 有 独 特 的 最 适 反 应 温 度 ， 如 冷 凝 集 素 在 4℃ 左 右 与 细 胞 结 合 最 好 ， 20℃ 反而解离。
溶性复合物，大多数动物属比型，家兔为代表。
H型抗体 — 合适比例较窄，抗原抗体过量均可形成可溶性复合物，人 和大动物属此型，马免疫血清为代表。
三、可递性（reversibility）
Ag + Ab
Ag + Ab

半抗原与载体的联接
1、连接方式：物理法（吸附） 化学法
2、化学连接方法： 直接联接法： 间接联接法：
碳化二亚胺法
蛋白质-COO— + R-N+=CN-R` H-N+-R
蛋白质-COO-C-NH-R` + 半抗原-NH2 O
蛋白质-C-NH-半抗原 + R-NH-CO-NH R`
半抗原与载体直接联接
一氯醋酸钠法
半抗原-
- OH + Cl- CH2 - COONa
半抗原-
- CH2 - COOH
半抗原与载体间接联接
重氮化的对氨基苯甲酸法
HOOC-
-NH2 + NaNO2
HOOC-
-N=N
半抗原-
- OH + HOOC-
-N=N
半抗原-
-N=N-
OH
-COOH
半抗原与载体间接联接
本章小结
1、免疫学技术的应用范畴 2、免疫学的基本概念 3、抗原抗体反应的原理、特点、影响因素 4、抗原制备的方法
处理与粉碎
组织粉碎：机械、生物 细胞破碎：物理、化学、生物
蛋白质分离
选择性沉淀：盐析 有机溶剂沉淀 水溶性非离子型聚合物沉淀
透析技术：
超滤技术：
单一组分提取
层析技术：凝胶过滤 离子交换 亲和层析
离心技术：差速离心 密度梯度离心
电泳技术：电泳洗脱 等电聚焦
凝胶层析（分子筛）
— —
+ + ++
一、抗原抗体反应的原理 二、抗原抗体反应的特点 三、影响抗原抗体反应的因素
抗原抗体反应的原理
1、抗原抗体结合的作用力 2、抗原抗体结合物析出原因