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抗原抗体反应的原理PPT讲稿
抗原抗体反应的原理PPT讲稿
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戊二醛法
蛋白质- NH2 + 半抗原-NH2 + COH-(CH2 ) 3 - COH 蛋白质-N=CH-(CH2 ) 3 – CH=N-半抗原
半抗原与载体直接联接
氯甲酸异丁酯法
半抗原-COOH + Cl-COO-CH2 CH(CH3)2 OO
半抗原-C-O-C-O-CH2CH(CH3)2 + 蛋白质- NH2 半抗原-CO- NH -蛋白质 + HO-CH2CH(CH3)2
特异性与敏感性的关系
特异性高、敏感性低 敏感性高、特异性低
第一节 抗原/免疫原制备的基本概念
一、抗原制备的目的 二、抗原的“纯度” 三、抗原制备的主要技术途径
抗原制备的目的
免疫原:激活T、B细胞 半抗原:检测相应抗体
抗原的“纯度”
免疫原:保留足够的可被T、B细胞 识别的抗原决定簇
半抗原:尽可能减少影响反应特异 性的抗原决定簇
抗原制备的主要技术途径
天然抗原——分离、纯化 半抗原——人工合成、载体联接 抗原肽—— 合成、基因工程制备
第二节 完全抗原/免疫原的制备方法
一、颗粒性抗原的制备 二、可溶性抗原的制备
颗粒性抗原的制备
1、采集、分离抗原 2、无害化处理
可溶性抗原的制备与纯化
1、处理与粉碎 2、蛋白质分离 3、单一组分提取 4、抗原纯度鉴定
免疫活性细胞(Immune competent cell,ICC) 能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、分化并形成效
应产物的淋巴细胞。
免疫细胞的类型
红细胞 血小板 肥大细胞 中性粒细胞 巨噬细胞 树突状细胞 浆细胞 T细胞 NK细
免疫应答的概念与过程
免疫应答(immune response) 免疫系统接触抗原后,免疫细胞对抗原进行识别;并使特异性淋巴细胞
半抗原与载体直接联接
琥珀酸酐法
OO 半抗原-CH2 –OH + C-O-C
CH3 CH3Fra Baidu bibliotek
O 半抗原-CH2 –O-C-(CH2 ) 2-COOH
半抗原与载体间接联接
O-(羟甲基)羟胺法
半抗原-C=O +H2 N-O- CH2 - COOH 半抗原-C=N-O- CH2 - COOH
半抗原与载体间接联接
抗原过剩
网格学说(lattice theory)
抗原抗体反应的影响因素
1、电解质 2、酸碱度(pH值6-8) 3、温度(37-42。C)
第四节 免疫学检测技术的评价
一、评价标准 二、特异性与敏感性的关系
评价标准
Specificity(特异) Sensitivity(敏感) Simplicity(简便) Safety(安全) Saving(节约)
一、抗原抗体反应的原理 二、抗原抗体反应的特点 三、影响抗原抗体反应的因素
抗原抗体反应的原理
1、抗原抗体结合的作用力 2、抗原抗体结合物析出原因
引起抗原抗体结合的作用力
1、电荷引力(库仑引力) 2、电子云引力(Van der Waals力) 3、氢键结合力 4、疏水作用力
抗原抗体结合物析出的原因
活化、增殖;表现出免疫效应的过程。
免疫应答的阶段 1、抗原识别阶段(antigen-recognizing phase) 2、淋巴细胞活化阶段(lymphocyte-activating phase) 3、抗原清除阶段(antigen-eliminating phase)
第三节 抗原抗体反应的基本原理
— —+
+ —
—
+
+
+ +
+
— —
—
— —
+ +
+ + +
离子交换层析
亲和层析
抗原纯度鉴定
方法:层析性质测定 电泳法 免疫法
指标:电泳纯 免疫纯
第三节 半抗原免疫原制备的方法
一、载体的选择 二、半抗原与载体的联接
载体的选择
蛋白质载体:BSA、HAS、OVA、KLH 聚合多肽载体:多聚赖氨酸 高分子聚合物载体:PVP、羧甲基纤维素
一氯醋酸钠法
半抗原-
- OH + Cl- CH2 - COONa
半抗原-
- CH2 - COOH
半抗原与载体间接联接
重氮化的对氨基苯甲酸法
HOOC-
-NH2 + NaNO2
HOOC-
-N=N
半抗原-
- OH + HOOC-
-N=N
半抗原-
-N=N-
OH
-COOH
半抗原与载体间接联接
本章小结
1、免疫学技术的应用范畴 2、免疫学的基本概念 3、抗原抗体反应的原理、特点、影响因素 4、抗原制备的方法
抗原抗体反应的原理课件
第一节 免疫学技术的范畴与应用
一、免疫学技术的范畴 二、免疫学技术的应用特点
免疫学技术的范畴
1、对具有免疫活性物质的定性、 定量测定
2、对免疫系统的组成成分的数量、 状态的测定
免疫学技术的应用特点
1、对象——“包罗万象” 2、方法——“兼容并蓄”
第二节 有关免疫学基本概念
半抗原与载体的联接
1、连接方式:物理法(吸附) 化学法
2、化学连接方法: 直接联接法: 间接联接法:
碳化二亚胺法
蛋白质-COO— + R-N+=CN-R` H-N+-R
蛋白质-COO-C-NH-R` + 半抗原-NH2 O
蛋白质-C-NH-半抗原 + R-NH-CO-NH R`
半抗原与载体直接联接
处理与粉碎
组织粉碎:机械、生物 细胞破碎:物理、化学、生物
蛋白质分离
选择性沉淀:盐析 有机溶剂沉淀 水溶性非离子型聚合物沉淀
透析技术:
超滤技术:
单一组分提取
层析技术:凝胶过滤 离子交换 亲和层析
离心技术:差速离心 密度梯度离心
电泳技术:电泳洗脱 等电聚焦
凝胶层析(分子筛)
— —
+ + ++
+++ +——— —
+ + + ———
———+++
——— —+++ +
电解质
析出
抗原抗体反应的特点
1、特异性 2、可逆性 3、适合比例性
特异性
特异性反应
交叉反应
无反应
抗原A
抗原B
抗原C
可逆性
K(亲和常数)=
Ag+Ab Ag Ab
适合比例性
抗体含量
抗原含量
前带
等价带
后带
抗体过剩
抗体抗体比例合适
一、抗原的概念与属性 二、免疫细胞的概念与分类 三、免疫应答的概念与过程
抗原的概念与属性
免疫原性——可识别、可反应性 (诱导机体产生免疫应答的特性)
免疫反应性 ——选择结合性 (和免疫应答产物特异性结合的特性)
免疫细胞的概念与分类
免疫细胞(Immune cells) 泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动相关的细胞。
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