小鼠脾脏、胸腺单个核细胞分离PPT精选课件
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小鼠尾静脉取血和脾淋巴细胞分离小鼠尾静脉取血所需器材:热光源(如:普通台灯),鼠尾固定器,刀片,1.5mlEP管。
步骤:1.烘烤。
用热源烘烤小鼠使其血管膨胀。
烤至小鼠开始有剧烈反应时,关掉热源。
2.割尾。
烤完后将小鼠固定将尾部露在外面,用刀片割一下鼠尾远心端腹侧静脉血管使血液流出,立即用1.5mlEP收集滴下来的血液。
3.止血。
用干棉球按压伤口或按压尾部近心端止血,以防失血过多死亡。
要点1.烤:烤的不够:血管未膨胀,割尾后血液不易流出。
烤的太过:小鼠死亡。
2.割:割的太浅:血液不流出。
割的太深:鼠尾被割断。
后续应用:取血时可根据需要选择是否需加抗凝剂。
所取血可用于血液学指标的检测,如EPO浓度、甘油三酯浓度、红细胞数及红细胞压积等。
附表:本实验室常用的2种取血方法的比较尾静脉取血VS 眼眶后静脉丛取血小鼠脾淋巴细胞分离所需器材(以下均为取1只鼠脾需准备的量):手术器械——剪刀、镊子至少2套(高压灭菌),止血钳一个(高压灭菌),细头玻璃吸管一根(高压灭菌),,200目尼龙网一张(高压灭菌),一次性5ml注射器一支,15ml和50ml离心管各一个,60mm 中皿及血球计数板一块。
所需试剂:小鼠淋巴细胞分离液,无血清1640,进口血清,青链霉素(双抗)(100X),NEAA,丙酮酸钠,谷氨酰胺,β-巯基乙醇注:200目尼龙网和小鼠淋巴细胞分离液均从达科为公司购买。
分离原理示意图图一小鼠脾脏研磨示意图图二离心后小鼠脾细胞分层示意图分离步骤及要点:1.断颈处死小鼠,75%乙醇中浸泡几分钟消毒。
2.将小鼠转移至超净台中,先用一套剪刀和镊子剪开小鼠皮肤使腹腔内脾脏可见。
换一套干净的剪刀和镊子剪开腹腔,小心用镊子夹出脾脏,用剪刀尽量去除附着其上的脂肪组织。
脾脏位于小鼠左侧腹部,为一暗红色长条形器官,不要误取肾和肝。
取出后浸泡于RPMI1640中稍作清洗。
注意无菌操作。
3.在一无菌的中皿中加入5ml淋巴细胞分离液,用止血钳将尼龙膜固定在中皿上,放上脾脏开始研磨(如图一所示)。