鸡胚
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鸡胚接种注意事项鸡胚接种是家禽育种中重要的一环,它对于确保育种工作的顺利进行和家禽的健康发展至关重要。
以下是鸡胚接种的一些注意事项:1. 鸡胚的来源和存储:确保鸡胚的来源可靠,选择健康的种鸡作为母鸡,对母鸡进行充分的预防接种,排除传染病的风险。
鸡胚应当存储在适当的温度和湿度下,避免过高或过低的温度对鸡胚质量的影响。
2. 接种器具的消毒:鸡胚接种器具包括针头、注射器等,使用前应当进行严格的消毒处理,以避免交叉感染。
消毒可采用高温蒸汽、化学消毒剂等方法进行,确保器具表面干燥后方可使用。
3. 接种环境的准备:接种前要对接种环境进行充分的准备,确保无尘、无菌的环境,以减少接种后的感染风险。
接种室内要保持干燥,地面要清洁干净,空气流通良好,配备必要的消毒设备和安全用品。
4. 鸡胚的处理和接种操作:接种前,对鸡胚进行外观检查,选择外形完整、无明显异常的鸡胚作为接种对象。
接种时要先将鸡胚表面进行消毒处理,然后通过注射器将疫苗接种到鸡胚的腹腔内。
接种时要确保操作准确、迅速,并且不要使鸡胚受到过多的创伤。
5. 接种后的照顾:鸡胚接种后要给予适当的照顾,要保持鸡胚温暖、干燥,充分休息。
鸡胚接种后要进行观察,确保没有异常症状的出现。
同时,要给予它们充分的营养和护理,以促进它们的正常生长发育。
总之,鸡胚接种是育种工作中至关重要的一步,正确的接种操作和注意事项会直接影响到家禽育种的成果。
因此,在进行鸡胚接种时,我们要选择好的鸡胚来源,进行必要的消毒和准备工作,规范的操作流程和良好的鸡胚照顾是确保接种成功的关键。
只有做好这些,才能保证家禽育种的顺利进行,提高家禽的免疫力和生产性能,为养殖业的发展做出积极的贡献。
一、实验目的1. 了解鸡胚的发育过程及形态变化;2. 掌握鸡胚培养的基本操作技能;3. 熟悉鸡胚培养在生物科学研究和医学领域的应用。
二、实验原理鸡胚是一种常用的实验动物模型,其胚胎发育过程与哺乳动物胚胎发育过程具有相似性。
通过观察鸡胚的发育过程,可以了解胚胎发育的规律和机制。
鸡胚培养是生物科学研究和医学领域的重要技术手段,可用于病毒分离、疫苗制备、基因功能研究等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:- 新鲜鸡蛋- 生理盐水- 灭菌滤纸- 鸡胚培养液- 培养皿- 显微镜- 培养箱- 计时器2. 实验仪器:- 研钵- 研杵- 灭菌镊子- 灭菌剪刀- 灭菌移液器四、实验步骤1. 鸡胚培养液的准备:- 将生理盐水加入研钵中,用研杵搅拌均匀;- 将生理盐水倒入培养皿中,用灭菌滤纸过滤;- 将过滤后的生理盐水倒入培养瓶中,加入鸡胚培养液,充分混合。
2. 鸡胚的收集:- 将鸡蛋放入温水中浸泡,待鸡蛋表面温度与室温相近;- 将鸡蛋敲碎,取出蛋黄和蛋白,弃去;- 将鸡蛋清加入鸡胚培养液中,搅拌均匀。
3. 鸡胚的接种:- 将鸡胚培养液倒入培养皿中,厚度约1cm;- 将鸡胚放入培养皿中,用灭菌镊子轻轻压平;- 将培养皿放入培养箱中,保持适宜的温度和湿度。
4. 鸡胚的观察:- 每日观察鸡胚的发育情况,记录发育过程;- 利用显微镜观察鸡胚的形态变化,如胚胎细胞分裂、器官形成等。
5. 实验结果分析:- 根据观察结果,分析鸡胚的发育规律和机制;- 结合相关文献,探讨鸡胚培养在生物科学研究和医学领域的应用。
五、实验结果1. 鸡胚发育过程:- 鸡胚在培养过程中,细胞分裂迅速,胚胎逐渐形成;- 随着时间的推移,胚胎细胞分化出不同的器官,如心脏、肝脏、肺等。
2. 鸡胚形态变化:- 通过显微镜观察,可见鸡胚细胞分裂、胚胎形成、器官发育等过程;- 鸡胚的形态变化与相关文献描述相符。
六、实验讨论1. 鸡胚培养在生物科学研究和医学领域的应用:- 鸡胚培养可用于病毒分离和疫苗制备;- 鸡胚培养可用于基因功能研究和疾病模型构建;- 鸡胚培养为研究胚胎发育规律和机制提供了有力工具。
鸡的胚胎发育总结总结:鸡胚是讨论动物发育的重要模型,已被大量用于发育生物学的讨论。
对鸡胚的讨论可以追溯到古XX闻名的博物学家亚*,之后被许多生物学家予以深化的讨论。
鸡胚在疫苗的开发和讨论中有着不行替代的作用。
1、鸡胚发育阶段(1)种蛋形成中胚胎的发育卵黄自卵巢上排出后,被输卵管的漏斗部接纳,与精子相遇受精,成为受精卵,并在蛋形成过程中开头发育。
当受精卵到达峡部时发生卵裂,进入子宫部4~5小时后已达256个细胞期,到蛋产出时,胚胎发育已进入到囊胚期或原肠早期。
蛋产出后,由于外界气温低于胚胎发育所需要的温度,胚胎发育处于停滞状态,随着时间的延长,胚胎渐渐死亡,降低孵化率。
(2)孵化过程中胚胎发育当赐予种蛋适当的孵化条件,胚胎从休眠状态中清醒过来,连续发育。
以后就由内、中、外3个胚层渐渐发育成新个体全部的组织和器官。
2、各胚层发育命运内胚层:形成呼吸系统上皮、消化器官、内分泌器官。
中胚层:形成肌肉、骨骼、生殖系统、血液循环系统、消化系统的外层、结缔组织。
外胚层:形成羽毛、皮肤、喙、趾、感觉器官、神经系统。
3、鸡胚孵化期阶段划分鸡胚发育时间平均约21天。
但是不同类型鸡种之间有差异。
蛋用鸡种比肉用鸡种短;蛋用鸡种中,白壳蛋鸡种比褐壳蛋鸡种短。
大致可分为成4个阶段:1-4天为内部器官发育阶段;5-14天为外部器官形成阶段;15-19天为胚胎生长阶段;20-21天为出壳阶段。
4、孵化过程中胚胎发育特征孵化过程中胚胎发育表现出固有的特征,可以依据这些特征了解胚胎发育状况:5、鸡胚胚膜鸡胚有4种胚膜(卵黄囊膜、羊膜、浆膜、尿囊膜)和2套血管网(卵黄囊血管网、尿囊膜浆膜血管网)。
孵化至第8天时胚膜和血管网的发育已趋稳定。
在鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成早期,机体免疫系统尚未完全建立,因此对各种异物几乎不发生排斥反应,便于将含药物载体臵于其表面,观看各种诱导剂和抑制剂对血管生成的影响。
由于其对抗血管生成药物敏感,目前仍被认为是一种较抱负的药物筛选模型。
简述孵化过程中鸡胚发育的特点孵化过程中鸡胚发育的特点孵化是指动物胚胎孵化出来继续发育的过程。
而对于鸟类来说,特别是鸡类来说,孵化是其生命的起点。
当鸡蛋被孵化器或者母鸡通过体温孵化时,鸡胚就开始发育了。
本文将简述孵化过程中鸡胚发育的特点。
首先,孵化过程中鸡胚发育的第一个特点是阶段性发育。
鸡胚的发育可以分为不同的阶段,每个阶段都有特定的发育特点和生理功能。
最早的第一天开始,鸡胚只是一个单细胞,之后经过连续的细胞分裂,逐渐形成了胚胎的各个器官和组织。
第一天的单细胞阶段会持续到第三天,此时胚胎已经有了高级生物的基本结构,包括胚胎的上下半胚层和原始神经系统。
接下来的几天里,鸡胚会逐渐发育出心脏、肠道、肢体等重要器官。
其次,孵化过程中鸡胚发育的第二个特点是较快的发育速度。
相对于其他动物的胚胎发育来说,鸡胚的发育速度是非常快的。
通常情况下,鸡蛋需要21天才能孵化出鸡雏。
在这21天里,鸡胚会从单细胞不断分裂成为一个个发育完整的器官和组织。
有研究表明,第一天的鸡胚分裂速度可以达到每分钟一次,而在孵化的最后几天,鸡胚的发育速度更是快得惊人。
这种较快的发育速度使得鸡蛋能够在相对较短的时间内完成胚胎的发育。
此外,孵化过程中鸡胚发育的第三个特点是胚胎内外的相互作用。
鸡胚的发育并不是孤立进行的,它和蛋壳、孵化器内部环境等有着密切的相互作用。
首先,蛋壳对于鸡胚的保护起到了至关重要的作用。
蛋壳可以防止外界有害物质的进入,提供适宜的温度和湿度,保证鸡胚的正常发育。
同时,鸡胚内部的发育也会产生一定的影响。
例如,鸡胚自身的新陈代谢会产生二氧化碳,而这些二氧化碳会通过蛋壳渗透到外部环境中,从而调节蛋壳内部的酸碱度和湿度。
最后,孵化过程中鸡胚发育的第四个特点是染色体的稳定。
鸡胚发育的过程中,染色体的结构和数量都是相对稳定的。
这是由于在受精过程中,雄性和雌性的染色体都会参与到胚胎的形成中,从而保证了染色体的稳定性。
这种稳定性使得鸡胚发育过程中的基因表达和遗传信息能够传递至下一代。
简述孵化过程中鸡胚发育的特点孵化过程中鸡胚发育的特点是指受精卵在孵化器中经过一系列发育阶段,逐渐形成完整的鸡胚。
这个过程中,鸡胚经历了一系列的细胞分裂、器官形成和生理功能发育等过程,最终孵化成为鸡苗。
孵化过程中鸡胚发育的特点是有一定的时间要求。
一般来说,鸡蛋的孵化周期为21天,但这个时间也会受到一些外界因素的影响,如温度、湿度等。
孵化过程中,鸡胚在特定的温度下持续发育,温度的控制对鸡胚的发育至关重要。
温度过高或过低都会影响鸡胚的正常发育,甚至导致死亡。
孵化过程中鸡胚发育的特点是有明确的发育阶段。
孵化过程一般可以分为前期、中期和后期三个阶段。
前期是指孵化开始到胚胎发育初期,这个阶段主要是胚胎的细胞分裂和胚胎器官的形成。
中期是指胚胎发育的中期,这个阶段主要是器官的进一步发育和胚胎的体型增长。
后期是指孵化的最后几天,这个阶段主要是鸟儿的形态进一步成熟和生理功能的发育。
孵化过程中鸡胚发育的特点是有一定的顺序和规律。
在孵化的不同阶段,鸡胚的发育过程都是按照一定的顺序和规律进行的。
例如,在前期阶段,受精卵中的单细胞逐渐分裂为多细胞,并形成胚胎盘、胚胎囊等结构;在中期阶段,胚胎的各个器官逐渐形成,如心脏、肝脏、肺等;在后期阶段,胚胎的大小逐渐增大,羽毛开始生长,并准备破壳而出。
孵化过程中鸡胚发育的特点还包括胚胎的生理功能逐渐发育。
随着孵化的进行,胚胎的生理功能也逐渐发育完善。
例如,在孵化的早期,胚胎的心脏开始跳动,消化道开始形成;在孵化的中期,胚胎的呼吸系统开始发育,开始通过卵壳进行气体交换;在孵化的后期,胚胎的肌肉系统开始发育,准备破壳而出。
孵化过程中鸡胚发育的特点是有一定的时间要求,经历明确的发育阶段,按照一定的顺序和规律进行,胚胎的生理功能逐渐发育完善。
这些特点保证了鸡胚能够在孵化过程中顺利发育,并成功孵化成为鸡苗。
简述孵化过程中鸡胚发育的特点孵化是指鸟类在温度和湿度适宜的条件下,通过体内的发育和生长过程,从胚胎发育到孵化出蛋壳的过程。
而在这个过程中,鸡胚经历了一系列的发育阶段和特点。
本文将对孵化过程中鸡胚发育的特点进行简述,以增加读者对这一过程的了解。
一、受精卵形成阶段受精卵形成是指雄性和雌性鸡的精子和卵子结合形成受精卵的过程。
在此阶段,雄性鸡的精子通过交配进入雌性鸡体内,与卵子结合形成受精卵。
这个阶段的特点是受精卵的形成需要雄性鸡和雌性鸡的合作,并且只有在交配后的一段时间内,卵子才能受精成功。
二、初期发育阶段初期发育阶段是指受精卵形成后的最初几天,此时受精卵内的胚胎开始发育并形成初级胚。
这个阶段的特点是胚胎发育很快,细胞不断分裂,胚胎逐渐形成。
三、中期发育阶段中期发育阶段是指初级胚形成后的一段时间,此时胚胎形态开始显现出来。
这个阶段的特点是胚胎逐渐长大,各个器官开始形成,胚胎的形态也逐渐明确。
四、后期发育阶段后期发育阶段是指胚胎形成后的最后几天,此时胚胎内的器官逐渐完善,并且开始形成羽毛、骨骼等特征。
这个阶段的特点是胚胎的发育基本完成,即将进入孵化阶段。
五、孵化阶段孵化阶段是指胚胎发育完成后,开始孵化出蛋壳的过程。
这个阶段的特点是胚胎内的鸟儿逐渐成熟,开始打破蛋壳,孵化出来。
这个过程需要一定的时间和力气,鸟儿通过运动和呼吸来帮助自己孵化出蛋壳。
总的来说,孵化过程中鸡胚发育的特点可以总结为以下几点:1.温度和湿度的影响:孵化过程需要适宜的温度和湿度条件,这些条件对胚胎的发育起着重要的作用。
过高或过低的温度都会影响胚胎的正常发育。
2.发育速度快:胚胎发育的速度非常快,特别是在初期发育阶段,细胞不断分裂,胚胎逐渐形成。
3.器官逐渐形成:胚胎在发育过程中,各个器官逐渐形成,并且逐渐完善。
4.孵化过程需要一定的时间:孵化过程不是一蹴而就的,需要一定的时间和力气。
鸟儿通过运动和呼吸来帮助自己孵化出蛋壳。
5.孵化过程需要鸟儿的参与:孵化过程需要鸟儿自己的参与,它们通过运动和呼吸来帮助自己孵化出蛋壳。
一、实验目的1. 了解鸡胚培养的基本原理和操作步骤;2. 掌握鸡胚培养过程中细胞的分离、培养和传代技术;3. 观察鸡胚成纤维细胞的生长、形态和增殖情况。
二、实验原理鸡胚培养是一种在体外培养鸡胚细胞的方法,主要用于研究细胞生物学、分子生物学和发育生物学等领域。
通过将鸡胚组织中的细胞分离出来,并在特定的培养条件下进行培养,可以观察到细胞的生长、形态和增殖情况,从而研究细胞的生物学特性。
三、实验材料1. 新鲜鸡蛋:选用新鲜鸡蛋,确保蛋壳完整,无破损;2. 实验器材:解剖刀、剪刀、镊子、解剖盘、培养皿、移液枪、培养箱、显微镜等;3. 培养基:DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、胰蛋白酶等;4. 其他:消毒剂、无菌操作台、无菌棉签等。
四、实验步骤1. 鸡胚的获取:将新鲜鸡蛋在37℃温水中浸泡10分钟,使蛋壳软化,然后用解剖刀在鸡蛋的一端切开,取出鸡胚。
2. 鸡胚的解剖:将鸡胚放在解剖盘上,用剪刀剪开卵黄囊,取出卵黄囊膜,用镊子取出鸡胚成纤维细胞。
3. 细胞的分离:将鸡胚成纤维细胞放入装有DMEM培养基的培养皿中,用胰蛋白酶消化细胞,待细胞变圆后加入胎牛血清终止消化,然后用移液枪吹打细胞,使细胞分散。
4. 细胞的接种:将分散的细胞接种到培养皿中,放入培养箱中培养。
5. 细胞的观察:在显微镜下观察鸡胚成纤维细胞的生长、形态和增殖情况。
6. 细胞的传代:待细胞生长到一定密度后,用胰蛋白酶消化细胞,将细胞分离成单个细胞,再进行接种。
五、实验结果1. 鸡胚成纤维细胞在培养过程中,呈扁平梭形,细胞质丰富,细胞核明显。
2. 随着培养时间的延长,细胞逐渐增多,细胞密度逐渐增大。
3. 在显微镜下观察,细胞形态规则,生长旺盛。
4. 经过传代培养,细胞仍保持良好的生长状态。
六、实验讨论1. 鸡胚培养过程中,无菌操作至关重要,需严格按照无菌操作规程进行。
2. 培养基的质量对细胞的生长和增殖有重要影响,需选用优质培养基。
3. 细胞传代次数过多,可能导致细胞生长缓慢、形态发生变化,影响实验结果。
第一节鸡胚接种一、鸡胚的结构鸡胚是正在发育的活的机体,组织分化程度低,细胞代谢旺盛,适于许多人类和动物病毒的生长增殖,是常用的病毒分离培养方法之一(衣原体、立克次体的分离亦用鸡胚)。
目前,鸡胚在正粘病毒、副粘病毒、痘病毒、疱疹病毒及脑炎病毒,尤其在禽类病毒的研究上应用较多。
可用于病毒的分离、鉴定,抗原和疫苗制备,以及病毒性质的研究等。
虽然随着组织培养技术的不断发展,不少病毒已不再用鸡胚来分离培养,但对某些病毒来说,鸡胚仍是一种不可缺少的培养手段。
鸡胚培养的优点是,来源充足,价格低廉,操作简单,无需特殊设备或条件,易感病毒谱较广,对接种的病毒不产生抗体等。
当然,鸡胚培养也有其缺点,即除痘斑和鸡胚死亡是特异性感染指征外,多需用第二试验系统来测定病毒存在与否;非SPF鸡胚,亦可能含有对某些家禽病毒的母源抗体,甚至还可能带有鸡白痢沙门氏菌、霉形体、鸡白血病等病毒。
因此,用鸡胚分离培养病毒时,必须考虑这些问题。
原则上应使用非免疫蛋来孵鸡胚,最好用SPF鸡胚。
一般说来,孵育至8-14天的鸡胚最有利于病毒的生长,因为此阶段鸡胚发育日趋完善,各种脏器均已形成,已能经受接种物的适当刺激,同时胚胎细胞幼嫩,骨胳不健全,还未长出羽毛,很利于病毒在胚胎中增殖,同时也有利于收获高滴度的病毒,14天以后,胚胎骨骼硬化,胚皮表面羽毛渐生,已不便感染病毒,特别是已不利于收获病毒材料。
在操作鸡胚时)一定要注意到这一点。
孵育至21天左右,羊水和尿囊液已全部被胚胎吸收,一部分卵黄陷入胚胎腹部,另一部分则仍留在体外,胚胎已发育成小鸡,破壳而出。
鸡胚的基本结构如图,从图中可以看出,鸡胚的最外层为石灰质的卵壳,上有气孔供气体交换,卵壳之下为壳膜,很易与卵壳分离,其功能是使气体分子与胚胎内的液体分子在内外进行交换,因此在孵育时需要有一定的湿度和空气。
如果湿度太低,鸡胚就容易脱水、引起鸡胚死亡。
气流不通,鸡胚缺氧,同样会造成鸡胚死亡。
鸡胚的钝头(俗称“大头”),是气室,其功能是呼吸和调节胚内压力。
鸡胚是什么,适宜的孵化温度是多少鸡胚就是鸡的胚胎,是指鸡蛋孵化的第一天开始到雏鸡形成过程中的鸡蛋。
孵化室要严密,而且保温性能要好,同时还要有比较好的通风设备,在孵化之前对孵化室进行消毒。
如果把种蛋放在孵化器里进行孵化,那么孵化过程中要严格控制温度,并根据孵化的进程对温度做出适当的调整。
一、鸡胚是什么1、鸡胚就是鸡的胚胎,是指鸡蛋孵化的第一天开始到雏鸡形成这个过程中的鸡蛋,鸡蛋孵化大约需要21天,在孵化鸡蛋的时候要根据孵化的天数合理控制好孵化的温度。
2、孵化鸡蛋的孵化室要严密,而且保温性能要好,同时还要有比较好的通风设备,这样可以保证室内的空气新鲜,在孵化之前对孵化室进行彻底消毒。
3、孵化的种蛋也要进行消毒处理,可以用熏蒸消毒法,每立方米用高锰酸钾1.5克、福尔马林30毫升,在27-30°C的温度下熏蒸20分钟左右即可,在熏蒸完之后需要把气体排出。
4、把种蛋放在孵化器里进行孵化,在孵化过程中要严格控制温度,根据孵化的进程及时调整适宜的温度。
还要按时照蛋,这样可以观察鸡蛋的孵化情况,还可以查出无精蛋和早期死胚蛋。
二、鸡胚适宜的孵化温度是多少1、鸡胚适宜的孵化温度是37-38°C,在孵化的过程中,需要经常根据鸡胚日龄对温度适当的调节。
2、在孵化过程中还要定期进行检查,在孵化5天的时候要及时检查出无精蛋、破壳蛋、死胚蛋,还要观察胚胎发育情况并且及时调整孵化的条件。
在孵化19天的时候要检查有没有破壳蛋、死胚蛋。
3、温度是种蛋孵化比较重要的条件。
胚胎发育要有一定的温度,要保证胚胎正常发育所需要的适宜温度,这样才可以获得比较高的孵化率和健康的雏鸡。
4、还需要严格控制好孵化湿度,在种蛋孵化1-18天相对湿度控制在50%-60%比较好,而孵化在19-21天的时候相对湿度控制在60%-70%比较好,这样有利于胚胎受热均匀、胚胎散热,而且在后期小鸡比较容易出壳。
鸡胚培养法(病毒分离培养)鸡胚是发育的机体,适合许多人类和动物病毒及立克次体的生长增值,常用于痘类病毒、粘液病毒、和疱疹病毒的分离、鉴定、抗原准备、疫苗生产以及病毒性质等方面的研究。
鸡胚培养病毒,常用的接种途径包括绒毛尿囊膜,尿囊腔、羊膜腔以及卵黄囊接种四种。
根据不同病毒,不同实验目的以及不同来源的标本,选择不同的途径接种鸡胚进行培养,即可达到分离培养病毒和传代病毒的目的。
本片主要介绍尿囊腔和羊膜腔两种接种途径在病毒分离培养和传代中的应用。
鸡胚的接种方法、孵育及收获一、仪器和器材SPF鸡卵或鸡胚、二级生物安全柜、孵卵箱或恒温箱、检卵灯、照蛋灯、开卵钻、卵盘、1ml、1次注射器、医用胶布、液体石蜡、无菌镊子、巴氏吸管、15 ml无菌离心管、试管架、96孔微量反应板、加样槽、移液器、75%酒精、生理盐水等。
二、鸡胚的孵育应选择保存温度在100左右,时间不超过10天,卵壳薄而色浅的鸡卵,用于鸡胚的孵育。
特别脏的鸡卵需用清水清洗,用布擦干后孵育,干净的鸡卵不必做任何处理。
将鸡卵置于380C---390C孵卵箱,在孵卵箱底层盛水器中放入干净自来水,以保证鸡胚发育的湿度,病保持良好的通风,孵育至第四天,于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育情况。
受精鸡卵可见清晰地血管小团和发育的鸡胚迹象,似蜘蛛壮,未受精鸡卵仅能看见模糊的卵黄黑影,无鸡胚迹象。
在孵育过程中,应随时对鸡胚进行检查,淘汰濒死或已经死亡的鸡胚。
若在恒温箱里孵育鸡胚,则应在恒温箱底层放入装满水的广口容器,并从孵育的第3天起,每天180度转到鸡胚1—2次,是鸡胚发育匀称。
也可直接订购孵育9—11日龄的鸡胚。
如何判断鸡胚存活状态:1胎动:于检卵灯下可见活胎有明显的自然运动,但胎龄大于14天的胚胎,胎动不明显,甚至无胎动,死胎则无任何胎动,胎发红似出血样,有的呈现黑快。
2血管:活胚可见清晰地血管,卵壳较薄者还可见血管的搏动。
死胎血管模糊,成淤血带或淤血块。
3绒毛尿囊膜发育界限:生活良好的胚胎可见密布血管的绒毛尿囊膜,与胚胎的另一面形成良好的界限须将上面三个方面结合起来进行观察,如果胚胎活动呆滞或不能主动地运动,血管模糊扩张,或折断沉落,绒毛尿囊界限模糊,则可判断胚胎濒死或已经死亡。
一、实习背景鸡胚培养是生物技术领域的一项重要技术,广泛应用于病毒学、免疫学、遗传学等研究领域。
通过在鸡胚中培养病毒,可以研究病毒的复制、传播机制以及疫苗的研发等。
为了提高自身对鸡胚培养技术的掌握,我参加了为期两周的鸡胚培养实习。
二、实习目的1. 熟悉鸡胚培养的基本原理和操作流程。
2. 掌握鸡胚接种、传代、观察等实验技术。
3. 了解鸡胚培养在病毒学研究中的应用。
三、实习内容1. 鸡胚培养基本原理鸡胚培养是利用鸡胚作为宿主,在适宜的条件下,使病毒在其中复制、增殖,从而达到研究病毒的目的。
鸡胚具有以下优点:(1)繁殖速度快,易于操作。
(2)病毒在鸡胚中生长条件稳定,有利于病毒学研究。
(3)鸡胚具有广泛的病毒易感性,可以用于多种病毒的研究。
2. 鸡胚培养操作流程(1)鸡胚选择:选择健康的鸡胚,一般选用9-14天的鸡胚。
(2)鸡胚消毒:将鸡胚置于75%酒精中浸泡30秒,然后用无菌生理盐水冲洗。
(3)接种:将病毒悬液滴加于鸡胚尿囊腔中,每只鸡胚接种量为0.2-0.5ml。
(4)孵育:将接种后的鸡胚置于37℃恒温箱中孵育,观察病毒生长情况。
(5)观察:定期观察鸡胚的生长状况,记录病毒复制情况。
(6)收获:当鸡胚出现病变时,收集尿囊液,进行病毒分离、鉴定等实验。
3. 鸡胚培养在病毒学研究中的应用(1)病毒分离:利用鸡胚培养可以分离出多种病毒,如流感病毒、新城疫病毒等。
(2)病毒鉴定:通过鸡胚培养可以观察病毒的形态、生长特性等,从而对病毒进行鉴定。
(3)病毒疫苗研发:利用鸡胚培养可以筛选出具有免疫原性的病毒抗原,为疫苗研发提供依据。
四、实习收获1. 熟悉了鸡胚培养的基本原理和操作流程,掌握了鸡胚接种、传代、观察等实验技术。
2. 深入了解了鸡胚培养在病毒学研究中的应用,提高了自己的科研能力。
3. 通过实习,培养了严谨、细致的科研态度,提高了自己的动手能力。
五、实习总结本次鸡胚培养实习让我受益匪浅。
在实习过程中,我不仅学到了鸡胚培养的基本知识和操作技能,还了解了鸡胚培养在病毒学研究中的应用。
鸡胚接种的方法与步骤
鸡胚接种是一种常用的病毒分离和培养方法,其基本步骤如下:1. 选择合适的鸡胚:通常选择9-12 日龄的鸡胚,此时鸡胚的免疫系统尚未完全发育,适合病毒的生长和繁殖。
2. 准备接种材料:将待接种的病毒样品稀释到适当的浓度,并准备好接种工具,如吸管、针头、注射器等。
3. 接种鸡胚:将稀释后的病毒样品接种到鸡胚的尿囊腔、卵黄囊或绒毛尿囊膜等部位。
接种时要注意操作规范,避免污染和损伤鸡胚。
4. 孵化鸡胚:将接种后的鸡胚放入孵化箱中,在适当的温度和湿度条件下孵化,让病毒在鸡胚中生长和繁殖。
5. 观察和检测:在孵化过程中,定期观察鸡胚的生长情况和病变特征,如鸡胚是否死亡、是否出现出血点、是否出现痘斑等。
同时,可以进行病毒的分离和鉴定,以确定病毒的种类和特性。
6. 收获病毒:当病毒在鸡胚中生长和繁殖到一定程度时,可以收获病毒。
收获病毒的方法包括离心、过滤、沉淀等,具体方法取决于病毒的种类和特性。
7. 保存病毒:收获的病毒可以保存在适当的温度和湿度条件下,以备后续的实验和研究使用。
需要注意的是,鸡胚接种是一项技术性较强的操作,需要严格遵守实验操作规范和安全注意事项,以确保实验的准确性和安全性。
同
时,在进行鸡胚接种实验时,应该遵循相关的法律法规和伦理规范,确保实验的合法性和道德性。
鸡胚检查法的原理鸡胚检查法,也称为鸡胚生化试验法,是通过观察鸡胚在不同情况下的反应和变化来判断品质或检测物质的方法。
该方法广泛应用于农业、食品、药物等领域,特别适用于鸡蛋和鸡肉产品的质量检测与控制。
鸡胚检查法的原理基于鸡胚的生物学特性和生化成分的变化,同时结合观察和测量等方法,通过对鸡胚的外观、重量、生长和发育的观察和测量,从而进行相关的判断和分析。
首先,孵化鸡蛋的选择是鸡胚检查法的关键。
通常选择无瑕疵的、表面无损伤的、形状规则的鸡蛋进行检查。
如果鸡蛋在蛋壳上有明显的裂纹或鸡蛋壳变色,则会影响检测结果。
其次,鸡蛋需在恒温箱中进行孵化,使其中的胚胎能够正常发育。
恒温箱中设定恒定的温度和湿度,以模拟鸡蛋在自然环境中的孵化条件。
通常情况下,将鸡蛋放置在恒温箱中孵化20-22天,鸡胚会在这个过程中发育成熟。
在鸡胚孵化过程中,可以通过观察和测量鸡胚的各项生物学指标来判断鸡蛋的品质。
常见的指标包括鸡胚的体重、体积、生长率、存活率等。
当然,不同类型的检测目标会有不同的鸡胚参数指标。
通过观察鸡胚的外观可以初步判断鸡胚的生长和发育情况。
正常的鸡胚在孵化后会逐渐长出胚头、胚体、心脏、脊柱等结构,形成完整的胚胎。
如果鸡胚在特定时期内没有形成或形成不完整,可能会表明存在胚胎发育异常或品质问题。
另外,测量鸡胚的体重也是判断鸡蛋品质的重要依据。
正常情况下,鸡胚的体重会随着孵化时间的增加而逐渐增加。
如果鸡胚的体重增长缓慢,或者更严重的是体重减少,很可能是因为胚胎发育异常或胚胎受到了各种外界不良因素的影响。
此外,观察鸡胚的存活率也是判断鸡蛋品质的重要指标。
正常情况下,鸡胚在孵化过程中的存活率应该是很高的。
如果存活率过低,说明了孵化系统或鸡胚自身存在问题,可能是由于臭氧、温度、湿度和氧气水平等因素对鸡胚发育过程的影响。
总之,鸡胚检查法通过观察和测量鸡胚在孵化过程中的生长和发育情况,配合相关的判断标准和指标,可对鸡蛋的品质进行评估和检测。
鸡胚鸡胚概述鸡胚就是鸡的胚胎,是研究动物发育的重要模型,已被大量用于发育生物学的研究。
对鸡胚的研究可以追溯到古希腊著名的博物学家亚里士多德,之后被很多生物学家予以深入的研究。
现在对鸡胚发育的过程已有清楚的了解和认识。
鸡胚在疫苗的开发和研究中有着不可替代的作用。
鸡胚装片a.当孵化第一天,染色较深的一端为头部,染色较浅的一端为尾部。
血岛、脊索原基、神经板。
体节出现1—3对。
b.48小时鸡胚装片颈曲、背曲,脑已分化为前、中、后脑三部分。
体节已发展到16—23对。
视、听囊出现,心脏开始搏动。
胚盘血管已形成并与体内建立了联系。
胚体长度达9—12毫米。
c.72小时鸡胚装片脑已清楚地分为五个部分;体节数达33对左右。
前、后肢芽出现,鳃弓具有5对。
尿囊出现。
d.96小时鸡胚装片头部显著增大,大脑半球明显。
眼发育极快,眼内色素沉着,眼球明显。
鳃弓和鳃囊开始模糊不清,全部体节约50对左右。
心脏发育已近似成体心脏。
胚体已极度弯曲,大脑半球与前肢芽几乎和尿接触。
鸡胚培养目录[隐藏]基本原理途径器材操作步骤附:鸡胚培养法血凝试验基本原理途径器材操作步骤附:鸡胚培养法血凝试验[编辑本段]基本原理鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的一种培养方法,此方法可用以进行多种病毒的分离、培养,毒力的滴定,中和试验以及抗原和疫苗的制备等。
鸡胚培养的技术比组织培养容易成功,也比接种动物的动物来源容易,无饲养管理及隔离等的特殊要求,且鸡胚一般无病毒隐性感染,同时它的敏感范围很广,多种病毒均能适应,因此,是常用的一种培养动物病毒的方法。
[编辑本段]途径各种病毒接种鸡胚均有其最适宜的途径,故应注意选择.本实验用牛痘病毒(vac cinia virus)和鸡新城疫病毒(Newcastle-disease virus)接种鸡胚。
牛痘病毒适宜于在绒毛尿囊膜上生长,经培养后,产生肉眼可见的白色痘疱样病变,似小结节或白色小片云翳状。
鸡新城疫病毒适宜接种在尿囊腔和羊膜腔内,生长后,鸡胚全身皮肤出现出血点,以脑后最显著。
[编辑本段]器材牛痘病毒液,鸡新城疫病毒液;白壳受精卵(自产出后不超过10天,以5天以内的卵为最好);孵卵器,检卵灯,齿钻,磨壳器,钢针,蛋座木架,注射器,2.5%碘酒,70%酒精,镊子,剪刀,封蜡(固体石蜡加1/4凡士林,溶化),灭菌培养皿,灭菌盖玻片等。
[编辑本段]操作步骤1.准备蛋胚孵育前的鸡卵先用清水以布洗净,再用干布擦干,放入孵卵器内进行孵育(37℃,相对湿度是45—60%),孵育三日后,鸡卵每日翻动1—2次。
孵至第4日,用检卵灯观察鸡胚发育情况,未受精卵,只见模糊的卵黄黑影,不见鸡胚的形迹,这种鸡卵应淘汰。
活胚可看到清晰的血管和鸡胚的暗影,比较大一些的可以看见胚动,随后每日观察一次,将胚动呆滞或没有运动的、血管昏暗模糊者,即可能是已死或将死的鸡胚,要随时加以淘汰。
生长良好的蛋胚一直孵育到接种前,具体胚龄视所拟培养的病毒种类和接种途径而定。
2.接种1)绒毛尿囊膜接种(a)将孵育10—12天的蛋胚放在检卵灯上,用铅笔勾出气室与胚胎略近气室端的绒毛尿囊膜发育得好的地方。
(b)用碘酒消毒气室顶端与绒毛尿囊膜记号处,并用磨壳器或齿钻在记号处的卵壳上磨开一三角形或正方形(每边约5—6mm)的小窗,不可弄破下面的壳膜。
在气室顶端钻一小孔。
(c)用小镊子轻轻揭去所开小窗处的卵壳,露出壳下的壳膜,在壳膜上滴一滴生理盐水,用针尖小心地划破壳膜,但注意切勿伤及紧贴在下面的绒毛屑囊膜,此时生理盐水自破口处流至绒毛屑囊膜,以利两膜分离。
(d)用针尖刺破气室小孔处的壳膜,再用橡皮乳头吸出气室内的空气,使绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室(e)用注射器通过窗口的壳膜窗孔滴0.05—0.1ml牛痘病毒液于绒毛尿囊膜上。
(f)在卵壳的窗口周围涂上半凝固的石蜡,作成堤状,立即盖上消毒盖玻片。
也可用揭下的卵壳封口,则将卵壳盖上,接缝处涂以石蜡,但石蜡不能过热,以免流入卵内。
将鸡卵始终保持人工气室在上方的位置进行37℃培养,48—96小时观察结果。
(2)尿囊腔接种用孵育10—12天的蛋胚,因这时尿囊液积存得最多。
(a)将蛋胚在检卵灯上照视,用铅笔画出气室与胚胎位置,并在绒毛尿囊膜血管较少的地方作记号。
(b)将蛋胚竖放在蛋座木架上,钝端向上。
用碘酒消毒气室蛋壳,并用钢针在记号处钻一小孔。
(c)用带18mm长针头的1ml注射器吸取鸡新城疫病毒液,针头刺入孔内,经绒毛尿囊膜入尿囊腔,注入0.1ml病毒液(图Ⅻ-5)。
(d)用石蜡封孔后于37℃孵卵器孵育72小时。
(3)羊膜腔接种(a)将孵育10—11天的蛋胚照视,画出气室范围,并在胚胎最靠近卵壳的一侧做记号。
(b)用碘酒消毒气室部位的蛋壳。
用齿钻在气室顶端磨一三角形,每边约1cm的裂痕。
注意勿划破壳膜。
(c)用灭菌镊子揭去蛋壳和壳膜,并滴加灭菌液体石蜡一滴于下层壳膜上,使其透明,以便观察,若将蛋胚放在检卵灯上,则看得更清楚。
(d)用灭菌尖头镊子,两页井拢,刺穿下层壳膜和绒毛尿囊膜没有血管的地方,并夹住羊膜从刚才穿孔处拉出来(图Ⅻ-6)。
(e)左手用另一把无齿镊子夹住拉出的羊膜,右手持带有26号针头的注射器,刺入羊膜腔内,注入鸡新城疫病毒液0.1ml。
针头最好用无斜削尖端的钝头,以免刺伤胚胎。
(f)用绒毛尿囊膜接种法的封闭方法将卵壳的小窗封住,于37℃孵卵器内孵育48—72小时,保持蛋胚的钝端朝上。
3.收获(1)绒毛尿囊膜(a)用碘酒消毒人工气室上的卵壳,去除窗孔上的盖子。
(b)将灭菌剪子插入窗内,沿人工气室的界限剪去壳膜,露出绒毛尿囊膜,再用灭菌眼科镊子将膜正中夹起,用剪刀沿人工气室边缘将膜剪下,放入加有灭菌生理盐水的培养皿内,观察病灶形状。
然后或用于传代,或用50%甘油保存。
(2)尿囊腔接种法收获尿囊液(a)将蛋胚放在冰箱内冷冻半日或一夜,使血管收缩,以便得到无胎血的纯尿囊液。
(b)用碘酒消毒气室处的卵壳,并用灭菌剪刀除去气室的卵壳。
切开壳膜及其下面的绒毛尿囊膜,翻开到卵壳边上。
(c)将鸡卵倾向一侧,用灭菌吸管吸出尿囊液。
一个蛋胚约可收获6ml左右尿囊液。
若操作时损伤了血管,则病毒会吸附在红细胞上,尿囊液成为无用。
收获的尿囊液经无菌试验后可在4℃以下的温度中保存。
(d)观察鸡胚,看有无典型的症状。
(3)羊膜腔接种法收获羊水(a)按收获尿囊液的方法消毒、去壳,翻开壳膜和尿囊膜。
(b)先吸出尿囊液。
(c)再用镊子夹出羊膜,以尖头毛细吸管插入羊膜腔,吸出羊水,放入灭菌试管内,每蛋胚可吸0.5—1.0ml。
经无菌试验后,保存于低温中。
(d)观察鸡胚的症状。
写鸡新城疫病毒接种鸡胚培养后,鸡胚所出现的变化。
[编辑本段]附:鸡胚培养法一、.实验材料(一)7—11日龄鸡胚(二)孵卵箱:孵卵箱要有两个,一个39℃,放正常鸡胚用,另一个33—35℃,放接种病毒后的鸡胚。
(三)照明灯,打孔器和卵盘。
(四)其它:注射器,针头,消毒剂(2.5%碘酒和75%酒精),镊子,酒精灯,试管架,蜡和胶布等。
二、接种技术(一)活胚检查鸡胚使用前必须进行检查,可根据以下三方面来判断其活死:1.血管:活胚可见明显的血管,有时可见血管搏动;死胚血管模糊,成淤血带或淤血块。
2.胎动:活胚可见明显的自然运动,尤其用手轻轻转动卵时。
但胎龄大于14天胚胎,胎动则不明显,甚至无胎动;死胚见不到任何胎动,胚发红像出血样,有的呈现黑块。
3.绒毛尿囊膜发育之界线:生活良好之胚胎可见密布血管的绒毛尿囊膜与鸡胚胎的另一面形成较明显的界线。
必须把上述三方面结合起来进行观察,如果胚胎活动呆滞或不能主动地运动,血管模糊扩张或折断沉落,绒毛尿囊膜界限模糊,则可判断胚胎濒死或已经死亡。
(二)接种途径尿囊腔接种通常选9一11日龄鸡胚,照检后画出气室边界,在气室交界边缘以上约1mm处并避开血管作一标记此即为注射点。
在点周围用先用2.5%碘酒消毒,再用75%酒精脱碘。
用打孔器在注射点处打一小孔,勿损伤壳膜。
用注射器注入样品0.2ml,然后用石蜡溶化封口,置33—35℃培养。
于接种后24h内死亡者为非特异性死亡应弃去。
培养72h后进行收获。
收获前鸡胚须置4℃冰箱6h或过夜,不能置时间过长,过长会引起散黄。
如急于收获亦可置-20℃冰箱1h左右,但不能过长,过长会引起鸡胚结冰,再融化时卵黄膜就破碎,卵黄就流出。
预冷的目的是,将鸡胚冻死使血液凝固,避免收获时流出红细胞并同尿液或羊水里的病毒发生凝集,造成病毒滴度下降。
收获时,用碘酒或75%酒精消毒气室部卵壳,用消毒镊子轻轻敲碎气室部卵壳并取走,再用另一无菌镊子撕去气室部壳膜,然后用无菌注射器通过绒毛尿囊膜进入尿囊腔,吸取尿囊液,置西林瓶内4℃或低温保存待用。
[编辑本段]血凝试验一.仪器设备一次性注射器,微量血凝板(V型、96孔),微型振荡器,移液器二.所需试剂(1)稀释液10×PBS(磷酸缓冲液pH7.0~7.2)氯化钠8.5g,磷酸二氢钾0.68g,氢氧化钠0.15g,上述成分溶于100ml蒸馏水后高压灭菌,于4℃保存,使用时作10倍稀释。
(2)红细胞保存液(阿氏液)葡萄糖20.5克,氯化钠4.2克,柠檬酸0.55克,柠檬酸钠8.0克,溶于1000毫升蒸馏水中,调PH值6.8~7.2,分装,115℃15分钟灭菌,低温保存备用。
(3)1%红细胞悬液用一次性注射器吸取2ml阿氏液,再直接采成年公鸡翅下静脉血液2ml,混匀,转移到离心管中,用1×PBS洗涤红细胞三次,头两次以1500rpm离心5min,最后一次以2000rpm离心10min。
将1ml离心压积后红细胞加入到100mlPBS中或阿氏液中即配成。
三.操作方法(1)于微量血凝板的每孔中滴加稀释液1×PBS 50μL,根据被检样品数量定所加排数。
(2)吸取被检尿囊液分别滴加于第一列孔,每个样品50μL,然后由左至右顺序倍比稀释至第11列孔,再从第11列孔各吸取50μL弃之。
最后一列不加样品作空白对照。
(3)于每孔中加入1%红细胞悬液25μL。
(4)置微型振荡器上振荡1min,或手持血凝板绕圆圈混匀。
(5)放室温下(18~20℃)30min,观察结果。
一、检视标记鸡胚(1)用照蛋灯检视鸡胚,判断鸡胚状态血管:活胚血管清晰;死胚模糊,成淤血带或淤血块胎动:活胚有明显的自然运动,死胚无胎动绒毛尿囊膜发育界限:密布血管的绒毛尿囊膜与鸡胚胎的另一面形成明显的界限(2)标记出鸡胚的气室与尿囊的界限(3)如果鸡胚是死胚、没有受精、有裂痕、发育不全、或表面有好多渗水孔,应弃掉二、接种样本(1)将标记好的鸡胚的气室朝上放置在照蛋器上。
(2)用75%酒精消毒鸡胚,用无菌镊子在气室端钻孔,再无菌眼科剪剪开10x6mm窗口。
(3)用注射器吸800µl标本。