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《生理药理学》实验指导课程编号：0741535048实验一水杨酸钠血浆半衰期的测定一、实验目的了解分光光度法测定水杨酸钠的血药浓度和计算半衰期的方法。
二、实验内容家兔静脉采血、静脉注射、离心、光电比色等。
三、实验要求集中授课形式。
四、实验准备预习药物代谢动力学，药动学参数的概念、意义、计算方法等理论知识。
五、实验原理、方法和手段在酸性条件下，水杨酸钠解离为水杨酸，后者与三氯化铁生成一种紫色络合物，该络合物在520nm波长处，其光密度与水杨酸的浓度成正比。
采用光电比色法，计算血药浓度，进一步计算药物的半衰期。
六、实验条件1. 动物家兔，2～3kg，雌雄均可。
2. 药品10% 及0.02% 水杨酸钠（sodium salicylic），10% 三氯化铁，10% 三氯醋酸（trichloroacetic acid），0.5% 肝素（heparin），蒸馏水。
3. 器材试管架、试管、离心管、吸管（10mL、2mL、1mL 0.5mL）、注射器（2mL、5mL）、针头、吸耳球、分光光度计、离心机、计算器等。
七、实验步骤1、取4支离心试管，编号后各加入10% 三氯醋酸5mL。
2、取家兔一只，称体重，使其耳部充血后，用经0.5% 肝素湿润过的注射器由耳缘静脉缓慢抽血2.5mL，分别置于1号管和2号管内各1 mL，余血弃掉，将试管摇匀静置。
3、由耳缘静脉缓慢注射10% 水杨酸钠1.5 mL/kg，（150mg/kg），给药后5min 和35min，各采血1mL，分别置于3号管和4号管内，摇匀静置。
4、1，3，4号管内各加入蒸馏水1mL ，2号管内加入0.02%水杨酸钠1mL。
摇匀。
5、将4支离心管置于离心机内，以1500～3000rpm，离心5min，使血浆蛋白沉淀。
6、另取相应编号的试管4支，将离心后的上清液倒入相应编号的试管中，从中准确吸取3mL 分别置入相应编号的另外4支试管中，每管再加入10% 三氯化铁溶液0.5mL，摇匀显色。
药理学精讲讲义绪言一、药理学性质和任务药理学：研究药物与机体(包括病原体)相互作用的规律和机制；连接药学和医学、基础医学和临床医学的桥梁。
任务：阐明药物有何作用、作用如何产生、药物在体内变化规律分类：药物效应动力学（药效学）、药物代谢动力学（药动学）临床前药理学（研究对象为动物）、临床药理学（研究对象为人）二、药理学发展发展起步较早，尤其指传统医学。
三、学习方法1、基本概念、基本理论、作用机制2、掌握代表性药物，熟悉同类药物，并能比较异同。
3、临床常用新药药物代谢动力学第一节药物的体内过程一、药物跨膜转运（一）被动转运从高浓度的一侧向低浓度的一侧扩散转运的过程。
多数药物属于被动转运。
分子量小、脂溶性大、极性小、非解离型的药易通过生物膜转运，反之难跨膜转运。
特点：不需要载体，不消耗能量，无饱和现象，无竞争性抑制1．简单扩散药物在体液中解离，以离子型和分子型同时存在。
药物常以未解离的分子型通过细胞膜，离子不易通过细胞膜。
药物解离度取决于取决于pKa和介质pH。
弱酸性药物易在胃中吸收；弱碱性药物易在小肠内吸收；完全离子化药物吸收不完全2．滤过：分子粒径小于膜孔，不带电荷（二）载体介导的转运1．主动转运：是一种逆浓度(或电位)差的转运。
与正常代谢物相似的药物，如5-氟尿嘧啶、甲基多巴等特点：需要载体，消耗能量，有饱和现象和竞争性抑制。
2．易化扩散：如葡萄糖的吸收特点：需要载体，不消耗能量，顺浓度梯度。
3．膜泡运输：内吞、外排二、药物的吸收定义：药物经血管外给药从给药部位进入血液循环的转运过程。
生物利用度――――影响吸收的因素：药物性质、给药途径剂型、机体状况（一）胃肠道给药1．口服：最常用的给药途径，安全方便，经济。
小肠是主要吸收部位。
缺点：吸收缓慢，影响因素多。
影响因素较多：溶解度、pH、首关消除。
首过消除：药物进入体循环之前，首先在胃肠道或肝脏被灭活，进入体循环量减少。
不宜口服：①刺激性大或首过消除；②病人昏迷不能吞咽；③不易吸收或易破坏；④必须注射才能达到疗效。
药理学实验课讲义（24学时）-1实验一：不同给药途径对药物作用的影响【目的】1．掌握硫酸镁的药理作用。
2．掌握小鼠灌胃给药及腹腔注射的方法。
3．观察硫酸镁不同给药途径产生的药理作用是否相同。
【原理】硫酸镁是一个典型的不同给药途径产生不同药理作用的药物，其口服在胃肠道形成高渗透压，使肠腔外水份向肠腔内渗透，最终导致肠容积增大，对肠壁刺激增加，导致肠蠕动加快，出现泻下作用。
静脉注射硫酸镁主要作用有：抑制中枢神经系统、扩张血管降低血压、阻断神经肌肉接头产生肌松作用等。
【材料】1. 动物小白鼠6只2. 药品 15%硫酸镁3. 器材小鼠灌胃器、注射器、针头、小天平【方法】1. 小白鼠标号、称重、分组。
2．Ⅰ组 i.p. 15%MgSO4溶液 0.2ml/10gⅡ组 i.g. 15%MgSO4溶液 0.2ml/10g3．以存活或死亡观察小鼠灌胃及腹腔注射等量硫酸镁所致药物效应不同。
【思考题】1．给药途径不同，为什么会影响药物作用？2．比较各种给药途径的优缺点？实验二：有机磷农药中毒与解救【目的】观察有机磷农药中毒的症状及阿托品、解磷定二药对有机磷农药中毒的解救效果，初步分析其解救原理。
【实验原理】有机磷农药能与胆碱酯酶牢固结合，使之失去水解Ach的活性，造成突触间隙Ach大量堆积而产生一系列中毒症状（M样、N样症状等）。
阿托品是M受体阻断药、氯磷啶是胆碱脂酶复活药，可不同程度的解救其中毒症状。
如阿托品解除M样症状，但对肌震颤无效；解磷定可使胆碱酯酶复活，对肌震颤有效。
【材料】1．动物：家兔2．药品：10%敌百虫溶液、0.1%硫酸阿托品溶液、2.5%解磷定溶液3．器材：兔箱、注射器、5#针头、台式磅秤、瞳孔尺【方法】1．取家兔1只，称重后分别观察下列各项指标：全身状况、活动情况、呼吸（次数、有无呼吸困难、呼吸道有无分泌等），瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌张力及有无肌震颤等，记录在表内。
2．耳缘静脉注射10%敌百虫溶液1ml/kg，密切观察上述的各项指标。
药理学概论实验讲义药理学概论实验讲义一、药理学实验设计的基本知识1.实验设计的基本原则药理研究的目的是通过动物实验来认识药物作用的特点和规律，为开发新药和评价药物提供科学依据。
由于生物个体之间存在着差异性，且实验过程也存在系统误差和操作误差，因此要取得精确可靠的实验结论，必须进行实验设计。
进行实验设计必须遵循三条原则，即重复、对照、随机。
重复是保证实验结果可靠的重要措施之一。
重复具有两方面的含义，即重现性和重复性。
重现性就是精确可靠的实验结果，应能在相同条件下重复出现。
重复性就是实验要有足够的次数或例数。
由于个体差异和实验误差，仅根据一次实验或少数样本所得的结果，往往难以下结论。
在适当的范围内重复愈多，则放可靠。
究竟用多少动物或多大样本进行药理实验，是研究者遇到的首要问题。
样本过少不行，过多则增加实际工作中的困难，也不符合经济的原则，而且单纯加大样本量也不能完全排除偏差，所以，在实验设计时对样本大小的估计应在保证结论可靠的条件下确定最小的例数。
在实验研究中，为消除个体差异和各种无关因素对实验结果的影响，须设对照组。
对照应符合可比原则，除实验药物或处理因素的差别外，其他一切条件(包括实验对象的种局、年龄、性别、体重和实验方法、仪器、环境、时间等)应力求一致，这样才能从实验组与对照组比较中得出药物作用的准确结论。
对照一般可分为如下两类。
①自身对照。
即在同一个体观察给药前后某种观测指标的变化，或者两种药物前后交叉比较，这样可以减少个体差异的影响。
②组间对照。
即在实验中设若干平行组进行比较，或分不给药物(或不加处理)的空白对照组及已知药物的标准品对照组。
前者最常用，后者便于与已知药物比较，并可检验实验方法及技术的可靠性。
随机分组的目的是使样本的差异平均分配到各组，而不受实验者主观因素或其他偏性误差的影响。
例如，动物分组时先被抓到的往往是不活泼考，后抓到的是活泼者，前者分入同一组，后者分入另一组，这样得出的结论是不可靠的。
（整理）《药理学》实验讲义.《药理学》实验讲义实验一药理学实验的基本知识和基本技术一、目的1. 掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；2. 更好地掌握药理学基本理论知识；3. 培养科学思维二、基本要求1. 实验前：预习实验内容并复习相关理论知识；2. 实验时⑴实验器材要妥善保管；⑵实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录；⑶注意节约实验药品；⑷维持良好的课堂纪律。
3. 实验后⑴各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室；⑵值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所；⑶书写实验报告。
三、实验报告的书写1. 题目2. 目的3. 原理4. 材料：实验动物，器材，药品5. 方法：用自己的语言简单扼要描述出来；6. 结果：要求真实、清楚；7. 讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；8. 结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。
四、药理学实验实验设计原则1.随机原则按照机遇均等的原则进行分组。
其目的是使一切干扰因素造成的实验误差减少，而不受实验者主观因素或其他偏性误差的影响。
2.对照原则空白对照（指在不加任何处理的条件下进行观察对照）；阴性对照也称假处理对照（给予生理盐水或不含药物的溶媒）；阳性对照也称标准对照（指以已知经典药物在标准条件下与实验药进行对照）。
3.重复原则能在类似的条件下，把实验结果重复出来，才能算是可靠的实验，重复实验除增加可靠性外，也可以了解实验变异情况。
五、实验动物1. 动物的选择（1）小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。
也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。
（2）大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。
（3）豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。
绪言一、生理学实验课的目的生理学是一门实验学科，其研究的基本方法即是实验。
生理学实验课的基本目的在于：⑴通过实验培养学生具有科学的思维方法和科学的工作态度；⑵在实验过程中使学生初步掌握生理学实验的基本操作技术；⑶了解获得生理学知识的科学方法；⑷验证和巩固生理学的基本理论。
二、生理学实验的特点及基本方法生理学实验的特点在于主要以活的动物为实验材料，因此要求做到：⑴爱护动物，尽量减少动物在实验中的痛苦，并充分利用每只动物以获得尽可能多的观察结果和实验数据；⑵严格按实验步骤和要求进行操作，以免造成不必要的创伤和出血使动物的正常生理状态遭到破坏，从而影响到实验结果的可靠性。
生理学的基本实验方法分为急性实验方法和慢性实验方法两大类。
㈠急性实验方法实验过程不能持久，实验后动物不能存活，实验观察能在短时间内完成的实验方法。
一般又可分为两种：⒈离体器官实验方法把要研究的器官或组织从活的或刚死去的动物身上取下来，放在一个适宜于正常生理活动的人工环境中以观察和研究其生理功能。
⒉活体（在体）实验方法在动物麻醉或大脑毁损的状态下，解剖暴露动物的某一器官组织以进行实验研究。
㈡慢性实验方法是在某一特定条件下，连续地反复观察和记录清醒动物的生理机能，需要较长时间才有结果的实验方法。
有时要先做无菌的外科手术，待动物恢复健康后再进行实验研究。
此法在基础实验课教学中较少应用，主要广泛应用于研究工作中。
三、生理学实验课要求⒈认真预习本次实验的原理、目的、要求、实验步骤和操作程序。
⒉严格按照实验步骤认真操作、仔细观察，在需要互相合作的实验中应互相配合。
在整个实验过程中不得进行与实验无关的活动。
⒊注意保护实验动物和标本，尽量节省实验器材和药品。
⒋实验后将仪器整理整齐，所用器械清洗干净并擦干，做好本组卫生。
⒌遵守实验器械管理规定，爱护实验器械。
⒍及时整理实验记录，认真撰写实验报告，按时将报告交负责老师评阅。
四、实验报告写作要求⒈写明姓名、日期、学号、组别及同组人员⒉实验号和实验题目⒊实验目的⒌实验对象⒍实验器材和药品⒎实验方法和步骤：可作扼要描述⒏实验结果：详细记录所观察的实验结果，以及获得这些结果所需的各种实验条件，并进行适当的分析和处理。
《生理药理学》实验指导课程编号：0741535048实验一水杨酸钠血浆半衰期的测定一、实验目的 了解分光光度法测定水杨酸钠的血药浓度和计算半衰期的方法。
二、实验内容家兔静脉采血、静脉注射、离心、光电比色等。
三、实验要求集中授课形式。
四、实验准备预习药物代谢动力学，药动学参数的概念、意义、计算方法等理论知识。
五、实验原理、方法和手段在酸性条件下，水杨酸钠解离为水杨酸，后者与三氯化铁生成一种紫色络合物，该络合物在520nm波长处，其光密度与水杨酸的浓度成正比。
采用光电比色法，计算血药浓度，进一步计算药物的半衰期。
六、实验条件1. 动物家兔，2～3kg，雌雄均可。
2. 药品10% 及0.02% 水杨酸钠（sodium salicylic），10% 三氯化铁，10% 三氯醋酸（trichloroacetic acid），0.5% 肝素（heparin），蒸馏水。
3. 器材试管架、试管、离心管、吸管（10mL、2mL、1mL 0.5mL）、注射器（2mL、5mL）、针头、吸耳球、分光光度计、离心机、计算器等。
七、实验步骤1、取4支离心试管，编号后各加入10% 三氯醋酸5mL。
2、取家兔一只，称体重，使其耳部充血后，用经0.5% 肝素湿润过的注射器由耳缘静脉缓慢抽血2.5mL，分别置于1号管和2号管内各1 mL，余血弃掉，将试管摇匀静置。
3、由耳缘静脉缓慢注射10% 水杨酸钠1.5 mL/kg，（150mg/kg），给药后5min 和35min，各采血1mL，分别置于3号管和4号管内，摇匀静置。
4、1，3，4号管内各加入蒸馏水1mL ，2号管内加入0.02%水杨酸钠1mL。
摇匀。
5、将4支离心管置于离心机内，以1500～3000rpm，离心5min，使血浆蛋白沉淀。
6、另取相应编号的试管4支，将离心后的上清液倒入相应编号的试管中，从中准确吸取3mL 分别置入相应编号的另外4支试管中，每管再加入10% 三氯化铁溶液0.5mL，摇匀显色。
7、以1号管为对照管，用724分光光度计在波长520nm处测定其余3管的光密度值，由2号管的光密度值（Y2）和浓度（X2）求比值K，即K=X/Y（恒定）。
再根据X=KY，由Y3和Y4求得X3和X4，即药后5min 和35min 时的血药浓度，根据下列公式求出半衰期（t1/2）。
0.301t1/2 =（lgX3-lgX4）/△t注：式中X3和X4分别为给药后5min 和35min 时的血药浓度，△t 为两次取血的间隔时间（30 min）。
结果与处理：将实验结果列入表3中，根据实验结果计算半衰期。
表3 水杨酸钠血药浓度测定步骤与结果记录试管（编号）10%三氯醋酸/mL血/mL 蒸馏水/mL0.02%水杨酸钠/mL10%三氯化铁/mL光密度(Y)K值(X/Y)C/μg·mL-11（对照） 5.0 1.0 1.0 - 0.52（标准） 5.0 1.0 - 1.0 0.53（药后） 5.0 1.0 1.0 - 0.54（药后） 5.0 1.0 1.0 - 0.5八、思考题1、测定药物的t1/2有何临床意义？2、什么情况下药物的t1/2会延长？九、实验报告1、预习报告要明确实验目的、实验原理、实验材料、实验步骤、实验观察指标及数据处理方法、实验注意事项等。
2、实验记录所测各管的光密度值。
3、实验报告写明实验目的、实验原理、实验材料、实验步骤、实验观察指标及数据处理方法等。
重点是对数据的处理，结合思考题分析实验结果。
十、注意事项1、本实验属分析性的，操作必须准确，取血间隔的时间△t要根据各实验者操作的准确时间而定。
2、取血时可采用多种取血方式，如心脏取血、动物取血等，取血用的注射器在取血前要用0.5%肝素润洗，以防血凝。
实验二药物对离体肠管平滑肌的作用一、实验目的1. 学习离体平滑肌器官的实验方法。
2. 观察乙酰胆碱、阿托品、组织胺、扑尔敏和某药等药物对离体回肠平滑肌的作用，并分析其作用原理。
二、实验内容熟悉离体器官实验的方法，观察肠平滑肌收缩曲线的记录方法。
多种药物对离体肠管活动的影响。
三、实验要求集中授课形式。
四、实验准备传出神经系统药物的分类、药理作用、作用机制，肠平滑肌省分布的受体、兴奋后产生的效应。
五、实验原理、方法和手段消化道平滑肌除具有肌肉的共性外，尚具有不同于心肌和骨骼肌的特性，主要表现在其自动节律性缓慢而不规则，伸展性较大，兴奋性较低，具有一定的紧张性，对电刺激和切割不敏感，而对温度变化、牵拉、酸碱、乙酰胆碱等理化因素敏感等。
本实验观察M胆碱受体激动药和阻断药、组胺受体激动药和阻断药以及某药对小肠平滑肌的作用，并理解和分析药物的作用机制。
六、实验条件1. 动物：家兔，2～3kg，雌雄均可。
2. 器材：BL-420F生物信号采集处理系统、计算机、打印机、恒温循环水浴各1台，麦氏浴管、张力换能器、气袋、通气钩、铁支架、止水夹各1个，1ml注射器5个，培养皿、250ml烧杯、100ml烧杯、搪瓷盘、塑料碗各1个，十字夹1套，普通剪刀、组织剪、眼科剪、止血钳各1把，丝线、打印纸若干。
3. 药品：台氏液、0.1%氯化乙酰胆碱溶液、0.05%硫酸阿托品溶液、1%磷酸组织胺溶液、0.1%扑尔敏溶液、1%某药溶液。
七、实验步骤1. 标本制备：取家兔一只，置于手中倒悬，以木槌击头至死，立即打开腹腔，找到回盲部，在离其2～3cm的回肠处剪断，取出回肠，置于盛有台氏液的培养皿中，沿肠壁分离并剪去肠系膜，将肠管剪成数段，轻轻冲出肠内容物，最后将肠管剪成2～3 cm的小段备用。
2. 冲洗浴管，并在其中加入台氏液30ml （标线处），打开恒温水浴，设定温度为37.5℃，并打开循环开关。
3. 取上述备用回肠一段，两端用丝线结扎并用挂钩挂住，一端挂在通气钩上，放入浴槽，另一端连于张力换能器。
通气钩另一端与气袋相连，缓慢通入气泡，并调节1～2个气泡/秒。
4. 打开计算机，进入BL-420F生物信号采集系统，选择“通道1 → 张力”，实验项目下的“药理实验”，“药物对离体肠平滑肌的作用”。
调整肠管的张力，使之适度。
5. 观察项目：待肠管在浴管内稳定10 min左右，记录一段正常活动曲线，然后用注射器依次向浴槽中滴加药液。
每加一个药后立即标记，并观察、记录肠管的收缩幅度。
待药物的作用明显及肠管的活动平稳后加入下一个药物。
第一组药物：（1）0.1%氯化乙酰胆碱溶液0.2ml；（2）0.1%硫酸阿托品溶液0.2ml；（3）重复给（1）。
用台氏液冲洗1～2遍，加入新鲜台氏液，待肠管活动稳定后，记录一段正常收缩曲线，然后加入第二组药物。
第二组药物：（4）1%磷酸组织胺溶液0.3ml，作用明显时加入（5）；（5）0.1%扑尔敏溶液0.3ml；（6）重复给（4）。
用台氏液冲洗1～2遍，加入新鲜台氏液，待肠管活动稳定后，记录一段正常收缩曲线，然后加入第三组药物。
第三组药物：（7）1%某药溶液1ml；（8）0.1%硫酸阿托品溶液0.2ml；（9）重复给（7）。
用台氏液冲洗1～2遍，加入新鲜台氏液，待肠管活动稳定后，记录一段正常收缩曲线，然后加入第四组药物。
第四组药物：（10）1%某药溶液1ml；（11）0.1%扑尔敏溶液0.2ml；（12）重复给（10）。
6. 切断电源，取出回肠，冲洗浴槽，整理实验台其他物品。
八、思考题1. 乙酰胆碱和阿托品对小肠平滑肌的作用及其作用机制？2. 组胺和扑尔敏对小肠平滑肌的作用及其作用机制？3. 阿托品和扑尔敏对某药的作用有什么影响？为什么？九、实验报告1、预习报告要明确实验目的、实验原理、实验材料、实验步骤、实验观察指标及数据处理方法、实验注意事项等。
2、实验记录3、实验报告整理实验结果，剪接描记曲线并打印。
结合思考题对实验结果进行分析。
十、注意事项1. 冲洗和分离肠管时动作应轻柔，尽量避免牵拉肠管；标本制备好后，放在盛有台氏液的培养皿中保存，以免影响标本的反应性。
肠管两端穿线时，切勿将肠管缝死，只需穿过一层肠壁。
2. 实验前后应将浴槽彻底清洗，以免残留药物影响实验结果。
3. 台氏液必须新鲜配置，温度保持在37℃～38℃。
4. 通气时使气泡呈小米粒大小均匀上升，水泡不宜过大。
5. 调节连线松紧度，并且线应垂直桌面。
6. 加药时不要把药液直接加到回肠上，以免影响结果。
7. 浴温和肠肌的张力均可影响实验结果，应注意调节。
实验三热板法观察药物的镇痛作用一、实验目的 用热板法观察某药的镇痛作用，并学习镇痛药物的筛选方法。
二、实验内容小鼠捉拿、固定、分组及腹腔着注射方法，热板测痛仪的使用。
三、实验要求 集中授课形式。
四、实验准备 镇痛药的作用、作用机制、临床应用、不良反应及使用注意。
五、实验原理、方法和手段将小鼠置于恒温的热金属板上，热刺激小鼠足部产生疼痛反应（舔后足），记录小鼠从放于热板上至出现疼痛反应即舔后足的时间（痛阈值），比较用药组与对照组小鼠痛阈值的差异，判定药物有无镇痛作用。
六、实验条件1 动物 小鼠（18～22g ），雌性。
2 药品 某药，生理盐水，某药。
3 器材 热板测痛仪，天平，注射器（1ml 2支），大镊子。
七、实验步骤1 调整仪器 ①接通电源，按动“升温”按钮，将温度设定为55℃。
②测痛记时：按动“T ”按钮，计时开始，再次按动“T ”按钮，计时停止，并锁定数据。
再次按动“T ”按钮又从零开始计时，周而复始。
2 小鼠筛选及正常痛阈值的测定 取小鼠数只，依次放在热板上，密切观察，记录痛阈值。
凡在30s 内不舔后足或逃避者皆弃之不用，将合格的小鼠随机分成两组，列入表内。
3 给药及药后痛阈值的测定 第一组小鼠腹腔注射某药（0.1ml/10g ），第二组小鼠腹腔注射同容量的生理盐水作对照。
给药后30min 、45min 各测痛阈值一次（如60s 内无反应，应将小鼠取出，以免把脚烫伤，痛阈值按60s 计算）。
将两次测得的平均值作为药后痛阈值（即观察值X ）进行t 检验。
4 t 检验 显著性检验中，两组均数的显著性检验最常用的是t 检验。
一般分三步：第一步：检验假设，比较两组均数的差异有无显著性时，首先假设差异是不显著的，即两组平均数无本质区别，差异可能是由抽样误差引起的，这样假设在统计学上称为“无效假设”。
第二步：计算t 值，进而求得概率（P 值）。
公式：nX X ∑=2121S X X t --=2121221n n n n S S C +⋅=- 2])([])([2122222121212-+-+-=∑∑∑∑n n n X X n X X Sc式中，X ：均数；21XX S -：两组均数的标准误；Sc 2：两组均数的标准差；n ：例数；∑：总和；第三步：判断结果，查“t值表”，t值越大P值越小，但t值的大小又与自由度有关。
