抗生素微生物测定法48页PPT

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依次求出6个不同浓度梯度的标准溶液对应 的校正后抑菌圈直径大小。 d1= d0.4-a1； d3= d0.8-a3 d5= d1.2-a5 d2= d0.6-a2 d4= d1.0-a4 d6= d1.4-a6


标准曲线
．
d6 抑菌圈直径d
抗 生 素 浓 度 C
C6
．
C5


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例如：6组中1U/mL标准品54个抑菌圈直 径总平均值为22.6mm，而0.4U/mL(第 一组）的一组中9个1U/mL标准品抑菌圈 直径的平均值为22.4mm，则第一组的矫 正值为22.6-22.4=0.2。 如果第一组9个0.4U/mL标准品抑菌圈直 径的平均值为18.6mm，则第一组抑菌圈 直径校正后为18.6+0.2=18.8mm。
抗生素效价：用抗生素效价单位表示，反映抗生 素的活性。 抗生素效价单位：每毫升或每毫克中含有某种抗 生素的有效成分的多少，用单位U或ug表示。

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一、微生物检定法
1、原理 以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为 指标来衡量抗生素效价的方法。 量反应平行原理： 在实验所用的剂量范围内，对数剂量和 反应呈直线关系，供试品和标准品的直 线应平行。
稀释法 比浊法 管碟琼脂扩散法（中国）
管碟琼脂扩散法

利用抗生素在涂布特定试验菌 的固定培养基内呈球形扩散，形成 含一定浓度的抗生素球形区，抑制 了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑 菌圈。 通过比较标准品与供试品产生 抑菌圈的大小来测定供试品的效价。

2、测 定 方 法
（1）青霉素发酵液样品溶液的制备

23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢谢！
抗生素微生物检定法
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26、我们像鹰一样，生来就是自由的 ，但是 为了生 存，我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子，然 后把自 己关在 里面。 ——博 莱索
的。— —爱·科 克
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28、好法律是由坏风俗创造出来的。 ——马 克罗维 乌斯
•
29、在一切能够接受法律支配的人类 的状态 中，哪 里没有 法律， 那里就 没有自 由。— —洛克
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30、风俗可以造就法律，也可以废除 法律。 ——塞·约翰逊
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈

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• 抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关；
• 比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小， 可计算出抗生素的效价。
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计算检品的效价
• 求出W和V • W=（SH+TH）-（SL+TL） • V=（TH+TL）-（SH+SL） • TH供试品高剂量的抑菌圈 • TL供试品低剂量的抑菌圈 • SH标准品高剂量的抑菌圈 • SL标准品低剂量的抑菌圈
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抗生素效价微生物检定法
赵永成 生工1001 4104100139
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1.概述
一、抗生素的概念及抗生素的生物检定
抗生素是由微生物所产生的极微量便 具有选择性地杀死或抑制其他病原微生物 生长的一类天然有机化合物。
抗生素的生物检定是以抗生素对微生 物的抗菌效力作为效价的衡量标准。
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3、管碟法：是利用抗生 素在含敏感试验菌的 琼脂培养基中的球面 扩散渗透作用，从而 形成一定的抑菌圈。
通过琼脂培养基，可观 察并测量出抑菌圈的 大小。
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管碟法测定抗生素效价 原理和方法
一 原理 在一定的抗生素浓
度范围内，对数剂量(浓 度)与抑菌圈的表面积或 直径成正比，可以得出 一条曲线。
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• 求出θ=D· log（IV/W）
• θ供试品和标准品的效价比 • D标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般
为1 • I 高低剂量之比的对数，即log2或log4 • Pr = Ar×θ • Pr供试品实际单位数

金黄色葡萄球菌（CMCC26003）等。
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12、标准品
标准品是指用于生物检定、抗生素或生化 药品中含量或者效价测定的标准物质，一 般以效价单位标示，标准品应由国家法定 的单位制备、标定和供应，一般常用的标 准品来源于中国兽医药品监察所和中国药 品生物制品检定所。
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三、管碟法操作步骤
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六、林可胺类 主要有盐酸林可霉素、盐酸吡利霉素等。
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七、多肽类
包括硫酸黏菌素、杆菌肽锌、亚甲基水 杨酸杆菌肽、恩拉霉素、维吉尼霉素、那 西肽等。
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八、多糖类 包括阿维拉霉素、黄霉素等。
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九、其他：
包括延胡索酸泰妙菌素、泰妙菌素、盐酸 沃尼妙林、赛地卡霉素等
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7、抑菌圈测定仪： 用于测定细菌所致抑菌圈直径，也可以用 游标卡尺进行测量直径。
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8、超净工作台：
用于菌种的接种、传代和菌悬液的制备。 超净台应放在洁净工作间或半无菌室内。
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琼脂扩散法(管碟法）：
是使用固体培养基，在培养基凝固前，将试 验菌混进去，采用一定的方法，将含有抗生素的 物质与含菌的培养基表面接触。目前，国际上采 用将抗生素加入到特定的小钢管中，使小钢管中 的抗生素与培养基表面接触，此方法称为“管碟 法”。经过培养后，由于抗生素不断向培养基中 扩散，凡抑菌浓度能到达之处，试验菌不能生长， 从而形成透明的抑菌范围，此范围一般都呈圆形， 称为“抑菌圈”。

细菌耐药机制 革兰氏染色阴性细菌耐药机制
革兰氏染色阳性细菌耐药机制
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阻碍细胞壁合成(阳性细菌)
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阻碍细胞壁合成(阴性细菌)
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阻碍细胞壁合成(阴性细菌)
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抗生素作用机制
阻碍细胞壁合成
β－内酰胺类药物
万古霉素
抑制蛋白质合成
大环内酯类 氯林可霉素,氯霉素(50S) 四环素,氨基糖苷类(30S)
干扰细菌DNA合成

悬液 的制
方法
备
⑤供试品溶 液的制备
④标准品溶 液的制备
学习目标 复习提问
类别 实验菌 培养基 PH
链、卡 枯草芽胞杆 Ⅰ
7.8-
庆、红 菌
8.0
新课大纲 新课内容 本课小结
四、土 滕黄八叠球 Ⅱ 氯、林 菌
6.56.6
课后习题
学习目标 复习提问 新课大纲 新课内容
牛肉浸 酵母浸 出粉 1.5g 出粉3g 胨5g
学习目标 复习提问 新课大纲 新课内容 本课小结 课后习题
学习目标 复习提问 新课大纲 新课内容 本课小结 课后习题
学习目标 复习提问 新课大纲 新课内容 本课小结 课后习题
学习目标 复习提问 新课大纲 新课内容 本课小结 课后习题
三、管碟法
T2
S1
S2
T1
学习目标 复习提问 新课大纲 新课内容 本课小结 课后习题
1.理论依据：
• 扩散现象：由球面扩散动力学公式表 示
• 相当于直线方程：y=bX+c • 抗生素总量的对数值与所形成抑菌圈
直径的大小呈直线关系，来测定抗生 素抗菌活性。
2.影响因素?
学习目标
Ⅰ超净工作台
复习提问 Ⅱ抑菌圈测量仪
新课大纲 新课内容 本课小结 课后习题
Ⅲ双碟 Ⅳ陶瓦盖 Ⅴ钢管
Ⅻ试验菌
学习目标 复习提问 新课大纲 新课内容 本课小结 课后习题
• 管碟法分为三种方法 一剂量法又称 标准曲线法，常用于原料生产的过程 监控、中间体或半成品检验；二剂量 法是抗生素质量检验的常规方法；三 剂量法主要用于标准品的标定。中国 兽药典（2005年版）收载了二剂量法 和三剂量法。
学习目标 复习提问 新课大纲 新课内容 本课小结 课后习题

ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
31、只有永远躺在泥坑里的人，才不会再掉进坑里。——黑格尔 32、希望的灯一旦熄灭，生活刹那间变成了一片黑暗。——普列姆昌德 33、希望是人生的乳母。——科策布 34、形成天才的决定因素应该是勤奋。——郭沫若 35、学到很多东西的诀窍，就是一下子不要学很多。——洛克
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1、战鼓一响，法律无声。——英国 2、任何法律的根本；不，不成文法本 身就是 讲道理 ……法 律，也 ----即 明示道 理。— —爱·科 克
3、法律是最保险的头盔。——爱·科 克 4、一个国家如果纲纪不正，其国风一 定颓败 。—— 塞内加 5、法律不能使人人平等，但是在法律 面前人 人是平 等的。 ——波 洛克