免疫学实验中常用封闭剂介绍及选择
- 格式:pdf
- 大小:367.19 KB
- 文档页数:9
blocking reagent成分摘要:一、引言二、Blocking reagent的定义和作用三、Blocking reagent的分类四、常见Blocking reagent的使用方法五、选择合适的Blocking reagent的注意事项六、结论正文:一、引言在生物实验中,Blocking reagent(封闭剂)作为一种关键试剂,广泛应用于免疫组化、免疫荧光、ELISA等实验方法。
本文将详细介绍Blocking reagent的定义、作用、分类及使用方法,帮助实验人员更好地选择和使用合适的Blocking reagent。
二、Blocking reagent的定义和作用Blocking reagent,又称封闭剂,是一种在实验过程中用于阻断非特异性结合的试剂。
其主要作用是减少背景染色、提高实验的特异性和灵敏度。
通过使用Blocking reagent,可以有效地消除实验过程中非特异性抗体的干扰,从而获得更准确的实验结果。
三、Blocking reagent的分类根据实验方法和目的的不同,Blocking reagent可分为以下几类:1.蛋白质类Blocking reagent:如牛血清白蛋白、羊血清、兔血清等,主要用于阻断非特异性抗体结合。
2.聚合物类Blocking reagent:如聚乙烯醇、羟乙基纤维素等,用于固定细胞和阻断非特异性结合。
3.化学物质类Blocking reagent:如Triton X-100、NP-40等,用于破坏细胞膜结构,暴露抗原表位。
四、常见Blocking reagent的使用方法1.选择合适的Blocking reagent:根据实验方法和目的选择相应的Blocking reagent。
2.配制溶液:根据实验需求,将Blocking reagent溶解在适当的溶剂中,如PBS、生理盐水等。
3.处理样品:将待检测样品与Blocking reagent混合,孵育一段时间,以阻断非特异性结合。
ELISA 封闭液(1%BSA)简介:平衡盐溶液(Balanced Salt Solution ,BSS)与细胞生长状态下的pH 值、渗透压等环境状态一致,具有维持渗透压、控制酸碱平衡、供给细胞生存代谢所必需的能量和无机盐成分等作用,可满足体外实验中细胞生存并维持一定的代谢的基本需要。
Leagene ELISA 封闭液(1%BSA)主要由磷酸氢二盐、磷酸二氢盐、BSA 、防腐剂等组成,主要用于ELISA 实验中对96孔板或其他固相载体进行封闭处理。
本试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:1、 96孔板其他固相载体2、 水浴锅操作步骤(仅供参考):1、 按要求包被96孔板。
2、 用ELISA 洗涤液(1×,pH7.4)洗涤数次。
3、 对96孔板或其他固相载体进行封闭处理,一般 2-3h 。
4、 封闭完成后,将包被好的96孔板拍干、密封,4℃保存备用或加入包被缓冲液4℃保存备用。
5、 加入配制好的显色底物100μl ,水浴20min 。
6、 加入ELISA 终止液25μl 终止ELISA 反应。
注意事项:1、 注意密闭保存,避免挥发。
一旦开封,保质期就会大大缩短。
2、 封闭是否必要取决于ELISA 的模式及具体实验条件。
3、 并非所有的ELISA 固相均需封闭,封闭不当反而会使阴性本地增高。
4、 本试剂属于营养物质,注意无菌操作,尽量避免污染。
5、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
编号 名称 IT0028 Storage ELISA 封闭液(1%BSA) 100ml 4℃ 使用说明书 1份有效期:6个月有效。
亦可短期内室温存储。
相关:编号名称DC0032 Masson三色染色液DH0006 苏木素伊红(HE)染色液NR0003 Lezol(总RNA提取试剂)PW0082 丽春红S染色液(1×Ponceau S)TC0699 葡植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法)。
免疫学模考试题含参考答案一、单选题(共80题,每题1分,共80分)1、下列检测无助于自身免疫病诊断的是A、RF检测B、ANA检测C、抗乙酰胆碱受体检测D、白细胞分类计数E、抗ds-DNA抗体检测正确答案:D2、接触性皮炎多属于A、Ⅲ型超敏反应B、Ⅰ型超敏反应C、Ⅳ型超敏反应D、Ⅴ型超敏反应E、Ⅱ型超敏反应正确答案:C3、B细胞作为免疫效应细胞,其表面主要的协同刺激分子受体A、CD40B、LFA-2C、CD40LD、B7E、CD28正确答案:A4、免疫自稳功能异常可发生A、免疫缺陷病B、超敏反应C、自身免疫病D、肿瘤E、病毒持续感染正确答案:C5、试管凝集试验判定抗体效价(滴度)的依据是A、抗原和抗体达最适比例时的抗体稀释度B、产生明显凝集现象的最低抗体稀释度C、产生明显凝集现象时的凝集状态D、产生明显凝集现象的最高抗原稀释度E、产生明显凝集现象的最高抗体稀释度正确答案:E6、酶免疫技术中悬浮在溶液中具有液相反应速率的固相载体是A、尼龙膜B、硝酸纤维素膜C、聚氯乙烯D、磁性微粒E、聚苯乙烯正确答案:D7、关于ENA抗体谱检测,下列方法中不采用的是A、双向免疫扩散法B、对流免疫电泳C、免疫印迹D、荧光法E、ELISA正确答案:D8、下列哪种物质可刺激机体产生人工主动免疫A、卡介苗B、白喉抗毒素C、破伤风抗毒素D、丙种球蛋白E、IFN正确答案:A9、目前已发现的IL有A、8种B、12种C、18种D、16种E、26种正确答案:C10、纯化效果最好的单克隆抗体提纯方法是A、盐析B、凝胶过滤C、离子交换层析D、超速离心法E、亲和层析正确答案:E11、抗原抗体复合物激活补体时,抗体最先与补体结合的组分是A、C1B、C1qC、C1rD、C1sE、C3正确答案:B12、人轮状病毒感染时,最重要的治疗是A、早期抗病毒治疗B、补液为主的对症治疗C、并发症的治疗D、轮状病毒抗体的治疗E、退热治疗正确答案:B13、甲胎蛋白是下列哪一种肿瘤的最灵敏、最特异的指标A、胃癌B、甲状腺肿瘤C、卵巢癌D、直肠癌E、肝癌正确答案:E14、细胞膜型Ig合成中恒定区基因所连接的外显子是A、CμB、SCC、MCD、σE、Cγ正确答案:C15、关于ADCC效应说法错误的是A、可由NK细胞介导B、是抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应C、依赖IgG的参与D、不能直接杀伤靶细胞E、可以直接杀伤靶细胞正确答案:D16、斑点金免疫渗滤试验的载体材料为A、尼龙膜B、滤纸C、醋酸纤维素膜D、硝酸纤维素膜E、塑料膜正确答案:D17、不能用于检测血清总IgE的是A、放射免疫吸附试验B、凝胶扩散法C、酶联免疫测定法D、间接血凝试验E、化学发光法正确答案:B18、下列缩写代表主要组织相容性复合体的是A、MHCB、MHAC、MHSD、HLAE、MPC正确答案:A19、参与炎症反应最重要的细胞因子是A、IL-1B、IL-3C、IL-4D、EPOE、IFN正确答案:A20、由花生四稀酸衍生的血管活性介质包括A、LTs(白三烯)B、组胺C、磷酸酰肌醇D、5-羟色胺E、激肽原酶正确答案:A21、酶免疫分析中,常以聚苯乙烯作为固相载体的检测项目是A、ELISAB、斑点ELISAC、斑点免疫渗滤试验D、酶免疫电转移印迹法E、酶免疫组化技术正确答案:A22、溶血空斑试验主要是用来检测何种细胞的的功能A、T细胞B、B细胞C、中性粒细胞D、吞噬细胞E、NK细胞正确答案:B23、双向琼脂扩散试验中,抗原含量较大,反应沉淀线应A、呈多条沉淀线B、在两孔之间C、沉淀线弯向抗原孔D、靠近抗体孔E、靠近抗原孔正确答案:D24、骨髓移植的主要作用是A、治疗病毒感染B、抑制实体肿瘤生长C、重建造血和免疫系统D、治疗排斥反应E、治疗自身免疫病正确答案:C25、双特异性抗体的最主要特点是A、双特异性抗体分子片段可在体外构建B、亲和力大C、能同时结合两种抗原表位D、分子量大E、灵敏度高正确答案:C26、荧光效率的决定因素是A、温度B、激发光强度C、荧光素本身特性D、环境因素E、激发光波长正确答案:C27、补体激活替代途径的激活物主要是A、免疫复合物B、细胞核C、免疫球蛋白D、脂多糖和酵母多糖E、细胞质正确答案:D28、抗核抗体的性质主要是A、IgMB、IgGC、IgAD、IgDE、IgE正确答案:B29、实验室检查发现某份血清抗HIV初筛阳性,应该A、报告患者单位B、进一步送指定部门做确认实验C、告诉患者D、告诉患者家人E、自己做确认实验正确答案:B30、在RIA反应系统中,参与反应的标记抗原,已知抗体和待测抗原,对这三种成分的要求是A、只需固定标记抗原量B、待测抗原要先标记C、标记抗原与已知抗体的量都是固定量的D、只需固定已知抗体的量E、三者的量均需固定正确答案:C31、人类T淋巴细胞分化成熟的器官是A、胸腺B、骨髓C、脾脏D、法氏囊E、淋巴结正确答案:A32、被称为乳腺癌相关抗原的是A、HE4B、CA15-3C、CA125D、CA19-9E、CA72-4正确答案:B33、抗原抗体反应的特异性指的是A、两者分子的电子云吸引力B、两者分子大小的相近性C、两者之间相互吻合的互补性D、两者之间空间结构的相似性E、两者分子功能的相近性正确答案:C34、下列组成荧光显微镜的结构中,与普通光学显微镜相同的是A、物镜B、光源C、目镜D、滤光片E、聚光器正确答案:C35、不属于肿瘤标志物的是A、AFPB、CEAC、CRPD、PSAE、CA125正确答案:C36、在抗毒素皮试阳性时正确的措施是A、禁用抗毒素B、改用抗生素C、全量一次注射D、少量多次注射E、以上都不是正确答案:D37、感染后0-4h,发挥吞噬杀菌作用的细胞是A、树突状细胞B、δT细胞C、中性粒细胞D、B2细胞E、B1细胞正确答案:C38、与绵羊红细胞结合形成E花结的细胞是A、K细胞B、NK细胞C、单核细胞D、T细胞E、B细胞正确答案:D39、用于标记的HRP,下面哪一项描述是正确的A、HRP是由具有酶活性的糖白主酶和无酶活性的亚铁血红素辅基构成B、根据HRP的RZ值可判断酶活性的高低C、HRP对酶催化反应中的受氢体专一性要求不高D、酶变性后,其RZ值不变E、HRP的底物为对-硝基苯磷酸酯正确答案:D40、合成sIgA分泌片的细胞是A、巨噬细胞B、NK细胞C、肥大细胞D、浆细胞E、粘膜上皮细胞正确答案:E41、免疫电泳的结果,主要是观察A、沉淀峰的高低B、沉淀弧的长短C、沉淀弧的方向D、沉淀环的直径E、沉淀线的数目、形状和位置正确答案:E42、母体在妊娠中使遗传有父亲的MHC的胎儿不被排斥的原因是A、母亲体内Th1细胞水平高B、母亲体内Tc细胞水平高;C、胎盘形成的生理屏障D、母体免疫系统不能识别有父亲的MHC的胎儿细胞;E、吞噬细胞的吞噬作用正确答案:C43、多次接受输血的病人所发生的非溶血性输血反应与下列哪种抗体有关A、ABO血型抗体温表B、Rh血型抗体C、抗Ig抗体D、抗DNA抗体E、抗白细胞和血小板HLA抗体正确答案:E44、下列代表艾滋病的是A、HAVB、HBVC、AIDD、AIDSE、SCID正确答案:D45、酶免疫分析的基本技术组成不包括A、通过电场来精确控制整个分析过程B、最佳固相载体和抗体包被技术C、检测放大系统D、最佳酶作用的底物E、应有高活性的酶和高质量的酶标抗体正确答案:A46、下列关于可检测出RF阳性的疾病,错误的是A、SLEB、RAC、甲型肝炎D、部分老年人E、干燥综合症正确答案:C47、受者与供者在血型配型后进行器官移植。
常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。
常用试剂有:1、0.01M(pH7.4)的磷酸盐缓冲生理盐水(PBS),稀释抗体和洗片子用;2、清洁液、纯水,洗玻片用3、多聚赖氨酸处理载玻片,防止脱片4、固定液:4%多聚甲醛;5、梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋;6、抗原修复液:枸橼酸缓冲液(pH6.0);7、H2O2,灭活内源性过氧化物酶8、血清清蛋白(BSA)封闭液;9、显色液:根据酶来选择,如果是HRP就用DAB,如果是AKP,就用NBT/BCIP,免疫荧光则不需要10、树胶封片液一般的sp法步骤啊,具体如下:1. 烤片,68℃,20分钟,2. 常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水;二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min3.阻断灭活内源性过氧化物酶:3%H2O2 37℃孵育10min,PBS冲洗3X5min;4. 抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液(PH 6.0)中用煮沸(95℃,15-20min),自然冷却20min 以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温,PBS冲洗3X5min。
5. 正常羊血清工作液封闭,37℃10 min,倾去勿洗.6. 滴加一抗4℃冰箱孵育过夜,PBS冲洗3X5min(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照);滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液,37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;8. DAB/ H2O2反应染色,自来水充分冲洗后,苏木素复染,常规脱水,透明,干燥,封片。
1)PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L,KH2PO4 1.4mmol/L。
免疫学题库(含答案)一、单选题(共100题,每题1分,共100分)1、在ABC法中,不使用的制剂是A、生物素B、亲合素C、生物素化抗体D、链霉亲合素E、生物素化酶正确答案:A2、在胸腺中发育成熟的细胞是A、巨噬细胞B、T淋巴细胞C、粒细胞D、B淋巴细胞E、树突状细胞正确答案:B3、关于lgG在对流免疫电泳中的特殊形式,说法正确的是A、全部泳向正极B、全部泳向负极C、IgC₃和IgC泳向负极D、IgG₁和IgG₂冰向负极E、IgG₁和IgG₃冰向负极正确答案:D4、免疫球蛋白的独特型表位位于A、IgV区B、IgC区C、IgFe段D、Ig铰链区E、IgV区之外的部位正确答案:A5、抗体特异性的鉴定,一般采用的方法是A、单向免疫扩散试验B、双向免疫扩散试验C、ELISAD、火箭电泳实验E、免疫电泳试验正确答案:B6、4-MUP在ALP催化下生成4-甲基伞形酮,在激发光作用下发出荧光的波长为A、450nmB、360nmC、525nmD、570nmE、640nm正确答案:A7、可在HAT培养基中存活的细胞是A、可在HAT培养基中存活的细胞是B、未融合B细胞C、骨髓瘤细胞D、杂交瘤细胞正确答案:D8、旁路激活途径首先被活化的补体成分是A、C1B、C2C、C3D、C4E、C5正确答案:C9、艾滋病的病原体是A、HPVB、HAVC、HCVD、HIVE、HSV正确答案:D10、下列移植抗原属于组织特异性抗原的是A、MHC-Ⅰ类分子B、H-Y抗原C、ABΟ血型系统D、血管内皮细胞特异性抗原E、RH抗原正确答案:D11、目前国内ELISA中应用最广泛的底物是A、OPDB、ABTSC、TMBD、5-ASAE、p-NPP正确答案:C12、放射免疫分析(RIA)方法始建立于A、20世纪30年代B、20世纪40年代C、20世纪50年代D、20世纪60年代E、20世纪70年代正确答案:C13、ELISA板包被后最常用的封闭剂是A、人血清球蛋白B、牛血清球蛋白C、人血清白蛋白D、牛血清白蛋白E、2%脱脂牛奶正确答案:D14、以下对分析中质量控制的描述中,正确的是A、定性免疫检测试剂性能验证指标包括参考区间B、荧光显微镜应定期检测汞灯光强C、在免疫检验中,温湿度的控制是为了仪器设备的正常运行D、血液标本采集后,应尽早离心分离血清E、室内质量控制主要是为了提高检测的准确性正确答案:B15、介导直接识别供者主要的抗原提呈细胞为A、T细胞B、B细胞C、NK细胞D、巨噬细胞E、树突状细胞正确答案:E16、与强直性脊柱炎关系最为密切的HLA是A、B27B、DR3C、DR4D、DRSE、B7正确答案:A17、急性脉管排斥反应属于A、超急排斥反应B、急性排斥反应C、慢性排斥反应D、CVHRE、HVGR正确答案:B18、可在HAT培养基中存活的细胞是A、TK缺陷细胞B、HCPBT缺陷细胞C、骨髓瘤细胞D、杂交瘤细胞E、未融合B细胞正确答案:D19、丙型肝炎的病原体是A、HCVB、HPVC、HSVD、HIVE、HAV正确答案:A20、放射免疫试验的明显缺点是A、检测成本高B、检测时间长C、分析敏感度低D、放射性污染E、分析特异度低正确答案:D21、下列检测方法中,自身抗体筛查实验首选的是A、ⅡFB、Western blotC、ELISAD、RIAE、CLIA正确答案:A22、ABO血型不符,移植后会发生以下排斥反应中的A、超级性排斥反应B、急性排斥反应C、慢性排斥反应D、移植物抗宿主反应E、超慢型排斥反应正确答案:A23、采用细胞法检测循环免疫复合物的常用细胞是A、HEp-2B、RajiC、肝细胞D、虫体细胞E、Vero细胞正确答案:B24、最早用于标记免疫测定的标记物是A、酶B、荧光素C、吖啶酯D、量子点E、放射性核素正确答案:B25、检测旁路激活途径总补体成分含量与活性常用的项目是A、CP-CH50、C2、C3、C4测定B、AP-CH50、C3、B因子、P因子测定C、衰变加速因子(DAF)和膜反应性溶破抑制物(MIRL)缺陷D、溶血空斑试验E、补体依赖的细胞毒(CDC)试验正确答案:B26、SPDP是目前常用的非均一双功能交联剂,下列选项中不属于其优点的是A、对蛋白质的伯胺基和脂肪族链上的游离巯基反应敏感B、反应容易控制C、副反应较少D、交联后的大分子生物活性高于一般交联剂方法E、可通过氧化反应使其再生正确答案:E27、以下选项中,不属于细胞因子特点的是A、分泌型蛋白质B、半衰期长C、不受MHC限制D、自分泌E、低分子量正确答案:B28、目前国内ELISA中应用最泛的底物是A、ΟPDB、ABTSC、TMBD、5-ASAE、p-NPP正确答案:C29、具有强还原性的是A、[Ru(bpy)₃]²B、TPAC、TPAD、[Ru(bpy)₃]³E、A+B正确答案:C30、兼顾特异性和简便快速的分离方法是A、PEG沉淀B、双抗体沉淀C、滤膜过滤D、双抗体-PEGE、活性炭吸附正确答案:D31、预示病情进展或恶化时,乳腺癌患者CAI5-3比原来水平升高A、15%B、20%C、25%D、30%E、35%正确答案:C32、用于标记抗体的荧光素应符合下列要求,除外A、荧光色泽与背景组织色泽对比鲜明B、与蛋白质结合后不影响蛋白质的性质C、与蛋白质分子形成离子键D、与蛋白质结合后仍能保持较高的荧光效率E、标记方法简单正确答案:C33、以下选项中,属于取得满意的免疫组化染色结果的最关键条件的是A、操作过程质量控制B、仪器设备的校准C、试剂质量控制D、标本的质量E、人员之间的比对正确答案:C34、FITC的最大吸收光谱和最大发射光谱为A、490~495nm、520~530nmB、390~395nm、520~530nmC、590~595nm、520~530nmD、490~495nm、620~630nmE、390~395nm、620~630nm正确答案:A35、能增殖分化为浆细胞的淋巴细胞为A、T辅助细胞B、T抑制细胞C、B细胞D、树突状细胞正确答案:C36、可与蛋白质氨基结合的活化生物素是A、3-N-马来酰胶-丙酰-生物胞素B、生物素酰肼C、生物胞素D、生物素-羟基丁二酰亚胺脂E、肼化生物胞素正确答案:D37、时间分辨荧光免疫试验常用的荧光物质为A、Eu³B、FITCC、RB200D、吖啶酯E、鲁米诺正确答案:A38、下列说法正确的是A、准确度反映的是待测物的测定值与其真值的一致性程度B、准确度反映的是在一定条件下所获得的独立的测定结果间的一致性程度C、精密度反映的是待测物的测定值与真值的一致性程度D、偏差能够在一定程度上反映标本测定值的离散度,尤其是大样本资料E、室内质量控制可以反映检测的准确度正确答案:A39、利用粘附贴壁法可以去除单个核细胞中的A、浆细胞B、淋巴细胞C、单核细胞D、中性粒细胞正确答案:C40、抗体过剩时称为A、前带B、前带或后带C、后带D、前带或后带E、等价带正确答案:A41、超急性排斥反应是由于A、非免疫因素介导的移植排斥发应B、受者细胞直接识别供者组织抗原后产生细胞免疫应答引起的移植排斥发应C、受者细胞间接识别供者组织抗原后产生细胞免疫应答引起的移植排斥发应D、受者体内预先存在抗供者组织抗原的抗体引起的移植排斥发应E、受者细胞识别供者MHC后发生的的排斥反应正确答案:D42、检测slgE时,可能出现交叉反应的检测方法是A、RASTB、western blotC、FEIAD、RASTF EIAE、RASTEIA正确答案:B43、与肿瘤发生无关的直接因素有A、化学诱变剂的接触B、摄人过多热量C、某些病毒感染D、机体免疫功能的强弱E、紫外线照射、辐射正确答案:B44、亲和组织化学技术中,葡萄球菌A蛋白(SPA)法的描述正确的是A、该技术是根据SPA能与多种动物IgG的Fe段结合的原理B、该技术是根据SPA能与人IgG的Fe段结合的原理C、该技术是根据SPA能与多种动物IgG的Fab段结合的原理D、该技术是根据SPA能与人IgG的Fab段结合的原理E、该技术是根据SPA能与人IgM的Fe段结合的原理正确答案:A45、以下关于亲合素-生物素-过氧化物酶复合物技术(ABC)的基本原理描述中,不正确的是A、亲合素与酶标生物素按比例结合,形成可溶性ABCB、生物素化抗体(直接法)与ABC中未饱和的亲合素结合部位结合C、生物素化第二抗体(间接法)与ABC中未饱和的亲合素结合部位结合D、生物素与ABC中未饱和的亲合素结合部位结合E、抗原-抗体反应体系与ABC标记体系连成一体进行检测正确答案:D46、检测抗体最常用的方法是A、双抗体夹心法B、竞争法C、双抗原夹心法D、捕获法E、间接法正确答案:E47、可增强HRP催化鲁米诺氧化反应和延长发光时间,提高发光敏感度的物质是A、4-MUPB、三联吡啶钌C、萤火虫荧光素酶D、对-羟基苯乙酸E、3-氯4-羟基乙酰苯胺正确答案:E48、电化学发光免疫测定中常用的发光底物为A、鲁米诺B、吖啶酯类C、4-MUPD、HRPE、三联吡啶钌正确答案:E49、以亲合素作“桥”的反应模式称为A、LAB模式B、直接模式C、间接模式D、BAB模式E、BA模式正确答案:D50、免疫抑制药物血药浓度检测所用的免疫学方法不包括A、酶免疫检测法(EIA)B、放射免疫法(RIA)C、荧光偏振免疫法(FPIA)D、化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)E、双向免疫扩散试验正确答案:E51、以下关于肿瘤标志物测定的临床意义说法中,错误的是A、预后判断B、复发或转移监测C、高危人群早期普查D、普通人群早期筛查E、辅助临床诊断正确答案:D52、在检测可溶型黏附分子中,ELISA常用A、直接法B、间接法C、夹心法D、夹心法E、斑点法正确答案:C53、与生物素-亲合素系统放大作用无关的因素是A、生物素-亲合素相互结合有很强的专一性B、1个生物大分子可结合多个生物素分子C、1个亲合素分子能结合4个生物素分子D、亲合素能与多个生物素化抗体和生物素化酶结合E、生物素-亲合素可形成多级结合构成网状结构正确答案:A54、下列抗核抗体中,不属于系统性红斑狼疮的特异性抗体的是A、抗dsDNA抗体B、抗核小体抗体C、抗Sm抗体D、抗核糖体P蛋白抗体E、抗组蛋白抗体正确答案:E55、单核-巨噬细胞系统细胞的表面标志是A、CD2B、CD3C、CD14D、CD16E、CDI9正确答案:C56、淋巴细胞交叉配合中,检测HLAⅡ分子抗原时需要采用哪种细胞作为靶抗原A、T细胞B、B细胞C、NK细胞D、巨噬细胞E、树突状细胞正确答案:B57、荧光染料在488nm激发光下不可能发出的荧光颜色是A、红色B、蓝色C、白色D、橙色E、绿色正确答案:B58、抗原-抗体反应的特异性是指A、两者分子大小的相近性B、两者分子空间结构的相似性C、两者之间功能的相近性D、两者之间结合的专一性E、两者分子的电子云吸引力正确答案:D59、分化抗原是指A、不同肿瘤的特异性抗原B、同一肿瘤不同分化阶段的特征性抗原C、区分正常组织和癌变组织的特异性抗原D、同一组织良恶性肿瘤的标志性抗原E、是特定组织正常分化到一定阶段所特有的标志正确答案:E60、荧光抗体用于活细胞染色时,其F/P比值为A、2.4B、1C、1.8D、1.2E、1.5正确答案:A61、以滤膜小室法能检测A、中性粒细胞的定向运动能力B、受检的细胞吞噬能力C、小吞噬细胞的随机运动能力D、反映细胞杀菌的情况E、中性粒细胞的吞噬调理能力正确答案:A62、感染后长期潜伏在神经节的病原体是A、EBVB、CMVC、HCVD、HSVE、HIV正确答案:D63、Graves病特异性的自身抗体是A、抗TG抗体B、抗TPΟ抗体C、抗TRAb抗体D、抗甲状腺微粒体抗体E、抗ACTH受体抗体正确答案:C64、下面属于镧系元素标记抗原或抗体作为示踪物优点的是A、荧光寿命较短B、激发光谱带较窄C、镧系元素发光不稳定D、stokes位移小E、发射光光谱带极窄正确答案:E65、轮状病毒感染抗原检测的最佳标本是A、纤维支气管镜刷检物B、血清C、外周血T淋巴细胞D、外周血B淋巴细胞E、新鲜粪便正确答案:E66、血清中能够检测到M蛋白的疾病是A、慢性感染B、肝硬化C、类风湿关节炎D、肾病综合征E、淀粉样变性正确答案:E67、病毒侵人机体后,是否感染与下列因素无关的是A、机体的免疫状态B、机体的易感性C、病毒的数量D、红细胞的数量E、病毒的毒力正确答案:D68、寄生虫感染时,人体内明显升高的g是A、IgGB、IgDC、IgED、IgAE、IgM正确答案:C69、生物素-亲合素系统用于包被小分子抗原的模式为A、固相-生物素-亲合素化抗原B、固相-亲合素化抗原C、固相-亲合素-生物素化抗原D、固相-生物素化抗原E、固相-SPA-生物素化抗原正确答案:C70、卵巢分泌的雌激素主要是A、雌二醇B、绒毛膜促性腺激素C、雌酮D、孕酮E、雌三醇正确答案:A71、最终测定沉淀的放射活性,其所代表的组分是A、标记抗原(*Ag)B、结合标记物(*AgAb)C、待测抗原(Ag)D、免疫复合物(AgAb)E、第二抗体(Ab)正确答案:B72、用于ELISPOT中PVDF膜斑点显色的底物是A、ΟPDB、4-MUPC、BCIP/NBTD、TMBE、AMPPD正确答案:C73、原发性B细胞缺陷病的代表性疾病是A、慢性肉芽肿B、Diegorge综合征C、Bruton综合征D、毛细血管扩张性共济失调综合征E、AIDS正确答案:C74、免疫组织化学技术中,有关试验对照的设立正确的描述是A、目的在于证明和肯定阳性结果的特异性B、阴性对照显示阳性将证明整个显色程序的正确C、阳性对照的主要目的在于排除假阳性D、尤其在待检标本呈阴性结果时,阴性对照尤为重要E、以上都不是正确答案:A75、均相酶免疫试验主要应用于测定下列物质中的A、药物和小分子物质B、IgC、细菌抗原D、补体E、病毒正确答案:A76、原发性T细胞缺陷病的代表性疾病是A、慢性肉芽肿B、Diegorge综合征C、Bruton综合征D、毛细血管扩张性共济失调综合征E、AIDS正确答案:B77、ELISA双抗原夹心法检测抗体时,固相载体包被物是A、未标记的已知抗原B、未标记的已知抗体C、未标记的抗抗体D、酶标记的抗原E、酶标记的抗体正确答案:A78、临床最常见的体液免疫缺陷病是A、Bruton综合征B、性联高IgM综合征C、G-6-PD缺乏症D、选择性IgM缺乏症E、选择性IgA缺乏症正确答案:E79、与CP-CH50检测血清补体溶血活性有关的是A、补体C3、B因子、P因子,D因子的含量与活性B、补体C5~C9各成分的量及活性C、补体C1~C9各成分的量及活性D、补体C3、B因子、P因子、D因子以及C5~C9各成分的量及活性E、补体B因子、P因子,D因子以及C1~C9各成分的量及活性正确答案:C80、制备抗体免疫动物时,原则上首次免疫后,加强免疫应该至少A、5次B、1次C、3次D、2次E、4次正确答案:D81、双参数直方图反映的是A、单维参数与细胞数量之间关系B、细胞内部颗粒度和精细结构的变化C、两个独立参数与细胞相对数之间的关系D、不同细胞大小和复杂度细胞群体的相对荧光强度之间关系E、细胞大小和细胞表面分子表达水平之间关系正确答案:C82、液相中抗原抗体结合反应主要是蛋白质A、氨基酸数量发生变化B、氨基酸功能发生变化C、由亲水胶体转化为疏水胶体D、氨基酸结构发生改变E、氨基酸种类发生变化正确答案:C83、在酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测中常用的固相载体是A、聚氯乙烯B、尼龙膜C、硝酸纤维素膜(NC膜)D、聚偏二氟乙烯膜(PVDF膜)E、聚苯乙烯正确答案:D84、巨噬细胞的典型标志是A、CD3B、CD4C、CD8D、CD14E、CD56正确答案:D85、以下对Levey-Jennings质控图方法的描述中,错误的是A、属于阳性质控标本测定重复性的统计室内质量控制方法B、需要先进行基线测定C、所谓基线测定就是首先使用质控品确定实验在最佳条件和常规条件下的变异D、如果在30次室内质量控制结果中出现1个结果超过2SD,说明质控品失控E、通常以±2SD为告警限,±3SD为失控限判断质控结果正确答案:D86、诊断充血性心力衰竭的可靠指标A、CRPB、肌钙蛋白C、肌红蛋白D、D-二聚体E、脑钠肽正确答案:E87、设立对照的目的主要针对A、SPAB、凝集素C、第一抗体D、第二抗体E、第三抗体正确答案:C88、下述吖啶酯标记化学发光免疫分析过程中,错误的是A、再加吖啶酯标记抗体形成固相包被抗体-抗原-吖啶酯标记抗体复合物B、洗涤、分离C、吖啶酯发光,信号检测D、磁性微粒上的抗体与待测抗原结合E、加入酸性增强液正确答案:E89、促进雌激素合成与分泌的激素不包括A、雌激素B、催乳素C、FSHD、血管活性肠肽(VIP)E、LH正确答案:B90、下列情况不支持细胞缺陷病的诊断的是A、患者反复发生病毒性肺炎B、患者外周血E花环形成率低下C、患者外周血淋巴细胞对PHA反应增强D、患者结核菌素试验阴性E、患者外周血淋巴细胞Smlg细胞数正常正确答案:C91、发光剂可以在反应体系中循环使用的是A、直接化学发光免疫试验B、酶促化学发光免疫试验C、电化学发光免疫试验D、电化学发光免疫试验E、A+B正确答案:C92、微柱凝胶法中涉及的原理和技术不包括A、分子筛B、沉淀反应C、抗原抗体反应D、抗人球蛋白试验E、离心技术正确答案:B93、具有强氧化性的是A、[Ru(bpy)₃]²B、TPAC、TPA·D、[Ru(bpy)₃]³E、A+B正确答案:D94、IL-2和IL-2受体的检测可用于对某些疾病的监测,一位肾移植患者,术后排斥反应明显,检测IL-2、IL-2受体结果为A、IL-2水平下降,IL-2受体水平升高B、IL-2水平升高,IL-2受体水平也升高C、IL-2水平升高,IL-2受体水平无变化D、IL-2水平升高,IL-2受体水平下降E、IL-2水平下降,IL-2受体水平也下降正确答案:B95、分选式流式细胞仪一般分选速度为A、3000个/秒B、1000个/秒C、1500个/秒D、30000个/秒E、5000个/秒正确答案:E96、T淋巴细胞和B淋巴细胞发生免疫应答的免疫场所是A、骨髓B、法氏囊C、脾脏D、胸腺E、淋巴结正确答案:E97、激发后产生的荧光寿命最短的是A、四甲基异硫氰酸罗丹明B、镧系螯合物C、四乙基罗丹明D、异硫氰酸荧光素E、藻红蛋白正确答案:B98、在速率散射比浊法中,测定哪个单位时间段内抗原-抗体复合物形成速率作为定量依据A、抗原-抗体复合物形成结束的时间段B、抗原-抗体复合物形成最快时间段C、抗原-抗体复合物形成的最长时间段D、抗原-抗体复合物形成最稳定时间段E、抗原-抗体复合物形成最大时间段正确答案:B99、下列类型中,不属于血浆中的脂蛋白的是A、极低密度脂蛋白B、乳糜微粒C、极高密度脂蛋白D、高密度脂蛋白E、低密度脂蛋白正确答案:C100、125 I常用于放射免疫标记示踪的优点是A、核素丰度低,对蛋白质、多肽抗原活性影响小B、半衰期短(8天),使用安全C、化学性质活泼,易于制备标记物D、衰变时释放的β射线,容易探测E可以标记甾体化合物正确答案:C。
北京雷根生物技术有限公司
内源性生物素封闭液
简介:
内源性生物素广泛分布于哺乳动物组织,尤其在肝脏、肺、脾、脂肪、脑等组织中。
组织经过福尔马林固定后,内源性产生的背景会降低,但冷冻切片中的背景会大大增强。
剧烈的抗原修复会将经过福尔马林固定组织中的内源性物质暴露出来,譬如内源性亲和素-生物素。
本试剂含有内源性生物素封闭液,能够很好的抑制内源性物质(主要是内源性生物素)的活性,尤其适用于免疫组化中封闭内源性物质的活性。
组成:
操作步骤(仅供参考):
1、 切片脱蜡、水化。
2、 入内源性生物素封闭液,孵育。
3、 PBS 或Tris 缓冲液中清洗。
4、 进行免疫染色的步骤。
注意事项:
1、 如待检测组织富含内源性链亲和素-生物素,应考虑使用非链亲和素-生物素检测系统。
2、 避免反复冻融,否则容易失效。
3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期: 6个月有效。
相关:
编号 名称 IH0119 Storage 内源性生物素封闭液 100ml 4℃ 使用说明书 1份
编号 名称
DH0006 苏木素伊红(HE)染色液
IH0119 内源性生物素封闭液
PW0053 Western 抗体洗脱液(碱性)
TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 比色法)。
常用封闭剂介绍
及选择
制作:最后的大肠杆菌
概述
•在许多利用免疫学原理,通过抗原抗体结合,进行的实验(如ELISA、WB、FC等),通常会使用封闭剂来减少非特异性结合。
常用的封闭剂有脱脂
奶粉,BSA,血清以及Fab片段单链二抗等。
•封闭剂中的蛋白可以与抗原表面上的空白位置结合,同样以机械填补(堆积)和吸附覆盖的方式结合在其他表面上,因为有“填补”和“覆盖”蛋白结合位点以避免抗体的非特异结合,所以叫做“封闭剂”。
•封闭剂应封闭所有的未结合位点而不替换表面上的靶蛋白、不结合靶蛋
白表位、也不与抗体或检测试剂有交叉反应,
脱脂奶粉Ø作用原理:脱脂奶粉含有多种蛋白,可以封闭未吸附蛋白的固相载体
(WB膜、ELISA板等)位点,减少
抗体与之结合的概率,避免非特异
性结合带来的高背景。
Ø优点:价格便宜;对于表面的微结构不均匀的WB膜、ELISA板,因含
多种不同分子量的蛋白,故封闭起
来更全面。
Ø缺点:成分复杂,适用范围窄;对于磷酸化抗体可能会导致背景增加,并且自身含有生物素,因此不适用
于生物素和碱性磷酸酶标记的抗体
系统;且封闭后的载体不易长期保
存,因此在试剂盒的生产中较少应
用。
牛血清白蛋白BSA Ø作用原理:BSA是最常用的封闭剂,同脱脂奶粉,封
闭未吸附蛋白的固相载体
位点。
Ø优点:成分单一,适用于ELISA实验,生物素、碱性磷酸酶系统的免疫学检测
实验或者其他对特异性要
求较高的实验。
Ø缺点:大部分BSA中有少量的抗体残留,会导致抗原/
抗体之间的交叉反应,造
成一定背景。
动物血清Ø作用原理:
a)封闭血清一般选择和二抗同一来源的,血清中动物自身
的抗体,预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合,
否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合,会造成背景。
b)待检样本中可能会有Fc受体,可以和抗体恒定区结合,
而封闭血清中有抗体,因此用血清可以封闭掉一抗及二
抗和样本Fc受体之间结合。
BSA则无法封闭Fc受体。
Ø优点:因为血清可以封闭Fc受体及减少抗体间的非特异性结合,故在免疫组化、免疫荧光实验中有广
泛应用。
Ø缺点:某些封闭血清中可能含有叠氮钠,因此不适用于HRP酶标的检测体系。
要注意封闭用血清中不能含有目标蛋白,且与一抗来源不同。
另外二抗因尽
量少选取兔子或老鼠来源的,因为这两个在亲缘关
系上和人类非常接近,所以产生交叉反应的机会就
比较大,从而导致背景比较高。
适合选用来源于驴,山羊,绵羊等的二抗,背景相对就很低。
Fab片段单链二抗Ø作用原理:由于二价的抗体(全IgG或F(ab’)2片
段)有两个结合位点,不
能用来封闭。
而Fab片段单
链二抗只有一个结合位点,因此可完全封闭免疫球蛋
白。
Ø应用:在IHC或IF双标/多标实验中,封闭样本表面
的免疫球蛋白,封闭组织
切片或细胞表面的内源性
免疫球蛋白,并可解决两
个一抗来自同一种属的麻
烦。
和BSA作用类似,普通酪蛋白
不易溶解。
中性和碱性条件
下带有负电性,与同样带负
电荷胶体金之间存在排斥力,
而膜一般都是带正电荷,会
与酪蛋白有一定的吸附作用,
用酪蛋白封闭效果好些。
酪蛋白
无蛋白化合物
甲醛:与PVDF膜表面的微结构反应或者结合,使之失去结合蛋白的疏水力或者空间结构域。
去污剂(吐温-20):有抗原修复的作用,与膜疏水性吸附,有很强的对非特异性吸附的洗脱作用,同样可以降低蛋白间的疏水作用,可提高特异性抗体的识别能力。
还有明胶,PEG等也可作为封闭剂。
END。