微载体培养动物细胞技术的研究与进展

动物细胞大规模培养技术研究进展【摘要】当前动物细胞大规模培养技术已经成为生物技术领域的研究重点，同时被广泛应用于生物医药的研发、生产。

本文介绍了动物细胞大规模培养过程中的技术及研究进展。

【关键词】动物细胞；大规模培养技术；研究进展前言动物细胞培养出现在二十世纪初，并于1962年开始扩大，当前被广泛应用于生物、医学研究等。

依托动物细胞培养进行医用价值高的酶、疫苗、单抗、生长因子等的生产，已逐步发展为医药生物高新技术产业的一部分[1]。

当前依托动物细胞培养技术所制造生物制品在世界生物高技术产品市场份额中几乎占有一半的比例。

相关资料显示，生物技术药物属于新药开发的重要领域，在未来的制药工业中生物技术制药将成为重要新门类，上市的生物技术新药将高达数百种。

动物细胞大规模培养技术属于生物技术制药的重要环节，其水平当前集中于培养规模的扩大、细胞特征的改变等方面。

一、细胞生物反应器生物制品的生产离不开动物细胞的培养，其中生物反应器是进行动物细胞培养的重要设备。

因为动物细胞在生产红细胞生成素、尿激酶原、疫苗、干扰素等价值昂贵的生物制品时优势显著，所以关于动物细胞生物反应器的研制迅速。

（一）机械搅拌式这一类型的生物反应器开发相对早、应用也比较广泛，包括培养罐、阀、马达、管、泵、仪表。

在马达带动不锈钢搅拌系统可以对培养物进行混匀，罐顶的传感器连接监测培养物的pH值溶氧度、NH3、NH4+、温度、葡萄糖消耗等，规模为2000L，在微载体、灌注技术及多孔微球技术的配合下，其细胞密度将超过107/mL，消毒十分便利[2]。

培养的动物细胞类型多样、培养工艺易于放大、适宜于工厂化生产是其优势所在，但机械搅拌造成的剪刀力却会对细胞造成损害。

（二）气升式通过这一类型的生物反应器，气体混合物可以经底部喷射管到中央导管，这样中央导管的液体密度将比外部区域低，这就促成了循环。

其结构趋同于搅拌式，但是进行搅拌的不锈钢叶片换成了气流管，所以其形成的剪刀力较为温和，对细胞的损害相对较小。

动物细胞培养及微载体技术研究进展
刘轶;朱国强
【期刊名称】《吉林农业大学学报》
【年(卷),期】2007(029)002
【摘要】动物细胞培养作为生化工程学科领域中迅速发展起来的生物技术与化学工程结合的新型学科,无论在基础研究和应用研究方面都越来越受到生物技术界的重视,现已成为生化工程学科主要前沿学科之一.文中介绍了动物细胞培养技术,并就微载体细胞培养进行了详细的论述.
【总页数】4页(P203-206)
【作者】刘轶;朱国强
【作者单位】中国药科大学生命科学与技术学院,南京,210038;扬州大学兽医学院,扬州,225009
【正文语种】中文
【中图分类】Q813.11
【相关文献】
1.动物细胞培养技术研究进展 [J], 孔永;秦秀云;;;
2.动物细胞培养技术研究进展 [J], 孔永;秦秀云
3.大规模动物细胞培养技术研究进展 [J], 邹寿长;李干祥;杨葆生;徐秀英
4.纤维素多孔微载体的制备及其用于动物细胞培养 [J], 胡显文;肖成祖
5.大孔微载体在动物细胞培养中的应用 [J], 张孝兵;张元兴
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动物细胞培养的研究和应用动物细胞培养是一种非常重要的技术，它可以用来进行重要的研究、药物开发和生产等。

近年来，随着科技的进步，动物细胞培养技术也得到了很大的发展和广泛的应用。

本文将对动物细胞培养的研究和应用进行介绍和分析。

一、动物细胞培养的方法动物细胞培养是指将生物组织中的细胞，以一定条件下的体外培养方式，使细胞继续生长和增殖的技术。

动物细胞培养可以分为原代细胞培养和细胞系培养两种。

原代细胞培养是指将从生物组织中直接分离出来的细胞在一定条件下培养，可培养出小规模的细胞群，用于相关的实验研究。

而细胞系培养是先从生物组织中原代培养得到的细胞，经过放射线和化学物质等处理，其中一部分细胞经过某些条件或选择，使其具有无限增殖和传代的潜力，形成细胞系。

二、动物细胞培养的意义动物细胞培养具有重要意义，其主要体现在以下几个方面：1、科学研究动物细胞培养技术可以为生物学、医学、药学等科学领域的研究提供大量的细胞材料，推动了相关领域的研究进展。

在细胞遗传和细胞代谢研究方面，动物细胞培养也发挥了重要作用。

2、药物开发和生产动物细胞培养技术被广泛用于药物开发和生产领域。

通过长期大规模的细胞培养和检测，可以获得大量的生物数据，为开发新的药物提供重要的基础。

目前，动物细胞培养技术已应用于制造多种生物制品和药物。

3、临床医学动物细胞培养技术在临床医学领域也得到了广泛的应用，例如在体外人工合成器官等方面。

三、动物细胞培养的挑战和问题尽管动物细胞培养技术非常重要，但还存在着一些挑战和问题：1、细胞生长和传代能力在动物细胞培养过程中，细胞的生长和传代能力往往是一个挑战。

为了维持细胞的生命，需要给细胞提供适宜的生长和存活条件。

2、细胞纯度和稳定性动物细胞培养过程中，随着培养时间的增加及细胞的转移，细胞浓度和杂质含量会发生变化，需要对培养物进行定期监测，以保证细胞纯度和稳定性。

3、较高的成本和复杂性动物细胞培养技术往往需要耗费大量的时间、人力和物力，成本也相对较高。

动物细胞培养技术的研究现状和前景动物细胞培养技术是一项重要的生物技术，通过无菌操作将动物细胞培养在适当的培养基中，可以获得大量纯化的细胞、细胞器和生物制品，被广泛应用于生命科学、疾病研究和药品生产等领域。

本文将介绍动物细胞培养技术的研究现状和前景。

一、动物细胞培养技术的发展历程动物细胞培养技术起源于上世纪50年代，随着无菌技术和培养基的不断改进，动物细胞培养技术得以飞速发展。

1961年，美国学者Eagle首次提出了MEM培养基，可以支持多种细胞的生长和分裂，成为现代动物细胞培养的基础。

20世纪70年代，出现了断头草胚胎细胞、合成肝素生产细胞、丝裂素等细胞系，使用纯化技术获得大量细胞产物。

随着基因工程、克隆技术的发展，人们对细胞培养技术的需求也更加迫切，培养技术也得到了进一步的发展。

二、动物细胞培养技术的应用领域1. 细胞学研究动物细胞培养技术为细胞生长、分裂和传代提供了良好的条件，可以用于生物学、医学、药学等多个领域的细胞学研究，例如细胞遗传学、细胞生理学、细胞生物学等方面的研究。

2. 疾病研究动物细胞培养技术在疾病研究中具有重要的作用。

通过培养某一疾病的细胞，可以研究该疾病的病理机制和治疗方法。

例如，培养癌细胞可以研究癌症的发生和治疗。

3. 生物制品研发动物细胞培养技术可以大量生产具有生物活性的蛋白质、酶、抗体和疫苗等生物制品。

例如，利用CHO细胞或HEK293细胞表达可溶性蛋白，或利用CHO细胞表达单抗和Fc融合蛋白，都在药品生产中得到广泛应用。

三、动物细胞培养技术的研究进展1. 三维培养技术传统的动物细胞培养技术通常采用二维培养方式，细胞长期生长在平坦的表面上，存在许多限制。

三维培养技术可以让细胞在三维环境中生长，更接近自然情况。

三维培养技术可以在细胞核、蛋白质和代谢等方面呈现更真实的情况，更适合生物学和医学方面的研究。

2. 纳米技术和微流控技术纳米技术和微流控技术可以为细胞培养提供更优化的环境。

动物细胞培养技术的进展及应用动物细胞培养技术是一种生物医学研究中极为重要的技术，主要用于生产药品、细胞学、分子生物学和免疫学等领域的研究。

自从细胞培养技术的出现，它的应用范围越来越广泛，也越来越深入，本文将为您介绍动物细胞培养技术的进展及应用。

一、动物细胞培养技术的研究进展1. 细胞培养的基本原理细胞培养的基本原理是利用体外条件来模拟体内环境，为细胞提供适宜的营养物和生理调节因子，使细胞在体外生长、分化、增殖。

2. 培养基的制备培养基的制备是动物细胞培养技术中的关键步骤，它能够为细胞提供必需的营养物和生长因子，如氨基酸、维生素、激素等。

目前，常用培养基包括麦克尼五十五培养基、迈格林五十三号培养基等。

3. 细胞培养的技术方法细胞培养的技术方法主要有悬浮培养和附着培养两种方式。

其中，悬浮培养常用于细胞生长阶段的初步生长，主要是用于细胞的扩增；附着培养主要用于细胞的育种。

4. 细胞分离技术细胞分离技术将组织或器官中的细胞分离出来并对其进行分级培养。

常用的细胞分离技术主要包括胰酶、碎草酸和牛血清等。

5. 细胞传代技术细胞传代技术是指将已经生长到一定程度的细胞离心，将细胞培养上清液丢弃并重悬细胞，再一次培养出与上一代相同的数量和质量的细胞。

其目的是为了维持细胞的正常生理状态和扩大培养规模。

二、动物细胞培养技术的应用方向1. 生产药品细胞培养技术的重要应用之一就是生产药品。

细胞培养可以生产多种药品，如激素、抗体、血液制品等，与传统药品相比，细胞培养药品具有高纯度、低污染的优点。

2. 动物学研究细胞培养技术在动物学研究中也起着重要的作用。

细胞培养可以用于体外模拟动物器官的建立，从而研究生物功能和对病原体的免疫反应等。

3. 生物技术领域的应用细胞培养技术在生物技术领域也广泛应用。

例如细胞间相互作用的研究、生物反应器的建立、基因工程的研究等。

4. 医学领域的应用细胞培养技术在医学领域也有广泛的应用，如癌症的研究、干细胞和组织工程的应用等，这些领域都离不开细胞培养技术。

动物细胞培养的最新研究进展及其应用近年来，随着生物技术的不断发展，动物细胞培养已经成为了生命科学领域中的重要研究手段。

动物细胞培养可以为现代医学、生物制药和分子生物学等领域的发展提供有力支撑，因此，近年来动物细胞培养的最新研究进展备受关注。

一、动物细胞培养的技术原理动物细胞培养是指将动物细胞从体内分离出来，通过特定的营养物质、环境和条件，在实验室中重新使其生产生长。

动物细胞培养的实质是建立体外的生态环境，为细胞提供必须的营养物质，通过控制细胞的生理状态，使其合成和分泌目的分子。

动物细胞培养的基本步骤包括：细胞分离和纯化、获得种子细胞、筛选培养基、培养细胞、细胞检测和应用开发等环节。

其中，种子细胞的选择和培养基的筛选是关键环节，它们对于培养细胞的稳定性和细胞代谢的正常性具有至关重要的意义。

二、动物细胞培养的应用动物细胞培养的应用范围非常广泛，包括生物制药、制备疫苗、生产基因工程产品、组织工程、细胞毒性试验、检测环境和食品污染物等领域。

下面我们分析一下动物细胞培养在这些领域中的应用情况。

1、生物制药生物制药是指利用生物技术生产的药物。

动物细胞培养在生物制药中的应用非常广泛，它可以用来生产各种人工合成的蛋白质药物。

比如已经被广泛应用于临床治疗的人胰岛素，就是通过细胞培养技术生产的。

除此之外，细胞培养还可以被用于研究生物制药药物的生产工艺、药效、药代动力学等。

2、制备疫苗疫苗是指预防传染病以及控制疾病传播的一种预防措施。

动物细胞培养技术在制备疫苗中也发挥着重要的作用。

通过细胞培养，可以生产单克隆抗体、疫苗等免疫药物，为对抗病毒和细菌感染提供有效手段。

3、生产基因工程产品基因工程产品是指利用基因技术获得的具有特定功能的产品。

动物细胞培养技术在基因工程产品的研究和生产中也取得了很大的进展。

细胞培养可以获得大量的基因工程细胞，为制备基因工程产品提供了充足的细胞来源。

此外，细胞培养也可以用于研究基因表达、蛋白质结构和功能。

微载体培养技术（microcarrier culture technique）一、微载体培养应用此技术于1967年被用于动物细胞大规模培养。

经过三十余年的发展，该技术目前已渐日趋完善和成熟，并广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。

微载体培养是目前公认的最有发展前途的一种动物细胞大规模培养技术，其兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，放大容易。

目前微载体培养广泛用于培养各种类型细胞，生产疫苗、蛋白质产品，如293细胞、成肌细胞、V ero细胞、CHO细胞。

使用较多的反应器有两种：德国贝朗生物反应器BIOSTA T Bplus ，使用双桨叶无气泡通气搅拌系统；美国NBS公司的CelliGen、CelliGen PlusTM和Bioflo3000反应器，使用Cell-lift 双筛网搅拌系统。

两种系统都能实现培养细胞和收获产物的有效分离。

二、微载体是指直径在60-250μm，能适用于贴壁细胞生长的微珠。

一般是由天然葡聚糖或者各种合成的聚合物组成。

自V an Wezel用DEAE-Sephadex A 50 研制的第一种微载体问世以来，国际市场上出售的微载体商品的类型已经达十几种以上，包括液体微载体、大孔明胶微载体、聚苯乙烯微载体、PHEMA微载体、甲壳质微载体、聚氨酯泡沫微载体、藻酸盐凝胶微载体以及磁性微载体等。

常用商品化微载体有三种：Cytodex1、2、3，Cytopore和Cytoline。

●微载体的大小：增大单位体积内表面积（S/F）对细胞的生长非常有利。

使微载体直径尽可能小，最好控制在100-200μm之间。

●微载体的密度：一般为1.03-1.05g/cm2，随着细胞的贴附及生长，密度可逐渐增大。

●微载体的表面电荷：据研究，控制细胞贴壁的基本因素是电荷密度而不是电荷性质。

若电荷密度太低，细胞贴附不充分，但电荷密度过大，反而会产生“毒性”效应。

三、微载体培养原理与操作1.原理：其原理是将对细胞无害的颗粒-微载体加入到培养容器的培养液中，作为载体，使细胞在微载体表面附着生长，同时通过持续搅动使微载体始终保持悬浮状态。

动物细胞培养技术的应用与发展动物细胞培养技术是一种重要的生物技术，它将生物学、细胞学、生物化学、分子生物学等多个领域紧密结合，通过在体外培养细胞，为生物医学和生物工程领域的研究提供了重要的手段。

动物细胞培养技术可以应用于制备生物制品、肿瘤细胞的研究、人类基因细胞的研究等领域。

本文将简要介绍动物细胞培养技术的应用与发展。

一. 动物细胞培养技术的应用范围1.药品制备动物细胞培养技术可以大量生产生物制品。

进一步改善生产过程、增加新药种类。

目前这个技术已经广泛应用于疫苗、抗体、蛋白质、细胞因子等生物制品的生产。

这些药品都是基于细胞工程生产，通过对细胞表达系统和蛋白质的设计改进和优化，使得药品的纯度和活性更高。

2.肿瘤细胞研究动物细胞培养技术在癌症研究中被广泛应用。

因为这个技术可以创造一个有利于实验环境，研究癌症发展过程的底物。

例如，科学家可以通过培养肿瘤细胞通过再生能力、转移能力等从细胞水平研究这类疾病的病理生理机制，从而寻找针对癌症的新治疗方法。

3.基因治疗动物细胞培养技术已成为基因治疗的重要平台。

目前的细胞工程技术已经可以改变生物体内的细胞基因等DNA部位的序列，重构细胞的表达系统。

利用这一技术不仅可以添加或缺失某些基因，还可以创造一些新组合的DNA序列，从而生产出一些潜在有效的治疗方法。

二. 动物细胞培养技术的发展历程道林·加德纳是动物细胞培养技术的先驱之一，他在1903年成功培养了脐带血细胞。

在20世纪的50年代，人类细胞开始得到更多的研究，成功地通过培养细胞获得大量人类组织、器官样细胞及其基础培育液有了很大提升。

随着各种新技术和材料的出现，使得细胞培育和研究更切实可行，加速了动物细胞培养领域的发展。

1960s年代，一些新的培养技术出现，例如立即培养、减少培养液中营养元素的使用等。

这些技术提高了人类细胞的生长速度和生存率，也为如今更加高级的领域提供了基础。

面膜，化妆品等美容产品近年来爆发性的增长，也使得随着技术的发展，细胞培育技术也普及到了美容细节体验。

动物细胞培养技术的研究与应用动物细胞培养技术是生物医学领域中非常重要的研究和应用技术之一、通过培养动物细胞，可以模拟和研究生物体内复杂的生理和生化过程，并为疾病的研究、药物筛选和生物工程等领域提供可靠的实验基础。

本文将详细介绍动物细胞培养技术的研究与应用。

原代培养通常从动物体内获得细胞组织，经过洗涤、消化和离心等步骤，最终通过适当的培养基和条件，使细胞在培养皿内附着并生长。

原代培养是从动物身体内直接获得细胞，因此具有反映动物本身生理和功能状态的优点，可以广泛应用于生物学、医学和药学等领域的研究中。

与原代培养相比，细胞株培养则是从原代培养中分离出来的细胞株经过无限次传代培养，形成一种可长期维持和保存的细胞系。

细胞株培养具有细胞稳定性高、供应充足、操作简便等优点，在药物研发、生物制药以及生物工程等领域得到广泛应用。

动物细胞培养技术在生物医学领域中有着广泛的应用。

首先，它可以用于疾病模型的建立。

通过培养细胞，可以模拟和研究疾病的发生和发展过程，为疾病的机制解析、新药的筛选和治疗方法的研究提供实验基础。

例如，通过培养人类癌细胞，可以用于研究肿瘤发生的分子机制、筛选抗癌药物以及开发癌症的新治疗方法。

其次，动物细胞培养技术还可用于药物筛选和安全性评估。

在新药研发过程中，动物细胞培养可以用于筛选化合物的活性和选择性，评价药物的毒性和副作用，从而提高药物研发的效率。

此外，由于动物细胞培养技术可以提供大量的细胞材料，还可以用于生物药物的产生和提纯，例如蛋白质、细胞因子和抗体等。

最后，动物细胞培养技术还在生物工程领域得到广泛应用。

在组织工程和再生医学研究中，动物细胞培养技术可以用于构建人工组织和器官，用于治疗和修复损伤的组织。

同时，动物细胞培养技术还可用于生物传感器、基因工程和基础科学研究等领域。

总的来说，动物细胞培养技术是一种重要的实验手段，能够模拟和研究动物体内的生理过程和疾病发生的机制，为疾病治疗和药物开发提供实验基础。

动物细胞培养技术的应用和发展动物细胞培养技术是20世纪发展起来的一项重要技术，它可以使科学家们在实验室中研究和繁殖动物细胞。

这项技术的应用广泛且发展迅速，对医学研究、药物开发和组织工程等领域具有重要意义。

本文将探讨动物细胞培养技术的应用和发展。

一、动物细胞培养技术在医学研究中的应用动物细胞培养技术在医学研究中发挥着重要作用。

通过培养和繁殖动物细胞，科学家们可以利用这些细胞来进行药物筛选、毒性测试和基因研究等。

例如，动物细胞培养技术可以用来测试新药物对人体细胞的影响，加速药物研发的过程。

此外，动物细胞培养技术还可以用来研究人类疾病的发生机制，对某些难治性疾病的研究提供了新的思路。

二、动物细胞培养技术在药物开发中的应用药物开发是动物细胞培养技术的另一个重要应用领域。

利用这项技术，科学家们可以通过培养动物细胞和繁殖细胞系列来生产大量的药物。

这种生产方法相对于传统的动物源性药物更加高效和安全，减少了使用动物的数量，降低了生产成本，同时也消除了某些传染病的风险。

因此，动物细胞培养技术在药物开发中具有巨大的潜力。

三、动物细胞培养技术在组织工程中的应用动物细胞培养技术在组织工程领域的应用也日益重要。

组织工程是一个旨在重建和修复受损组织的领域，而动物细胞的培养可以为这一过程提供重要的基础。

通过培养和繁殖动物细胞，科学家们可以生产出与自身组织相似的人工组织，用于替代受损的组织或器官。

这种方法对于器官移植和修复有着重要的意义，可以提高手术成功率并改善患者的生活质量。

四、动物细胞培养技术的发展趋势随着科学技术的不断进步，动物细胞培养技术也在不断发展。

新的培养技术和细胞培养基的开发使得科学家们能够更好地模拟动物体内的环境，进一步提高培养效率和细胞生存率。

此外，细胞工程、基因编辑和人工智能等领域的发展也为动物细胞培养技术带来了新的可能性。

未来，我们有理由相信，动物细胞培养技术将在医学和生命科学领域发挥越来越大的作用。

结论：动物细胞培养技术是一项重要且发展迅速的技术，其在医学研究、药物开发和组织工程等领域具有广泛应用和重要意义。

动物细胞培养技术及其应用研究近年来，动物细胞培养技术在生物医学领域中的应用研究越来越广泛，已经成为许多生物医学领域研究重心。

动物细胞培养技术是一种生物学研究和生产中非常重要的技术手段，它可以通过对细胞培养环境的掌控来研究复杂的分子生物学问题，为药物设计和生物制品生产提供重要的技术支持。

动物细胞培养技术的发展历史非常漫长，不断地创新和优化，为医学研究和开发新药物奠定了基础。

一、动物细胞培养技术的基础原理动物细胞培养技术是利用细胞自我生长、分化和增殖的能力，在体外不断地进行培养和繁殖。

将动物体内的细胞从活体中分离出来，由于体内环境与体外环境的不同，需要调配适宜的营养液来满足细胞的生长需要。

同时，还需采用种种适当的技术控制培养环境中气体、酸碱度、温度、通气、营养成分等各种生理条件。

从而建立一个能够为细胞生长和分化提供良好支持的体外环境。

在这样的环境下，细胞就能够适应体外环境，不断分裂和生长。

二、动物细胞培养技术的应用1、药物研发动物细胞培养技术在药物研发过程中的作用非常重要。

通过细胞培养技术可以模拟动物或人体内复杂的环境条件，从而研究新药物的有效性。

此外，通过细胞培养技术可以研究药物的副作用，对药物进行更好的筛选和选择，为研发更安全和有效的药物提供了技术支持。

2、生产生物制品动物细胞培养技术还可以应用于生产各种生物制品。

目前，这项技术已广泛应用于医药、生物食品、生物材料等领域。

例如，动物细胞培养技术可以用于生产疫苗、细胞因子、抗体、生长因子、基因工程药物等。

3、遗传学研究动物细胞培养技术还可用于遗传学研究。

通过细胞培养技术，可以简化和模拟遗传环境，加速染色体探针和核酸技术的发展，为研究基因的结构和功能解决了难题。

三、动物细胞培养技术存在的问题1、细胞株变异在细胞培养过程中，细胞会经历无数代次的分裂和增殖，并且不断地累积自身的遗传信息。

随着细胞的增长，细胞会逐渐失去原有的特性，甚至可能发生异质性突变。

这种变异可能会导致细胞失去原有的生物学特性和功能，不能再进行使用。

1 材料和方法
1.1 细胞及毒株 ST细胞和猪细小病毒由哈药疫苗有限公司研发中心提供。

1.2 主要试剂 微载体Cytodex-1购自美国GE公司；培养基MEM购自美国Gibco公司；新生牛血清购自美国Clark
为0.354%。

杜平等（2010）报道称遗传因素、饲粮组成及配比、育成期的饲养管理、病理状态等因素是影响略阳乌鸡产蛋率的主要因素。

4 总结
略阳乌鸡产业的发展受多方面因素的影响，无论是政府的政策支持，还是市场的导向，育种工作人员，都需要清楚略阳乌鸡育种的方向，明确略阳乌鸡客观存在的问题，实事求是的解决问题，以市场为导向，利用现代分子生物技术，科学、高效的推进略阳乌鸡的选育保种，为产业发展提供稳定的种源。

91
A细胞接种微载体72h B细胞接毒后72h
图1 微载体细胞生长情况
2.2 病毒灭活 灭活的病毒液接种ST细胞未发现细胞病变，表明猪细小病毒灭活完全。

2.3 灭活疫苗的免疫原性 检测结果显示，灭活疫苗组5只豚鼠免疫后28天中和抗体效价在1∶128～512之间，抗体效价较高，而对照组抗体效价为1∶2～4都为阴性，见表1。

3 讨论
我国疫苗市场发展迅速，疫苗生产技术也正经历着一场深刻的技术革新。

由于微载体培养系统的成熟应用，疫苗生。

大规模动物细胞培养技术在兽用生物制品的研究进展动物细胞培养开始于本世纪初1962 年，其规模不断的扩大，发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法，，而大规模动物细胞培养技术已经成为生物技术制药中非常重要的环节。

目前，大规模动物细胞培养技术在兽用生物制品上面，也已经开始了一些大规模的生产应用，细胞大规模培养技术作为行业技术升级改革的重要内容，农业部自2012年2月1日起，停止受理转瓶培养生产方式的的兽用细胞苗生产线项目兽药GMP验收申请。

因此，传统转瓶工艺的应用越来越受到限制使用。

自从20世纪60年代微载体生物反应器培养技术建立以来，国外许多国家对其在疫苗生产中的应用进行了广泛研究，细胞悬浮培养已是当前国际上生物制品生产的主流模式。

动物细胞有悬浮培养和贴壁培养两种，技术水平的提高主要集中在培养规模的扩大、细胞培养环境的优化、细胞特性的改变、不断提高产品的产量及保证其质量上。

本文就大规模动物细胞培养技术在兽用疫苗上的应用进行综述，分析了其在獸用生物制品产业的发展趋势。

一、动物细胞培养方法1.贴壁培养贴壁培养是指细胞贴附在某种载体上，载体悬浮在反应器里的培养方法，一切贴壁型细胞都能够适用于贴壁培养。

在实际生产中具有贴壁生长特性的细胞种类较多，如CHO细胞、PK—15细胞、ST细胞和Vero细胞等。

由于贴壁细胞具有贴壁的要求，提高细胞的密度就是使细胞培养规模最大化的有效方法。

传统的贴壁细胞培养包括方瓶、扁瓶、转瓶等。

但是由于其不能有效监控细胞的生长，操作比较复杂，所占空间大，劳动量也大，贴附面积具有限制性，在实际生产使用中受到极大的限制。

目前，贴壁细胞的微载体培养在细胞生产中得到广泛的应用。

2.悬浮培养悬浮生长的细胞其培养和传代都十分简便，细胞经过一定程度的驯化培养后，直接悬浮在适宜的液体培养基中，置于特定的培养条件下即可良好的生长。

传代时也不需要再进行分散，只需要添加一定比例的培养基即可继续生长。

哺乳动物细胞灌注培养工艺研究进展随着动物细胞培养技术的不断改进，灌注培养体系以其特有的优势取得了广泛的发展。

本文依据不同灌注培养系统的特点划分分为微载体悬浮灌注培养、悬浮细胞截流灌注培养、流化床及固定床灌注培养等几类，并对各类型的灌注体系进行了概述。

【关键词】灌注培养；微载体；细胞截留随着单克隆抗体药物产业的发展，带动了大规模动物细胞培养技术的不断提高。

利用动物细胞生产单克隆抗体已成为当前生物制药企业的发展方向。

在上世纪六十年代，灌注培养技术的出现为动物细胞大规模培养开辟了广阔的前景。

在随后的研究中，灌注培养技术得到了迅速发展，已成为动物细胞大规模培养的重要方法。

灌注培养的主要优点是连续灌注的培养基可以提供充分的营养成分，并带走代谢副产物，而细胞保留在反应器系统中，由于细胞生长环境优良，可以达到很高的细胞密度，并延长表达时间、增大收获体积，同其它方法相比，灌注培养的产率可以提高很多。

1 悬浮灌注培养1.1 微载体悬浮灌注培养微载体培养最先是由A1 L1 Van Wezel提出，其方法是在细胞培养时，将细胞悬液与经过特殊处理的微载体混合培养，待细胞贴附于微载体上后移至培养液中培养，借助搅拌系统使细胞随载体均匀悬浮于培养液中。

近年来随着对微载体材料的深入探索，相继开发出液体微载体、聚苯乙烯微载体、PHEMA 微载体、藻酸盐凝胶微载体等，并有很多微载体已进行商业化生产，如明胶微载体Gelibead 、Cultispher 、Cytodex3和Microsphere以及大孔的Cellsnow和Cytopore 等。

1.2 悬浮细胞截流灌注培养随着无血清悬浮培养技术的日趋成熟，现有细胞密度及表达量已不能满足需求，人们重新将目光转移到灌注培养上，但是如何不用微载体而将细胞截流在反应器中并结合无血清悬浮培养工艺进行产物的表达成为热门。

该工艺的重点在细胞截流上，如何高效的截流细胞而不对细胞产生损害及降低堵塞成为焦点。

动物细胞培养技术的研究及应用近年来，动物细胞培养技术在多个领域中得到了广泛应用。

众所周知，动物细胞是构成动物体的基本组成部分，其研究和应用涉及到生物学、医药学、生态学等诸多领域。

因此，动物细胞培养技术的发展一直备受瞩目。

本文旨在介绍动物细胞培养技术的研究和应用，以及相关的实验方法和技巧。

一、动物细胞培养技术的研究动物细胞培养技术的研究可以追溯到19世纪。

随着细胞生物学的发展，人们对于细胞生长和分化的掌握逐渐加深，相关技术也不断完善。

目前，动物细胞培养技术包括细胞的体外培养、细胞的冻存、细胞的转染和细胞的类器官表达等多个方面。

在体外培养方面，我们通常采用组织培养、原代细胞培养和细胞株培养等方法，来进行细胞培养研究。

组织培养允许我们模拟组织内的细胞相互作用，进行功能性实验；原代细胞培养则可以解决组织样本不足的问题。

细胞株培养是研究细胞形态和生长规律的基础。

冻存技术是实现细胞永久保存的方法之一，可用于初始种子细胞、原代细胞和滴度低的分泌因子等的长期保存。

细胞转染则是一种将外源基因导入细胞中的技术，通常使用的方法有病毒转染和质粒转染。

二、动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术被广泛应用于多个领域。

例如，在药物研发中，人们使用动物细胞培养技术来评估各种活性化合物在人类体内的疗效和安全性。

此外，动物细胞培养技术还可用于研究癌症、神经退行性疾病和肝炎等多种疾病的治疗手段。

在医学研究中，动物细胞培养技术可以用来研究细胞信号传导、基因调控、蛋白结构及功能等方面的问题。

同时，这些技术还可以直接作为创新治疗的源头，例如使用人造血管或肾脏组织等。

在生态学研究领域，动物细胞培养技术可以用来研究环境污染、生境退化、生物种群变化等方面的生态问题。

比如，通过细胞培养技术，我们可以发现某些化学物质对动物体内的免疫力有哪些影响，从而评估环境中化学物质的安全性。

三、动物细胞培养实验方法和技巧1. 细胞培养皿和培养瓶细胞培养需要一定的条件，例如适宜的环境、培养液和培养器具等。

动物细胞悬浮培养技术研究进展周欣，程海卫，王永生，王川庆，杨霞【摘要】摘要：细胞悬浮培养是利用生物反应器大规模培养动物细胞生产生物制品的核心技术，是当前国际上生物制品生产的主流模式。

作者就微载体的发展、各种生物反应器的基本原理及应用状况、悬浮培养技术存在问题、中国悬浮培养技术产业化存在的挑战和展望等作一综述。

【期刊名称】中国畜牧兽医【年(卷),期】2012(039)011【总页数】6【关键词】悬浮培养；微载体；生物反应器动物细胞培养在生物技术和生物医药研究中已得到了广泛的应用。

通常，动物细胞培养为病毒疫苗的生产提供培养基质，同时也是多种生物药品生产不可缺少的工具，包括单克隆抗体和基因治疗产品等。

另外，为了研究体内的生物化学途径、病毒产物、病理学机制及细胞内或细胞间反应等，动物细胞培养在大量的生物检测体系中也得到了应用（徐莉等，2008）。

动物细胞与植物细胞和微生物细胞不同，动物细胞没有细胞壁，因此在培养时对剪切力很敏感，要求也更为严格。

传统的动物细胞采用方瓶和转瓶来培养，这方面的技术已经成熟，但是，该方法存在细胞密度低、病毒产率低、生产成本高、劳动强度大等缺点，不能满足现代生物制苗的要求；诞生于20世纪60年代的悬浮培养技术可以进行大规模细胞培养，能够获得大量的病毒产物和高质量的疫苗产品，在国外疫苗生产中普遍应用。

该技术是从转瓶的贴壁培养发展来的，是在生物反应器中人工条件下高密度大规模培养动物细胞用于生物制品生产的技术。

根据细胞是否贴壁分为无载体的悬浮细胞培养和贴壁细胞微载体悬浮培养，前者已在内蒙古生药厂口蹄疫生产中广泛使用。

悬浮培养技术最大优势是通过更为精确有效的工艺控制手段，在获得最大产量的同时能稳步提高产品的质量（张韧等，2011）。

作者就悬浮培养的相关问题进行介绍和探讨。

1 微载体的发展Capstick等（1962，1965）对BHK21细胞驯化成功实现悬浮培养，并用于兽用疫苗生产，从而奠定了动物细胞大规模培养技术的发展基础。

动物细胞培养技术的进展动物细胞培养技术是生物学研究中不可或缺的一项技术，它可以使得研究者能够更加深入地研究细胞的结构和功能，同时也可以用于生物制药、生物医学等领域。

在过去的几十年里，动物细胞培养技术得到了很大的发展，其应用领域逐渐扩大，成为了生物学研究中非常重要的一部分。

本文将从细胞培养的历史、技术进展、应用领域三个方面来说明动物细胞培养技术的发展和应用。

一、历史最早关于细胞培养的实验可追溯至19世纪中期，当时的法国生物学家Lionel S. Beale使用兔子标本，成功地将细胞在玻璃注射管中维持生长了20天以上。

此后，人们开始尝试利用试管和培养基来培养细胞。

1907年，美国生物学家Ross Harrison用鸡胚的神经细胞成功地将神经元分开培养，这是世界上第一个动物细胞培养的成功实验。

20世纪40年代，建立了细胞培养的基础技术，包括培养基的选择和制作以及培养环境的控制等。

二、技术进展20世纪50年代和60年代，动物细胞培养技术得到了进一步的发展，培养时间、数量和品质都有了显著提高。

其中最重要的技术之一是无血清培养，也称为无血清减少培养（serum-free or reduced medium culture），这种培养方式不需要使用动物源性血清，使得培养环境更加卫生、纯净、可控。

同时，由于血清的来源有限，而且还可能存在病毒、影响研究可靠性，使得无血清培养技术在组织工程、生物技术、基因治疗等方面的应用越来越受到重视。

细胞培养还可以分为立体培养和平面培养两种。

立体培养最为常见的就是三维细胞培养技术，这种技术可以模拟真实的组织环境，在生物医学和组织工程等领域得到了广泛应用。

三、应用领域动物细胞培养技术在人类医疗保健、药品开发、疾病治疗等领域有广泛的应用。

例如，癌症治疗中，锁定细胞表面的化学信号分子可以用于诊断和治疗；对细胞机理的深入研究，有可能找到治疗癌症的有效药物。

动物细胞培养技术的应用领域还包括：1. 组织工程：三维细胞培养和其他技术一起被用来制造人工组织和器官，如骨骼、肌肉、心脏和肝脏等;2. 生物制药：动物细胞培养被用于制造人类蛋白质药物，如肿瘤坏死因子、白细胞介素2、角质细胞生长因子等;3. 疫苗研发：培育细胞，制造疫苗成分是最常见的方式之一。

动物细胞培养技术的应用和最新进展动物细胞培养技术是一种以哺乳动物细胞为材料通过体外培养方式生产蛋白质、疫苗、抗体等生物制品的技术。

自20世纪50年代发展至今，动物细胞培养技术已成为生物制药领域不可或缺的一环。

动物细胞培养技术的应用范围广泛。

在生物制药领域，动物细胞培养技术被广泛应用于生产重要的生物制品，如免疫球蛋白、疫苗、生长激素等。

在医学研究领域，动物细胞培养技术是模拟人体疾病发生、发展的重要工具。

同时，动物细胞培养技术还被广泛应用于毒理学、环境保护、食品科学、农业科学等领域。

动物细胞培养技术的最新进展主要体现在以下三个方面。

一、三维培养技术传统的动物细胞培养技术主要是在二维的平面培养基上进行，但这种方法不能完全模拟人体内三维环境。

近年来，三维培养技术呈上升趋势。

三维培养技术可以更好地模拟生物组织的真实环境，有利于研究体内疾病的发生机理及药物研发。

例如，三维培养技术已被应用于肿瘤细胞的筛选，在肿瘤研究中发挥了重要作用。

二、基因编辑技术动物细胞培养技术中的基因编辑技术是目前最热门的研究领域之一。

借助基因编辑技术，可以更好地研究细胞的功能及相关基因对生命活动的调节。

例如，通过基因编辑技术，可以对病毒基因进行编辑，用于研究病毒的传播机制及遗传规律。

此外，基因编辑技术在遗传病治疗方面也具有广阔的应用前景。

三、人工智能技术在动物细胞培养技术中，人工智能技术的应用也开始增多。

借助人工智能技术，可以更好地对大规模生物数据进行处理和分析。

例如，预测药物对蛋白质结构的影响及酶的特异性。

同时，人工智能技术还可以为动物细胞培养过程中的质量控制提供支持。

总的来说，动物细胞培养技术作为生物制药领域不可或缺的一环，其应用前景十分广阔。

随着科学技术和生产工艺的不断进步，动物细胞培养技术必将在世界范围内得到更广泛的应用。