酵母快速发面的方法

薪型巴氏杀菌监测仪　脚　麟　［，ｈｆｂ＋　１０　８８４４６６。１３０１３ｅ６；。４ｒ６　０：１　１１３ｇ口０　６　４６４　６９０７６。　。。　’　Ｅ　ｍａｉｌ￣ｈｎｇ＠ｅｂ　ｒｏ￣ｈｌｎａ…　ｍ颐贝隆　，　ｌ，ｉ　４＂　颐贝隆电－７－科技（北京）有限公司　・　６ｌ　・　

胡维胜　，３吴英敏２陈元３（摘译）　１中国海洋大学生命科学与技术学部食品科学与工程学院２６６００３　÷２中国食品发酵工业研究院　１　０００２７　ｊ　３福建雪津啤酒有限公司　３５１］１］　

［摘要］　本文提出了一种在无需糖化或发酵的条件下就可以实现快速、灵敏测定麦芽中酵　

母超前絮凝（ＰＹＦ）活力水平的新方法，该法测定结果重现性好、分析时间仅需３ｈ；采用该法测　

定的ＰＹＦ活力水平与发酵验证试验结果有着良好的线性相关性；同时该法可用于大麦或绿麦　芽中的ＰＹＦ活力检测，且可作为评价大麦、麦芽或麦汁发酵力的一种有效工具。　

［关键词］　大麦发酵力　

前言　酵母超前絮凝（ＰＹＦ）指的是在麦汁营养成分　

消耗完之前，酵母出现过早凝聚的一种现象。它　

不仅影响Ｊ，啤酒发酵的　常进程，ｒｊＩ起发酵度偏　

低，严重的情况下可能会导致啤酒出现不良风　味。该现象的发生＝丰：要受酵母超前絮凝冈子的　

诱导，研究表明这种ＰＹＦ　子ｒｌＪ‘能是糖化过程　ｆ１　麦皮溶出的高分子多糖或蛋白绀分。　

为Ｊ，衡量麦芽【｝１的ＰＹＦ活力水平，设计ｒ实　

验窄的发酵验证试验来说明酵母牛长和麦汁比　

重之间的关系。虽然该法测定的ＰＹＦ活力水平　

能从一定程度卜反映酿造的实际结果，　其　要　

不足之处仵于费时凡需要消耗大量的样品。　酵母絮凝指的是悬浮酵母细胞从培养　【ｆ１　

聚集成团、沉淀出来的一种现象，一般可采用分　

光光度计测定细胞恳浮液的沉降速率来进行判　

别。我们似定酵母超前絮凝是由于ＰＹＦ因子诱　

导形成了比正常细胞团大的絮状物而导致比正　

常细胞沉降速率更快的一种现象，因此从这种意　义上说该现象的发牛很大程度Ｌ取决于ＰＹＦ因　

正确使用酵母发面的方法如下（做馒头或包子）

1、根据季节秋冬酵母用量0.6-0.8%，春夏0.3-0.5%。（按面粉量来计，也就是说1公斤面粉加酵母6-8克酵母）；

2、最好把酵母溶于水后使用，不然酵母可能有些不溶解；

3、若是现在这个季节，按这个配方进行：1000克面粉，5克酵母，480克水；

4、面团和光后，下剂子，100克一个；

5、搓成馒头状；

6、发酵60分钟左右，在36-38度，湿度90%左右；

7、发酵完成后蒸15分钟即可。

安徽农学通报，Ａｎｈｕｉ　Ａｇｒｉ．Ｓｃｉ．Ｂｕｌ１．２００８，１４（１２）　５５　

重组酵母的快速鉴定方法　

张玉军　王　斌　１　孔　浩　（ｔ青岛大学医学院，山东青岛２６６０　７１；。山东万杰医学院）　

摘要：该文阐述了重组酵母的快速鉴定方法，首先通过ＭＭ／ＭＤ培养基筛选，然后利用酵母染色体ＤＮＡ快速制　备法获得酵母ＤＮＡ，经ＰＣＲ检测发现腈水解酶基因已经完整地整合进酵母基因组。　关键词：溴苯腈；腈水解酶；毕赤酵母；快速鉴定　中图分类号０９　３－３３１　文献标识码Ｂ　文章编号１００７—７７３１（２００８）１２—０５５—０２　

Ｔｈｅ　ｒａｐｉｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｙｅａｓｔ　Ｚｈａｎｇ　Ｙｕ　Ｊｕｎ　Ｗａｎｇ　Ｂｉｎ　Ｋｏｎｇ　Ｈａｏ２　（１Ｑｉｎｇｄａｏ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｍｅｄｉｃａｌ　ｃｏｌｌｅｇｅ，￥ｈａｎｄｏｎｇ　２６６０７１；。Ｓｈａｎｄｏｎｇ　ｗａｎｊｉｅ　ｍｅｄｉｃａｌ　ｃｏｌｌｅｇｅ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｉＳ　ｐａｐｅｒ　ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ　ｔｈｅ　ｒａｐｉｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｙｅａｓｔ，Ｂｙ　Ｍ　／￣Ⅱ）ｍｅｄｉｕｍ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｙｅａｓｔ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ＤＮＡ　ｗａｓ　ｇｅｔｔｅｄ　ＵＳｉｎｇ　ａ　ｒａｐｉｄ　ａｃｃｅｓｓ　ｏｆ　１ａｗ，ＰＣＲ　ａｎａｌｙｓｉＳ　ｆｏｕｎｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ　ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｙｅａｓｔ　ｇｅｎｏｍｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｂｒｏｍｏｘｙｎｉｌ；ｈｅｒｂｉＣｉｄｅ；Ｐｉｃｈｉａ　ｐａｓｔｏｒｉ　Ｓ；Ｒａｐｉｄ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　

杂草与农作物竞争水分、养料和光照，影响农作物　的产量和品质，还是许多病虫害的中问寄主或越冬场所。　通过除草剂来控制杂草己成为现代化农业不可缺少的一　部分。广谱、非选择性触杀型除草剂溴苯腈主要用来清　除田问阔叶类杂草，它的作用机理是能够阻滞光合电子　的传递，使植物光合作用受阻而致死。从土壤细菌中分　离得到了一种以溴苯腈为氮源的菌株（Ｋ　ｌ　ｅ　ｂ　Ｓ　ｉ　ｅ　ｌ　ｌ　ａ　ｏｚａｅｎａｅ），它可以产生专一的溴苯腈水解酶，将溴苯腈　转变为无毒的３，５一二溴一４一羟基苯甲酸［　，　。编码　此酶的ｂｘｎ基因也己被克隆，并在小麦、油菜等植物中　成功表达。　毕赤酵母表达系统利用的是乙醇氧化酶基因（Ａｏｘ１）　启动子作为强诱导型启动子，可被甲醇诱导。宿主菌　Ｇｓ１１５在Ｈｉｓ４基因位点被突变，因而只有当携有外源基　因和Ｈｉ　Ｓ４基因的表达载体（如ｐＰＩＣ９或ｐＨＩＬ～Ｓ１）与　酵母染色体在ＡｏｘＩ基因处发生同源重组后，酵母克隆才　能在组氨酸缺陷培养基（ＭＤ）平板上生长。而此时由于　酵母基因组上Ａｏｘｌ基因被取代，重组克隆仅能利用Ａｏｘ２　缓慢代谢甲醇（Ｍｕｔ　Ｓ），表现为在ＭＭ平板上生长缓慢。因　此一般采用ＭＤ／ＭＭ平板筛选法来筛选重组酵母克隆。但　作者简介：张玉军，男，讲师，研究生。　通讯联系人　收稿日期：２００８—０６—０６　由于至少１０％～２０％的转化子是载体Ｈｉ　ｓ４基因和ＧＳ１１５　染色体上的Ｈｆｓ突变基因位点间的转换而形成，故这种　所谓的重组克隆并不携有载体上的目的基因表达序列　［　。这种假阳性的克隆的排除只有用ＰＣＲ方法来鉴定目　的基因是否存在于酵母染色体上。传统提取酵母染色体　的方法较为繁琐且耗时较长…，而其他相对简便的方　法中则需使用酵母裂解酶处理　。我们将改造的腈水　解酶基因转入酵母，目的是鉴定一下经过改造的基因表　达产物是否还具有正常活性。　１材料与方法　１．１菌株、培养基及试剂　重组酵母表达载体ｐＰＩＣ９Ｋ—ｂｘｎ含有改造的腈水解酶　基因片段…，为本室构建。Ｇ　ｓ　１　１　５（Ｈ　ｉ　Ｓ一）为本室　保存。酵母培养基的配制参照文献【　。　１．２　ＭＤ／ＭＭ平板法筛选重组酵母克隆。参照Ｉｎｖｉ　ｔｒｏｇ　ｅｎ　公司的说明书。从转化平板上挑取菌落，先后接种于ＭＭ／　ＭＤ平板上。２ｄ后观察菌落生长状况，在ＭＭ平板上生长缓　慢而在ＭＤ平板上长得较大的克隆视为重组酵母克隆。　１．３酵母染色体ＤＮＡ的快速制备。从ＭＤ平板上用牙签　

中国生物制品学杂志2013年9月第26卷第9期ChinJBiologicalsSeptember2013，Vol.26No.9

重组乙型肝炎疫苗（酵母）是由重组酵母菌表达

的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）经纯化，加入铝

佐剂制成。鉴别试验是重组乙型肝炎疫苗常规的检

测项目，《中国药典》三部（2010版）中规定重组乙型

肝炎疫苗鉴别试验采用ELISA法［1］，但重组酵母菌

表达的HBsAg经铝佐剂吸附后不能直接检测，而且

ELISA法检测时间也较长。本实验用处理液将重组

乙型肝炎疫苗（酵母）上的铝佐剂解离下来，再采用

胶体金法检测疫苗中的HBsAg，并对该方法进行验证，以期建立稳定的重组乙型肝炎疫苗（酵母）快速

鉴别试验。

1材料与方法

1.1疫苗及参考品重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵

母）、重组乙型肝炎疫苗（汉逊酵母）和甲型乙型肝炎

联合疫苗分别来自3个不同的生产厂家（编号为A、

B、C）；甲型肝炎灭活疫苗（批号：2009113001）由厂家C提供；重组（酵母）乙型肝炎疫苗冻干参考品重组乙型肝炎疫苗（酵母）快速鉴别试验

方法的建立

王静，白亦昊，周长明，纪宏，武晗燕

北京市药品检验所，北京100035

摘要：目的建立重组乙型肝炎疫苗（酵母）快速鉴别试验方法。方法选取不同的处理液对吸附铝佐剂的3批重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）进行解离，采用胶体金法检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），筛选快速鉴别试验的最佳处理液；优化快速鉴别试验的反应温度和反应时间，并对该方法进行特异性、灵敏度和重复性验证。结果处理液A（10%TritonX-1000.20ml、20%二乙醇胺1.25ml、0.01mol／LPBS8.55ml）为重组乙型肝炎疫苗快速鉴别试验的最佳样品处理液；快速鉴别试验的最佳反应温度为25℃，最佳反应时间为15min；该方法特异性较强，重复性良好，最低检出限为1.375μg／ml。结论建立了重组乙型肝炎疫苗（酵母）快速鉴别试验方法，为该疫苗的快速鉴别提供了参考。关键词：重组乙型肝炎疫苗；酵母；快速鉴别试验中图分类号：R373.2+1R392-33文献标识码：A文章编号：1004-5503（2013）09-1334-03