凝血酶原时间测定sop(CA系列)
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凝血酶原时间测定凝血酶原时间(prothrombin time,PT)测定是外源凝血系统常用的筛选试验之一,它可反映凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ及Ⅰ的活性。
(一)检验原理凝固法。
于受检血浆中加入过量的组织凝血活酶和Ca2+,使凝血酶原转变为凝血酶,后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白并使受检血浆凝固,血浆凝固所需的时间即为凝血酶原时间。
(二)检验方法学1.试剂(1)人脑或兔脑浸出液。
(2)0.025mol/L CaCl2。
2.标本采集与制备于硅化或塑料试管内加入0.109mol/L枸橼酸钠溶液0.2ml,然后加入受检全血1.8ml (1∶9抗凝)充分混匀,1500r/min离心10分钟,以此制备乏血小板血浆。
3.标本检验取玻璃小试管1支,加入血浆和组织凝血活酶试剂各0.1ml,37℃温育30秒,加入0.025mol/L氯化钠溶液0.1ml,立即启动秒表,不断轻轻倾斜试管,记录液体停止流动所需的时间,重复上述步骤2次,取2次结果的平均值,并以正常参比血浆(20份正常人混合血浆)作为对照。
(三)方法学评价1.未按离心要求导致受检血浆中血小板增多使凝血酶原时间假性缩短。
2.标本溶血,因红细胞中含有促凝成分,可使凝血酶原时间假性缩短;脂血可导致结果观察困难,故也影响检验结果的准确性。
(四)质量保证1.正常对照因每次使用的组织凝血活酶(兔脑、人脑、胎盘、肺组织等浸出液)的活性不尽相同,且每次检验的条件也各异,故每天均需作正常对照。
2.检验温度水浴温度应恒定在36~38℃,温度过高或过低均可使凝血酶原时间延长。
3.检验周期应在采血后4小时内完成检测,否则可使凝血酶原时间假性延长。
4.调整抗凝剂比例当血细胞比容小于20%或大于50%时,抗凝剂与血液的比例应按下式调整:抗凝剂量(ml)=(100-HCT)×采血量(ml)×0.00185。
(五)参考范围男性:11~13.7秒;女性:11~14.3秒。
受检者的测定值较正常对照值延长超过3秒才有临床病理意义。
血浆凝血酶原时间测定(手工法)1.检验原理凝血过程是通过适量的凝血活酶、钙离子和孵育血浆触发,然后测定纤维蛋白凝块形成时间。
PT的长短反映了血浆中凝血酶原、纤维蛋白原和因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的水平,本试验是外源性凝血系统常用的筛选试验。
2.导致PT检测过高原因标本自身高和用药后高(比如肝素),抽血过程中抗凝剂未充分混匀或者抗凝剂失效,加了肝素的针头抽出的血液放入血凝管送检。
3.手工适用状态当标本在血凝仪器CA1500上血浆凝血酶原时间未能检测出来,测量状态为●完成,数据显示错误报警ERR032(无凝结物),对标本和试剂进行全面评估后,怀疑是血浆凝血酶原时间太长(>100S)(排除非自身原因),立即采用手工操作测定凝血酶原时间。
4.检验方法4.1.试剂准备:按照试剂瓶标签上标明的量(4mL),用去离子水复溶ThromborelS试剂,颠倒混匀8~10次,使用前用水浴箱预温到37℃5分钟,也可直接使用CA1500上的PT(经水浴箱37℃复温5分钟)。
请注意:试剂使用前小心混匀。
4.2.检验步骤及方法:3000r/min离心标本10分钟,用加样枪吸取血浆100uL到小塑料试管37℃孵育1分钟,加Thromborel S 试剂(已预温到37℃)200uL并同时开启秒表计时,不断轻轻倾斜试管,记录至液体停止流动所需要的时间,记录时间,重复以上操作2次,取最准确的那次时间(一般最后一次测量值准确度最高),即为该患者凝血酶原时间。
5.结果计算在LIS系统上输入该患者的凝血酶原时间,其它根据下列公式计算:凝血酶原活度(PTA)=[(对照PT﹣对照PT*0.6)÷(患者PT-对照PT*0.6)] *100%凝血酶原比值(PTR)=患者PT/对照PT国际标准化比值(INR)=PTR ISI6.报告确定无误后及时报告危急值,并在LIS上输入计算出来的结果,在备注栏中注明“手工法结果”,审核报告发出。
7.标本存放1小时内(3000r/min*10min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2~8℃保存不超过4小时,长时间保存需在冰冻条件下,(-70℃不超过6个月),只能冻融1次,在37℃迅速解冻,以减低凝血因子的消耗,解冻后立即测试。
凝血酶原时间分类标准
凝血酶原时间(PT)是指在缺乏血小板的血浆中加入过量的组织因子(兔脑渗出液)后,凝血酶原转化为凝血酶,导致血浆凝固所需的时间,主要反映外源性凝血是否正常。
其分类标准如下:
•正常参考值:对于成人,PT的正常值通常在11-15秒之间;对于新生儿,由于他们的凝血系统还在发育中,因此正常值会稍长一些,大约在18-22秒之间。
另外,也有观点认为,PT的正常值应在12-14秒之间。
•临床意义:当PT超过正常对照值3秒以上时,具有临床意义。
PT延长可能见于先天性凝血因子缺乏,如凝血酶原(因子Ⅱ)、因子Ⅴ、因子Ⅶ、因子Ⅹ及纤维蛋白原缺乏,或者获得性凝血因子缺乏,如继发性/原发性纤维蛋白溶解功能亢进、严重肝病等。
此外,使用肝素,血循环中存在凝血酶原、因子Ⅴ、因子VII、因子Ⅹ及纤维蛋白原的抗体,也可能导致PT延长。
相反,PT缩短可能见于妇女口服避孕药、血栓栓塞性疾病及高凝状态等。
总的来说,凝血酶原时间的分类标准主要依赖于其正常值范围以及临床应用中的变化情况。
这些指标有助于医生判断凝血系统的状态,从而制定相应的治疗方案。
Sysmex CA 500系列全自动血凝仪标准操作规程目录1. 概述 (3)2. 仪器运行条件 (6)3. 样本检测程序 (17)4. 质控检测程序 (23)5. 标准曲线制作 (29)6. 维护及耗材置换 (35)7. 附录 (49)第一部分概述1.使用目的CA-500系列全自动血凝分析仪用于凝血、抗凝、纤维蛋白溶解系统功能的检测,为出血性和血栓性疾病的诊断与鉴别诊断、溶栓及抗凝治疗的监测与疗效观察提供有价值的指标。
2.检测原理全自动血凝分析仪CA-500系列用于凝血、抗凝、纤维蛋白溶解系统因子的检测,其中CA510采用凝固法;CA530采用凝固法,发色底物法两种检测原理:CA550采用凝固法,发色底物法和免疫分析法三种检测原理。
2.1凝固法(散射光比浊法加百分比终点法)2.1.1散射光比浊法CA-500系列采用光学检测法,将血液凝固过程中的混浊度变化转换成散射光的变化后进行检测。
光源(卤素灯)发出的660nm光照射到标本,光电二极管接收90°直角方向散射光信号并转换为电信号,仪器内微机据此绘制出凝固曲线,用百分比检测法来确定凝固时间。
图1-1:光学检测系统2.1.2百分比检测法仪器把加入试剂后最初的散射光量设为0%,把反应结束后不再变化的散射光量设为100%。
将与50%散射光量相对应的时间作为凝固终点报告,因为50%的部位单位时间内散射光量的变化最为显着,纤维蛋白单体的聚合速度最快。
我们把这种方法称为“百分比终点法”。
图1-2:凝固时间的测定2.2发色底物法首先人工合成含某种活性酶裂解位点的化合物,且化合物连接上产色物质,该修饰后的化合物称作产色底物。
待检样品中含有活性酶或往样品中加入活性酶(被测物质含量同酶活性呈一定的数量关系),酶作用于裂解位点使产色物质被解离下来,在被检样品中产生颜色变化,检测透射光的变化。
根据酶活性同吸光度的变化、酶活性同所需检测物质含量间均存在一定的数量关系,由吸光度变化推算出所检测物质含量。
凝血参考值参考标准凝血是一种非常重要的生理过程,对于人体的健康至关重要。
凝血参考值即血浆中凝血功能检测项目的正常值范围,也是评估患者凝血功能是否正常的主要依据。
以下是凝血参考值的详细说明。
一、凝血时间(PT)和活化部分凝血时间(APTT)凝血时间是在体外加入凝血促进物质后,从加试剂开始计时到在凝结断裂时停止的时间。
在正常情况下,凝血时间应在10-14秒之间。
活化部分凝血时间是在加入特定激活物后,从加试剂开始计时到凝结断裂的时间。
常规情况下,活化部分凝血时间正常值为20-35秒。
二、凝血酶原时间(TT)凝血酶原时间是指在加入凝血促进物质后,从加试剂开始计时到生成凝血酶并凝结的时间。
正常情况下,凝血酶原时间应在14-21秒之间。
三、国际标准化比值(INR)国际标准化比值是指根据凝血时间和患者血浆的凝血因子含量计算出来的比值。
它是经常用来监测患者正在使用的口服抗凝药物的疗效。
正常情况下INR应该在0.8-1.2之间。
四、血小板计数血小板是人体中重要的细胞成分,它们参与凝血。
在正常情况下,血小板计数应该在150-450×10⁹/L之间。
五、纤维蛋白原(FIB)纤维蛋白原是血液中的一个蛋白质,对于维持正常的凝血功能意义非凡。
在正常情况下,FIB的参考值应该在2.0-4.0克/升之间。
六、 D-二聚体(D-Dimer)D-二聚体是一种蛋白质片段,在人体的凝血和纤溶过程中发挥重要的作用。
在正常情况下,D-Dimer的参考值应该在0-0.5微克/升之间。
综上所述,凝血参考值是一种非常重要的生理指标。
通过了解这些参考值,我们能更好地了解患者的凝血状态,及时发现异常情况并采取措施进行干预治疗。
凝血酶时间测定
一、试管法
目的掌握凝血酶时间测定的试管法
原理在血浆中加如标准化的凝血酶溶液后,在凝血酶的作用下,其血浆凝固所需要的时间就是凝血酶时间
器材水浴箱、试管、试管架、吸样管,胶吸头、离心机、秒表。
试剂
1.凝血酶溶液有商品试剂盒子供应,将高浓度的凝血酶用生理盐水稀释5~10倍以
能使正常对照血浆的凝血酶时间在16~18s
2.正常参比血浆
标本同凝血酶原的时间测定
操作
1.分离乏血小板血浆与凝血酶原时间测定
2.预温取0.1ml参比血浆加入试管中,置于水温37的水中预热5min。
3.测定正常参比血浆的TT 于试管中加入凝血酶0.1ml,同时启动秒表记录时间。
以出
现浑浊的最初凝固点作为终点,记录血凝时间。
重复做2~3次,取其平均值,即是参比血浆的TT
4.测定待测血浆以同样的方法检测待测血浆的TT
5.报告方式XXs
参考值每个试验方法都有其相应的参考值。
通常16~18s 超过参考值3s以上的才有临床意义。
注意事项
1.标本血浆力求新鲜,应该在采血后1h内完成,置于冰箱内保存不超过4h
2.采血采血要稳。
准、快,不能混入组织液。
3.凝血酶
(1)凝血酶通常是悬浮液,用前一定要充分混匀。
(2)已经稀释好的凝血酶溶液不能久置室温下,在4度下可保存3天血凝仪法,,简单方便快捷。
凝血酶原时间国际标准值
凝血酶原时间(PT)是一种常见的凝血功能指标,用于评估凝
血系统的功能。
国际标准化比值(INR)是一种用来标准化不同实验
室测定结果的方法,以便能够进行比较。
国际标准值是指在正常情
况下,一个健康的成年人的凝血酶原时间或国际标准化比值应该是
多少。
在一般情况下,国际标准值的范围是0.8至1.2。
这意味着在
正常情况下,一个健康的成年人的凝血酶原时间或国际标准化比值
应该在0.8至1.2之间。
然而,这个范围可能会因实验室的测定方
法和使用的试剂而有所不同,因此在具体情况下,应该以医生或实
验室提供的参考范围为准。
需要注意的是,个体的健康状况、年龄、性别、药物使用等因
素都可能会对凝血酶原时间产生影响,因此在进行凝血功能检查时,应该综合考虑个体的情况来进行评估。
如果凝血酶原时间或国际标
准化比值超出正常范围,可能需要进一步的检查和治疗。
总之,国际标准值是指在正常情况下,一个健康的成年人的凝
血酶原时间或国际标准化比值应该在0.8至1.2之间,但具体范围
可能会因实验室的测定方法和个体情况而有所不同。
建议在进行凝血功能检查时,应该咨询医生或实验室以获取准确的参考范围。
SOP_09-17 血凝分析仪项目标准操作程序一、目的:统一项目操作规程,严格检验质量标准,为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围:血栓/止血检验项目三、操作人员:检验科授权工作人员四、操作步骤:凝血酶原时间PT测定1、检测原理:待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶,使凝血酶原转变为凝血酶,后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白,测定凝固所需的时间,即为待测血浆凝血酶原时间PT。
是外源性凝血系统较理想和常用的筛选试验。
2、试剂盒组成PT凝血活酶:10支本批试剂国际敏感指数ISI值:1.20标本来源与保存静脉采血,置于含有1/10体积0.109mol/L枸橼酸钠抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料试管或硅化玻璃管中,3000rpm离心10分钟,收集上层液(血浆,黄色)。
2-8℃保存,不宜超过12小时。
3、方法3.1取PT凝血活酶冻干品一支,加入2.2ml蒸馏水轻摇溶解。
3.2取待测血浆(参比血浆)0.1ml,37℃孵育2分钟,加入37℃预温凝血酶溶液0.2ml(上机加0.1ml),混匀,立即启动秒表,记录凝固时间,即为PT值。
4、数据处理凝血酶原时间比值(PTR)=待测血浆PT/参比血浆PT国际标准化比值(INR)=PTR ISI正常值1.以时间表示:11-15秒2.以PTR表示:0.95-1.243.以INR表示:0.94-1.295、注意事项1)采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器,贮血升微使用塑料试管或硅化玻璃管。
不宜使用普通玻璃管,避免凝血因子活化。
2)血时止血带不可束缚过紧,并不应超过5分钟,否则导致凝血及纤溶因子活化。
3)浆制备必须及时,血浆分离应尽量去除血小板。
血浆分离后应尽快测定。
4)血浆预温不宜超过10分钟。
5)凝血活酶预温不可超过30分钟。
6)用浊度法测定终点的自动化凝血仪,溶血和较明显的黄疸及脂血会影响测定结果,此时宜用手工法或电子机械式凝血仪测定。
7)红细胞比容超过55%时,应调整抗凝剂用量。
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ZYYY/LJxm--b10--20XXsop文件附录bb10:血浆凝血酶原时间(pT)测定第一页页首内容:血浆凝血酶原时间(pT)测定(凝固法)科左中旗中医医院检验科操作规程文件号:ZYYY/LJxm--b10--20XX第4版共6页20XX年9月13日起实施。
〔该sop变动程序〕本操作程序的改变可由使用sop文件工作人员提出,人,科主任批准签字。
本规程每2年复审一次复审日期:年月日复审人:规程编写者:李凤兰审批者:李凤兰批准日期:20XX年9月13日医务科保管者:包金泉检验科保管者:李凤兰临检实验室保管者:于庆芝并报告专业负责ZYYY/LJxm--b10--20XXsop文件b10.1:测定原理:待测血浆加入过量的钙组织凝血活酶,重新钙化的血浆在组织因子存在时激活因子x成为xa,后者是凝血酶原转变为凝血酶,凝血酶使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白,测定凝固所需的时间,即为待测血浆凝血酶原时间。
b10.2:标本采集与处理:b10.2.1:受检者准备:空腹静脉取血b10.2.2:受检者体位:坐位、静脉取血、使用止血带时间不超过1分钟。
b10.2.3:标本种类:采用血浆检测,用枸橼酸钠抗凝。
b10.2.4:使用器材:取血器材包括注射器、针头与试管,必须干燥、清洁,要使用一次性塑料注射器与塑料试管,使用真空采血管后应及时去除真空。
b10.2.5:离心条件与测定时间:必须以3000rpm的离心速度离心15分钟,血浆分离后应在2小时内完成测定。
b10.2.6:抗凝剂:必须用109mmol/L(32g/L)枸橼酸钠抗凝,抗凝液应防止霉变。
凝血酶原时间诊断标准
凝血酶原时间(PT)是检查外源性凝血因子的一种过筛试验,正常参考值一般为11-13秒。
测定值在正常对照值3秒内为正常,超过正常对照值3秒
以上为延长。
凝血酶原时间能够反映血浆中凝血因子二、七、九、十活性的指标,凝血酶原转化为凝血酶的参考值为±、秒。
如果检查者的凝血酶原转化为凝血酶凝固血液的时间大于正常对照值3秒以上,考虑有先天性凝血因子缺乏、纤维蛋白原缺乏、维生素K缺乏等血液疾病,可通过补充血浆、冷沉淀及补充维生素K等方法进行治疗。
如果检查者的凝血酶原转化为凝血酶小于正常对照值,表示血液处于高凝状态,这种情况常发生在患有血栓性的疾病的患者,比如冠心病、脑血栓、心肌梗死、脑梗塞、深静脉血栓等,治疗可采用抗凝药物,药物可选择双嘧达莫、氯吡格雷、华法林、肝素类抗凝药,或者皮下注射低分子肝素等。
以上信息仅供参考,诊断凝血酶原时间是否正常需结合其他检查和临床表现。
如需获取更多专业信息,建议咨询医生或查阅医学书籍。
血凝仪SOP文件CA1500全自动血凝分析系统标准操作规程SOP编码:页数:页制定人签名:日期:审核人签名:日期:批准人签名:日期:生效日期:颁发日期:周期性审查:年一次1.设备基本技术参数1.1 原理——CA1500凝血仪仪器具有三种检测原理方法:凝固法、发色底物法、免疫法1.1.1 凝固法:基本测试原理是光学法的散射光检测(用660nm 光电二极管检测散射光强度的变化),还并用了百分比方式的测定原理:当试剂加入标本后,凝血开始启动,随之光学出现变化,仪器把这种光学的变化描绘成凝固曲线:把开始出现凝集的起始点作为0%、把完全凝固的终点作为100%、把50%变化点处作为凝固时间(报告点),当测定含有干扰物(黄疸、溶血、高脂血症等)或低纤维蛋白原血症的特殊标本时,其作为起始点的0%的基线会随之上移或下移,相当于扣除本底干扰.以上凝固法检测原理所测定的项目包括了最常用的如PT、APTT、FIB、TT、内源凝血因子(F VIII、XI、XI、XII),外源凝血因子(F II、V、VII、X)等1.1.2. 发色底物法的检测原理:是通过测定产色物质的吸光度变化,以推算待测物的含量,这种方法属生物化学法,其基本原理是:试剂中为人工合成的含某种酶裂解位点的短肽,与产色物质如对硝基苯胺(pNA)连接,待检物品中含有活性酶或无活性的酶原被加入的激活剂活化,在检测过程中产色物质被解离下来,使被检物品出现颜色变化,其与被检物含量呈一定的数量关系。
此方法以酶学方法为基础,可检测项目包括如:AT-III、Plg、PC、PS、FM、PAI,Tpa,α2-AP等。
1.1.3. 免疫法:以被检物作为抗原,制备相应的多克隆抗体,利用抗原抗体的特异结合反应来对被检物进行定性和定量检测,在凝血仪上多采用免疫比浊法测定,其基本原理是当一定波长的光线通过反应混合液时,被其中抗原抗体反应形成的免疫复合物吸收而减弱,在一定范围内,其吸光度与复合物量呈正相关,因此当抗体量固定时,根据复合物的吸光度值,即可推算出待测抗原含量,可测定项目如D-二聚体、vWF因子、FDP等1.2 检测环境要求:1.2.1 温度: 10° - 30° C;湿度: 20 - 80% (无冷凝)1.2.2 电源: 交流电100-240V,50/60Hz;功率:720VA1.2.3 请勿将仪器直接置于水、直射阳光、冷凝或大风的环境中,这样会导致不正确的检测结果并导致仪器工作不正常而损坏1.2.4 仪器的背面和墙之间要始终保持20厘米以上的距离。
修改纪录:1目的本操作书的制定的目的是,为操作者进行凝血酶原时间测定提供正确的操作方法。
2适用范围适用于凝血酶原时间测定3定义凝血酶原时间(Prothrombin time,PT)是一个基础的凝血筛选试验,常用来评价先天的和/或后天获得的外源性凝血途径(因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ)。
4测定原理和临床意义4.1测定原理在待检血浆中加入过量的第Ⅲ因子和适量Ca2+,使凝血酶原转变为凝血酶,后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。
采用凝固法,通过电磁感应,感测介质黏度变化,从而测定血浆凝固时间,与正常人凝血酶原时间比较,综合反映外源性凝血系统中因子(Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ)的水平。
方法为自动血凝分析仪(STA Analyzers)Clauss凝固法。
该试验对外源性凝血因子敏感:----因子II (凝血酶原)----因子V (易变因子)----因子VII (稳定因子)--因子X (Stuart 因子。
4.2临床意义为外源性凝血途径检查的筛选试验,是综合反映凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅰ含量及活性的指标。
监测抗凝剂治疗。
延长:Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ因子先天性缺乏和低(无)纤维蛋白原血症;DIC的低凝期及继发性纤溶亢进期;原发性纤溶症;维生素K缺乏症;肝脏疾病(肝硬化、肝炎、黄疸);循环血液中有抗凝物质;纤维蛋白降解产物(FDP)增多;口服香豆素类抗凝药;肠道重吸收紊乱;新生儿出血性剂病等。
缩短:血栓前状态或血栓性疾病、DIC早期、口服避孕药等。
PT被广泛用于监测抗凝治疗(warfarin),因为它的灵敏度可反映依靠维生素K的因子II,VII 和X的浓度变化,所以此试验所得的结果对确定治疗药物浓度是特异的。
众所周知,血浆PT的值由于凝血活酶试剂本身及所测量的仪器的不同而不同。
WHO采用的一种标准品是“抗凝治疗强度凝血活酶国际参考标准系统”,在这个系统中,PT比值被转换成国际标准化比值(INR),病人的PT和标准PT比值符合INR与ISI(国际敏感度指数)换算公式:INR=(病人PT / 平均正常PT)ISI凝血活酶ISI 值通过使用国际参考品凝血活酶(IRP),由正常血浆和香豆素治疗病人血浆的凝血活酶来决定,PT值的获得可通过作log--log 图,并回归画出直线,该直线的斜率描绘的即是凝血活酶ISI 值。
纤维蛋白原凝结时间测定(Fibrinogen coagulative time, FIB)【目的】用于判定血栓前状态或血栓性疾病的必查项目【操作人员】本实验室实验人员。
【原理】采用clauss法,即在待稀释血浆中加入高浓度的凝血酶,血浆凝固时间与血浆纤维蛋白原浓度成反比。
【方法学溯源】:纤维蛋白原测定(Clauss法)原理:凝血酶将可溶性的血浆蛋白纤维蛋白原转化为不溶性的多聚体,纤维蛋白。
当凝血酶浓度较高(约为100NIH/ml)且纤维蛋白原浓度较低(0.05—0.8g/L)时该反应决定于纤维蛋白原浓度。
如在双对数坐标纸上画点,凝血酶凝块时间与纤维蛋白原浓度相比较呈线形关系。
【仪器】:型号:MC-4000 PUS血液凝血分析仪【试剂】:1. 凝血酶试剂(Thrombin Reagent)(1)商标:美创(MDC Hemostasis)(2)包装规格:2.0ml×10瓶(3)成分:冻干牛凝血酶冻干粉(lyophilized preparation of bovine thrombin)(近似100 NIH units/ml)使用前用蒸馏水复溶,轻轻摇动至完全溶解.溶后的凝血酶2~8℃存放可稳定一周,溶解后4小时内-20℃冻存,可以稳定一个月.冻存的凝血酶应37℃快速复溶,避免反复冻溶.2.咪唑缓冲盐水(pH7.4±0.2)135ml/瓶该缓冲液以叠氮钠为防腐剂,叠氮钠如遇酸将产生有毒化合物,因此,含有该试剂的容器/试管及丢弃的试剂均应用大量流水冲洗.此外,亦应避免该试剂在金属管道内沉积.【参考范围】:200~400mg/dl【样本采集】:109 mmol/L 枸橼酸钠与血液按9∶1混合,RCF 2500×g(3000转/分)离心10分钟,分离血浆待检。
室温下两小时内检测,否则冻存。
【操作步骤】1、取50μl血浆加入450μl咪唑盐水(IBS)中,作1:10稀释。
2、取1:10稀释的血浆100μl,37℃预热2分钟,然后加入50μl已预热的凝血酶试剂,仪器自动记录凝固时间(步骤2在血凝仪上完成)【参考范围】200~400mg/dl【注意事项】1.分离的血浆中不应含有细胞成分;2.纤维蛋白原含量低于150mg/dl/L,而血浆FDP含量明显升高时,可致标本的测定结果较实际低。
凝血酶凝结时间测定
「参考值」
被检血浆的凝血酶时间比正常对照延长3秒以上,即有临床意义(若正常对照为20秒,则凝血酶时间须延长5秒以上才有诊断意义)。
「临床意义」
当血浆中存在有抗凝物质时,这种情况可见于肝素增多症和一些胰脏疾患,抗凝血酶Ⅲ活性显著增加时,均可使凝血酶凝结时间延长。
此外,纤维蛋白原减少,弥漫性血管内凝血或原发性纤溶、多发性骨髓瘤(有异常蛋白质)时,凝血酶凝结时间亦可延长。
【注意事项】
大家在用药的时候,药物说明书里面有三种标识,一般要注意一下:
1.第一种就是禁用,就是绝对禁止使用。
2.第二种就是慎用,就是药物可以使用,但是要密切关注患者口服药以后的情况,一旦有不良反应发生,需要马上停止使用。
3.第三种就是忌用,就是说明药物在此类人群中有明确的不良反应,应该是由医生根据病情给出用药建议。
如果一定需要这种药物,就可以联合其他的能减轻不良反应的药物一起服用。
大家以后在服用药物的时候,多留意说明书,留意注意事项,避免不良反应的发生。
本文到此结束,谢谢大家!。
血浆凝血酶原(PT)测定
1. 实验原理:
确定量的血浆样本经过一定时间的加温后,加入一定浓度的凝血酶试剂,采用波长为660nm的光照射样本,凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定,从散射光光强度的测定,
可以作出凝血曲线,。
凝血酶可使血浆标本中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白,形成凝块。
形成凝块的时间即检测时间。
2. 标本采集
2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血.
2.2
3.8%(w/v)枸椽钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀.
3. 标本存放
1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2~8℃保存不超过4小时,长时间保存需在冰冻条件下,(-70℃不超过6个月),只能冻融1次,在37℃迅速解冻,以减低凝血因子的消耗,解冻后立即测试.
4. 标本运输:低温条件下运输.
5. 标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定.
6. 实验材料:
6.1 德国Dade Behring Marburg 公司Test Thrombin试剂(干粉),每瓶加5ml配套缓冲液溶解(50毫升),未开封试剂2~8℃贮存到说明书上有效期.复溶试剂2~8℃保存不超过5天.
6.2 缓冲液,用于凝血酶试剂的溶解,2~8℃贮存到说明书上有效期.
6.3 Dade Citrol质控血浆.用蒸镏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装.复溶后,室温保存2小时,2~8℃4小时.
7. 仪器设备:
7.1 仪器名称: Sysmex CA-1500全自动血液凝固分析仪
7.2 仪器厂家:日本Sysmex公司
7.3 仪器型号:Sysmex CA-1500
7.4 仪器技术参数:
7.4.1 速度:最快检测速度180测试/小时,组合检测约140测试/小时
7.4.2 试剂位:36个,具冷藏功能.
7.4.3 样本位:50个,可自动连续添加.
7.5 仪器校准程序:
7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校
准.
7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)
8. 操作步骤:
8.1 检查前准备:
8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽.
8.1.2 添加足够反应杯(不能超出警告线)
8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸镏水等.
8.2 开机
先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定.
8.3 输入工作清单:
从主菜单选,选
并同时输入此标本的其他测试项目,若选“凝血四项(APTT、APAPTT、Fbg、APTT)”,
可按,选完项目后按
某项目时只需按该项目(按键如
(快速输入可用.
8.4 放置样本
按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上,并按顺序把样本架排列于Sampler 进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本)
8.5 .
盖好遮光盖,确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按,进样开始,→测定进行,仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为“◎”,此时可重复8.3,8.4,继续输入其他架样本工作
清单,继续确认测试任务,添加样本架继续测试,→测定完成,测定项目背景变为“●”,打印机打印出测定结果,所有测定清单完成,系统恢复“Ready”状态.
8.6 每日维护:完成每日的测定后,关机前维护.
8.6.1 冲冼针Rinse Probe
8.6.2 清空废液瓶,和已使用过的反应杯.
8.6.3 将试剂架连用试剂放入冰箱.
8.7 关机:先关主机,再关打印机.
9.检验结果的判断与分析:
9.1 仪器测定APTT线性范围在5-200s,测定完成仪器将显示每个参数的结果,若不能对参数进行正确
计算,将出现下列信息:
﹡﹡﹡,﹡出现错误,不能得到分析数据
ˉˉˉ,ˉ不能计算参数
+++,+数值超出线性范围.
9.2 仪器设定APTT参考范围在24-36s,如果得到一个不正常数值,在数据的左侧将出现下列标记:
﹡出现错误信息
< 数据低于可报告的低限
> 数据高于可报告的高限
10. 质量控制:每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S为警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控.质控规则详见室内质控作业指导书.
11. 临床意义:APTT是用于判定血栓前状态或血栓性疾病的筛查项目.
11.1 参考范围: 24-36s,(患者结果超过正常对照3秒以上有临床意义)
11.2纤维蛋白原溶解治疗的监测
11.3纤维蛋白形成障碍或怀疑重度纤维蛋白原缺乏的筛查
11.4 肝素诱导活化部分凝血活酶延长和纤维蛋白形成障碍的鉴别诊断
12.变异的潜在来源
12.1抗凝剂:草酸盐、EDTA、肝素不能用于APTT测定项目,抗凝比例不当也将影响结果的准确性。
12.2样本采集处理不当,如血与抗凝剂未充分混匀,出现小凝块;混匀时过分用力,使红细胞破坏出
现溶血,均会造成结果变异。
12.3纤溶药物的影响:如双香豆素、链激酶、尿酶等
12.4妊娠与急性炎症的影响
13. 操作注意事项:干粉试剂及质控血浆溶解
13.1 确认溶剂类型,一般溶解液包括:蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定溶解液,必须按说明书
要求使用。
13.2 溶解时,轻轻转动容器,保证干粉完全溶解,避免剧烈振荡。
13.3复溶后,室温放置5-10分钟方可使用。
14. 仪器维护与保养
14.1 日常维护(见8.6)
14.2 每周维护
14.2.1液路冲洗:仪器在“Ready”状态下,从主菜单按
→按键运行此程序→完成后按返回。
14.2.2清洁仪器:定期用擦布擦干净仪器内外,包括试剂槽。
14.3 需要时维护:
14.3.1调整压力:仪器在“Ready”状态下,以主菜单按→按
键,显示压力是否在其调整范围内?若不在,则打开仪器右侧相应压力调整旋钮,旋动调整好压力,再锁紧旋钮。
14.3.2更换灯泡:关机→从仪器右侧取下灯泡外盖及内盖→换上好的灯泡→装上内外盖→从主菜单按
14.3.3更换保险管:关机→从仪器左侧旋下保险盖→更换上好的保险管→装上保险管盖。
15. 参考文献
15.1 叶应妩.王毓三等《全国临床检验操作规程》第三版,东南大学出版社.
15.2 Sysmex公司《Sysmex CA-1500操作手册》1998.6修订本.。