下载文档原格式
4种黄酮小分子对DPPH自由基的清除作用及构效关系研究刘帅涛;陶慧林;李锦艳【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2012(031)001【摘要】The scavenging activities, stabilities and hemi-inhibitory concentrations ( IC50 ) of 4 fla-vonoids, including rutin, vitexin, kaempferide and hyperoside to DPPH free radical were investigated by UV - Vis spectra, by using natural antioxidants ascorbic acid as the comparison. The relations of the flavonoids structures with their antioxidant activities were also discussed. The results indicated that different antioxidants have different balance time in scavenging the DPPH free radical, in which rutin need the longest time. Four flavonoids and ascorbic acid have scavenging effect to DPPH free radical, and the dose-effect relationship exists. The DPPH free radical scavenging abilities of these five antioxidants were as follows; hyperoside > ascorbic acid > rutin > kaempferide > vitexin. The a-nalysis on the structures of four flavonoids showed that the pyrocatechol hydroxy group of B ring was necessary for the antioxidant activities of flavonoids compounds. The hydroxymethylation of - OH at B ring and the glycosylation of - OH at A ring were not favorable for antioxidant activities. The gly-cosylation of 3-OH at C ring could increase the antioxidant activities of flavonoids, in which the antioxidant activity of monloglycoside ( e. G. Hyperoside) is better than that of diglycoside (e. G. Rutin).%通过紫外可见光谱测定了4种黄酮小分子芦丁、牡荆素、山奈素、金丝桃苷对DPPH自由基的清除率、稳定性及半抑制浓度(IC50),并以常用的天然抗氧化剂抗坏血酸作为对照,考察了其抗氧化效果,探讨了黄酮类化合物的抗氧化性与结构的关系.结果表明:不同的抗氧化剂清除DPPH自由基达到平衡的时间不同,芦丁所需时间最长.4种黄酮小分子及抗坏血酸均对DPPH自由基有清除效果,并存在一定的量效关系.对DPPH自由基的清除能力从大到小依次为金丝桃苷、抗坏血酸、芦丁、山奈素、牡荆素.结构分析表明,B环邻二酚羟基是黄酮类化合物抗氧化所必需的基团,其羟甲基化及A环羟基糖苷化不利于黄酮类化合物的抗氧化活性.而C环3-OH的糖苷化对抗氧化活性有利,且单糖苷优于双糖苷.【总页数】5页(P71-75)【作者】刘帅涛;陶慧林;李锦艳【作者单位】桂林理工大学化学与生物工程学院,广西桂林541004;桂林理工大学化学与生物工程学院,广西桂林541004;桂林理工大学化学与生物工程学院,广西桂林541004【正文语种】中文【中图分类】O657.3;O625.311【相关文献】1.川桂叶总黄酮清除DPPH·自由基作用的研究 [J], 李姣娟;周尽花;戴瑜;黄克瀛2.金银花、银杏叶总黄酮协同清除DPPH自由基作用研究 [J], 石艳宾3.女贞花总黄酮提取及清除DPPH自由基作用的研究 [J], 姚文红;李飞阳;王娟;骆珍;侯婷4.石上柏中双黄酮对DPPH自由基的清除作用研究 [J], 朱田密; 陈树和; 张金亮;陈科力5.响应曲面优化提取半枝莲中总黄酮及清除DPPH自由基作用的研究 [J], 李可同;李棣华;吕沅珊;刘俊红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于DPPH自由基清除效果研究白头翁的提取工艺孙珊珊;杨海焱;刘悦;常福曼;苏建青【摘要】为了优化白头翁的提取工艺,以白头翁提取液对DPPH自由基的清除率作为评价指标,考查料水比、提取时间、提取次数、提取温度等不同单因素对白头翁提取液清除DPPH自由基效果的影响,并通过正交试验对单因素结果进行优化.结果表明,当料水比为1:40、提取时间为45 min、提取次数为2次、提取温度为60℃时白头翁提取液对DPPH自由基的清除率最大,可达到54.9％.由该结果可以得出,提取方法对白头翁提取液清除DPPH自由基效果具有影响,高温和长时间提取可能对白头翁提取液清除DPPH自由基的有效成分具有破坏作用.【期刊名称】《畜牧与饲料科学》【年(卷),期】2019(040)003【总页数】5页(P16-20)【关键词】白头翁;提取工艺;DPPH自由基【作者】孙珊珊;杨海焱;刘悦;常福曼;苏建青【作者单位】聊城大学农学院,山东聊城 252000;聊城大学农学院,山东聊城252000;聊城大学农学院,山东聊城 252000;聊城大学农学院,山东聊城 252000;聊城大学农学院,山东聊城 252000【正文语种】中文【中图分类】S859.4;R284.2白头翁［Pulsatilla chinensis（Bge.）Regel］属于毛茛科，为多年生草本植物，又名白头草、老冠花、野丈人等［1］。
白头翁始载于《神农本草经》，列为下品，为常用中草药，以干燥的根入药，性苦味寒［2］，具有清热解毒、凉血止痢和燥湿杀虫等功效［3］。
白头翁主产于我国吉林、辽宁、河北、河南、山西和黑龙江等地［4］。
药理学研究表明该属植物含有100多种药理化学成分，如皂苷、黄酮、有机酸、白头翁素等［5］。
研究显示其主要药理活性成分为三萜皂苷类成分［6-7］。
氧化应激是机体自由基生成增加、抗氧化能力下降、氧化和抗氧化平衡出现紊乱，从而导致自由基在机体内积累，进而损伤DNA、细胞引起病理变化的过程［8］。
PEF 技术对抗氧化活性肽MMCTD 的DPPH 自由基清除活性和结构的影响张鸣镝，邢杰，李幸芳，梁荣，林松毅（吉林大学食品科学与工程学院，吉林长春 130062）摘要：本研究以前期研究所得的Met-Met-Cys-Thr-Asp （MMCTD ）抗氧化肽为研究载体，以DPPH 自由基清除能力为抗氧化活性衡量指标，借助中红外光谱（Mid-infrared spectroscopy ，MIR ）、圆二色谱（Circular dichroism spectrum ，CD ）、Zeta 电位以及核磁共振（Nuclear magnetic resonance ，NMR ）技术，深入探究高压脉冲电场（pulsed electric field, PEF ）技术对MMCTD 抗氧化肽活性的影响。
研究表明在电场强度为5 kV/cm 、电场频率为2400 Hz 时，MMCTD 的自由基清除能力达到最大值94.27%±0.03%且MMCTD 的Zeta 电位值下降到10.85±0.98 mV 。
MIR 和NMR 结果表明经PEF 处理后MMCTD 的官能团并未发生改变但所含的H 质子所处的化学环境有所改变。
经CD 分析，其二级结构中的β-折叠的含量从13.70%下降至0.00%，β-转角以及无规则卷曲的含量都有着明显的增加。
这些变化不仅初步揭示了PEF 可以通过改变MMCTD 的二级结构以及表面电荷分布来提高它抗氧化活性，更为进一步探究PEF 提高抗氧化肽活性的机理奠定基础。
关键词：高压脉冲电场（PEF ）；抗氧化肽；圆二色谱（CD ）；机理文章篇号：1673-9078(2016)9-180-185 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.9.027Effects of a Pulsed Electric Field on DPPH Radical-scavenging Activityand Structure of Antioxidant Peptide MMCTDZHANG Ming-di, XING Jie, LI Xing-fang, LIANG Rong, LIN Song-yi(College of Food Science and Engineering, Jilin University, Changchun 130062, China)Abstract: The antioxidant peptide Met-Met-Cys-Thr-Asp (MMCTD) obtained in the previous study was analyzed in this work, and 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH·) radical-scavenging capacity served as an indicator of antioxidant activity. Mid-infrared spectroscopy (MIR), circular dichroism (CD) spectroscopy, zeta-potential, and nuclear magnetic resonance (NMR) were used for an in-depth analysis of the effects of a pulsed electric field (PEF) on the antioxidant activities of peptide MMCTD. The results showed that when the electric field intensity was 5 kV/cm and pulse frequency was 2400 Hz, the DPPH radical-scavenging capacity reached a peak value (94.27%±0.03%, mean±SD) and the zeta-potential of peptide MMCTD being treated was reduced to 10.85±0.98 mV . The MIR and NMR results revealed that after the PEF treatment, the functional groups of peptide MMCTD were not changed, but the chemical environment of the hydrogen ion (proton) was changed. The CD analysis indicated that the proportion of the β-sheet in the secondary structure decreased from 13.7% to 0%, and the relative amounts of the β-turn and random coil increased significantly. These changes not only preliminarily reveal that PEF can enhance the antioxidant activity of peptide MMCTD by changing the secondary structure and surface charge distribution but also lay the foundation for identification of the mechanism underlying the enhancement of antioxidant activity by PEF.Key words: pulsed electric field; antioxidant peptide; circular dichroism spectrum; mechanism将我国优质的植物蛋白资源开发为具有多重功能活性、高额附加值的生物活性肽类是未来植物资源精180收稿日期：2015-10-26基金项目：“十二五”国家科技支撑计划项目（2012BAD33B03）作者简介：张鸣镝（1971-），男，博士，副教授，研究方向：营养与功能食品通讯作者：林松毅（1970-），女，博士，教授，博士生导师，研究方向：食品加工质量控制技术与原理深加工的必然趋势，其中具有抗氧化功能的植物源生物活性肽占有重要地位。
栽培育种ZAIPEI YUZHONG不同产地蜂胶抗氧化活性评价与抗氧化活性成分研究刘学医1王晓卉"刘丽敏1（1.安徽中医药高等专科学校，安徽芜湖241000；2■皖南医学院药学院，安徽芜湖241000）摘要：测定不同产地蜂胶的总酚酸含量、总黄酮含量和抗氧化活性并建立关联，为蜂胶质量评价提供参考#以75%的乙醇超声提取得蜂胶粗提液，以DPP&法评价蜂胶的抗氧化活性，用分光光度法测定蜂胶中的总多酚和总黄酮含量，并与抗氧化活性建立关联$蜂胶样V对DPPH自由基清除的IC50为12.43〜211.4）"g/mL，总多酚含量在4.40%〜25.41%，总黄酮含量在4.45%〜36.22%$蜂胶的抗氧化活性在一定范围内与总酚酸含量和总黄酮含量有相关性，且呈正相关关系，总酚酸和总黄酮含量高的蜂胶具有较强的抗氧化能力$关键词：蜂胶；抗氧化活性；总酚酸；总黄酮蜂胶是蜜蜂科昆虫意大利蜂Apis mellifera L.工蜂采集的植物树脂与其上6腺、蜡腺等分泌物混合形成的具有黏性的固体胶状物0蜂胶具有多种药理活性#如抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤、保肝、增强免疫等#其中#黄酮类成分和酚酸类成分被认为是其主要的活性物质0蜂胶的化学成分取决于蜜蜂采集蜂胶的地理来源及植物分布#不同地区蜂胶的化学成分可能存在很大差异0本将不同产地蜂胶的抗氧化活性与其总酚酸及黄酮含#为不同地区蜂胶的质提供参考0一、材料（一）材料与试剂蜂胶购自蜂农，经鉴定为蜂胶粗品,DPPH（1,1-二苯基-2-）抗（上海）有#乙醇、强化工有（分）「酸化学试剂厂，酸科化学剂有#成物科有限公司（批号：DST180321-016）,氢氧化钠购自上海山化工有，亚硝酸钠购自中集化学试剂分#合硝酸化学试剂有0（）KQ5200E型超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）#MultiskangO1510型全波长酶标仪（Thermo Fisher Scientific Oy Ratastie Z Fl-01620Uantaa Finland）#UV5100型紫外分（上海元析仪器有限公司），FA2004N型分（上科学有），SHB-!多（科工有）#AUW220D 型电子天平（Shimadzu Corporation Japan） 0二、方法与结果（一）蜂胶供试品溶液制备称取各产地的蜂胶1g,分别用75%乙醇30mL超声提取20min#抽滤，合并3次滤液，75%乙醇定容至100mL#配制成浓10mg/mL溶液，密封#冰箱4#保存0（二）抗氧化活性测1.DPPH母液制备"精密称取DPPH4,0mg#甲醇超声溶解，定容至10mL棕色容量瓶#得到1mL母液#避光4#冰箱保存。
蜂胶抗氧化和抑菌作用的研究进展蜂胶(Propolis) 是蜜蜂从植物花苞及树干上采集的树胶，并混入颚腺分泌物和蜂蜡等物质加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物质，是防护病原微生物、修补巢房和内环境消毒杀菌的高效清洁剂[1-3]。
蜂胶素有“自然界中的紫色黄金” 之称，是一种对健康有很大作用的天然营养品。
大量研究表明：蜂胶中起药理作用的主要有效成分是黄酮类化合物，其具有增强免疫功能、抗菌消炎、排除毒素、增强免疫、软化血管、净化血液、改善微循环、抗氧化、抗病毒、抗癌作用，此外，还能调节大鼠的血糖水平，调节体内蛋白质代谢，对肾脏有保护作用，促进组织再生等广泛的生物学作用。
我国已有将蜂胶作为主要原料的准字号药品，2005 版《中国药典》第一部已经收录蜂胶。
随着蜂胶的多种神奇医疗作用逐渐揭示，国际蜂胶消费量迅速增长，国内外学者对蜂胶的功能研究日益深入，尤其在蜂胶的抗菌活性方面进行了广泛的研究。
经研究蜂胶提取物对革兰阳性菌的抑制效果较好。
而有关蜂胶抗氧化作用报道也较多，均表明蜂胶及所含黄酮类化合物对动物体内的多种自由基有显著的抑制或直接清除作用。
文章综合近几年蜂胶研究进展对蜂胶的抗氧化和抑菌作用综述如下。
1. 蜂胶的主要化学成分及其提取方法1.1 蜂胶的主要化学成分目前，已从蜂胶中分离鉴定出的化学成分有黄酮类、萜烯类、醌类、酯类、醇类、酚类、醚类、有机酸和大量的氨基酸、酶类、维生素B1、维生B2、维生素B6、维生素E和维生素 A 以及各种矿物质等。
蜂胶总酚含量很高，要高出蔬菜、水果、植物药材的几万倍至几百万倍。
蜂胶中的酚类化合物主要包括黄酮类化合物和酚酸类化合物以及它们的缩合体。
含有大量的黄酮类、萜烯类化合物是蜂胶的重要特征。
现已从蜂胶中分离鉴定的黄酮类化合物135 种，其中黄酮及黄酮醇类化合物46 种，二氢黄酮及二氢黄酮醇类36 种, 11 种异黄酮类化合物。
查耳酮和二氢查耳酮类17 种，以及最近几年从蜂胶中鉴定出的新黄酮类似物25 种。
DPPH法测定黄芩黄酮的抗氧化活性抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。
目前对自由基清除剂的研究方法主要有2类，一类是体外模型，另一类是体内模型，其中DPPH法是体外模型中最常用的方法。
DPPH又称1,1—二苯基-2—三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，他的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。
它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系.。
向其中加入自由基清除剂时,可以结合或替代DPPH·，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅,借此可评价清除自由基的能力。
即通过在517nm波长处检测样品清除DPPH·的效果,来计算抗氧化能力.实验研究表明，黄芩黄酮中清除DPPH自由基活性的主要成分是黄芩苷［1]，黄芩苷中含有羧羟基和酚羟基能与DPPH反应，反应式如下：N N+O2NO2N NO2H+N NHO2NO2NNO2 DPPH与抗氧化剂反应原理材料：DPPH（1,1—二苯基—2—三硝基苯肼）；无水乙醇；仪器：分光光度计1.DPPH贮备液的制备准确称取DPPH试剂3．5mg，用无水乙醇溶解，并定量转入10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度,取2mL至100ml容量瓶中,摇匀得浓度为0.0178mmol／L DPPH贮备液，置于冰箱中冷藏备用.2.试液的制备(只作参考)准确称取5。
2mg干燥的黄酮提取物（32。
75%）,用无水乙醇溶解,并定量转入50ml容量瓶中，用无水乙醇定量至刻度，取10ml至100ml容量瓶中,摇匀得浓度为0.0233mmol／L试液。
3.DPPH·清除率的测定在10mL比色管中依次加入4.0mLDPPH溶液和黄酮提取液,再加入无水乙醇至刻度，混匀立即用1cm 比色皿在517nm波长处测吸光值(A），吸光值记为Ai，再在温室避光保存30min后测吸光值，记为Aj，对照试验为只加DPPH的乙醇溶液,其吸光值记为Ac.按下式计算自由基清除率(K）：K（%）=［1-（Ai—Aj）/Ac］*100％试验重复三次，取其平均值作为最后结果。
蜂胶挥发油提取及其DPPH自由基清除率的研究作者：蒋金龙王姝砚缪晓青来源：《海峡科学》2010年第10期蜂胶(propolis)是蜜蜂用从植物的嫩芽及树干上采集的树脂并混入自身上颚腺分泌物和蜂蜡混合而成的一种具有芳香气味的胶状固体物[1]。
蜂胶成分极为复杂,主要由55%的树脂树香复合物、30%的蜂蜡、10%的芳香挥发油和5%的花粉及其它物质混合组成的[2]。
蜂胶中的挥发油虽然含量较少,但也是一类非常重要的活性成分,具有独特的芳香气味和一定的生物学功能及药理学作用[3]。
Melliou等[4](2007)报道了五种希腊蜂胶的挥发性成分具有良好的抗细菌和真菌的功效。
目前蜂胶精油的提取方法常见的有:水蒸汽蒸馏法,固相微萃取法,溶剂提取法,超声波辅助萃取,微波炉辅助萃取及超临界CO2萃取等[5]。
由于固相微萃取法及超临界萃取成本比较高,而溶剂提取法和水蒸汽蒸馏法提取率较低,故本文采用超声和微波这两种普及率高且成本低的辅助技术来提取蜂胶挥发油。
许多植物挥发油易溶于石油醚等极性小的有机溶剂中,也能溶于高浓度乙醇所以,本文研究主要采用石油醚,己烷,乙醚三种溶剂来提取蜂胶中的挥发油,并对其提取工艺和抗氧化能力进行比较研究。
1材料与仪器材料:蜂胶(原胶)由福建神蜂技术开发有限公司提供;DPPH产自于日本和光纯药工业株式会社,乙醇、石油醚、乙醚、己烷等均为分析纯试剂。
仪器:旋转蒸发仪RE52C5-2,上海亚荣生化仪器厂;微波炉MM823ESJ-PA(输出功率为800W),广东美的微波炉制造有限公司;超声波清洗器KQ5200E,昆山市超声仪器有限公司;电子天平BS223S,赛多利斯科学仪器(北京)有限公司;可见分光光度计WFJ 7200,尤尼柯(上海)仪器有限公司;等。
2实验方法2.1 原料制备蜂原胶置于-18℃环境条件下冷冻12小时,经粉碎机粉碎成100目以上的粉末后,按料液体积比为1:4加入90%乙醇,在40℃条件下超声回流搅拌提取3次,时间为4h,过滤除杂后合并滤液,放入4℃条件下静置12小时,让其自然析出蜂蜡,过滤后真空抽滤得到精蜂胶。
·综述·2012年8月第19卷第22期蜂胶是蜜蜂从植物芽孢和树干处采集的树脂，混入蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡等形成的一种具有芳香味的黏性胶状固形物[1]。
蜂胶作为一种新型的保健食品与药品，已经成为保健食品研究领域的热点。
1免疫增强作用胡怡秀等[2]探讨北京蜂胶对正常小鼠免疫功能的影响，与阴性对照组比较，0.367、1.101g/（kg·bw）剂量能明显提高小鼠的迟发型变态反应的能力，1.101g/（kg·bw）剂量能明显提高小鼠抗体生成细胞数、半数溶血值，明显增强小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力，明显提高小鼠NK细胞活性；3个剂量对小鼠体重增长、胸腺体重比值、脾脏体重比值、ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力均无明显影响，可以看出蜂胶具有增强免疫力作用。
谭宗艳等[3]根据《保健食品检验与评价》方法检测了蜂胶对小鼠免疫免疫功能的影响，结果证明，蜂胶具有促进迟发型变态反应的作用；实验还证明，蜂胶有促进小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清功能的作用。
于晓红等[4]研究采用氢化可的松免疫功能低下小鼠模型（HC小鼠模型），证实蜂胶有增强免疫力的功能。
李淑华等[5]利用单克隆抗体技术检测实验小鼠药物处理前后T细胞总数及亚群变化，用MTT 法检测T细胞增殖；实验证实了蜂胶乙醇提取液能促进淋巴细胞增殖，增加T细胞总数并调整T细胞亚群紊乱，说明EEP对免疫功能低下小鼠细胞免疫功能具有免疫刺激和调节作用。
2抗氧化作用陈明之[6]研究了蜂胶清除自由基和抗油脂氧化作用的能力。
结果表明，蜂胶提取液清除-OH自由基的能力与总黄酮含量呈正相关；蜂胶具有良好的抗油脂氧化能力，其能力略高于同浓度的二丁基羟基甲苯（BHT）。
钟立人等[7]人通过DPPH法研究发现，蜂胶的各种溶剂提取物均有抗氧化作用。
曹炜等[8]通过抑制非细胞体系产生的超氧阴离子和羟基自由基研究蜂胶的抗氧化活性，实验证实，蜂胶能够抑制清除机体外产生的O2-和-OH自由基，以达到抗氧化作用。
