绕线虫培养条件的优化

土壤食细菌线虫的分离和富集培养方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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工厂化循环水养殖设备中的线虫分离和昆虫饵料生产技术研究在工厂化的循环水养殖设备中，线虫分离和昆虫饵料生产技术是关键的环节。

线虫是养殖过程中的一种重要饵料资源，可以为养殖动物提供高蛋白、高营养的食物。

而昆虫饵料则具有良好的营养成分和生长特性，能够作为鱼类、鸟类等养殖动物的理想饲料。

线虫分离是工厂化循环水养殖设备中的一项关键技术。

线虫主要通过发育和繁殖，以及适应环境得以生存和繁衍。

在养殖循环水中，随着时间的推移，线虫的数量会逐渐增加，若不进行分离则会出现过度繁殖和过高密度的情况，从而导致养殖环境的不稳定和养殖效果的下降。

因此，线虫分离技术是必要的。

目前，常用的线虫分离技术主要有筛选法、诱杀法和离心法。

筛选法是通过筛网或滤网将线虫从养殖水中分离出来，适用于较大尺寸和活动能力较强的线虫。

诱杀法是通过添加诱杀剂，诱使线虫聚集在诱杀剂上，从而方便分离。

离心法是利用离心机的离心力将线虫从养殖水中分离出来，适用于较大尺寸和较重的线虫。

与线虫分离相比，昆虫饵料的生产技术相对复杂。

昆虫饵料的生产过程分为培养昆虫和收获昆虫两个阶段。

在培养昆虫阶段，需要提供适宜的生长环境包括温度、湿度、光照等条件，以及适量的饲料。

常用的昆虫饲料包括麦麸、酒糟、菜渣等，这些饲料能够为昆虫提供充足的营养，促进其良好生长。

在收获昆虫阶段，需要进行昆虫分离和粉碎等处理，以获得适合鱼类和鸟类等养殖动物食用的昆虫饵料。

昆虫饵料的生产技术目前主要有传统手工生产和自动化生产两种方式。

传统手工生产方式较为简单，但劳动强度大、效率低，且生产过程中易受环境因素和人为因素的影响，难以控制质量和数量。

自动化生产方式是近年来兴起的一种生产方法，它利用机械设备和自动化控制技术，实现了昆虫饵料的规模化生产和品质控制。

自动化设备包括昆虫孵化箱、喂食装置、温湿度控制装置、收获装置等，通过合理的系统设计和生产流程，实现昆虫饵料的高效、稳定和可控生产。

工厂化循环水养殖设备中的线虫分离和昆虫饵料生产技术的研究具有重要的意义。

根结线虫活体染色条件的优化高英健;王绍辉;郑雨杭;张琴林;侯钰颖;李萌;李鸿信;方天一;吕伟兴;赵文超【摘要】[目的]为了提高根结线虫的成活率.[方法]以番茄和南方根结线虫为试验材料,对根结线虫二龄幼虫(J2)进行荧光标记,改进标记溶液浓度,进行染液浓度梯度和染色时间的筛选,确定最佳的染液浓度和染色时间,在保证线虫有效标记的前提下,不影响线虫的活力和致病性,深入了解线虫的行为.[结果]FITC:0.025 mg/mL、0.25％间苯二酚、15 mol/L章鱼胺盐酸盐缓冲液浓度下标记3h,线虫可以保持活力,入侵植株.[结论]该方法降低了染液浓度,缩短了染色时间,减少试剂用量,增加了线虫的存活率.【期刊名称】《北京农学院学报》【年(卷),期】2019(034)002【总页数】4页(P19-22)【关键词】异硫氰酸荧光素;间苯二酚;章鱼胺盐酸盐;根结线虫【作者】高英健;王绍辉;郑雨杭;张琴林;侯钰颖;李萌;李鸿信;方天一;吕伟兴;赵文超【作者单位】北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206【正文语种】中文【中图分类】S432根结线虫(Root-knot Nematode, RKN)是植物根系内寄生线虫，包括爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)，南方根结线虫(Meloidogyne incongnita)，花生根结线虫(Meloidogyne hapla Chitwood)和北方根结线虫(Meloidogyne hapla)等，第二阶段幼虫(J2s)从土壤中的卵孵化，必须找到合适的宿主，机械穿透植物根部，并迁移到维管束组织以完成其生命周期，给生产带来很大的损失[1]。

昆虫病原线虫培养及应用
线虫是一类世界性的昆虫病原体，它们可以损害不同种类的植物，引起重大农业损失。

研究线虫病原体对防治昆虫病害具有重要意义。

线虫培养是研究线虫病原体的基础，也是这些病原体保护、利用的前提。

线虫培养是指在一定条件下培养线虫病原体，使其在实验室里获得良好的生存能力和繁殖能力。

线虫培养通常分为两步：初始培养和维持培养。

初始培养时，首先挑选适当的线虫病原株，将其放置在适宜的实验条件下，如温度、湿度、光照、营养成分等，使其能够得到良好的生长发育；维持培养就是维持上述实验条件，不断地更换营养液，以保证线虫病原体的正常表现。

线虫培养有一定的风险，包括病原体传播、环境污染等，所以应在实验室采取较严格的安全措施，确保病原体不会外溢。

此外，还要遵守实验室安全规定，按照明确的流程使用相关仪器设备，以确保实验过程的安全有效。

开展线虫培养，可以帮助人们更好地了解昆虫病原体，有助于防治昆虫病害。

但培养的线虫病原体并不总是能完全模拟野外的自然环境，因此，实验室培养的情况下，需要结合外源信号，如植物素、病原体调控因子等，使线虫病原体能够正常发挥其病原生理效应，实现病原精准控制。

总之，线虫培养是研究昆虫病原体的基础，在调查病原体的病原组成和野外流行状况的基础上，应用线虫培养技术，可以实现对病原体的有效控制，从而降低昆虫给农作物带来的损失。

一种番茄根结线虫人工培养和保存的优化方法作者：刘丽颜世翠姚良同丁延芹杜秉海来源：《山东农业科学》2012年第11期摘要：根结线虫病在世界范围内对粮食蔬菜水果产量影响严重，其人工培养具有依赖寄主植物的局限性。

从山东省泰安市房村镇的日光温室中采集被根结线虫侵染严重的番茄根系，用机械捣碎-过筛喷淋法从根系样品中分离根结线虫和卵，以牡丹根腐病镰刀菌（Fusarium solani）制作二重培养基，分别接种根结线虫悬液与卵悬液培养。

结果显示，接种线虫悬液与卵悬液的平板分别在第三周与第四周线虫密度达到最高峰，培养基中虫口密度分别为2 300头/ml与2 000头/ml。

置培养平板于15℃条件下存放，5个月后培养基内仍有可供继代繁殖的活虫体。

该优化后的方法脱离了寄主植物束缚，简化了培养过程，具有高效繁殖和长期保存根结线虫的优点。

关键词：根结线虫；人工培养；牡丹根腐病镰刀菌；优化方法中图分类号：S436.412.2+9 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2012）11-0117-04An Optimized Artificial Culture and Preservation Methodfor Tomato Root-knot NematodesLiu Li， Yan ShiCui， Yao LiangTong， Ding YanQin， Du BingHai*（College of Life Science， Shandong Agricultural University /Shandong Key Laboratory ofAgricultural Microbiology， Taian 271018， China）Abstract Root-knot nematodes seriously decreased the production of crops， fruits and vegetables worldwide， and its artificial culture relied heavily on host plants. In this study， the tomato roots infected by root-knot nematodes were adopted from greenhouse of Fangcun Town，Taian City， Shandong Province， and the root-knot nematodes and eggs were separated by the method of mechanical beating-sifting spray and inoculated to double medium of Fusarium solani. The density of root-knot nematodes was about 2 300 per mini liter medium when inoculated with root-knot nematodes for three weeks and about 2 000 when inoculated with eggs for four weeks. Live root-knot nematodes could still be obtained after 5 months， if the culture plate was preserved at 15℃. This optimized method was independent of host plants， processed more simply， could obtain large quantity of root-knot nematodes in short time and preserve for long time.Key words Root-knot nematode； Artificial culture； Fusarium solani； Optimized method根结线虫（Meloidogyne spp）是一类广泛分布在世界各地的植物根系定居性内寄生线虫[1]。

杀松材线虫细菌的分离、鉴定及其培养条件研究王方; 王林松; 马怡; 关腾腾; 张廷婷; 李荣贵【期刊名称】《《微生物学杂志》》【年(卷),期】2019(039)003【总页数】7页(P22-28)【关键词】松材线虫; 细菌; 杀线虫活性; 鉴定; 培养条件【作者】王方; 王林松; 马怡; 关腾腾; 张廷婷; 李荣贵【作者单位】青岛大学生命科学学院山东青岛266071【正文语种】中文【中图分类】Q939.96松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)是一种常见的松树寄生虫，通过松墨天牛等媒介昆虫传播，进而引发松材线虫病，也称松树萎蔫病(Pine wilt disease, PDA)[1]。

寄主主要包括黑松、赤松、马尾松等松属植物。

被松材线虫感染的松树，针叶呈黄褐色或红褐色，整株干枯死亡[2]。

松材线虫病在墨西哥、美国、加拿大、日本、韩国等国均有发生[3-4]。

1982年在我国南京市中山陵首次被发现，随后在山东、安徽、广东、浙江等地形成几个疾病中心，并向四周扩散，使这些省的局部地区发生并流行成灾，导致大批松树枯死，给安徽、浙江两省带来的经济损失高达5亿～7亿元[5]。

由于松材线虫的毁灭性危害，该虫已被列为对内、对外的重要检疫对象。

松萎蔫病的发生与松材线虫及其媒介昆虫都有十分紧密的联系。

因此，防治松材线虫对控制松萎蔫病起着非常重要的作用[6]。

目前，对松萎蔫病的防治主要采用化学防治法，即采用高效的化学杀虫剂，主要有氨基甲酸酯类(如杀线威、涕天威、克百威等)、有机磷酸酯类(如噻唑磷、灭线磷、克线威等)，线虫容易对这些广谱性合成药物产生抗药性，并且这些杀虫剂多为高毒、剧毒或是高残留的农药，给人类、环境、微生物、水资源等造成严重污染，所以化学杀虫剂的应用受到了很大的限制[7-8]。

随着人们环保意识的提高，从自然界中寻找安全、高效、低毒、环境友好的新型生物杀虫剂已经成为研究热点。

微生物是生物资源的重要组成部分，是很多活性物质的天然宝库。

李美茹，杨烁烁，张洪琛，等．红线虫抗菌肽提取条件的工艺优化［Ｊ］．江苏农业科学，２０２０，４８（１７）：１９１－１９４．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２０．１７．０３８红线虫抗菌肽提取条件的工艺优化李美茹，杨烁烁，张洪琛，张天悦，吴兴华，张会会（廊坊师范学院生命科学学院／河北省动物多样性重点实验室，河北廊坊０６５０００） 摘要：以红线虫（Ｌｉｍｎｏｄｒｉｌｕｓｈｏｆｆｍｅｉｓｔｅｒｉ）为材料，采用０．０１ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ－２Ｎａ的０．９％ＮａＣｌ溶液为浸提液提取有抑菌活性的多肽，以料液比、时间、ｐＨ值对红线虫抗菌肽提取条件进行３因素３水平正交试验优化提取工艺，并对处理结果进行多重比较。

试验结果表明，红线虫抗菌肽对大肠杆菌没有抑菌效果，对金黄色葡萄球菌有一定抑制效果；影响浸提效果的主要因素为料液比，次要因素为浸提时间和ｐＨ值，提取的最优处理组合：料液比１ｇ∶１５ｍＬ，浸提时间８ｈ，浸提液ｐＨ值为７．２。

关键词：红线虫；抗菌肽；抑菌效果；大肠杆菌；金黄色葡萄球菌 中图分类号：Ｑ５１６；Ｓ１８８ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０２０）１７－０１９１－０３收稿日期：２０１９－１０－１０基金项目：廊坊师范学院校级项目（编号：ＬＳＬＹ２０１４０４）。

作者简介：李美茹（１９７４—），女，河北秦皇岛人，硕士，副教授，从事多肽分离纯化研究。

Ｅ－ｍａｌｉ：ｌｍｒｄｙｘ＠１６３．ｃｏｍ。

抗菌肽（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｅｐｔｉｄｅｓ）是许多生物自身合成的小分子碱性多肽［１］，最早被诱导并纯化的抗菌肽是惜古比天蚕（Ｈｙａｌｏｐｈｏｒａｃｅｒｏｐｉａ）产生的昆虫抗菌肽———天蚕素［２］，昆虫抗菌肽因其种类和品种繁多、分布广泛而被研究得最多［３］。

抗菌肽具有很多特性，如杀菌谱广、耐热［４－５］，对真菌、细菌、病毒有抑杀作用，对病原虫以及异常增殖细胞有杀伤作用［６］，不易产生耐药性，可以中和内毒素，不会导致脓毒症等特性［７］。

线虫生长培养基（Nematode Growth Medium，NGM）的配制1）称取蛋白胨（peptone）2.5g，琼脂20g，NaCl 3g，置于洁净2000mL玻璃三角瓶，加入蒸馏水975ml，120℃高压蒸汽灭菌30min，之后置于55℃水浴锅中冷却。

2）依次加入5mg/ml胆固醇（乙醇溶解，不灭菌）1ml，高压灭菌的1M MgSO4，1M CaCl2，1M KPO4缓冲液（pH6.0）各1ml，摇匀即可。

1M KPO4缓冲液的配置方法为：称取108.3g KH2PO4 和35.6g K2HPO4，溶于1000mL蒸馏水中，调节pH值到6.0即可。

1.3 倒板1）倒平板在无菌条件下进行，应保证倒入每个无菌培养皿（直径6cm）的培养基量基本一致，否则平板的厚薄相差太大将会影响观察。

也可以用移液器分装8-9ml到每一个培养皿中，保证每个平板厚度基本一致。

2）将倒好的平板在室温下放置1~2天，一方面可以检验是否有污染，一方面让水汽晾干，之后可倒置于4℃保存备用。

1.3 菌液测试菌液测试：因为OP50菌株是无抗性的，所以在大批量铺菌前需进行菌液测试的。

1）将扩增好的OP50菌液摇匀，用移液器吸取约20uL至NGM平板中，用三角玻棒推开，每瓶菌液测试4-6个平板。

2）将铺好的平板倒置，于37℃过夜培养。

整个过程严格无菌操作！3）如果确认无污染后，在超净台中将菌液分装到无菌离心管中，约15mL/管，4℃保存。

4）若测试板上长出大量杂菌（菌落突起，色泽亮丽），需重新摇菌。

1.4铺菌可以用两种方法给NGM平布铺菌：涂板法和滴板法。

涂板法:将菌液倒入无菌一次性培养皿（直径6cm）中，用三角玻棒蘸取菌液，铺在平板上，蘸一次铺一个。

铺10个培养皿，三角玻棒须蘸上酒精灼烧一次，防止污染培养皿里的母液。

注意三角玻棒不样碰到培养皿的内壁，整个过程无菌操作。

滴板法：准备高压灭菌后的无菌玻璃吸管，在酒精灯上来回移动灼烧后稍晾凉，从分装的菌液中直接吸取菌液，悬空滴在NGM平板的中央，可滴1-3滴，这种方法可以避免使用三角玻棒接触培养基，污染的概率比较小，缺点是这样得到的菌苔边缘非常厚。