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埃博拉出血热防控方案(第三版)【法规类别】传染病防治【发文字号】国卫发明电[2014]56号【发布部门】国家卫生和计划生育委员会【发布日期】2014.08.27【实施日期】2014.08.27【时效性】现行有效【效力级别】XE0303埃博拉出血热防控方案（第三版）（国家卫生和计划生育委员会国卫发明电[2014]56号 2014年8月27日）埃博拉出血热是由埃博拉病毒引起的一种急性出血性传染病。
主要通过接触病人或感染动物的血液、体液、分泌物和排泄物及其污染物等而感染，临床表现主要为突起发热、咄血和多脏器损害。
埃博拉出血热病死率可高达50%-9O0/0。
本病于1976年在非洲首次发现，主要在苏丹、刚果民主共和国、科特迪瓦、加蓬、南非、乌干达、刚果、几内亚t 利比里亚、塞拉利昂、尼日利亚等非洲国家流行。
目前尚无预防埃博拉出血热的疫苗，及时发现、诊断和严格隔离控制病人、密切接触者隔离医学观察、加强个人防护与感染控制等是防控埃博拉出血热的关键措施。
一、疾病概述（一）病原学。
埃博拉病毒属丝状病毒科，为不分节段的单股负链RNA病毒。
病毒呈长丝状体，可呈杆状、丝状、“L” 形等多种形态：毒粒长度平均1000nm，直径约100nm。
病毒有脂质包膜，包膜上有呈刷状排列的突起，主要由病毒糖蛋白组成。
埃博拉病毒基因组是不分节段的负链RNA，大小为18，9kb，编码7个结构蛋白和1个非结构蛋白。
埃博拉病毒可在人、猴、豚鼠等哺乳类动物细胞中增殖，对Ⅴ0r。
和Hela等细胞敏感。
埃博拉病毒可分为扎伊尔型、苏丹型、塔伊森林型、莱斯顿型和本迪布焦型。
除莱斯顿型对人不致病外，其余四型感染后均可导致人发病。
不同型病毒基因组核苷酸构成差异较大，但同一型的病毒基因组相对稳定。
埃博拉病毒对热有中度抵抗力，在室温及4℃ 存放1个月后，感染性无明显变化，60℃ 灭活病毒需要1小时，100℃5分钟即可灭活。
该病毒对紫外线、Υ射线、甲醛、次氯酸、酚类等消毒剂和脂溶剂敏感。
附件2埃博拉出血热实验室检测方案（第三版）埃博拉出血热是一种严重的急性传染病，可发生人-人传播和院内感染,病死率高。
直接接触传播是本病最主要的传播途径。
可以通过接触病人或被感染动物的体液、分泌物、排泄物及其污染物等而感染。
埃博拉出血热的早期临床表现和其他一些病毒性出血热相似，需要通过实验室进行确诊。
在目前阶段，以对病人血液标本检测为主。
为及时检测和确认埃博拉出血热病例，规范实验室检测程序，提高检测质量，为指导病例的管理和出院提供依据，特制定本方案。
一、检测对象包括留观病例、疑似病例和确诊病例，病例定义参见国家卫生计生委制定的《埃博拉出血热相关病例诊断和处置路径》。
二、标本采集、保存和运输（一）标本采集用分离胶无菌真空促凝管采集静脉血，每管3mL，标记后4℃保存，填写标本采集登记表（附表1）。
留观病例、疑似病例采集发病3日后静脉血2管，送具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行埃博拉病毒检测；确诊病例采集恢复期血标本，送国家疾控中心病毒病所进行检测。
（二）标本保存、运送未分离血清的全血标本应4℃保存，并尽快送具有埃博拉出血热检测资质的实验室分离血清、检测；血清标本长期保存应置于-70℃或以下冰箱， 1周内保存可置-20℃冰箱。
标本运输应按照相关生物安全规定，采取A类包装，低温冷藏运输，避免反复冻融（附件1）。
三、检测内容埃博拉病毒核酸检测、埃博拉病毒抗原检测和IgM、IgG抗体检测。
四、实验室检测方法（一）病原学检测1．核酸检测：是目前早期诊断、早期发现埃博拉出血热病例的主要检测方法。
为提高检测的敏感性和特异性，用实时荧光PCR 方法针对埃博拉病毒2个不同的基因进行检测，在病例筛查时，任一基因检测阳性均可判为埃博拉病毒阳性；在确诊病例出院时，需针对2个基因的检测同时阴性，方可判定为阴性（附件2）。
传统RT-PCR因易出现污染，较少使用，但可以获得病毒基因序列。
发病后3天内，患者血标本中埃博拉病毒核酸检出率低，检测阴性不能排除埃博拉病毒感染，应结合病例的流行病学史和临床表现进行综合判断。
埃博拉出血热实验室检测方案二一想起埃博拉出血热，那种病毒带来的恐惧感就涌上心头。
病毒传播迅速，致死率高，实验室检测成了关键环节。
下面，我就结合自己多年的实验室检测经验，为大家详细讲解一下埃博拉出血热实验室检测方案二。
1.实验室准备实验室要保持干净整洁，避免交叉污染。
实验室内的设备和器材要定期消毒，特别是用于样本处理和检测的器材。
实验室内的空气流通要良好，避免空气污染。
2.实验室人员防护实验室人员需穿戴防护服、防护眼镜、口罩、手套等个人防护装备。
在操作过程中，避免直接接触样本，减少感染风险。
实验室人员要定期进行体检，确保身体健康。
我们进入实验室检测环节：1.样本收集样本应在发病早期收集，最好在症状出现后的48小时内。
收集样本时，要避免污染，确保样本的完整性和可靠性。
常见的样本包括血液、唾液、尿液、粪便等。
2.样本处理样本在实验室中要进行编号，确保样本的追溯性。
样本要进行灭活处理，以减少病毒传播风险。
样本在处理过程中，要确保生物安全，避免交叉污染。
3.检测方法实验室检测方法主要包括病毒核酸检测、血清学检测和病原体分离培养。
病毒核酸检测是快速检测埃博拉出血热的方法，具有较高的灵敏度和特异性。
血清学检测是通过检测抗体来判断病毒感染情况，适用于病毒感染的晚期。
病原体分离培养是检测埃博拉出血热病毒的“金标准”，但操作复杂，周期较长。
4.检测结果分析检测结果要及时进行分析，判断病毒感染情况。
对于阳性样本，要进一步进行病毒分型，了解病毒变异情况。
检测结果要及时报告给相关部门，为疫情防控提供数据支持。
实验室检测过程中的注意事项：1.实验室人员要严格遵守操作规程，确保检测结果的准确性。
2.实验室要定期进行质量控制，确保检测方法的可靠性。
3.实验室要与其他实验室保持沟通，共享检测经验和数据。
4.实验室要关注国内外疫情动态，及时调整检测策略。
注意事项：1.防护不到位注意事项：一想到实验室防护，我就想到那层层的防护服和手套。
埃博拉出血热实验室检测方案(第三版)
埃博拉出血热实验室检测计划(第3版)
埃博拉出血热是一种严重的急性传染病，可导致人传人和医院感染，病死率高。
直接接触传播是该疾病的主要传播途径。
可通过接触患者或受感染动物的体液、分泌物、排泄物和污染物而被感染。
埃博拉出血热的早期临床表现与其他病毒性出血热相似，需要实验室确认。
在现阶段，病人的血液样本主要是测试。
为了及时发现和确认埃博拉出血热病例，规范实验室检测程序，提高检测质量，为指导病例管理和出院提供依据，特制定本预案。
一、检测对象
包括观察病例、疑似病例和确诊病例。
病例定义见国家卫生计生委制定的《埃博拉出血热相关病例诊疗路径》。
二、标本采集、保存和运输(一)标本采集
用分离凝胶的无菌真空凝固加速管采集静脉血，每管3mL，标记后4℃保存，填写标本采集登记表(表1)。
发病3天后采集两个静脉血液管用于观察病例和疑似病例，并送至具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行埃博拉病毒检测。
从确诊病例中收集恢复期血液样本，并送往国家疾病控制和预防中心进行检测。
(2)标本的保存和运输
未分离血清的全血样品应在4℃保存，并尽快送至具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行分离血清和检测。
血清样本应长期保存在-70℃或以下的冰箱中，一周内可保存-XXXX年。
历史上最严重的埃
博拉出血热疫情发生在几内亚、利比里亚和塞拉利昂等西非国家。
为指导医疗机构和疾病预防控制机构工作人员采集、包装和运输埃博拉出血热相关标本，确保生物安全，特制定本指南。
一、生物安全保护
1.所有样本的采集或处理应符合《医院感染管理标准》和《病原微生物实验室生物安全管理规定》等相关生物安全规定。
在标准预防的基础上，采取喷雾和接触隔离预防措施。
2、采集样品时，应严格按照BSL-3实验室规定做好个人防护。
应穿戴医用防护服、能覆盖口鼻的医用防护面罩(N95)、双层防护手套、护目镜、防护面罩、鞋套或胶靴。
二、标本采集(一)采集时间
发病后2周内可在患者血样中检测到病毒核酸和抗原，发病后3-10天样品中核酸和抗原的检出率高。
在疾病发作后的几个月内，可以在特定的分泌物中连续检测到病毒。
特异性IgM抗体可以在疾病发作后最早2天从患者血清中检测到，并且IgM抗体可以维持几个月。
在疾病发作后7-10天可以检测到IgG抗体，并且回收的IgG抗体可以保持几年。
发病后10-14天标本中病毒特异性抗体的检出率较高。
因此，应根据不同的检测目的确定采样时间，并在埃博拉病毒感染发病后3天采集血样用于观察病例和疑似病例。
(2)标本采集
1.采血点应配备手套、防护服、防护口罩等。
除了用于常规病人护理的材料之外，还有洗手设备和装有消毒剂的桶。
2.采集埃博拉出血热患者的血样会给医务人员带来风险，应由受过生物安全保护培训的人员进行。
采血时应该有两个人在场。
3.用分离凝胶的无菌真空促凝管采集静脉血，每管3mL，采集后用密封膜密封管口，将密封管清晰标记后放入自密封袋或50mL离心管中，自密封袋或离心管的外表面清晰标记，4℃保存，填写标本采集登记表。
4.发病3天后，应采集两个静脉血液管用于观察病例和疑似病例，并送至具有埃博拉出血热检测资质的指定实验室进行埃博拉病毒检测。
5.对确诊病例恢复期的血液样本进行采集，包括但不限于出院前的2份样本，每份2管，采集时间间隔不少于48小时。
血样应送至国家疾病预防控制中心进行埃博拉病毒检测，以指导病例管理。
四、标本包装、运输
(1)所有疑似埃博拉病毒相关的感染性标本应按照《病原微生物实验室生物安全管理规定》和《人与人之间感染病原微生物名录》等相关规定进行甲类包装运输，符合UN2814的要求。
按照三重包装系统包装:第一层包装为自密封袋或50毫升离心管；第二层包装是一个防水防漏的容器；第三层由运输包组成。
样品应用吸水纸包裹，并固定在防漏自密封袋或离心管中。
然后将其放入坚固、防水、防漏的第二层安全壳中，用吸水纸等填充物固定内有样品的自密封袋或离心管，然后将其放入第三层包装中。
安全壳容器和外包装应符合国际航空运输协会危险货物法规包装系统650。
(2)填写两份样本描述，说明样本的详细信息、发送者和接收者的地
址，将样本描述密封在塑料袋中，用胶带粘贴在外包装的内外，并保存一份文件以供跟踪，以便实验室操作人员检查样本数量。
(3)样品运输前，应按照相关生物安全法规和样品接收单位的生物安全管理部门办理相关手续，运输日期确定后应立即通知接收单位运输时间和方式。
V.样品的保存和销毁
(1)埃博拉病毒阳性血液标本应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》等相关生物安全法规进行保存，并实行“双锁”和“审批”采样管理。
(2)消除埃博拉病毒感染后，应将埃博拉病毒阴性的血液样本转移至其他血清库保存或销毁。
(3)当所有传染性血清被破坏时，应在生物安全柜中自然解冻，在60℃灭活1小时，然后在生物安全柜中打开样本管，浸泡在有效消毒剂中，然后在高压下灭活。
(4)所有销毁的样品应在相应的数据库列表中标明，并记录销毁的时间和操作人员。
阴性样品的销毁记录应保存1年以上，阳性样品的销毁记录应保存5年以上。
附件2
埃博拉病毒核酸的检测方法
目的
埃博拉病毒核酸的提取和聚合酶链反应检测。
2适用范围
适用于检测血液样本中的埃博拉病毒核酸。
实验前准备
检查测试样本，包括患者姓名、编号和测试项目。
4测试设备和材料
实时定量核酸扩增检测器、常规核酸扩增检测器、核酸提取试剂盒、一步逆转录聚合酶链反应扩增试剂盒、一步实时定量逆转录聚合酶链反应扩增试剂盒等。
5实验步骤5.1实验准备
5.1.1提取埃博拉病毒核糖核酸需要在BSL-3实验室进行。
5.1.2进入实验现场前，应事先准备好所需的试剂和样品。
指定一个实验地点。
5.2核糖核酸提取
该试剂盒用于从血清样品中提取病毒核酸(如果使用其他试剂盒或方法提取病毒核酸，请参考相应的试剂盒说明或实验室操作手册)。
5.2.1将560μl含有载体核糖核酸的A VL缓冲液(核酸提取裂解物)吸入1.5毫升离心管中。
5.2.2向上述液体中加入140μl样品，盖上盖子，轻轻倒置混合10次，室温下孵育10分钟，简单离心，使离心管顶部的液体降至底部。
5.2.3向样品中加入560μL 96 ~ 100%乙醇，轻轻倒置混合10次，然后简单离心。
5.2.4小心地将630μl液体添加到QIAamp柱中，将其盖好，以8000rpm/min离心1分钟，丢弃收集管，并将柱放置在新的2ml收集管上。
5.2.5打开QIAamp色谱柱的盖子，重复步骤5.2.4，直到所有样品都被离心。
5.2.6打开盖子，向柱中加入500μl AW1缓冲液，盖上盖子，以8000rpm/min的速度离心1分钟，丢弃收集管，并将柱放在新的2ml收集管上。
5.2.7打开盖子，加入500μlAW2缓冲液，盖上盖子，以14000rpm/min 的速度离心3分钟。
5.2.8将色谱柱放在一个新的2ml收集管上，并将其空放1分钟。
5.2.9将色谱柱放在新的1.5毫升离心管上，加入50微升A VE洗脱缓冲液，在室温下孵育1分钟，以8000转/分钟的速度离心1分钟。
离心液是病毒核糖核酸，可在-70℃以下立即检测或储存。
5.3实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测埃博拉病毒核酸
为了提高埃博拉病毒核酸检测的灵敏度和特异性，当采用实时荧光定量聚合酶链反应方法检测标本时，应同时检测埃博拉病毒的两种不同基因，可采用平行单PCR或多重PCR方法进行检测。
5.3.1单一聚合酶链反应参考引物和探针引物/探针
顺序
用于检测埃博拉病毒核蛋白的引物和探针
西勃龙-福西勃龙
CGCCGAGTCTCACTGAATCTG
荧光标签
用于检测埃博拉病毒糖蛋白的BHQ-1引物和探针
ZEBOGP-F
TGGGCTGAAAAYTGCTACAATC
FAM/BHQ-1
5.3.2实时荧光定量反转录-聚合酶链反应扩增实时荧光定量反转录-聚合酶链反应扩增反应配置系统:
RNA模板5μl，酶(25x)1μl，缓冲液12.5μl，引物(10μM)各1μl，探针(10μM)0.5μl，加水至总体积25μl
推荐的反应条件为50℃30分钟，95℃10分钟，95℃15秒，60℃45秒40个循环。
5.3.3结果的判断
以定量荧光聚合酶链反应前3-15个周期的荧光信号为背景信号，以背景信号标准差的10倍为荧光阈值，以样品扩增产生的荧光信号达到荧光阈值时对应的周期数为周期阈值(Ct值)，Ct。
