细胞培养基及其添加物

mem培养基MEM培养基摘要：MEM（Minimal Essential Medium）是一种常用的细胞培养基，被广泛应用于生物医学研究领域。

本文将介绍MEM的组成成分、配制方法、应用领域以及常见的注意事项，以帮助读者更好地了解和使用MEM培养基。

1. 引言细胞培养是生物医学研究的重要手段之一。

为了保证细胞正常生长和增殖，在进行细胞培养时，需要提供适当的培养基。

MEM培养基作为一种全面适用的基础培养基，被广泛应用于各个领域的细胞培养工作中。

2. MEM培养基的组成成分MEM培养基由多种成分组成，包括无机盐、氨基酸、维生素、能源源和其他添加物。

其中无机盐的主要成分有钾、钙、镁、磷等。

氨基酸是细胞合成蛋白质的基本组成部分，维生素则是细胞正常代谢所需的营养物质。

能源源包括葡萄糖等糖类，提供细胞生长所需的能量。

除此之外，MEM培养基还添加了胎牛血清（FBS）等血清成分，来提供细胞所需的生长因子和其他重要成分。

3. MEM培养基的配制方法MEM培养基的配制可以通过两种方式进行：一种是购买现成的MEM培养基粉末，按照说明书配制；另一种是自行配制。

自行配制时，可以根据需要将相应的成分按照一定比例加入无菌蒸馏水中，然后通过无菌过滤器过滤，得到最终的MEM培养基。

4. MEM培养基的应用领域MEM培养基被广泛应用于细胞生物学的各个领域，包括细胞培养、细胞增殖、细胞扩增、病毒培养等。

它为细胞提供了适宜的环境，使得细胞能够在培养皿中正常生长和增殖，并可用来进行细胞系的维护和传代。

5. MEM培养基的注意事项在使用MEM培养基时，需要注意以下几点：- 必须保持培养基的无菌性，在制备和使用过程中严格遵循无菌操作规范；- 使用培养基前，应将其保存在4℃下，避免暴露于高温和阳光直射下；- 在配制培养基时，按照比例准确称量各个成分，并充分溶解均匀；- 培养基中的胎牛血清应选用优质的血清，并在使用前进行热灭菌处理。

另外，一些特殊细胞株（如原代细胞）也可以选择使用无血清培养基；- 培养基的pH值需要调整到适宜范围内（通常为7.2-7.4），可以使用缓冲液进行调节。

gibco多聚-d-赖氨酸用法
Gibco多聚D赖氨酸是一种生物化学试剂，用于生命科学研究中的细胞培养和实验。

具体用法如下：1. 培养基中的添加物：可以将Gibco多聚D赖氨酸添加到细胞培养基中，作为细胞的营养物来源之一。

通常的用量是每升培养基添加10-50 mg的多聚D赖氨酸。

2. 包被培养皿表面：可以在培养皿表面预先涂覆Gibco多聚D赖氨酸，从而提供细胞附着的基质。

在培养皿中加入适量的多聚D赖氨酸水溶液，让其在表面均匀涂敷，并在室温下干燥。

3. 组织工程和支架材料：Gibco多聚D赖氨酸也可以用于组织工程和支架材料的制备。

可以将多聚D赖氨酸加入到生物降解材料中，用于细胞生长和组织修复。

需要注意的是，具体的用法可能因研究目的、细胞类型和实验条件而有所不同。

在使用Gibco 多聚D赖氨酸前，最好参考相关的文献或咨询厂家提供的技术手册，以获取更详细的用法指导。

干细胞相关基础培养基和添加剂
干细胞是一种具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞类型，对于干细胞的培养基和添加剂的选择对于干细胞的生长、增殖和分化起着至关重要的作用。

基础培养基通常包括培养基基础液和必需的添加剂，以提供细胞所需的营养物质和生长因子。

常用的干细胞培养基基础液包括DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）、RPMI（Roswell Park Memorial Institute）1640、F12（Ham's F-12）等。

这些基础培养基液提供了细胞所需的营养物质，如氨基酸、维生素、糖类等，并且含有适当的缓冲剂来维持培养液的pH值。

在基础培养基中添加的生长因子和添加剂也起着至关重要的作用。

常见的添加剂包括胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）、人血清（Human Serum，HS）、胰岛素、转铁蛋白、EGF（表皮生长因子）、FGF（成纤维细胞生长因子）等。

这些添加剂可以提供细胞生长和增殖所需的营养物质和生长因子，促进干细胞的自我更新和增殖。

此外，针对不同类型的干细胞，还可以根据需要添加特定的生
长因子和细胞因子，以促进干细胞的特定分化方向。

例如，对于造血干细胞，可以添加血清素、Thrombopoietin等因子来促进其向血细胞系的分化。

总之，选择适合的基础培养基和添加剂对于干细胞的培养和研究至关重要，科学合理的培养条件可以有效地维持干细胞的稳定生长状态并促进其分化，为干细胞研究和应用提供坚实的基础。

DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分DMEM(H) 细胞培养基（粉末型）成分DMEM(L) 细胞培养基（粉末型）成分【DMEM专题】DMEM细胞培养基（二）配制方法及注意事项配制方法：（1）在一个尽可能接近总体积的容器中加入比预期培养基总体积少5％的双蒸水。

（2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基，轻轻搅拌，不要加热。

（3）水洗包装袋的内部，转移全部的痕量干粉到容器内。

（4）加NaHCO3到培养基中。

（5）用双蒸水稀释到想要的体积，搅拌溶解。

注意不要过分搅拌。

（6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值，由于pH值在过滤时会上升0.1到0.3，因而调节pH值使它比最终想要的pH值低0. 2到0.3。

培养基在过滤前要保持密封。

配制培养基要注意以下问题：●认真阅读说明书。

说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHC O3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。

这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。

●配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。

●配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。

●所用器皿应严格消毒。

●配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。

●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。

DMEM各种成分都有什么作用一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。

（1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。

（2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。

除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。

谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。

细胞培养基的基本要求体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。

营养成分：1.氨基酸：所有细胞都需要12 种必须氨基酸：缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱氨酸。

2.单糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。

细胞对葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖最低。

体外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。

3.维生素：生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素B12 都是培养基常有的成分。

4.无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素，还需要微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。

5.促生长因子及激素：o 各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态（分化或未分化）具有十分重要的作用。

有些激素对许多细胞生长有促生长作用，如胰岛素，它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸。

有些激素对某一类细胞有明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细胞的生长，泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。

6.渗透压：细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。

人血浆渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。

鼠细胞渗透压在320mOsm/kg左右。

对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260～320mOsm/kg的范围都适宜。

7.pH、气体：是细胞生存的必需条件之一，所需气体主要是氧和二氧化碳。

氧参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种成分。

一些细胞在缺氧情况下，借糖酵解也可获取能量，但多数细胞缺氧不能生存。

在开放培养时，一般置细胞于95％空气加5％二氧化碳的混合气体环境中培养。

二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞所需成分，它主要与维持培养基的pH 有直接关系。

动物细胞大多数需要轻微的碱性条件，pH值约在7.2 ～7.4 ，在细胞生长过程中，随细胞数量的增多和代谢活动的加强，二氧化碳不断被释放，培养液变酸，pH 值发生变化。

sciencell内皮细胞培养基说明书Sciencell内皮细胞培养基是一种特异性和高效性培养内皮细胞的基质，能够有效地维持和生长内皮细胞，并促进它们的分化和功能发挥。

以下是Sciencell内皮细胞培养基的详细说明：一、培养基配方Sciencell内皮细胞培养基主要包含以下成分：1. DMEM/F12培养基2. 10% FBS3. 内皮细胞生长因子（EGF、VEGF、FGF、呋喃丙酸等）4. 抗生素/抗菌素（penicillin和streptomycin）5. L-酪氨酸、谷氨酰胺和葡萄糖等。

二、适用范围Sciencell内皮细胞培养基适用于以下内皮细胞的培养：1. 人类内皮细胞（HEC、HUAEC、HPMEC等）2. 小鼠内皮细胞（MEC、MAEC等）3. 大鼠内皮细胞（REPEC、RAEC等）4. 其他动物内皮细胞。

三、培养条件1. 培养温度：37℃2. CO2浓度：5%3. 外源性添加物：Sciencell内皮细胞培养基中已经包含了必要的营养因子、生长因子和抗生素/抗菌素，不需要额外添加外源性添加物。

4. 培养密度：内皮细胞的培养密度应当根据不同细胞类型和研究需要适当调整，一般为1-3x10^4 cells/cm2。

5. 培养时间：培养时间应当根据不同细胞类型和实验需要适当调整，一般为4-7天。

四、保存条件Sciencell内皮细胞培养基应当在4℃低温保存，避免阳光直射和冻结。

保存期长达6个月，但是在保质期内使用会更好。

打开后，建议在一个月内使用完毕。

五、使用说明1. 移液操作：使用Sciencell内皮细胞培养基时应当采用无菌条件下的移液操作，并避免出现气泡和异物。

2. 细胞接种：将内皮细胞接种到预先涂覆的细胞培养底物上，并根据需要进行细胞划分和培养状态监测。

3. 细胞增殖：使用Sciencell内皮细胞培养基可促进内皮细胞的增殖和生长，建议每3-4天更换新的培养基。

4. 细胞检测：在细胞培养期间需监测细胞的培养状态、生长状态和增殖情况。

DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。

一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。

最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。

而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。

MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。

Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。

选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。

例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。

F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。

在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。

对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。

MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。

这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。

原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。

实际操作中并非如此简单。

显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。

一种成纤维细胞培养基及其应用一、引言成纤维细胞是一种重要的细胞类型，其在组织修复和再生过程中起着关键的作用。

成纤维细胞培养基是一种为成纤维细胞提供适宜生长环境的培养基。

本文将介绍一种常用的成纤维细胞培养基及其应用。

二、成纤维细胞培养基的组成一种常用的成纤维细胞培养基的基本组成包括培养基基础液和一系列的添加剂。

培养基基础液通常由DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）和FBS（Fetal Bovine Serum）组成，提供了细胞所需的营养物质和生长因子。

添加剂包括抗生素、胰岛素、转铁蛋白、胆固醇等，可以提供细胞生长所需的辅助物质。

三、成纤维细胞培养基的制备方法1. 将DMEM和FBS按照一定比例混合，得到培养基基础液。

2. 将培养基基础液加热至37摄氏度，然后加入适量的抗生素和其他添加剂，充分混合。

3. 将混合液过滤消毒，得到成纤维细胞培养基。

四、成纤维细胞培养基的应用成纤维细胞培养基广泛应用于生物医学研究、组织工程和药物筛选等领域。

1. 生物医学研究：成纤维细胞是体内最常见的细胞类型之一，其在炎症反应、创伤修复和疾病发展等过程中起着重要作用。

通过使用成纤维细胞培养基，研究人员可以对成纤维细胞进行体外实验，深入了解其生物学特性和功能，以及其与其他细胞类型的相互作用。

2. 组织工程：成纤维细胞培养基可用于培养和扩增成纤维细胞，为构建组织工程材料提供细胞来源。

成纤维细胞在组织工程中可以作为种子细胞，与生物支架相结合，用于修复和再生受损组织。

3. 药物筛选：许多疾病的发生和发展与成纤维细胞的功能紊乱密切相关。

通过使用成纤维细胞培养基，可以建立疾病模型，用于评估潜在药物的疗效和毒性。

这为药物研发提供了重要的工具和平台。

五、成纤维细胞培养基的优势和挑战1. 优势：成纤维细胞培养基提供了适宜的生长环境，可以促进成纤维细胞的增殖和细胞周期的稳定。

同时，培养基的成分可以根据具体需求进行调整和优化，以满足不同实验的要求。

培养细胞所需的几种主要液体的配制方法：1．DMEM维持培养基DMEM基础培养基95ml 95ml胎牛血清5ml谷氨酰胺液2ml含有DMEM基础培养基95ml，胎牛血清5ml，谷氨酰胺液2ml。

混合均匀，密封后与4摄氏度保存。

2．D-hank’sD-hank’s干粉9.5g(1袋)NaHCO3 0.35g超纯水1000ml取D-hank’s干粉9.5g加入超纯水500ml搅拌均匀，加入0.35g的NaHCO3搅拌至完全溶解，倒入1000ml容量瓶中，用1mol/l的HCL或者NaOH 溶液调整溶液的PH值为7.2,最后经过∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装后4摄氏度保存.3. DMEM完全培养基85ml,DMEM基础培养液85ml,, l-谷氨酰胺溶液, 2ml1000u/ml双抗液1ml胎牛血清15ml取DMEM基础培养基85ml, 胎牛血清15ml,l -谷氨酰胺溶液2ml,混合均匀,密封于4摄氏度保存.4. DMEM细胞基础培养基DMEM干粉13.4g(1袋)Na2HCO3 3.7g超纯水1000 ml取DMEM干粉1袋(13.4g)倒入烧杯中,取800ml 超纯水溶解培养基干粉,搅拌均匀,然后向溶液中加入3.7g的Na2HCO3,搅拌至完全溶解后倾入1000 ml容量瓶中,再用1mol/l 的HCL 或者1mol/l的NaOH溶液调整溶液的PH值为7.2,混合均匀后,定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装4摄氏度保存.5. l-谷氨酰胺溶液l-谷氨酰胺 2.92gDMEM基础培养基100ml称取l-谷氨酰胺干粉2.92g于烧杯中,加80 ml超纯水于烧杯中搅拌溶解,用100ml容量瓶定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中于-20摄氏度保存.使用添加量是1ml/50ml,使用浓度是2mmol/l.6.1000u/ml的双抗液青霉素(注射用) 80万单位(1瓶)链霉素(注射用) 0.8 g0.9％生理盐水80ml取注射用青霉素100万单位及注射用链霉素0.8g于80ml DMEM培养基中,搅拌混合均匀,用∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中-20℃条件下保存.使用添加量为1ml/100ml培养液.7.0.25％的胰酶溶液胰蛋白酶干粉 0.25 gDMEM基础培养基100ml称取胰蛋白酶干粉0.25 g于烧杯中,加入80ml DMEM基础培养基溶液,进行搅拌溶解,100 ml容量瓶定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中于-20℃条件下保存.8.2.5mg/ml的内皮细胞生长添加物溶液(ECGS)ECGS干粉 15 g(1支)无菌超净水 6 ml取内皮细胞生长添加物15 g(1支),加入6 ml无菌超纯水完全溶解后,分装于-20℃条件下保存.在培养基中添加剂量为1ml/50ml,即培养基浓度为50微克/ ml.9.PBS 液KCL 0.20gNacl 8.00gNa2HPO4.12H2O 2.88gKH2PO4 0.20g分别取KCL0.20g, Nacl8.00g, Na2HPO4.12H2O2.88g,KH2PO40.20g于烧杯中,加入适量的超纯水搅拌至所有药物完全溶解,然后倾入1000ml容量瓶中,最后定容并调节PH为7.20,分装于4℃保存,。