葡萄球菌属鉴定

病原性球菌的检验一、葡萄球菌属Staphylococcus⏹广泛存在于自然界，多数是不致病的腐物寄生菌。

⏹致病性葡萄球菌可引起化脓性炎症、败血症、食物中毒等。

分类与分型1）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病。

（2）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病。

（3）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病。

（4）致病性菌株能产生黄色或柠檬色素。

（5）多数金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解，表皮葡萄球菌不敏感。

金黄色葡萄球菌的致病性⏹用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。

⏹肠毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起，Ⅱ群菌对抗生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。

⏹造成医院感染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。

⏹引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。

金黄色葡萄球菌的流行病学⏹作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。

因而，食品受其污染的机会很多。

金黄色葡萄球菌及其检验⏹革兰氏阳性球状，排列呈葡萄串状。

无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，个别形成荚膜。

致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）菌体较小、约0.5~1um., 普通0.4~1.2um。

培养及生化特性1.在普通培养基上生长良好（需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃、pH7.4 ，对营养要求不高，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。

），在麦康凯琼脂平板不生长。

2. 血平板上生长更佳，致病菌株β溶血3. 产生金黄色色素4. 高度耐盐: 可在7.5~15%NaCl肉汤中生长。

5. 分解葡、乳、麦、蔗糖，产酸不产气，触酶阳性，致病菌株能分解甘露醇。

6. 金黄色葡萄球菌能产生的毒素和酶（致病因素P149）1）溶血毒素2）杀白细胞素3）血浆凝固酶：区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。

4）脱氧核糖核酸酶：5）肠毒素6）溶纤维蛋白酶7）透明质酸酶抗原性1. 多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁，借此可分群。

实验检测牛奶中是否感染有金黄色葡萄球菌并鉴定实验目的1、认识金黄色葡萄球菌；2、学习运用PCR方法检测金黄色葡萄球菌。

实验原理金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)属于葡萄球菌属（Staphylococcus），无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。

在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。

平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。

平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。

血平板菌落周围形成透明的溶血环。

金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。

微生物学方法是鉴定牛奶中病原菌的“金标准”，传统方法是进行细菌分类培养，通过生化试验、血清型、各种酶试验分析细菌的表型特点。

对牛奶中病原微生物培养需要很长时间用生化试验的方法进行种属特异性的鉴定至少需要48h以上传统的鉴定技术时间较长，从国外进口诊断试剂费用相对较高。

因此，本文建立了直接从牛奶中鉴别病原菌的PCR检测技术，这种快速、准确、有效、直接从牛奶中检测致病菌的方法将为检验检疫、食品安全质检系统以及兽医检疫提供技术支撑，从而为乳制品病原菌的检测提供一定的帮助。

建立一种直接从牛奶中检测金黄色葡萄球菌的PCR快速诊断方法。

方法是根据已发表的金黄色葡萄球菌16-23SrRNA特异性序列设计并合成一对引物，通过优化反应条件建立从牛奶中直接检测金黄色葡萄球菌的PCR方法。

结果是与细菌的常规分离方法相比，PCR 法敏感性高与其它型葡萄球菌无交叉反应，特异性达100%，检测细菌基因组DNA最低浓度为35ng/L（纳克每升），能在5h内对送检的牛奶样品直接进行金黄色葡萄球菌的测定，可用于乳制品中金黄色葡萄球菌的检测。

所以，建立了一种直接从牛奶中检测金黄色葡萄球菌的PCR快速诊断方法。

实验仪器、试剂与材料仪器：冰箱、摇床、显微镜、PCR反应管、PCR仪、微量加样器、高速离心官、水平电泳槽、恒压电泳仪和凝胶自动成像系统、紫外检测仪、电热恒温水浴槽。

葡萄球菌属旳常规鉴定原则操作程序1 概述葡萄球菌属是一类触媒实验阳性旳革兰阳性球菌，涉及金黄色葡萄球菌，表面葡萄球菌、腐生葡萄球菌等32个种。

是临床最常用旳化脓性球菌，广泛分布于自然界中，在人体表面鼻、咽、肠道也常常存在。

2 形态与染色革兰阳性球菌，直径0.4~1.2µm成单、双、短链或不规则状排列。

在液体培养基浓汁标本中，往往排列成双或短链状多数有鞭毛。

3 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上典型菌落为金黄色，周边有明显旳透明（β）溶血环，部分菌落呈橙色，在高盐甘露醇平板上呈橙色菌落。

表皮葡萄球菌等其她葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，不溶血。

4 生化反映触酶实验阳性，多数能分解葡萄糖、麦蚜糖、蔗糖和甘露醇。

不分解棉籽糖和水杨苷，液化明胶，血浆凝固酶和DNA酶实验分阳性。

5 鉴别要点5.1 本菌属特性：触酶实验阳性，革兰阳性球菌，葡萄状排列，菌落中档大小，中档干燥。

5.2 与微球菌属旳鉴别：触酶实验都为阳性，但O∕F实验葡萄球菌属为发酵型，而微球菌为氧化型或无反映，并且菌体较葡萄菌属更大，排列呈四联状为主。

5.3 与链球菌属旳鉴别：葡萄球菌属触酶实验都为阳性，而链球菌为阴性，O∕F实验葡萄球菌属为发酵型而链球菌为氧化型。

5.4 凝固酶阳性葡萄球菌旳鉴别见下表。

结合型凝游离型凝鸟氨酸脱菌名PYP实验DNA实验VP实验固酶实验固酶实验羧酶实验金黄色葡萄球菌+ + - + + -中间型葡萄球菌- + + + - -施氏葡萄球菌+ - + + + -路邓葡萄球菌+ - + - + +注：“+”为90%以上菌株为阳性，“--”为90%以上菌株为阳性。

5.5 凝固酶阳性葡萄球菌旳鉴别见下表+腐生葡萄球菌——+ V + +—。

病原性球菌及检验球菌种类很多，根据革兰氏染色的不同，分为G-、 G+两类球菌。

G+有：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌和微球菌。

G-有：脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、卡他布兰汉氏菌等。

对人体致病的球菌称病原性球菌，因能引起机体化脓性炎症，故又称为化脓性球菌。

常见的有葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌。

一、葡萄球菌属(一)形态与染色葡萄球菌呈不规则堆集排列，形似葡萄串状，也可见单个、成对或短链排列。

为G+性球菌，直径0.5-1.5um，（致病性葡萄球菌菌体较非致病性葡萄球菌菌体小）无芽胞，无鞭毛、无荚膜；无动力。

(二)分类 1965年按血浆凝固酶分为：血浆凝固酶阴性葡萄球菌，血浆凝固酶阳性葡萄球菌。

1.血浆凝固酶阴性葡萄球菌包括：表皮、腐生葡萄球菌。

2.血浆凝固酶阳性葡萄球菌包括：金黄色、中间型、家畜葡萄球菌。

(三)抗原本菌水解后，用沉淀法可获两种抗原即蛋白抗原和多糖抗原。

1.蛋白抗原：是一种表面抗原，为完全抗原；有种特异性，无型特异性。

存在葡萄球菌细胞壁的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。

2.多糖抗原：是半抗原，存在于细胞壁上，是金黄色葡萄球菌的重要抗原。

有型特异性，分A、B、C三型。

(四)标本接种1.脓汁、尿道分泌物、脑脊液沉淀物，通常直接接种在血琼脂上，经37℃24-48h培养，可见直径2-3mm，产生不同色素的菌落。

2.粪便、呕吐物应接种卵黄高盐、高盐甘露醇琼脂平板上，经37℃24-48h培养可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。

3.疑为败血症者，抽取静脉血5ml，注入50ml葡萄糖肉汤培养基中。

(五)培养特性需氧或兼性厌氧，对营养要求不高。

在20%CO2环境中，有利于毒力产生。

最适温度37℃，最适PH7.4。

DNA中G+C含量：30-39%。

1.在普通琼脂平板上，经37℃、24-48h培养，可形成圆形，凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明、脂溶性色素的菌落，直径一般为1-2mm，但大者也有4-5 mm的菌落。

葡萄球菌属检验方法及临床意义摘要】目的：探讨葡萄球菌属检验方法及临床意义。

方法：选取2014年2月至2016年1月期间，我所检查的葡萄球菌属感染患者31例，对其检验方法及临床意义进行回顾性的分析。

结果：经过实验室检验后，所有患者的样本中均存在葡萄球菌属，葡萄球菌属的实验室检验对病因的确定具有较高的指导意义。

结论：同人类疾病相关的葡萄球菌属主要有表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌及头状葡萄球菌，其会导致化脓性感染及病毒性休克等。

【关键词】葡萄球菌属；检验方法；临床意义【中图分类号】R378.1 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）08-0088-02葡萄球菌属细菌为一类革兰氏阳性球菌，因其常堆集排列呈葡萄串状而取名葡萄球菌属[1]。

葡萄球菌自然界与人体中广泛的存在，其大多数是非致病菌，少数于人与动物皮肤黏膜内存在的菌株会致使多种化脓性的感染，例如菌血症、痈、疖、脓肿等，其还可导致烫伤样的皮肤综合征与毒性的休克综合征等[2]。

葡萄球菌为较为常见的化脓性球菌，同时也是医源性感染中较为常见的细菌。

1.资料与方法1.1 一般资料选取2014年2月至2016年1月期间，我所检查的葡萄球菌属感染患者31例，其中男性患者16例，女性患者15例，患者年龄15至75岁，平均（43.9±15.1）岁。

31例患者中皮肤软组织感染11例，内脏器官感染10例，全身感染8例，尿路感染2例。

1.2 标本采集根据患者发生感染的疾病的不同，可采集其伤口分泌物、脓汁、渗出液、血液、痰液、粪便及脑脊液等[3]。

因葡萄球菌广泛的分布在人体皮肤及黏膜上，因此在采集时需注意避免患者病灶周围的正常菌群的污染。

2.检验2.1 标本的直接检查取患者的痰、渗出物、脓汁及脑脊液在进行离心后取其沉渣进行涂片，经过革兰染色后进行镜检，若在检查后发现革兰阳性菌，即可初步报告为疑为葡萄球菌[4]。

因在正常情况下，关节穿刺液、脑脊液等为无菌的，当检查时发现细菌则具有重要的价值，其他的体液标本中在检查时发现炎性细胞同样具有参考价值。

常见革兰阳性球菌鉴别
葡萄球菌属
鉴定及鉴别要点
1、葡萄球菌属与微球菌属的鉴别：
葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小；而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，并且菌体较大。

2、葡萄球菌属与链球菌属的鉴别：葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，触酶试验阳性；链球菌属葡萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。

表葡萄球菌属与微球菌科其他菌属的鉴别
注：各表中的d 为反应不定。

表常见葡萄球菌的鉴别
链球菌属
触酶试验阴性，分解葡萄糖产酸不产气，除肺炎链球菌外，链球菌不分解菊糖。

鉴定
杆菌肽敏感试验：95%以上的化脓性链球菌对杆菌肽（每纸片含0.04单位）敏感，抑菌环≥10毫米为敏感。

CAMP试验：无乳链球菌CAMP试验为阳性，其它链球菌为阴性。

Optochin敏感试验：几乎所有的肺炎链球菌都对Optochin敏感。

抑菌环≥18毫米为敏感。

β-溶血性链球菌的主要生物学特性见表
表β-溶血性链球菌的主要生物学特性
注：PYR：L-吡咯烷酮-萘酰胺水解。

d：为反应不定。

非β-溶血性链球菌的主要生物学特性见表
肠球菌属：肠球菌属细菌γ或α溶血，触酶试验一般为阴性，有些菌株可产生假阳性。

本属细菌的主要生化特征及鉴别见表表肠球菌属常见菌种的生化特征。

简述葡萄球菌属的鉴定要点。

葡萄球菌属是常见的细菌属，包括了许多病原菌。

对于葡萄球菌的鉴定，以下是一些要点：
1. 形态特征：葡萄球菌为革兰氏阳性球形细菌，通常呈成群聚集的形式，形成类似于葡萄串的结构。

2. 培养特性：葡萄球菌可以在常见的培养基上生长，通常需要高氧环境。

培养基上通常呈亮黄色或白色菌落。

3. 生化特性：葡萄球菌可以发酵葡萄糖，不发酵乳糖和蔗糖。

此外，一些生化反应也可以用于鉴定葡萄球菌。

4. 分子特征：现代分子生物学技术可以通过PCR、16S rRNA等方法对葡萄球菌进行鉴定，具有高度的准确性和灵敏度。

综上所述，对于葡萄球菌的鉴定，需要结合以上几个方面进行综合分析。

特别是在临床上，正确鉴定葡萄球菌的种类和特性对于治疗和预防感染非常重要。

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金黄色葡萄球菌的检测（GB 4789.10-2016）1 金黄色葡萄球菌1.1 金黄色葡萄球菌(1)葡萄球菌属微球菌科；(2)金黄色葡萄球菌为格兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无鞭毛、芽胞，少数有荚膜，不能运用，直径约为0.5 μm-1μm；(3)金黄色葡萄球菌科引起化脓性炎症，又称化脓性球菌；除此之外，金黄色葡萄球菌还会分泌很多毒素，是引起食源性疾病的原因之一；(4)金黄色葡萄球菌易培养，对营养要求不高，兼性厌氧；(5)金黄色葡萄球菌抵抗外届不良环境的能力很强，在80 ℃条件下加热达到30min才能使其死亡。

1.2 鉴定依据(1)格兰氏阳性；(2)能产生溶血毒素，时血平板（BP平板）出现溶血现象；(3)凝固酶，使血浆凝固。

1.3 鉴定流程25 g（25 mL）样品+225 mL 7.5%NaCl肉汤或者15%NaCl胰酪胨大豆肉汤BP平板、血平板36℃24h1、格兰氏染色2、观察溶血3、BHI肉汤和营养琼脂斜面36℃24h血浆凝固酶实验报告1、金黄色葡萄球菌产生的蛋白酶的种类？2、溶血圈为什么是透明的？2、金黄色葡萄球菌导致食源性疾病的原因？4、金黄色葡萄球菌的定量？5、BP平板和血平板的特征菌落？2 解疑2.1 金黄色葡萄球菌产生的蛋白酶的种类？蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶菌酶。

2.2 溶菌圈为什么是透明的？（1）金黄色葡萄球菌可以产生4种溶血素，α、β、γ、δ四种；（2）溶血素使得红细胞裂解，其中的血红蛋白被释放出来；（3）释放出来的血红蛋白被其分泌的蛋白酶水解。

其它菌的溶菌圈可能不是透明的，与它分泌的溶血素的种类有关，这里不多做解释。

2.3 金黄色葡萄球菌导致食源性疾病的原因？金黄色葡萄球菌因为其分泌的毒素和侵袭性酶而引起食物中毒，如杀白细胞素、肠毒素、溶血毒素、血浆凝固酶和脱氧核糖核酸酶都是其分泌的毒素和侵袭性酶。

2.4 金黄色葡萄球菌的定量？（1）污染严重的可以直接采用稀释平板计数法；（2）不严重可以采用MPN法。

葡萄球菌属的检验程序通常包括以下步骤：
样品处理：将采集的样品用生理盐水或75%酒精进行表面消毒，然后使用无菌棉拭子擦拭样品表面，将拭子放入无菌试管中，做好标记，送往实验室进行培养。

细菌接种：将拭子接种于营养丰富的培养基中，如肉汤培养基或平板培养基。

接种时需要注意无菌操作，避免污染。

细菌培养：将接种好的培养基放入恒温器中进行培养，通常在37℃下培养24-48小时。

培养期间需要观察细菌的生长情况，记录细菌的生长情况。

细菌鉴定：根据细菌的生长情况、形态、染色等特点，对细菌进行初步鉴定。

可以采用生化反应、血清学试验等方法对细菌进行进一步鉴定。

药敏试验：对鉴定的细菌进行药敏试验，以确定细菌对各种抗生素的敏感性。

药敏试验是制定合理用药方案的重要依据。

报告结果：将细菌鉴定和药敏试验结果报告给医生，以便医生根据结果制定相应的治疗方案。

需要注意的是，葡萄球菌属的检验程序需要严格的无菌操作，以避免污染。

同时，不同实验室可能采用不同的方法和试剂进行细菌鉴定和药敏试验，因此结果可能会有一定的差异。

沃氏葡萄球菌VITEK鉴定分析沃氏葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，主要存在于环境及人与动物的皮肤和粘膜上，是一种革兰氏阳性的球形细菌，显微镜下排列成葡萄串状。

有报道认为沃氏葡萄球菌与人类的动脉栓塞和牙周炎存在一定的关系，但有关沃氏葡萄球菌的研究较少。

VITRK全自动微生物鉴定分析系统是目前世界上最先进、自动化程度最高的细菌鉴定仪器之一，已被许多国家定为细菌最终鉴定设备，并获美国食品药品管理局（FDA）认可。

本文采用VITEK对日常检测中分离到的7株沃氏葡萄球菌进行鉴定，旨在为沃氏葡萄球菌的进一步研究提供数据参考。

1 材料与方法1.1 试验材料试验中所需所有试剂均购自北京陆桥技术有限责任公司，VITEK 2 全自动微生物分析系统及相关配套试剂购自法国生物梅里埃公司。

1.2 方法挑取营养琼脂上的沃氏葡萄球菌，制成一定浓度的悬浊液，按照VITEK2操作说明进行上机检测。

2 结果VITEK 2全自动微生物鉴定系统判断结果均为沃氏葡萄球菌，生化编码分别为000004010060271（可能性为94%）、010046012270231（可能性为93%）、010006002660231（可能性为97%）、010002012661231（可能性为96%）、000004000260231（可能性为95%）、010006002670231（可能性为95%）和010006010060231（可能性为97%），但在43项生化指标中有12项存在差异，具体结果如下：生化名称 1 2 3 4 5 6 7 ADH1 精氨酸双水解酶1 - + + + - + + BGURr β-葡萄糖醛酸酶- + - - - - - PyrA 焦谷氨酸芳胺酶- + + + - + + BGUR β-D-葡萄糖醛酸酶+ + + - + + + URE 尿素酶+ + - + - - + dRIB D-核酸- (-) - - - (-) - ILATK L-乳糖盐产碱- + + + - + - dMAL D-麦芽糖- + + + + + - BACI 杆菌肽耐受- - + + - + - NOVO 新生霉素耐受- + - - - + - dMNE D-甘露糖- - - + - - - ADH2s 精氨酸双水解酶2 + - - - - - -3 分析与讨论沃氏葡萄球菌是金黄色葡萄球菌检测工作中的主要干扰菌之一，由于沃氏葡萄球菌与人类某些疾病存在一定的关系，对沃氏葡萄球菌进行研究非常重要。