两株红树内生真菌混合发酵液提取物抗植物病原菌活性及LC—MS研究

红树植物内生真菌的分离鉴定及抗菌活性菌株的筛选陈昭华;伍菱;杨秋明;王骥妍;朱敏佳;杜希萍【期刊名称】《激光生物学报》【年(卷),期】2013(022)003【摘要】本文对厦门集美红树植物无瓣海桑(Sonneratia apetala),海马齿(Sesuvium portulacastrum)和秋茄(Kandelia candel)的多个部位进行内生真菌的分离和形态鉴定,并采用菌饼法对分离到的内生真菌进行抗菌活性筛选.结果显示,从3种红树植物的根、茎、叶中分离得到25株内生真菌,分别隶属8个类群,以链格孢属和曲霉属为主,分别占菌株总数的28.0％和24.0％;有19株菌株对至少一种指示菌有抑制作用,占菌株总数的76.0％.研究结果表明,红树植物来源的内生真菌数量多,种属丰富,同时具有良好的抗菌活性,是研究抗菌活性化合物的重要资源.【总页数】4页(P263-266)【作者】陈昭华;伍菱;杨秋明;王骥妍;朱敏佳;杜希萍【作者单位】集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;福建省食品微生物与酶工程重点实验室,福建厦门361021;福建省高校食品微生物与酶工程技术研究中心,福建厦门361021;厦门市食品与生物工程技术研究中心,福建厦门361021【正文语种】中文【中图分类】Q939【相关文献】1.3种沙生药用植物内生真菌的分离鉴定及其拮抗菌株筛选 [J], 张伟;贾倩;王丽;王泽东;王永昊;郝丽;顾沛雯2.三种药用植物内生真菌抗菌活性菌株的筛选 [J], 黄银芳;范志英;章方珺;刘幸;姚韶莹;王丽薇3.广西北部湾海洋腐木产孢真菌的分离鉴定和抗菌活性菌株筛选 [J], 龚斌;方怀义;熊拯;义翠花;廖日权;宋静静;张艳秋4.广西山口8种红树林内生真菌的分离鉴定及抗菌活性菌株的筛选 [J], 肖胜蓝;雷晓凌;佘志刚;林诗敏;李翰祥;王力卫;刘亚月;刘颖5.广西钦州湾红树林抗菌活性菌株 Erwinia sp ．5-8的筛选及发酵条件的优化 [J], 孟令洋;姜伟;张培玉;林学政因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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红树植物苦郎树提取物及其活性成分对植物病原真菌的抑菌活性研究
作者：邓业成毕秀莲杨林林廖永梅
来源：《湖北农业科学》2012年第10期
摘要：采用活性跟踪法及色谱分离技术从红树植物苦郎树叶中分离获得２种抗菌化合物ＫＬＳ－４６和ＫＬＳ－５４，测定苦郎树甲醇提取物及２种化合物对西瓜枯萎病菌、芒果叶枯病菌、甘蔗凤梨病菌、香蕉炭疽病菌、梨黑斑病菌、梨褐斑病菌、柑橘疮痂病菌的抑菌活性。

结果表明，苦郎树叶提取物对７种植物病原真菌的抑菌活性明显高于茎提取物和果提取物，１０ｇ／Ｌ叶提取物对７种病原菌抑菌率为２２．３７％～１００．００％。

ＫＬＳ－４６对
后５种病原菌菌丝生长的ＥＣ５０值为９．７９×１０－３～７．８８×１０－２ｇ／Ｌ，ＫＬＳ－５４的ＥＣ５０值为９．２６×１０－３～９．７５×１０－２ｇ／Ｌ，２种活性成分对５种植物病原真菌菌丝的毒力相似。

活性成分对甘蔗凤梨病菌、柑橘疮痂病菌和西瓜枯萎病菌的孢子萌发有较强的抑制活性，在浓度为０．２５ｇ／Ｌ时，ＫＬＳ－４６的抑制率分别
为９８．３１％、１００．００％和９８．１５％，ＫＬＳ－５４的抑制率分别为９９．８３％、１００．００％和９９．３３％。

关键词：苦郎树；提取物；活性成分；植物病原真菌；抑菌活性
中图分类号：Ｓ７５９．９文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）10－2010-04。

两种园林植物提取液抑菌活性的研究马海旭;郭阿君【期刊名称】《林业勘查设计》【年(卷),期】2017(000)001【摘要】运用琼脂扩散法、琼脂平板法,比较了兴安落叶松(Larix gmelinii)与银中杨(Populus alba × P.berolinensis)叶片的水提液、醇提液、鲜汁液对5种目标菌种的抑菌能力,结果表明:两种植物的水提液低浓度下即可实现对绿脓杆菌的抑制.62.50mg/mL浓度的银中杨水提液、125mg/mL浓度的兴安落叶松水提液可以有效抑制绿脓杆菌;250mg/mL的银中杨水提液可杀灭木霉,1000mg/mL的银中杨水提液可杀灭黑曲霉.%The antibacterial activity of leaf extract from Larix gmelinii and Populus alba × P.berol inensis was evaluated and measured by paper-disc agar-diffusion method and agar dilution method.Antibacterial experiment indicated that water extract from tested 2 plants presented significant antimicrobial activitie on Pesudomonas aeruginosa.The minimal b actericidal concentration(MBC) of Populus alba × P.berolinensis against Pesudomonas aeruginosa was 62.50mg/mL.MBC of Larix gmelinii against Pesudomonas aeruginosa was 125mg/mL.MBC ofPopulus alba ×P.berolinensis againstTrichoderma virens and Aspergillus niger was250mg/mL, 1000mg/mL respectively.【总页数】3页(P54-56)【作者】马海旭;郭阿君【作者单位】吉林北华大学林学院;吉林北华大学林学院【正文语种】中文【相关文献】1.不同溶剂艾蒿提取液对黄瓜枯萎病菌的抑菌活性研究 [J], 秦凯;刘永震2.茄非食部分生物碱提取液抑菌活性研究 [J], 刘艳芳;张德欣;丁寅寅3.两种园林植物提取液抑菌活性的研究 [J], 马海旭;郭阿君4.紫茎泽兰提取液对猪链球菌的抑菌活性研究 [J], 张小苗;周玉照;张以芳5.金银花枝叶提取液体外抑菌活性与体内抗炎作用研究 [J], 吕归红;陈宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

摘要:本文综述了植物内生菌次级代谢产物的抗菌、杀虫等活性，以便寻找到植物源新的具有农药活性的先导化合物。

关键词：内生菌；次级代谢产物；抗菌活性；杀虫活性植物内生真菌(Plant endophytic fungi)是指生活在健康植物组织内部但不引起植物体病害的真菌。

这类真菌资源十分丰富，它们可能产生在微生物一宿主关系中发挥作用的生理活性物质，其次生代谢产物在生物制药、农业生产、工业发酵等领域越来越受到人们的关注。

目前，微生物源生物化学农药的研究和开发在我国十分活跃，但微生物资源及其应用潜力尚没有得到充分的发挥，而植物内生真菌即是这样一类有待开发的新兴微生物资源，本文对植物内生菌次级代谢产物的生物活性进行总结，为进一步研究内生菌的生物活性提供依据。

1 抗菌活性的内生真菌代谢产物1.1生物碱类IFB-Lactam-1 (1)是来自白菜内生真菌Trichoderma sp.的1个大环内酰胺生物碱，其可以很好地抑制柿子炭疽病[1]。

6-isoprenylindole-3-carboxylic acid (2)是从黄花蒿（Artemisiaannua）内生真菌Colletotrichum sp.分离的吲哚生物碱。

生物活性测试，在浓度200 µg/mL时，其对Gaeumannomyces graminis var. tritici、Rhizoctonia cerealis、Helminthosporiumsativum有抑制作用[2]。

内生真菌E99401的发酵液中产生的cerulenin (3)，在5 μg/disk时对C.glabrata、Candida albicans、C. krusei、C. parapsilosis、Microsporum canis、Cryptococcus neoformans、Mucor miehe、Nematospora coryli、Rhizomucor pusillus、Paecilomyces variotii的抑菌圈分别为17、16、14、28、40、30、40、42、36、38 mm，而对应的阳性对照制霉菌素在20 μg/disk 时，抑菌圈在10-20 mm[3]。

红树林内生真菌350#低极性成分的GC-MS分析李尚德;魏美燕;郑明彬;陈铭祥;林永成【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2013(041)015【摘要】首次通过气相色谱-质谱联用仪分析红树木榄内生真菌350#低极性成分,并利用数据库检索共鉴定出29种化合物,主要包括烃类、醇、醛、酮、羧酸酯和酰胺等.结果显示酮的含量最高(32.35％),其次是酰胺(15.53％)、烷烃(13.32％)、醛(12.02％)、烯烃(8.62％)、羧酸酯(5.62％)和醇(3.59％).两个已知具有显著的生物活性醌类化合物柯桠素(23.31％)和蓝雪醌(2.97％)也从该菌中首次被鉴定.研究为红树木榄的进一步开发利用提供新的依据.【总页数】3页(P124-126)【作者】李尚德;魏美燕;郑明彬;陈铭祥;林永成【作者单位】广东医学院药学院,广东东莞523808;广东医学院药学院,广东东莞523808;广东医学院药学院,广东东莞523808;广东医学院药学院,广东东莞523808;中山大学化学与化学工程学院,广东广州 510275【正文语种】中文【中图分类】O629【相关文献】1.桐花树叶内生真菌代谢产物的低极性成分研究--基于GC-MS法分析 [J], 廖日权;钟秋平;陈俊其2.GC-MS法分析红树林内生真菌Nigrospora sp.的脂肪酸成分 [J], 李尚德;魏美燕;吴都督;陈铭祥;林永成3.GC-MS法分析红树林内生真菌#3895菌体低极性成分 [J], 陈海燕;张怀泉;王志滨;林翠梧;佘志刚;林永成4.蒙药苏格木勒-4汤低极性化学成分的GC-MS分析 [J], 果佳霖;孙利东;孟根花;白东浩;马丽杰;靳尚武5.油松叶低极性成分的GC-MS法分析及其抗真菌活性研究 [J], 郑巍;郭良君;金永生因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

两株南海红树林内生真菌(SK7、SK11)次级代谢产物的研
究的开题报告
一、研究背景
红树林是近海地区重要的生态系统，具有天然的防风固沙、保护海岸线、保护生物多样性等功能。

同时，红树林内生微生物是具有巨大研究价值的资源之一。

其中，
红树林内生真菌能够合成大量次级代谢产物，具有广泛的生物活性和药理作用。

因此，深入研究红树林内生真菌的次级代谢产物具有重要的理论和应用意义。

二、研究目的
本研究旨在从南海红树林内生真菌中筛选出具有生物活性和药理作用的次级代谢产物，并对其进行结构鉴定和生物活性测试，为寻找新型天然产物提供科学依据和理
论指导。

三、研究内容和方法
1、采集南海红树林样品，进行微生物分离和鉴定。

2、利用高效液相色谱、气相色谱及质谱等技术对红树林内生真菌的次级代谢产
物进行分离纯化和结构鉴定。

3、通过生物活性测试，对筛选出的次级代谢产物进行药理学评价。

四、预期成果
1、从南海红树林内生真菌中筛选出具有生物活性和药理作用的次级代谢产物。

2、对筛选出的次级代谢产物进行结构鉴定和生物活性测试，探讨其可能的药理
作用和应用前景。

3、为后续糖尿病、心血管等疾病药物开发提供基础数据和理论依据。

一株红树林来源放线菌的抗菌活性物质张骏梁;史蔷;吴昊;张萌;徐颖【期刊名称】《深圳大学学报（理工版）》【年(卷),期】2024(41)3【摘要】红树林沉积物微生物资源丰富,是新型天然产物以及药物先导化合物的重要来源之一.为获得具有新颖结构的微生物次级代谢产物,以活性为导向对红树林来源菌株进行筛选,对表现出抗细菌、生物膜和真菌活性的GP3T5(Streptomyces sp.)菌株的次级代谢产物进行研究.通过萃取、C18反相硅胶柱层析、Sephadex LH20凝胶柱层析和制备高效液相色谱,从菌株发酵液中分离出3种化合物,分别记为化合物1、2和3.利用高分辨电喷雾质谱、核磁共振波谱和紫外光谱等技术,鉴定化合物1、2和3依次为pyrisulfoxin A、collismycin A和echinomycin A.对化合物1、2和3进行活性评价,结果表明,3种化合物均有不同程度的抗菌和抗生物膜活性.其中,化合物3的抗菌活性最好,对食源性病原菌有很好的抗菌活性,对单增李斯特菌和无乳链球菌的最小抑菌质量浓度均为0.06μg/mL.化合物1、2和3对鲍曼不动杆菌的最小生物膜抑制质量浓度分别为32、16和1μg/mL.化合物2和3具有良好的抗植物病原真菌活性,化合物2的半数抑制质量浓度IC50≤10μg/mL,化合物3的IC50≤1μg/mL.以上红树林来源菌株GP3T5的研究结果可为深入挖掘红树林土壤微生物生物活性物质提供参考.【总页数】9页(P358-366)【作者】张骏梁;史蔷;吴昊;张萌;徐颖【作者单位】深圳大学生命与海洋科学学院【正文语种】中文【中图分类】Q939.9【相关文献】1.一株海洋放线菌抗菌活性物质的分离与结构解析2.一株具有抗菌活性红树林土壤放线菌的分离和鉴定3.一株红树林来源稀有放线菌的鉴定和抑菌活性物质的初步研究4.红树林放线菌产抗菌活性物质的分离纯化研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

红树林内生真菌K38和E33混合发酵代谢产物研究李春远;佘志刚;林永成;周世宁【期刊名称】《中山大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(049)006【摘要】将混合发酵技术应用于来自南海红树林内生真菌E33和K38的培养,其发酵液乙酸乙酯萃取物对多种植物病原菌有较强抑制活性,从该提取物中分离到deoxyscytalidin(1),1-甲氧基-2-羟基-3-甲基蒽醌(2),5-丁基-2-吡啶甲酸甲酯(3),5-(3-丁烯基)-2-吡啶甲酸甲酯(4),sescandelin(5)五个单独培养未能得到的代谢产物,其中化合物1,2,3,4为首次从海洋真菌里得到.【总页数】4页(P136-138,144)【作者】李春远;佘志刚;林永成;周世宁【作者单位】华南农业大学理学院生物材料研究所,广东,广州,510642;中山大学化学与化学工程学院,广东,广州,510275;中山大学化学与化学工程学院,广东,广州,510275;中山大学生命科学学院,广东,广州,510275【正文语种】中文【中图分类】O629【相关文献】1.2株红树内生真菌混合发酵培养液中代谢产物的分离鉴定 [J], 李春远;张杰;钟嘉升;何炳坚;黎荣棠;梁煜潮;林永成;周世宁2.红树林内生真菌K38和E33共培养代谢产物研究 [J], 李春远;龚兵;黄素萍;佘志刚;林永成;周世宁3.南海红树林内生真菌Aspergillus versicolor ZJ-ML1两个新的次级代谢产物研究 [J], 吴颖楠;佘志刚4.红树林内生真菌Penicillium sp Y2-2-1的次级代谢产物研究 [J], 沈煜;黄纪国;蔡琳韩;王欣欣;杨思婷;黄锡山;邓毛程;段迪5.红树林植物海莲内生真菌活性菌株筛选及次级代谢产物研究 [J], 冯昭;张旭;徐静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

红树植物内生真菌Penicillium sp.中两个甾体化合物的研究李想;孙光芝;郑毅男;林文翰;Isabel Sattler【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2007(019)003【摘要】从红树植物内生真菌Penicillium sp.的发酵液中分离纯化了两个甾体类化合物,通过各种波谱实验(1D-NMR,2D-NMR,ESI-MS)确定为:麦角甾-4,6,8 (14),22-四烯-3-酮(1)和麦角甾-5,7,22-三烯-3-醇(2),1对于3α-HSD脱氢酶在250 μm浓度下有较弱的活性.【总页数】3页(P420-422)【作者】李想;孙光芝;郑毅男;林文翰;Isabel Sattler【作者单位】吉林农业大学中药材学院,长春,130118;北京大学天然药物与仿生药物国家重点实验室,北京100083;吉林农业大学中药材学院,长春,130118;吉林农业大学中药材学院,长春,130118;北京大学天然药物与仿生药物国家重点实验室,北京100083;Hans-Kn(o)ll-Institute for Natural ProductResearch,Beuten bergstraβe 11,D-07745,Jena【正文语种】中文【中图分类】Q946.91;O629.29【相关文献】1.红树植物内生真菌Penicillium sp.中一个醌类化学成分的研究 [J], 李想;姚燕华;孙光芝;郑毅男;林文翰;Isabel SATTLER2.红树植物海杧果内生真菌Penicillium sp.中的抗菌活性成分 [J], 韩壮;梅文莉;崔海滨;曾艳波;林海鹏;洪葵;戴好富3.七叶一枝花内生真菌Penicillium sp.产含双环[4.4.1]环系甾体类结构研究 [J], 李雪霜;谭明慧;吕朦朦;路莉文;郭志勇;邓张双;涂璇4.红树植物内生真菌Penicillium sp.中新木质素的分离及结构鉴定 [J], 李想;孙光芝;郑毅男;林文翰;Isabel Sattler5.红树植物内生真菌Penicillium sp.的化学成分 [J], 李想;姚燕华;孙光芝;林文翰;Isabel Sattler因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

红树林植物内生菌分离鉴定及其抑菌活性研究谢星朋１，戴悦１，彭金菊１，罗帅帅１，李杨１，马浩天１，刘志军１，张怡１，马驿１，２∗（１．广东海洋大学滨海农业学院动物医学系，广东湛江５２４０００；２．岭南现代农业科学与技术广东省试验室茂名分中心，广东茂名５２５０００）摘要㊀［目的］从红树林植物组织中分离出对动物病原菌具有广谱抑菌活性的植物内生菌㊂［方法］以铜绿假单胞菌㊁多杀性巴氏杆菌㊁产气肠杆菌㊁粪肠球菌４种常见的致病菌作为指示菌，采用Ｍ１０和Ｐ３培养基从红树林植物根㊁茎㊁叶组织中分离内生菌，以固体琼脂打孔法筛选具有抑菌活性的菌株，提取菌株的基因组ＤＮＡ，ＰＣＲ扩增１６ＳｒＤＮＡ基因并测序，通过邻接法构建系统发育树㊂［结果］从红树林植物组织中共分离８５７株可培养的内生菌，有１４５株菌有抑菌活性，占分离菌株的１６．６％㊂其中通过Ｍ１０培养基从红树林植物叶组织分离的菌株３２－５对铜绿假单胞菌㊁产气肠杆菌都具有最强抑菌活性，其抑菌圈直径分别为３８和４２ｍｍ；通过Ｐ３培养基从红树林植物茎组织分离的菌株１２－４对粪肠球菌具有最强抑菌活性，其抑菌圈直径为５６ｍｍ；通过Ｍ１０培养基从红树林植物茎组织分离的菌株１３－２对多杀性巴氏杆菌具有最强抑菌活性，其抑菌圈直径为６４ｍｍ㊂有抑菌活性菌株分为１０个属，其中芽孢杆菌属是优势菌属㊂［结论］该试验初步揭示红树植物根㊁茎㊁叶组织中植物内生菌的抑菌活性和多样性，为开发新型抗菌药物及应用提供理论依据㊂关键词㊀红树林；植物内生菌；分离；鉴定；抑菌活性；海洋细菌中图分类号㊀Ｑ９３９．９㊀㊀文献标识码㊀Ａ㊀㊀文章编号㊀０５１７－６６１１（２０２４）０４－０００１－１０ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０５１７－６６１１．２０２４．０４．００１㊀㊀㊀㊀㊀开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＥｎｄｏｐｈｙｔｉｃＢａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍＭａｎｇｒｏｖｅＰｌａｎｔｓＸＩＥＸｉｎｇ⁃ｐｅｎｇ，ＤＡＩＹｕｅ，ＰＥＮＧＪｉｎ⁃ｊｕｅｔａｌ㊀（ＤｅｐａｒｉｍｅｎｔｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｏａｓｔａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＯ⁃ｃｅａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｊｉａｎｇ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ５２４０００）Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｔｏｉｓｏｌａｔｅｐｌａｎｔｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓｗｉｔｈｂｒｏａｄ⁃ｓｐｅｃｔｒｕｍａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｓ．［Ｍｅｔｈｏｄ］Ｐｓｅｕｄｏ⁃ｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ，ＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓａｎｄＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｉｎｄｉｃａｔｏｒｂａｃｔｅｒｉａ．Ｍ１０ａｎｄＰ３ｓｏｌｉｄｍｅｄｉａｓａｎｄａｇａｒ⁃ｗｅｌｌｄｉｆｆｕｓｉｏｎｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｉｓｏｌａｔｅａｎｄｓｃｒｅｅｎｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｆｒｏｍｒｏｏｔ，ｓｔｅｍａｎｄｌｅａｆｔｉｓｓｕｅｓｏｆｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓ．ＥｘｔｒａｃｔｅｄＤＮＡｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｔｅｍｐｌａｔｅｆｏｒＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅ１６ＳｒＤＮＡｇｅｎｅａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｂｙｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃ｊｏｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄ．［Ｒｅｓｕｌｔ］Ａｔｏｔａｌｏｆ８５７ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅｂａｃｔｅｒｉａｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｓａｎｄ１４５ｓｔｒａｉｎｓｈａｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃ⁃ｔｉｖｉｔｙ，ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｆｏｒ１６．６％ｏｆｔｈｅｉｓｏｌａｔｅｓ．Ｔｈｅｓｔｒａｉｎ３２⁃５，ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｌｅａｆｔｉｓｓｕｅｕｓｉｎｇＭ１０ｓｏｌｉｄｍｅｄｉｕｍ，ｈａｄｔｈｅｓｔｒｏｎｇｅｓｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａａｎｄＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ，ｗｉｔｈａｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｃｉｒｃｌｅｄｉａｍｅｔｅｒｏｆ３８ｍｍａｎｄ４２ｍｍ，ｒｅｓｐｅｃ⁃ｔｉｖｅｌｙ．Ｓｔｒａｉｎ１２⁃４ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｔｅｍｔｉｓｓｕｅｕｓｉｎｇＰ３ｓｏｌｉｄｍｅｄｉｕｍｓｈｏｗｅｄｔｈｅｓｔｒｏｎｇｅｓｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓｗｉｔｈａｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｃｉｒｃｌｅｄｉａｍｅｔｅｒｏｆ５６ｍｍ．Ｓｔｒａｉｎｓ１３⁃２ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｔｅｍｔｉｓｓｕｅｓｕｓｉｎｇＭ１０ｍｅｄｉｕｍｓｈｏｗｅｄｔｈｅｓｔｒｏｎ⁃ｇｅｓｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔＰａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａｗｉｔｈａｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｃｉｒｃｌｅｄｉａｍｅｔｅｒｏｆ６４ｍｍ．Ｂａｃｔｅｒｉａｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅｃｌａｓｓｉ⁃ｆｉｅｄｉｎｔｏ１０ｇｅｎｕｓ，ｏｆｗｈｉｃｈＢａｃｉｌｌｕｓｗａｓｔｈｅｄｏｍｉｎａｎｔｇｅｎｕｓ．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］Ｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉｎｉｔｉａｌｌｙｒｅｖｅａｌｅｄｔｈｅａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｄｉ⁃ｖｅｒｓｉｔｙｏｆｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｉｎｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｒｏｏｔｓ，ｓｔｅｍｓａｎｄｌｅａｆｔｉｓｓｕｅｓ，ｐｒｏｖｉｄｉｎｇａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｎｅｗａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｄｒｕｇｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀Ｍａｎｇｒｏｖｅ；Ｐｌａｎｔｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ；Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ；Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ；Ｍａｒｉｎｅｂａｃｔｅｒｉａ基金项目㊀广东省自然科学基金项目（２０２３Ａ１５１５０１２１８１）；湛江市科技局科技专项资金竞争性分配项目（２０２１Ａ０５２３１）；茂名实验室科研启动项目（２０２１ＴＤＱＤ００２）㊂作者简介㊀谢星朋（１９９９ ），男，江西吉安人，硕士研究生，研究方向：兽医药理学与毒理学㊂∗通信作者，教授，博士，硕士生导㊀㊀红树林是一种处在热带和亚热带交界地带的木本植物群落，是海洋与陆地两大生态系统的过渡区域，其独特的地理环境导致其中的微生物及其产物具有特殊性，红树植物内生菌复杂多样的代谢产物可成为重要的抗菌活性物质来源㊂目前，从红树林植物如木榄㊁秋茄㊁红海榄和海桑等宿主植物中均发现抗菌化合物［１－２］㊂随着陆地来源的药物研发难度不断加大，以 蓝色海洋药库 为资源库研制新药物已成为当今医药研究的重要方向㊂海洋微生物天然产物的研究最早是从海洋真菌开始的，海洋细菌天然产物的研究相对较晚㊂植物内生菌主要是指定殖于植物组织器官以及细胞间隙中的内生细菌［３］㊂研究显示，植物内生菌其特殊的代谢途径使其次级代谢产物可以产生大量结构新颖㊁抑菌效果较好的生物活性物质，成为开发新型抗微生物药物的良好资源［４－５］㊂该试验从广东湛江红树林自然保护区采取红树植物根㊁茎㊁叶样品，分离对动物病原菌有抑菌活性的内生菌，对其进行分子鉴定和系统发育分析，为开发新型抗菌药物及其在动物疫病防治领域的应用提供理论依据㊂１㊀材料与方法１．１㊀试验材料１．１．１㊀培养基㊂Ｍ１０培养基：可溶性淀粉１０．０ｇ，水解酪素０．５ｇ，复合盐母液１０ｍＬ，琼脂１４．０ｇ，去离子水１０００ｍＬ，ｐＨ７．２ ７．４，复合盐母液溶解㊂Ｐ３培养基：燕麦粉２０．０ｇ，复合盐母液１０ｍＬ，琼脂１４．０ｇ，去离子水１０００ｍＬ，ｐＨ７．２ ７．４，复合盐母液溶解㊂复合盐母液：ＫＮＯ３１．０００ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４０．５００ｇ，ＮＨ４ＮＯ３０．１００ｇ，ＭｇＳＯ４㊃７Ｈ２Ｏ０．５００ｇ，ＮａＣｌ０．５００ｇ，ＦｅＳＯ４０．０１０ｇ，ＭｎＣｌ２㊃Ｈ２Ｏ０．００１ｇ，ＺｎＳＯ４㊃７Ｈ２Ｏ０．００１ｇ，去离子水１０ｍＬ㊂ＬＢ液体培养基㊁ＬＢ固体培养基购自北京酷来博科技有限公司㊂１．１．２㊀指示菌㊂多杀性巴氏杆菌（批号ＣＶＣＣ３９３）㊁产气肠杆菌（批号ＡＴＣＣ１３０４８）㊁粪肠球菌（批号ＡＴＣＣ２９２１２）㊁铜绿安徽农业科学，Ｊ．ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃ．Ｓｃｉ．２０２４，５２（４）：１－１０㊀㊀㊀１．２㊀试验方法１．２．１㊀样本采集㊂从广东湛江红树林自然保护区采集红树植物根㊁茎㊁叶各５０份，装于密封袋，室温保存㊂１．２．２㊀样本的分组和处理㊂将采集的红树植物组织根㊁茎㊁叶样品各５０份随机排序标记㊂将样本植物清洗干净，依次用５％次氯酸钠㊁７５％乙醇浸泡３ｍｉｎ，在消毒液浸泡后用无菌水冲洗多次㊂消毒完成后晾干，采用电动匀浆器将植物组织充分研磨，加入无菌水制成组织原液㊂１．２．３㊀菌株培养与分离㊂吸取植物组织原液０．１ｍＬ均匀涂布到Ｍ１０㊁Ｐ３培养基上，２８ħ培养７ ２１ｄ，挑选单菌落，进一步纯化分离后的菌株－８０ħ保存㊂１．２．４㊀有抑菌活性菌株的筛选㊂采用固体琼脂打孔法筛选红树植物根㊁茎㊁叶组织中有抑菌活性的菌株，将大肠杆菌㊁金黄色葡萄球菌㊁沙门氏菌㊁链球菌４种指示菌分别加入ＬＢ固体培养基，用无菌打孔器打孔，将分离菌株培养过夜并用ＬＢ液体培养基稀释至１０５ＣＦＵ／ｍＬ，接种至孔中，２８ħ培养２４ｈ，测量抑菌圈直径㊂１．２．５㊀１６ＳｒＤＮＡ测序和系统发育树分析㊂对筛选的有抑菌活性的菌株采用试剂盒提取细菌基因组ＤＮＡ，进行１６ＳｒＤ⁃ＮＡ序列ＰＣＲ扩增㊂扩增的引物设计如下：上游引物２７Ｆ（５ᶄ－ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ－３ᶄ），下游引物１４９２Ｒ（５ᶄ－ＣＴＡＣＧＧＣＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡ－３ᶄ）㊂ＰＣＲ扩增条件：９４ħ预变性５ｍｉｎ；９４ħ变性３０ｓ，５７ħ退火３０ｓ，７２ħ延伸４５ｓ，３０次循环；最后７２ħ延伸１０ｍｉｎ㊂扩增产物经１％琼脂糖凝胶电泳检测，委托上海生工生物工程股份有限公司进行测序分析㊂序列经ＢｉｏＥｄｉｔＳｅｑｕｅｎｃｅＡｌｉｇｎｍｅｎｔＥｄｉｔｏｒ软件整理后，利用ＥｚＢｉｏＣｌｏｕｄ数据库（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｚｂｉｏｃｌｏｕｄ．ｎｅｔ／）进行在线比对；选取同源性最高菌株的序列作为参比对象，运用ＭＥＧＡ１０．０软件，采用Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ法构建系统发育树，Ｂｏｏｓｔｒａｐ１０００次检测各分支的置信值，对各菌株的系统发育地位进行分析㊂２㊀结果与分析２．１㊀分离菌株的抑菌效果㊀从红树植物根㊁茎㊁叶组织中分离出内生菌共８５７株，其中根２２７株，茎３１０株，叶３２０株㊂Ｍ１０培养基共分离出具有抑菌活性菌株９５株，从红树林植物根分离出具有抑菌活性菌株２２株，如表１所示，菌株４５－４对铜绿假单胞菌抑菌活性最强，菌株２９－１对产气肠杆菌抑菌活性最强，菌株１４－１对粪肠球菌和多杀性巴氏杆菌均表现出最强抑菌活性且呈现广谱抑菌效果；从红树林植物茎分离出具有抑菌活性菌株３８株，如表２所示，菌株１３－２对铜绿假单胞菌㊁粪肠球菌和多杀性巴氏杆菌均表现出最强抑菌活性且呈现广谱抑菌效果，菌株２１－４对产气肠杆菌抑菌活性最强且具有广谱抑菌效果；从红树林植物叶分离出具有抑菌活性菌株３５株，如表３所示，菌株３２－５对铜绿假单胞菌和产气肠杆菌均表现出最强抑菌活性且具有广谱抑菌效果；菌株３－３对粪肠球菌具有最强的抑菌活性；菌株３１－５对多杀性巴氏杆菌具有最强抑菌活性和广谱抑菌效果㊂Ｐ３培养基分离有抑菌活性细菌共４７株，从红树林植物根分离出具有抑菌活性菌株３０株，如表４所示，其中菌株７－３对铜绿假单胞菌抑菌活性最强，菌株１１－１对粪肠球菌抑菌活性最强且具有广谱抑菌效果，菌株２６－１对产气肠杆菌抑菌活性最强且具有广谱抑菌效果，菌株７－２对多杀性巴氏杆菌抑菌活性最强；从红树林植物茎分离出具有抑菌活性菌株７株，如表５所示，其中菌株１２－４对铜绿假单胞菌㊁粪肠球菌㊁多杀性巴氏杆菌抑菌活性均最强且具有广谱抑菌效果，菌株１４－４对产气肠杆菌抑菌活性最强；从红树林植物叶分离出具有抑菌性菌株１０株，如表６所示，其中菌株１４－１对铜绿假单胞菌抑菌活性最强，菌株３１－４对粪肠球菌和产气肠杆菌抑菌活性均最强，菌株４２－４对多杀性巴氏杆菌抑菌活性最强㊂表１㊀Ｍ１０培养基从红树林植物根分离出具有抑菌活性的菌株Ｔａｂｌｅ１㊀ＳｔｒａｉｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｒｏｏｔｓｕｓｉｎｇＭ１０ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ单位：ｍｍ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ４－４ １１ ２０－３ １７ １２１２－３ １３ ４４－１ １３ ２８－２ １２ ２－２ １４ １４－１１０２８１２１８２０－２ １６ ４４－２ １７ ２８－１ １４ ４５－４１３ ４５－２ １４４１－３１１ ２９－４１２ ４０－６１２ １３－５１２ ４１－６９ ３１－４１２ ３６－１１１ ４６－１９ ４１－５ １２ ２９－１ １３ ㊀注： 表示无抑菌圈或不明显㊂２㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２４年表２㊀Ｍ１０培养基从红树林植物茎分离出具有抑菌活性的菌株Ｔａｂｌｅ２㊀ＳｔｒａｉｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｔｅｍｕｓｉｎｇＭ１０ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ单位：ｍｍ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ４４－１ ２１ １２１８－６１５ ２１２３－２２１ ２０４０－１１９１８ １９４７－１１６１４ ３２２２－４ ２０ １６１３－２２７４０２０６４４８－１－２１１２０ ４９－１－２１２１４ １４１３－１１８２０ １２－１１３１４ ２５２１－４１３１６２４２８１６－１ １６ ２８－２ １９ ２０－７２０１２１８２６１８－３ １８ ４９－１－１２０１６１８３０２２－７ １９ ２２－１１８ １８１３－７１８２５ １２－２ ３６ １８－４ １８ ４７－２１５１２２３１５１０－１ ２３ ２１－２ １９２０１１３０－６ ３０１８２８５－４１５ ２０ ５－２１２ １７ ４７－３１４ １９９４５－５１１ ３５－３ １０ １３５－３１３ ４８－３１２ ７－１１０ ４８－６１０ ４８－５１０ ３９－１１２ ３９－３１１ ㊀注： 表示无抑菌圈或不明显㊂㊀Ｎｏｔｅ： － ｉｎｄｉｃａｔｅｓｎｏａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｚｏｎｅｏｒｉｎｃｏｎｓｐｉｃｕｏｕｓ．表３㊀Ｍ１０培养基从红树林植物叶分离出具有抑菌活性的菌株Ｔａｂｌｅ３㊀ＳｔｒａｉｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｌｅａｆｕｓｉｎｇＭ１０ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ单位：ｍｍ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ３２－１１２１４１４１５５－２３２５０３６３４１５－１ １２ ９－５ ２０１６１２１－１ １０３－３２０６０３８ ２７－３ ３７２０ ４４－３ ２４ ２３－１ ２０ １６３０－２ １８ ３０－３１３ ３３－２２６３８ ２３３１－３１７１６ １９４１－２ ３４ ６－２１２１６１３１３３０－４ ２０ ３６－３１３１７１７２２４６－７３２３６４２１４１３－５２０２２１６２５３４－３１２２６ １２１２－３１３１６ １３１８－４１２２２１２３２２６－５１５１６ ４７－２１７２９１６１５３２－５３８２６４２３２４８－１１７１０ ２９－３１４ １４１６２０－２ ２８２１２３３１－５１６２０３０３８４０－３ ２０ １８３３－５ １４１６１０－５ １２ １０４９－３ １４１２４７－３１６２３１５１６２０－３１８２０１４９㊀注： 表示无抑菌圈或不明显㊂－３５２卷４期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀谢星朋等㊀红树林植物内生菌分离鉴定及其抑菌活性研究表４㊀Ｐ３培养基从红树林植物根分离出具有抑菌活性的菌株Ｔａｂｌｅ４㊀ＳｔｒａｉｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｒｏｏｔｓｕｓｉｎｇＰ３ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ单位：ｍｍ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ２８－２１１ ２０－３１１ ３５－３１０ ３８－１１４１１１１１４４８－２１１ １８－１１３ ４７－２１１ １９－３１１１５１２１０４３－３１１１９１１１４３５－４１１ ２４－１１０１５１５ ４０－２１４ ３６－１１２１９１１１４７－２１２３８４０１９１５－３１８１５１６１６４１－４１２２８３０ １４－１１５２１１４１５１１－１１６４３３７１４３３－１１５ ４８－３１５２０３７１６５－１ ２６ ３４－１１３２２ １７８－３１９１６１８ １５－２１０２２３７ ８－１２１２８ １８４５－１１５２４３５１３８－４１８ ２６－１１３３０４２１０１９－２１０ ７－３２４１９ ㊀注： 表示无抑菌圈或不明显㊂㊀Ｎｏｔｅ： － ｉｎｄｉｃａｔｅｓｎｏａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｚｏｎｅｏｒｉｎｃｏｎｓｐｉｃｕｏｕｓ．表５㊀Ｐ３培养基从红树林植物茎分离出具有抑菌活性的菌株Ｔａｂｌｅ５㊀ＳｔｒａｉｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｔｅｍｕｓｉｎｇＰ３ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ单位：ｍｍ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ１２－４３１５６３１２９１６－１１８４０１６２２１４－４ ２０３６ １５－２ １６１６ ４５－２ １９２９ ２３－２３０２０１９２０３９－３ １４㊀注： 表示无抑菌圈或不明显㊂㊀Ｎｏｔｅ： － ｉｎｄｉｃａｔｅｓｎｏａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｚｏｎｅｏｒｉｎｃｏｎｓｐｉｃｕｏｕｓ．表６㊀Ｐ３培养基从红树林植物叶分离出具有抑菌活性的菌株Ｔａｂｌｅ６㊀ＳｔｒａｉｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｌｅａｆｕｓｉｎｇＰ３ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ单位：ｍｍ试验菌株编号ＴｅｓｔｓｔｒａｉｎＮｏ．铜绿假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ粪肠球菌Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ产气肠杆菌Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ多杀性巴氏杆菌Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ３１－４１３２４２０ ３３－２１６１４９１４１４－１２０ １０４８－１ ２５４２－４ ３０３４－１ ２５８－１ ２７２９－２１５ １３－１１５ １３１３－２１５１３ ２．２㊀有抑菌活性菌株的基因测序和系统发育分析㊀分别对２种培养基分离筛选出的有抑菌活性的菌株构建Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树，如图１ ６所示㊂Ｍ１０培养基从红树林植物根分离的菌株主要分为４个属，分别为变形杆菌属㊁肠球菌属㊁葡萄球菌属㊁芽孢杆菌属；从红树林植物茎分离的菌株主要为８个属，分别为芽孢杆菌属㊁肠球菌属㊁葡萄球菌属㊁草螺菌属㊁黄单胞菌属㊁不动杆菌属㊁肠杆菌属㊁分散泛菌属；从红树林植物叶分离的菌株主要为４个属，分别为分散泛菌属㊁黄单胞菌属㊁芽孢杆菌属㊁葡萄球菌属㊂Ｐ３培养基从红树林植物根分离的菌株主要分为６个属，分别为芽孢杆菌属㊁黄单胞菌属㊁肠球菌属㊁肠杆菌属㊁埃希氏菌属㊁分散泛菌属；从红树林植物茎分离的菌株主要为４个属，分别为芽孢杆菌属㊁肠球菌属㊁变形杆菌属㊁黄单胞菌属；从红树林植物叶分离的菌株主要为２个属，分别为芽孢杆菌属㊁葡萄球菌属㊂其中芽孢杆菌属为优势菌属，占分离菌株总数的４８．６％㊂３㊀讨论与结论海洋环境具有高压㊁高盐㊁无光照等特殊性，海洋微生物在海洋生态独特环境下会产生独特的代谢产物，而这些特殊代谢产物作为新型抑菌物质在生物医药具有巨大的研究意义，目前已经有针对海洋微生物及其次级代谢产物研究［６］㊂许多研究显示海洋微生物中的优势菌属 芽孢杆菌属，可以产生具有抗菌作用的抑菌活性物质［７］，如罗曼等［８］从南极海洋沉积物中分离纯化出草芽孢杆菌斯氏亚种对层生镰刀菌具有较强抑菌活性，Ｚｈｏｕ等［９］从南大西洋的深海沉积物中分离筛选得到一株能抑制曲霉突变株菌丝生长的环状芽孢杆菌㊂红树林是一种处在热带和亚热带交界地带的木本植物群落，是海洋与陆地两大生态系统的过渡区域，其独特的４㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２４年图１㊀Ｍ１０培养基分离的红树植物根有抑菌活性菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树Ｆｉｇ．１㊀Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｒｏｏｔｓｏｆｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｉｎＭ１０ｍｅｄｉｕｍ树林植物如木榄㊁秋茄㊁红海榄和海桑等宿主植物中均发现抗菌化合物［１－２］㊂根据戴悦等［１０］对红树林植物根际土壤细菌分离鉴定及其抑菌活性研究显示芽孢杆菌和肠杆菌为优势菌属，从红树林植物根际提取的内生菌具有产生活性物质的潜力㊂该试验从广东湛江红树林自然保护区采集的植物（９５株）比Ｐ３培养基（４７株）更多㊂戴悦等［１０］从红树林植物根际土壤中分离得到１０８株具有抑菌活性的菌株，占分离菌株的１６．５％，且Ｐ３培养基比Ｍ１０培养基在分离具有抑菌性菌株中更具有优势㊂李静等［１１］从海南东寨港红树林植物内生菌中共分离得到１４６株放线菌，其中４０株具有抗菌活性，５５２卷４期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀谢星朋等㊀红树林植物内生菌分离鉴定及其抑菌活性研究图２㊀Ｍ１０培养基分离的红树植物茎有抑菌活性菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树Ｆｉｇ．２㊀Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｓｔｅｍｏｆｍａｎｇｒｏｖｅ６㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２４年图３㊀Ｍ１０培养基分离的红树植物叶有抑菌活性菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树Ｆｉｇ．３㊀Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆｍａｎｇｒｏｖｅ７５２卷４期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀谢星朋等㊀红树林植物内生菌分离鉴定及其抑菌活性研究图４㊀Ｐ３培养基分离的红树植物根有抑菌活性菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树Ｆｉｇ．４㊀Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｒｏｏｔｓｏｆｍａｎｇｒｏｖｅ８㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２４年图５㊀Ｐ３培养基分离的红树植物茎有抑菌活性菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树Ｆｉｇ．５㊀Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｓｔｅｍｏｆｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｉｎＰ３ｍｅｄｉｕｍ中提取的内生菌产生抑菌活性物质研究具有巨大的潜力㊂通过分子鉴定和系统发育树分析，在属水平上，有抑菌活性菌株共１０个属，分别是芽孢杆菌属㊁肠球菌属㊁葡萄球菌属㊁草螺菌属㊁黄单胞菌属㊁不动杆菌属㊁肠杆菌属㊁分散泛菌属㊁埃希氏菌属㊁变形杆菌属，其中芽孢杆菌属为优势菌属，占分离菌株总数的４８．６％，在Ｍ１０和Ｐ３培养基中，Ｍ１０培养基在叶部提取分离芽孢杆菌属菌株数量最多，在根部提取芽孢杆菌属菌株数量最少，Ｐ３培养基在根部提取分离出菌，其中芽孢杆菌为优势菌属㊂张雅慧等［１３］从山口红树林根际土壤中获得１１７株细菌，其中芽孢杆菌为优势属，占所有菌株的２８．２０％㊂Ｖａｒｇｈｅｓｅ等［１４］研究表明海洋大型藻类相关异养细菌芽孢杆菌属细菌萎缩芽孢杆菌具有较好的抗菌活性，其中萎缩芽孢杆菌ＳＨＢ２０９７（ＭＷ８２１４８２）对临床上重要的病原体表现出显著的抗菌活性㊂这与该试验结果一致，优势菌属皆为芽孢杆菌属㊂以上数据表明湛江红树林植物各组织内生菌具有产生９５２卷４期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀谢星朋等㊀红树林植物内生菌分离鉴定及其抑菌活性研究图６㊀Ｐ３培养基分离的红树植物叶有抑菌活性菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ系统发育树Ｆｉｇ．６㊀Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃Ｊｏｉｎｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｉｎＰ３ｍｅｄｉｕｍ参考文献［１］徐志勇，冯昭，徐静．红树林微生物抗菌活性成分研究进展［Ｊ］．中国抗生素杂志，２０１７，４２（４）：２４１－２５４．［２］闫璧滢，陈渝川，雷丽娟，等．海南东寨港红树林植物和沉积物真菌多样性及其药用活性［Ｊ］．中国抗生素杂志，２０２３，４８（２）：１５８－１７１．［３］方珍娟，张晓霞，马立安．植物内生菌研究进展［Ｊ］．长江大学学报（自科版），２０１８，１５（１０）：４１－４５．［４］ＥＬ⁃ＳＡＹＥＤＭＯＵＲＡＤＭＨ．ＮｅｗｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓｆｒｏｍＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍａｌ⁃ｂｏａｔｒｕｍａｎｄＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｌｅｐｔｏｂａｃｔｒｕｍ［Ｊ］．Ａｕｓｔｒａｌｉａｎｊｏｕｒｎａｌｏｆｂａｓｉｃ＆ａｐ⁃ｐｌｉｅｄｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１０，４（８）：２１６６－２１７５．［５］ＪＯＵＤＡＪＢ，ＭＡＷＡＢＯＩＫ，ＮＯＴＥＤＪＩＡ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｉ⁃ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅｓｆｒｏｍＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｓｐ．ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＧａｒｃｉｎｉａｎｏｂｉｌｉｓａｇａｉｎｓｔＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｍｅｇｍａｔｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｊｏｕｒｎａｌｏｆｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉ⁃ｏｌｏｇｙ，２０１６，５（２）：１９２－１９６．［６］李贺，林学政，何培青，等．南极抗细菌活性菌株的筛选及系统发育分析－ａｕｒｅｕｓａｎｄｉｎｖｉｖｏｅｖａｌｕａｔｉｏｎｕｓｉｎｇｅｍｂｒｙｏｎｉｃｚｅｂｒａｆｉｓｈｔｅｓｔｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｉｎ⁃ｄｉａｎｊｏｕｒｎａｌｏｆｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１６，７８（３）：４１７－４２２．［８］罗曼，万婧倞，黄仕新，等．南极沉积物来源抗菌细菌的筛选及抑菌物质的鉴定［Ｊ］．微生物学通报，２０２０，４７（６）：１７８７－１７９４．［９］ＺＨＯＵＹ，ＷＡＮＧＪＹ，ＧＡＯＸＪ，ｅｔａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌｄｅｅｐ⁃ｓｅａＢａｃｉｌ⁃ｌｕｓｃｉｒｃｕｌｕｓｓｔｒａｉｎａｎｄｕｎｉｆｏｒｍｄｅｓｉｇｎｆｏｒｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｉｔｓａｎｔｉ⁃ａｆｌａｔｏｘｉ⁃ｇｅｎｉｃｂｉｏａｃｔｉｖｅｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ，２０１９，１０（１）：１３－２２．［１０］戴悦，张汝军，张腾月，等．红树林植物根际土壤细菌分离鉴定及其抑菌活性的研究［Ｊ］．黑龙江畜牧兽医，２０２３（３）：７３－７８．［１１］李静，戴素娟，庹利，等．海南东寨港真红树植物内生放线菌多样性及其抗菌活性［Ｊ］．微生物学通报，２０１６，４３（８）：１７５３－１７６５．［１２］李蜜，候师师，银江林，等．北部湾徐闻海域红树内生细菌物种多样性及其杀线虫活性研究［Ｊ］．广西植物，２０２０，４０（３）：３０１－３１０．［１３］赵雅慧，张舒琳，吴家法，等．山口红树林根际土壤可培养细菌多样性及其活性筛选［Ｊ］．海洋学报，２０１８，４０（８）：１３８－１５１．０１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２４年。

固体发酵两株南海红树林内生真菌的次级代谢产物研究的
开题报告
1. 研究背景
随着生物技术的不断发展，发酵技术在生产中逐渐得到应用，固态发酵具有操作简单、能耗低、产物纯度高等优点，在生物制药、食品生产等方面有着广泛的应用前景。

红树林是一种特殊的生境，内生真菌资源丰富，具有丰富的生物活性物质，研究南海红树林内生真菌的次级代谢产物对于开发新药、开发新食品等有着重要的意义。

2. 研究目的
本研究旨在通过固态发酵的方法研究南海红树林内生真菌的次级代谢产物，并对其进行分离、提纯和结构鉴定，为开发新药、新食品等提供理论依据。

3. 研究内容
（1）筛选南海红树林内生真菌，挑选两株优良菌株进行固态发酵；
（2）对固态发酵产生的代谢产物进行初步筛选和检测，并进行抑菌、抗氧化和细胞毒性活性测定；
（3）对活性成分进行分离和提纯，并进行结构鉴定和活性测试；
（4）探究固态发酵条件对代谢产物的影响。

4. 研究方法
选择南海红树林内生真菌，以不同的原料为基质进行固态发酵，收获静置培养物并通过旋转蒸发等分离手段进行分离；通过不同的化学方法对分离得到的代谢产物进行初步分离、结构鉴定和活性测试。

5. 预期结果
本研究将挖掘南海红树林内生真菌的次级代谢产物，筛选优良的真菌菌株和合适的固态发酵条件，并通过分离和结构鉴定活性成分，从而为生物制药和新食品的开发提供更多的前沿理论和丰富的实践基础。

两株红树林内生真菌次生代谢产物研究的开题报告题目：两株红树林内生真菌次生代谢产物研究摘要：红树林是一种独特的海岸生态系统，其内生真菌作为一种重要的生物体，对红树林的生态环境起到了关键作用。

本文选取两株分离自红树林的内生真菌，利用化学和分子生物学技术对其次生代谢产物进行研究和分析。

初始结果表明，这两株真菌的次生代谢产物具有较强的生物活性，并且存在药用和生物制造潜力。

进一步地，通过质谱分析等技术，对这些次生代谢产物的结构进行推断和确认，并探索其在微生物与植物相互作用中的功能和机制。

本文旨在深入探究红树林内生真菌次生代谢产物的特性和应用，为环境保护和医药开发提供科学依据。

关键词：红树林，内生真菌，次生代谢产物，结构鉴定，生物活性Abstract:Mangroves are a unique coastal ecosystem, and endophytic fungi as an important organism, have played a key role in the ecological environment of mangrove forest. In this paper, two endophytic fungi isolated from a mangrove forest were selected, and their secondarymetabolites were studied and analyzed using chemical and molecular biology techniques. The initial results showed that the secondary metabolites of these two fungi have strong biological activity and have the potential for medicinal and biological manufacturing. Furthermore, the structures of these metabolites were inferred and confirmed by mass spectrometry analysis and other technologies, and the functions and mechanisms of these metabolites in the interaction between microorganisms and plants were explored. This paper aims to explore the characteristics and applications of secondary metabolites produced by endophytic fungi in mangrove forests, and to provide scientific basis for environmental protection and drug development.Keywords: mangrove, endophytic fungi, secondary metabolites, structure identification, biological activity。

专利名称：红树植物秋茄内生真菌2cpe-1及其发酵液与应用专利类型：发明专利
发明人：叶炎婵,董钢,黄华容,方岩雄
申请号：CN201810409436.4
申请日：20180424
公开号：CN108546651A
公开日：
20180918
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一株红树植物秋茄内生真菌2cpe‑1及其发酵液与应用，该红树植物秋茄内生真菌2cpe‑1，保藏编号为CGMCC No.15388；于2018年02月07日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；旨在提供一种对红树植物秋茄内生真菌2cpe‑1及其发酵液，其对植物病原真菌小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、大豆疫霉病菌(Phytophthora sojae)和香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)的菌丝生长具有较为明显的抑制作用的菌种，可作为抗植物病原真菌病害的新型农用抗生素类天然活性物；属于微生物技术领域。

申请人：广东立威化工有限公司,广东工业大学
地址：525025 广东省茂名市茂高公路旁(金塘尚垌)
国籍：CN
代理机构：广州市科丰知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：王海曼
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