当前位置：文档之家 › 高效液相色谱法测定硫酸特布他林与

高效液相色谱法测定硫酸特布他林与

  • 格式：pdf
  • 大小：264.84 KB
  • 文档页数：4

下载文档原格式

  / 4

合集下载

反相高效液相色谱法测定硫酸特布他林片和硫酸特布他林气雾剂中硫酸特布他林的含量

反相高效液相色谱法测定硫酸特布他林片和硫酸特布他林气雾剂中硫酸特布他林的含量

反相高效液相色谱法测定硫酸特布他林片和硫酸特布他林气雾剂中硫酸特布他林的含量刘进芳;马艳【摘要】采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定硫酸特布他林片和硫酸特布他林气雾剂中硫酸特布他林的含量.在Shim-pack VP-ODS柱(150mm×4.6mm,4.6μm)上进行分离,以0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液—乙腈(体积比为85:15)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为215nm,柱温为40℃,建立了高效液相色谱法测定硫酸特布他林片和硫酸特布他林气雾剂中硫酸特布他林含量的方法[1].硫酸特布他林在0.5～20μg/mL浓度范围内线性关系良好,线性相关系数为0.9967,RSD为3.23％(n=6),硫酸特布他林片和硫酸特布他林气雾剂的回收率分别为97.18％和92.39％.利用此方法测定硫酸特布他林片和硫酸特布他林气雾剂中硫酸特布他林的含量,具有方法简便、快速、准确可靠的优点,可以作为样品的检测方法[2].【期刊名称】《天津化工》【年(卷),期】2017(031)004【总页数】4页(P55-58)【关键词】反相高效液相色谱法;硫酸特布他林;硫酸特布他林片;硫酸特布他林气雾剂【作者】刘进芳;马艳【作者单位】天津瑞通华盛贸易有限公司,天津300457;重庆市计量质量检测研究院,重庆401121【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2硫酸特布他林是一种具有较高选择性的平喘药，其结构式见图1，又名博利康尼，它对肾上腺素β2受体高度选择性，具有明显的平喘去痰作用，临床适用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎、肺气肿和其他伴有支气管痉挛的肺部疾病，在国内外已得到广泛的应用[3]。

硫酸特布他的主要成分硫酸特布他林原料及其它剂型，因有机杂质和分解产物的存在，含量测定国外均采用反相离子对高效液相色谱法。

中国药品标准采用分光光度法[4]。

硫酸特布他林体内有效血药浓度很低（1～10μg/mL）[5]。

高效液相色谱法测定注射用硫酸妥布霉素的含量

高效液相色谱法测定注射用硫酸妥布霉素的含量

１ １ 仪 器 与试 药 Ａ ｉ ｎ ０高 效液 相 色 谱 ． ｇｌ ｔ１ ０ ｅ １ 仪 ； 布 霉 素 标 准 品 ， 中 国 药 品生 物 制 品 检 定 所 ） 妥 （ ； 注 射 用 硫 酸 妥 布 霉 素 （ 建 闽东 力 捷 迅 药 业 有 限 公 福 司 ） 乙腈 为 色 谱 纯 ； 为超 纯 水 ； 生 化试 剂 等 均 为 ； 水 衍
４ ２ 采 用 Ｔ ． Ｉ ｃ法 以 自身对 照 检 测 有 关 物 质 ， 色 用
高 效 液 相 色 谱 法 测 定 注 射 用 硫 酸 妥 布 霉 素 的 含 量
胡 云明 张 康 于 华 生。 １ （ ．福 建 闽 东 力 捷 迅 药 业 有 限 公 司 福 州 ３ ０ ０ ； ．福 建 省 医 药 工 业 公 司 福 州 ５０１２ ３ ０ ０ ； ．福 建省 药 品检 验 所 福 州 ３ ０ ０ ） ５０３３ ５ ０ １
１ ２ 色 谱 条 件 色 谱 柱 ： ｇｌ ｔ Ｈｙ ｅｓ ． Ａ ｉ ｎ ｐ ｒｉ ＯＤＳ ｅ ｌ
（ｆ ．． × １ ５ ５ ｍ ４ ０ ２ ｍｍ ） 流 动 相 ： ． ５ 三 羟 甲 基 氨 基 ； 硫 酸 溶 液 （ ０：５ 乙 ． ｍｏ ・ ４ ９：１ ） 流 速 ：． ｍｌｍｉ～ ； １ ２ ／ ｎ 检测 波 长 ：６ ｎ 进 样量 ：Ｏ ｌ ３ ５ ｍ； ２
分 析纯 。
４硝 基 氟 苯 适 量 ， 乙 醇 制 成 每 ｌ 含 １ｒｇ的 溶 一 用 ｍｌ ０ ａ
液 。 （ ） 羟 甲基 氨基 甲烷 溶 液 ： 三羟 甲基 氨基 甲 ２三 取 烷贮备液 （ ｌ 每 ｍｌ中 含 １ ｍｇ 的 水 溶 液 ） ０ ， ５ ４ ｍｌ置 ２０ 量 瓶 中， 二 甲基 亚 砜 稀 释 至 刻 度 ， 匀 。 ０ ｍｌ 用 摇 ２ ２ ２ 衍 生 化处 理 ： 别 精 取 对 照 品 溶 液 ， 品溶 ． ． 分 样 液 和 水 各 ４ ， ５ ｍｌ 瓶 中 ， 加 入 ２ ４二 硝 基 ｍｌ置 ０ 量 各 ，一 氟 苯 溶 液 １ ｍｌ 三 羟 甲基 氨 基 甲 烷 溶 液 １ｍｌ摇 ０ 和 ０ ， 匀， ６＿ 置 ＯＣ的 水 浴 中 加 热 ５ ｍｉ 后 ， 温 放 置 ０ ｎ 室 １ ｍｉ 加 乙腈 适 量 ， 至 室 温 ， 乙 腈 稀 释 至 刻 度 ， ０ ｎ， 放 用

苯乙胺类药物杂质检查及含量测定

苯乙胺类药物杂质检查及含量测定

酮体 酮体
10%HCl
0.24
0.01mol/L HCl
20
310 不得大于0.10 330 不得大于0.47
苯乙胺类药物杂质检查及含量测定
三、苯乙胺类药物的杂质检查
（二）有关物质检查 肾上腺素中有关物质的HPLC检查 色谱条件：供试品溶液：1mg/ml 对照溶液0.2%（2μg/ml） 氧化破坏溶液：50mg供试品，加浓过氧化氢溶液1ml，放 置过夜，加盐酸0.5ml，加流动相稀释至50ml 系统适用性试验溶液 ：取重酒石酸去甲肾上腺素对照品适 量，加氧化破坏溶液溶解并稀释制成每1ml中含 20μg的溶 液
苯乙胺类药物杂质检查及含量测定
四、苯乙胺类药物的含量测定
（一）非水溶液滴定法
有机碱的硫酸盐，因硫酸在滴定液中酸性很强，只能滴
定至HSO4-
OH CH2OH
SO42- + HClO4
+
CH(OH)CH2NH2C(CH3)3 2
OH CH2OH
ClO4- +
OH (OH)CH2NH2C(CH3)3
四、苯乙胺类药物的含量测定
（一）非水溶液滴定法
BH+·A- + HClO4 BH+·ClO4- + HA
测定弱碱性药物含量-主要用于原料药分析 冰醋酸为溶剂 醋酸汞消除氢卤酸的干扰 指示剂（终点颜色应以电位滴定时的突跃点为准，并将 滴定结果用空白试验校正 ） 若碱性较弱则加醋酐使突跃明显
苯乙胺类药物杂质检查及含量测定
四、苯乙胺类药物的含量测定
（四）高效液相色谱法 • 测定方法 ➢ 精密量取本品适量（约相当于重酒石酸去甲肾上腺素
4mg），置25ml量瓶中， 加醋酸溶液（1→25）稀释至 刻度，摇匀，取2μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另 取重酒石 酸去甲肾腺素对照品适量，精密称定，加醋 酸溶液（1→25）制成每1ml中含0.16mg的溶液， 同法 测定。按外标法以峰面积计算，即得。

高效液相色谱法测定硫酸特布他林与红细胞膜表面β_2肾上腺素受体结合量

高效液相色谱法测定硫酸特布他林与红细胞膜表面β_2肾上腺素受体结合量

高效液相色谱法测定硫酸特布他林与红细胞膜表面β_2肾上腺素受体结合量蒋心惠;周岐新【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2010(38)3【摘要】建立了高效液相色谱同时检测红细胞混悬液中硫酸特布他林与盐酸普萘洛尔的方法.红细胞与特布他林在37 ℃水浴振荡保温反应1 h后,没有与细胞膜受体结合的特布他林通过1500 r/min离心5 min后分离,取上清液与受体-药物复合物分离.色谱柱为C_(18)柱,以0.020 mol/L KH_2PO_4溶液(含0.25%三乙胺,pH 5.1)-甲醇(20∶ 80, V/V)为流动相,在荧光激发波长280 nm,发射波长320 nm处测定样品含量.在优化的条件下,特布他林与普萘洛尔在0.010～3.000 mg/L范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9999和0.9998.测定重复性相对标准偏差为0.8%和1.2%;检出限分别为1.0和3.0 μg/L.该方法安全、简便、灵敏,适用于测定红细胞中硫酸特布他林和受体配体结合实验的研究.【总页数】4页(P377-380)【作者】蒋心惠;周岐新【作者单位】重庆医科大学药学院,重庆,400016;重庆医科大学药学院,重庆,400016【正文语种】中文【相关文献】1.妊高征患者淋巴细胞β2-肾上腺素能受体结合量改变及与新生儿体重关系的研究[J], 苏克平;刘志民;蔡庆如2.沙丁胺醇与红细胞膜表面β2-肾上腺素受体结合量的高效液相色谱法测定 [J], 蒋心惠;杨俊卿;周岐新3.反相高效液相色谱法测定硫酸特布他林片和硫酸特布他林气雾剂中硫酸特布他林的含量 [J], 刘进芳;马艳4.超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中肾上腺素残留量 [J], 位佳静; 曹艳云; 王祎娟; 臧勇军; 张肖; 路志轩5.固相萃取结合超高效液相色谱-质谱法测定畜禽肉及肉制品中肾上腺素和多巴胺的残留量 [J], 何亮娜;马俊美;范力欣;李强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

瘦肉精的来源及辨别

瘦肉精的来源及辨别

瘦肉精的来源及辨别作者：邓蓉蓉来源：《湖北畜牧兽医》2012年第11期中图分类号：S859.84 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2012）11-0030-01近年来，瘦肉精残留事件已为我国养殖业和肉食品安全领域蒙上了一层厚厚的阴影。

2006年9月上海曾出现300多人的瘦肉精中毒事件；2009年2月广州也发生了瘦肉精中毒事件。

2009年4月27日，《联合早报》报道：中国产牛肉产品被韩国查出含瘦肉精；2011年河南发生震惊全国的“3·15”瘦肉精事件，更是把瘦肉精残留推上了风口浪尖。

同期中央电视台新闻频道对饲喂瘦肉精的生猪流入南京市部分定点屠宰企业和济源双汇食品有限公司的情况进行了报道。

这是近年来在肉类行业发生的又一次影响重大的食品安全事件。

国家明令在饲料和动物饮用水中禁用的药品进入肉品产业链，造成肉品生产的无效供给和消费者的恐慌心理，严重影响了国家形象和产业发展。

现将瘦肉精的来源、危害及辨别方法介绍如下，供参考。

1 瘦肉精的来源瘦肉精是动物适用的一类药物，具有促进糖原分解、抑制脂肪合成、同化蛋白质等功效，这类药物主要包含盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、硫酸特布他林、马布特罗等，一般来说，饲料中添加适量盐酸克伦特罗等药物后，可使饲料转化率、生长速度、胴体瘦肉率提高10%以上[1]，因此被称为瘦肉精。

瘦肉精既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类β-激动剂，其严重危害畜牧业健康发展和畜产品安全。

20世纪80年代初，美国一家公司发现瘦肉精能促进动物瘦肉生长，于是开始将瘦肉精添加到饲料中，后因人体的不良反应而被禁用。

20世纪90年代初，瘦肉精流入我国，其危害也随之被报道。

1997年我国农业部相继发布了一系列的文件和规定禁止在动物养殖过程中使用盐酸克伦特罗等瘦肉精类药物。

2011年，国务院食品安全委员会办公室《“瘦肉精”专项整治方案》（食安办〔2011〕14号）规定的瘦肉精品种目录有：盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、盐酸多巴胺、西马特罗、硫酸特布他林、苯乙醇胺A、班布特罗、盐酸齐帕特罗、盐酸氯丙那林、马布特罗、西布特罗、溴布特罗、酒石酸阿福特罗、富马酸福莫特罗。

151种非法食品添加物黑名单

151种非法食品添加物黑名单

151种非法食品添加物黑名单为严厉打击食品生产经营中违法添加非食用物质、滥用食品添加剂以及饲料、水产养殖中使用违禁药物，卫生部、农业部等部门根据风险监测和监督检查中发现的问题，不断更新非法使用物质名单，至今已公布151种食品和饲料中非法添加名单，包括47种可能在食品中“违法添加的非食用物质”、22种“易滥用食品添加剂”和82种“禁止在饲料、动物饮用水和畜禽水产养殖过程中使用的药物和物质”的名单。

根据有关法律法规，任何单位和个人禁止在食品中使用食品添加剂以外的任何化学物质和其他可能危害人体健康的物质，禁止在农产品种植、养殖、加工、收购、运输中使用违禁药物或其他可能危害人体健康的物质。

这类非法添加行为性质恶劣，对群众身体健康危害大，涉嫌生产销售有毒有害食品等犯罪，依照法律要受到刑事追究，造成严重后果的，直至判处死刑。

这次公布的151种食品和饲料中非法添加名单，是由卫生部、农业部等部门在分次分批公布的基础上汇总再次公布，目的是提醒食品生产经营者和从业人员严格守法按标准生产经营，警示违法犯罪分子不要存侥幸心理;同时，欢迎和鼓励任何单位个人举报其他非法添加的行为。

一、食品中可能违法添加的非食用物质名单（47种）二、食品中可能滥用的食品添加剂品种名单（22种）三、禁止在饲料、动物饮用水和畜禽水产养殖过程中使用的药物和物质（82种）（一）食品动物禁用的兽药及其它化合物清单（21种）（二）禁止在饲料和动物饮水中使用的物质（11种）1．苯乙醇胺A（Phenylethanolamine A）：ß-肾上腺素受体激动剂。

2．班布特罗（Bambuterol）：ß-肾上腺素受体激动剂。

3．盐酸齐帕特罗（Zilpaterol Hydrochloride）：ß-肾上腺素受体激动剂。

4．盐酸氯丙那林（Clorprenaline Hydrochloride）：药典2010版二部P783。

ß-肾上腺素受体激动剂。

一、 食品中可能违法添加的非食用物质名单(卫生部公布)

一、食品中可能违法添加的非食用物质名单（卫生部公布）二、食品中可能滥用的食品添加剂品种名单（卫生部公布）注：滥用食品添加剂的行为包括超量使用或超范围使用食品添加剂的行为三、禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录（农业部公布）一、肾上腺素受体激动剂1．盐酸克仑特罗（Clenbuterol Hydrochloride）：中华人民共和国药典（以下简称药典）2000年二部P605。

β2肾上腺素受体激动药。

2．沙丁胺醇（Salbutamol）：药典2000年二部P316。

β2肾上腺素受体激动药。

3．硫酸沙丁胺醇（SalbutamolSulfate）：药典2000年二部P870。

β2肾上腺素受体激动药。

4．莱克多巴胺（Ractopamine）：一种β兴奋剂，美国食品和药物管理局（FDA）已批准，中国未批准。

5．盐酸多巴胺（Dopamine Hydrochloride）：药典2000年二部P591。

多巴胺受体激动药。

6．西马特罗（Cimaterol）：美国氰胺公司开发的产品，一种β兴奋剂，FDA 未批准。

7．硫酸特布他林（Terbutaline Sulfate）：药典2000年二部P890。

β2肾上腺受体激动药。

二、性激素8．己烯雌酚（Diethylstibestrol）：药典2000年二部P42。

雌激素类药。

9．雌二醇（Estradiol）：药典2000年二部P1005。

雌激素类药。

10．戊酸雌二醇（EstradiolValerate）：药典2000年二部P124。

雌激素类药。

11．苯甲酸雌二醇（EstradiolBenzoate）：药典2000年二部P369。

雌激素类药。

中华人民共和国兽药典（以下简称兽药典）2000年版一部P109。

雌激素类药。

用于发情不明显动物的催情及胎衣滞留、死胎的排除。

12．氯烯雌醚（Chlorotrianisene）药典2000年二部P919。

13．炔诺醇(Ethinylestradiol)药典2000年二部P422。

执业西药师考试：2020执业西药师《药学专业知识(一)》真题及答案(4)

执业西药师考试：2020执业西药师《药学专业知识（一）》真题及答案(4)共105道题1、与二甲双胍合用能增加降血糖作用的α-葡萄糖苷酶抑制剂是( )。

（配伍题）试题答案：A2、用于评价表面活性剂性质的参数是( )（配伍题）试题答案：E3、具有双室模型持征的某药物静脉注射给药,其血药浓度时间--曲线表现为()（配伍题）试题答案：B4、根据选项，回答{TSE}题 A.舒林酸 B.塞来昔布 C.吲哚美辛 D.布洛芬 E.萘丁美酮{TS}用于类风湿性关节炎治疗的选择性环氧酶-2（COX-2）抑制剂是（）（配伍题）试题答案：B5、器官移植患者应用免疫抑制剂环孢素，同时服用利福平会使机体出现排斥反应的原因是( )。

（单选题）A. 利福平与环孢素竞争与血浆蛋白结合B. 利福平的药酶诱导作用加快环孢素的代谢C. 利福平改变了环孢素的体内组织分布量D. 利福平与环孢素竞争肾小管分泌机制E. 利福平增加胃肠运动，使环孢素排泄加快试题答案：B6、基于病变组织与正常组织间酸碱性差异的靶向制剂是（配伍题）试题答案：D7、连续使用吗啡，人体对吗啡镇痛效应明显减弱，必需增加剂量方可获原用剂量的相同效应，这种对药物的反应性逐渐减弱的状态称为()（配伍题）试题答案：B8、属于控释制剂的是（）（单选题）A. 阿奇霉素分散片B. 硫酸沙丁胺醇口崩片C. 硫酸特布他林气雾剂D. 复方丹参滴丸E. 硝苯地平渗透泵片试题答案：E9、表观分布容积Ｖ反映了药物在体内的分布情况。

地高辛的表观分布容积V通常高达500L左右，远大于人的体液的总体积，可能的原因（）。

（多选题）A. 药物与组织大量结合,而与血浆蛋白结合较少B. 药物全部分布在血液中C. 药物与组织的亲和性强,组织对药物的摄取多D. 药物与组织几乎不发生任何结合E. 药物与血浆蛋白大量结合,而与组织结合较少试题答案：A,C10、根据选项，回答{TSE}题 A.常规脂质体 B.微球 C.纳米囊 D.pH敏感脂质体 E.免疫脂质体 {TS}常用作栓塞治疗给药的靶向制剂是（配伍题）试题答案：B11、注射用美洛西林/舒巴坦、规格1.25（美洛西林1.0g，舒巴坦0.25g）。

液相色谱_质谱法测定人血清中特布他林及其药代动力学_高凌

液相色谱/质谱法测定人血清中特布他林及其药代动力学高　凌＊,王广基,王　颖1,孙建国,韩　俊1,盛龙生1(中国药科大学药代中心,1中国药科大学分析中心,南京210009)摘要　目的:测定人血清中特布他林浓度,研究中国男性健康志愿者口服该药后药代动力学规律。

方法:用LC-MS法测定特布他林浓度。

流动相:2%冰乙酸—异丙醇(98.5∶1.5);色谱柱:Shimadzu VP-O DS;流速:0.5 mL·min-1;柱温:30℃。

结果:特布他林浓度在0.2～20ng·mL-1范围内线性关系良好(γ=0.9998)。

方法的回收率高于90%,最低浓度的日内及日间精密度分别为8.2%和12.9%,最低检测限为0.05ng。

10名健康志愿者单剂量口服特布他林口服液7.5mg后,药代动力学行为符合二房室模型。

结论:此法灵敏度高、选择性强,符合生物样品分析要求。

关键词　特布他林;液相色谱/质谱法;药代动力学 特布他林(terbutaline)是一种选择性的β2受体激动剂,有拟交感活性,广泛用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎、肺气肿等疾病[1,2]。

目前在国内已被列为基本药物。

由于该药口服剂量低,吸收不完全,且首过效应大,故体内血药浓度很低。

文献报道的测定方法有GC-MS[3,4]和LC-ECD[5]法,但这两种方法的提取及测定步骤均繁琐、费时。

本实验室首次用近几年发展起来的LC-M S联用技术测定人血清中特布他林,方法简便,特异性强,重现性好,灵敏度远高于上述两种方法。

用本方法测定了10名健康志愿者单剂量口服特布他林口服液后经时过程的血药浓度,并计算了相应的药代动力学参数,为临床用药提供参考。

材料与方法仪器与试剂　H P1100LC/MSD联用系统:含双高压泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱、光电二极管阵列检测器、电喷雾离子化接口的四极质谱检测器和HP Chemastation A.05.04。

反相高效液相色谱法测定硫酸特布他林片和硫酸特布他林气雾剂中硫

特 布他 林 的含 量 。在 Ｓ ｈ ｉ ｍ－ ｐ ａ ｃ ｋ Ｖ Ｐ — Ｏ Ｄ Ｓ 柱（ １ ５ ０ ｍｍＸ ４ ． ６ ｍｍ， ４ ． ６ ｔ ｘ ｍ） － － ｋ 进行分 离， 以０ ． Ｏ ｌ ｍｏ ｌ ／ Ｌ的 磷 酸 二 氢钾 溶 液 一 乙腈 （ 体 积 比为 ８ ５ ： １ ５ ） 为流 动相 ， 流速 为 １ ． ０ ｍＬ ／ ｍ ｉ ｎ ， 检 测 波长 为 ２ １ ５ ｎ ｍ， 柱 温 为 ４ ０ ℃， 建 立 了高效 液相 色谱 法测 定硫 酸特 布他 林 片和 硫 酸特 布 他 林 气 雾剂 中硫 酸特 布他 林 含 量 的方法【 】 ］ 。硫 酸 特 布 他 林 在 ０ ． ５ ～ ２ ０ １ ， ｚ ｇ ／ ｍＬ浓 度 范 围 内线 性 关 系 良好 ， 线 性 相 关 系数 为 ０ ． ９ ９ ６ ７ ， Ｒ Ｓ Ｄ为 ３ ． ２ ３ ％ｆ ｎ ＝ ６ ） ， 硫 酸 特布 他 林 片和 硫 酸 特 布他 林 气 雾剂 的 回 收 率 分别 为 ９ ７ ． １ ８ ％和 ９ ２ ． ３ ９ ％。
］
ｌ ， Ｈ ２ Ｓ Ｏ ４
Ｎ
量控制很有必要 。Ｕ Ｓ Ｐ Ｘ Ｘ Ｉ 版［ ７ １ 比色法测定硫酸特 布 他林 制剂 的含 量 ， Ｂ Ｐ １ ９ ８ ８ 年版 嗍 采 用 比较先 进 的
Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法 ， 但 其 色谱 条件 目前在 国内不 易满足 。 本 文 采 日本 岛 津 公 司 生 产 的 Ｏ Ｄ Ｓ色 谱 柱 （ １ ５ ０ ｍｍＸ ４ ． ６ ｍｍ， ４
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ８ — １ ２ ６ ７ ． ２ ０ １ ７ ． ０ ４ ． ０ ０ ２ ０ 中图分 类 号 ： ０ ６ ５ ７ ． ７ ２ 文 献标 志码 ： Ａ
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

2
2. 1
仪器与试剂 1100 高效液相色谱仪（ 美国 Agillent 公司 ） ， 配备荧光检测器。 Hypersil C18 柱 （ 250 mm × 4. 6 mm， 10 μm， 大连伊利特分析仪器有限公司） 。 KH2 PO4 、 H3 PO4 、 NaOH（ 优级纯 ） ； 柠檬酸、 NaCl （ 分析 甲醇（ 色谱纯） ； 三乙胺、 柠檬酸三钠、 葡萄糖、 纯） 。实验用水为超纯水。硫酸特布他林和盐酸普萘洛尔购自中国药品生物制品检定所 ， 分别以超纯 水配成 1000 mg / L 的储备液， 临用时根据需要以 Alsever 液逐级稀释为标准工作液。Alsever 液： 称取柠 NaCl 0. 42 g， 檬酸三钠 0. 80 g， 柠檬酸 0. 05 g， 葡萄糖 2. 05 g ， 加入超纯水溶解， 用 H3 PO4 调至 pH 7. 40 。 再加超纯水至 100 mL， 高温灭菌后置于冰箱中 4 ℃ 保存备用。
峰附近有一个干扰峰， 而且通过调节流动相比例的方法无法将其与特布他林达基线分离 ， 如果将其与特 布他林达基线分离， 普萘洛尔又不能被洗脱下来， 而且保留时间太长， 色谱采样时间必须在 30 min 以 上， 效率较低。改用荧光检测器后， 检测的灵敏度提高了 100 倍（ 定量限达到 1. 5 μg / L） ， 同时空白红细 胞样品中的杂质峰没有荧光吸收 ， 不存在对特布他林检测的干扰， 整个采样时间只需要 12 min， 检测效 率明显提高。色谱分离结果见图 1 。 3. 5 线性范围、 检出限和重现性 于 Alsever 液中分别加入不同浓度的特布他林和普萘洛尔标准溶液 ， 制得样品中分别含有 2 种药物 0. 030 ， 0. 100 ， 0. 300 ， 1. 000 和 3. 000 mg / L 的系列溶液， 分别进样测定， 以峰面积（ y） 对 浓度为 0. 010 ，
补加 Alsever 液至 0. 5 mL，混匀。将此混悬液置于 37 ℃ 水浴振荡保温反应 1 h， 取出， 以 1500 r / min 离 心5 min， 吸取上清液 0. 2 mL， 于此上清液中加入等体积的甲醇， 用于除去其中可能混有的少量蛋白质 13000 r / min 离心5 min， 成分。混悬均匀， 取上清液待测。 2. 2. 2 色谱条件 Hypersil C18 色谱柱（ 250 mm × 4. 6 mm，10 μm ） ； 流动相为 0. 020 mol / L KH2 PO4 溶 pH 5. 1 ） 液（ 含 0. 25% 三乙胺， 甲醇（ 20∶ 80 ，V / V ） ，流速为 1. 0 mL / min； 检测器为荧光检测器， 激发波 长 280 nm， 发射波长 320 nm； 柱温 30 ℃ ； 进样量 20 μL。
表 1 特布他林与红细胞膜 β2 受体结合量测定结果（ n = 3 ） Table 1 Results of combining capacity of terbutaline with β2 adrenergic receptor in erythrocyte membrane
第 38 卷 2010 年 3 月
分析化学（ FENXI HUAXUE）
研究简报
第3 期 377 ～ 380
Chinese Journal of Analytical Chemistry
檵檵殝
檵檵檵檵檵檵檵殝 檵檵殝
研究简报
DOI： 10. 3724 / SP. J. 1096. 2010. 00377
20090816 收稿； 20091108 接受 本文系国家自然科学基金（ No. 30572353 ） 资助项目 * Email： cqzhouqx@ yahoo. com. cn
檵檵檵檵檵檵檵殝
摘 要 关键词
高效液相色谱法测定硫酸特布他林与 红细胞膜表面 β2 肾上腺素受体结合量
蒋பைடு நூலகம்惠 周岐新
*
3
3. 1
结果与讨论
药物与细胞膜受体的反应平衡时间的测定
本实验的目的是测定药物与其特异受体的结合特性 ， 采用正常人体温 37 ℃ 为反应温度， 其达到平 衡所需要的时间通过药物与受体的结合程度 ， 也就是含有红细胞膜的 Alsever 液中游离药物的浓度变化 30 ， 60 和 90 min 时， 5842 ， 5843 和 来体现。实验结果表明， 保温时间为 15 ， 游离药物峰面积分别为 6253 ， 5865 。由此可见， 特布他林与红细胞膜受体的结合随水浴加热时间的延长而增加， 但加热到 60 min 后 结合已达平衡， 再延长加热时间， 结合率并没有明显增加， 所以本实验选用加热 60 min 作为特布他林与 红细胞膜受体的反应平衡时间。 3. 2 红细胞破膜与否的选择 红细胞膜经过低渗溶液破裂后， 用生理盐水洗涤除去水溶性杂质至细胞膜层呈肉红色 ， 同时上清液 ， 。 5 mg ， Alsever 200 L ， 呈无色 低温冷冻干燥细胞膜 称取干燥后的细胞膜样品 加入 液 μ 混匀， 再分别准 确加入普萘洛尔标准工作液与特布他林标准工作液 100 μL， 或者单独加入其中一种药物 100 μL， 然后 1500 r / min 离心 补加 Alsever 液至 0. 5 mL。 混匀， 将此混悬液置于 37 ℃ 水浴振荡保温反应 1 h， 取出， 5 min，吸取上清液 0. 2 mL， 于此上清液中加入等体积的甲醇， 用于除去其中可能混有的少量蛋白质成 13000 r / min 离心 5 min，取上清液待测。将此测定结果与未破裂的完整红细胞同法处理 分， 混悬均匀， 的测定结果进行比较。结果表明， 红细胞破裂后所测定得到的非特异结合量明显高于完整红细胞的非 特异结合量， 而特异结合量则减少。 3. 3 净化条件的选择 药物与细胞膜受体结合形成的复合物为大分子物质 ， 易溶于水而不溶于甲醇等有机溶剂中 ， 而本实 验采用的是反相高效液相色谱法 ， 流动相中使用了大量的甲醇， 如果不将水溶性的大分子物质分离， 在 样品注入色谱柱后， 大分子的物质会沉淀而堵塞色谱柱。同时， 已经与受体结合的药物也可能解离。因 此， 净化条件的优劣对测定结果影响很大。考察离心后上清液直接进样， 离心后上清液加入不同量的甲醇 沉淀水溶性的大分子物质， 高速离心后再进样等实验条件所得色谱分离效果及色谱分离时柱压的变化情 况， 得到样品的净化条件即结合反应后的上清液与甲醇 （ 1∶ 1 ，V / V） 混合处理， 分离效果好， 柱压稳定。 3. 4 检测器的选择及专属性 276 nm 波长处检测， 采用紫外检测器， 在进行样品测定时， 发现空白红细胞样品中在特布他林色谱
1
受体是存在于细胞膜、 细胞浆或细胞核上的大分子化合物 （ 如蛋白质、 核酸、 脂质等 ） ， 能与特异性 配体（ 药物、 递质、 激素、 内源性活性物质等 ） 结合并产生效应。 受体上能与配体相结合的活性基团， 称 为受点或位点。配体与受体结合是药物发挥临床疗效的基础 。肾上腺素受体存在于细胞膜， 而红细胞 膜表面存在特异的肾上腺素 β2 受体。特布他林是特异性的肾上腺素 β2 受体激动剂， 而普萘洛尔为非 选择性肾上腺素 β 受体的阻断剂， 与肾上腺素 β2 受体亲和力较高。 ［ 1 ～ 3］ ， 目前， 关于受体与配体的结合情况研究的经典方法是放射性受体配体结合法 即采用已用放射 性元素标记的药物与特异的受体蛋白或者含有某类受体的组织共同作用一段时间后 ， 分离未结合的标 ［ 4 ～ 6］ 。由于放射性元素在检测 记药物， 测定受体蛋白或者组织的放射性 ， 从而得出受体配体的结合情况 和后处理时存在环境污染和对人体的伤害 。本研究采用对人体无害的兼具有分离与分析功能的高效液 相色谱法检测游离药物量。结果表明， 特布他林与红细胞膜受体的非特异性结合高于特异性结合量 。
（ 重庆医科大学药学院，重庆 400016 ） 建立了高效液相色谱同时检测红细胞混悬液中硫酸特布他林与盐酸普萘洛尔的方法 。 红细胞与特
布他林在 37 ℃ 水浴振荡保温反应 1 h 后， 没有与细胞膜受体结合的特布他林通过 1500 r / min 离心 5 min 后分 离， 取上清液与受体药物复合物分离。 色谱柱为 C18 柱， 以 0. 020 mol / L KH2 PO4 溶液 （ 含 0. 25% 三乙胺， pH 5. 1 ） 甲醇（ 20∶ 80 ，V / V） 为流动相， 在荧光激发波长 280 nm， 发射波长 320 nm 处测定样品含量。在优化的 条件下， 特 布 他 林 与 普 萘 洛 尔 在 0. 010 ～ 3. 000 mg / L 范 围 内 线 性 关 系 良 好， 相 关 系 数 分 别 为 0. 9999 和 0. 9998 。测定重复性相对标准偏差为 0. 8% 和 1. 2% ； 检出限分别为 1. 0 和 3. 0 μg / L。 该方法安全、 简便、 灵 敏， 适用于测定红细胞中硫酸特布他林和受体配体结合实验的研究 。 硫酸特布他林； 盐酸普萘洛尔； 红细胞膜； β2 肾上腺素受体； 高效液相色谱
1. 特布他林（ Terbutaline） ； 2. 普萘洛尔（ Propranolol） 。
药物浓度（ x ） 进 行 线 性 回 归， 得 特 布 他 林 与 普 萘 洛 尔 的 线 性 方 程 分 别 为 y = 5 . 389 x + 5 . 3577 ， r = 0. 9999 ； y = 0 . 257 x + 0 . 0082 ， r = 0. 9998 。以基线信噪比的 3 倍测定检出限（ LOD） ， 本法针对特布他 林与普萘洛尔的检出限分别为 1. 0 μg / L 和 3. 0 μg / L。 分别于 Alsever 液中加入特布他林或普萘洛尔， 使终浓度均为 0. 30 mg / L， 各平行处理 6 份， 进样测定， 计算峰面积的 RSD 分别为 0. 8% 和 1. 2% 。 3. 6 特布他林与细胞膜受体的特异性结合 利用高效液相色谱法测定与细胞膜受体作用后游离药物浓度 ， 加入药物量与游离药物量之差即为 结合药物量。据此， 即可测定出特布他林与红细胞膜 β2 肾上腺素受体的结合量。取一系列浓度的特布 他林溶液 100 μL， 分别加入到 0. 2 mL Alsever 液混悬的红细胞中， 各个浓度的样品平行处理 6 份， 其中 3 份同时加入 100 mg / L 普萘洛尔 100 μL， 另外取 3 份空白的 Alsever 液混悬的红细胞， 只加入 100 mg / L 普萘洛尔 100 μL ， 再取 2 份空白的 Alsever 液混悬的红细胞， 所有反应管均补加 Alsever 液至 0. 5 mL， 振 1500 r / min 离心 5 min， 荡混匀后， 将混悬液均置于 37 ℃ 水浴振荡保温反应 1 h ， 取出， 吸取上清液 0. 2 mL， 于此上清液中加入 0. 2 mL 甲醇， 混悬均匀， 静置 10 min 后 13000 r / min 离心 5 min。 取上清液 20 μL 注入高效液相色谱仪测定游离药物浓度 。测定结果见表 1 。结果表明， 特布他林的非特异性结合 与特异性结合均随加入量的增加而增大 ， 同时加入硫酸特布他林和普萘洛尔组结合量明显高于单独加 ， 入硫酸特布他林组 提示特布他林与普萘洛尔在红细胞膜受体上的结合位点可能不同 。