植物病菌回接实验

实验六林木抗病性测定
植物病原菌侵入寄主植物体以后，要受到来自寄主方面的不同程度抵抗。

如果病原菌的致病性强于记住的抗病性，则病原菌就能建立起寄主关系，寄主就发病；反之，病原菌不能有效克服寄主的抵抗，亦即寄主的抗病性强于病菌的致病性，病菌不能建立起寄主关系，寄主就不能发病或发病很轻。

各种病原物的生物化学致病机制主要包括酶、毒素和生长调节物质等的作用。

实验目的：
1、掌握真菌病原菌接种方法。

2、理解相关概念植物抗病性、垂直抗性、水平抗性。

材料：
菌种：板栗疫病病原菌（Cryphonectria parasitica子囊菌亚门、核菌纲、球壳目、间座壳科、内座壳属的栗疫菌）
三种寄主枝条：毛栗、二栗、安栗一号（镇安板栗）
工具：
保鲜膜，打孔器55个，酒精灯
试验方法与步骤：
1、将采回的寄主枝条先用清水冲洗干净，再用无菌水冲洗，晾干
备用；
2、在枝条上用镊子或者打孔器做刺伤伤口；
3、在培养一周的菌种上用打孔器打菌饼若干；
4、取一块菌饼置于伤口上，用封口膜或保鲜膜将其缠绕；
5、放于生化培养箱内，26-28摄氏度培养一周后观察；
6、一周取出接菌的枝条，用刀片将接菌附近的树皮刮开（刮至木
质部），测量病斑大小。

作业
1、概念植物抗病性、水平抗性、垂直抗性
2、报告实验结果，分析存在问题，并提出改进意见
3、结果内容：菌株名称、病斑的尺寸（长轴和短轴的长度），找
出三种寄主的抗性差异。

植物病菌实验报告植物病菌实验报告引言：植物病菌是农作物生产中的重要问题之一，它们会导致作物减产甚至死亡，给农民带来巨大的经济损失。

为了探索有效的防治方法，我们进行了一系列的实验，以期找到对抗植物病菌的有效手段。

实验一：病菌的鉴定与分类在这个实验中，我们采集了不同植物病菌样本，并通过显微镜观察和分析，鉴定了它们的种类和分类。

我们发现，不同的病菌具有不同的形态特征，如菌丝的形状、孢子的颜色和大小等。

通过对病菌的鉴定和分类，我们可以更好地了解它们的生物学特性，为后续的防治工作提供有力的依据。

实验二：病菌的侵染机制在这个实验中，我们研究了病菌侵染植物的机制。

我们选择了一种常见的植物病菌，通过切割植物组织并接种病菌，观察了病菌在植物体内的生长和扩散情况。

我们发现，病菌通过菌丝侵入植物细胞，并利用植物的养分进行生长和繁殖。

这些发现有助于我们深入理解病菌的侵染机制，为寻找抗病菌的策略提供了线索。

实验三：植物抗病性的研究在这个实验中，我们研究了不同植物品种对病菌的抗性。

我们选择了几种常见的农作物品种，并接种相同的病菌。

通过观察和统计不同品种的病情发展情况，我们发现一些品种对病菌具有较强的抵抗力，而另一些品种则容易受到病菌的侵染。

这些结果为培育抗病品种提供了重要的参考。

实验四：防治病菌的策略研究在这个实验中，我们研究了不同的防治病菌的策略。

我们尝试了化学药剂、生物防治和物理防治等方法，并对它们的效果进行了评估。

我们发现，化学药剂可以有效地抑制病菌的生长，但可能对环境造成一定的污染。

生物防治则利用有益微生物或天敌来控制病菌的繁殖，具有环境友好性。

物理防治则包括热处理、紫外线辐射等方法，可以有效地杀灭病菌。

这些研究为选择合适的防治策略提供了科学依据。

结论：通过一系列的实验，我们深入研究了植物病菌的种类、侵染机制和防治策略。

我们发现不同的病菌具有不同的生物学特性，对不同的防治方法也有不同的响应。

因此，在实际生产中，应根据具体情况选择合适的防治策略，并结合植物品种的抗病性进行综合防治。

龙牙百合两种病害致病菌的分离、鉴定及抑制效应研究组织分离法对广西永福地区种植的龙牙百合两种病害的病原菌进行了分离，并对分离菌株进行培养、纯化、回接和重新分离，最后利用形态学和分子生物学技术对致病菌株进行了鉴定;同时观察了三种植物生长调节物质对两种致病菌的抑制效果。

结果表明：两种病害（A和B）症状表明是叶枯病和青霉病，分别从感病叶片中分离得到4株和3株病原菌，病原菌室外回接发现只有菌株A-4和B-2分别致病，致病率均达到100%。

形态学鉴定，A-4为葡萄孢属病原菌，菌落白色绒絮状，圆型;菌丝匍匐向外、向上生长、气生，无色，有隔膜，有分枝，具有分生孢子和顶生孢子。

B-2为青霉属病原菌，菌落圆形或不规则形，外围形成一圈白色绒毛状，中间蓝绿色;菌丝细，匍匐生长，具横隔，分生孢子梗扫帚状，孢子呈球形。

两类菌株分别获得全长522 bp和551 bp的序列，把ITS序列与Genbank中已登陆的序列进行相似性分析，并结合田间致病症状，认为龙牙百合叶枯病致病菌可能是椭圆葡萄孢，而青霉病致病菌是扩展青霉。

三种植物生长调节物质对两种致病菌的抑制效果表明，0.1～1.0 mmol·L-1 的SA不能完全抑制两种病原菌的生长，而0.5～1.0 mmol·L-1BRs和Me-JA均能完全抑制病原菌A-4和B-2的生长。

关键词：百合，叶枯病，病原分离和鉴定，植物生长调节物质，抑制效应中图分类号：Q945.8，S436.8文献标识码：A文章编号：1000-3142（2018）01-0109-10Isolation，identification and inhibiting effects of pathogens that caused two kinds of diseases in Lilium brownii var. viridulumQIU Shuo，XIA Ke，LI Xiujuan，ZHOU Hao，TANG Fengluan，ZHAO Zhiguo，ZHAO Jian*（Guangxi Institute of Botany，Guangxi Zhuang Autonomous Region and Chinese Academy of Sciences，Guilin 541006，Guangxi，China ）Abstract：The pathogens that caused two kinds of diseases in Lilium brownii var. viridulum were isolated using usual tissue isolation. Strains were cultivated，purified，reinoculated and reisolated. Morphological and molecular biological techniques were used to identify the strains. And three plant growth regulators were used to study the inhibiting effects on two pathogens. The results showed that two kinds of diseases were leaf blight （A）and penicilliosis （B）by the symptoms，and four strains and three strains were isolated from infected leaves，respectively. But only A-4 and B-2 caused two kinds of diseases，respectively. The incidences of A-4 and B-2 disease reinoculated in the field were all 100 %. A-4 is a kind of fungi belonging to the genus Botrytis，and its colonial morphology is a circular form，with colorless mycelium，prostrate on the medium，aerial，diaphragms and branches. There are conidium and acrospore. B-2 is a kind of fungi belonging to the genus Penicillium，and its colonial morphology is a circular form or irregular，with white mycelium outside the circle and turquoise in the central，the mycelium prostrate on the medium and diaphragms. There were broom conidium and spherical spores. At last，the sequence of internal transcribed spacer （ITS）region of A-4 and B-2 were analyzed，the length was 522 bp and 551 bp，respectively. The sequence were compared with other species in the Genbank，respectively. The symptom in the field indicates that the pathogen of Lilium brownii var. viridulum leaf blight（A）and penicilliosis are Botrytis elliptica and Penicillium expansum. The inhibiting effects of three plant growth regulators on two pathogens indicated that two pathogens could not be fully inhibited by 0.1-1.0 mmol·L-1 SA，but could be fully inhibited by 0.5-1.0 mmol·L-1BRs or Me-JA.感谢您的阅读！。

㊀山东农业科学㊀２０２２ꎬ５４(１２):１２３~１２８ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ㊀ＤＯＩ:１０.１４０８３/ｊ.ｉｓｓｎ.１００１－４９４２.２０２２.１２.０１９收稿日期:２０２２－０４－３０基金项目:中央引导地方科技发展专项(ＹＤＺＸ２０２１１０１)ꎻ泰安市科技发展计划项目(２０２１ＮＳ１０６)ꎻ山东省农业科学院农业科技创新工程项目(ＣＸＧＣ２０２２Ｄ０２ꎬＣＸＧＣ２０２２Ｆ０５)作者简介:姜莉莉(１９８６ )ꎬ女ꎬ博士ꎬ助理研究员ꎬ研究方向为草莓育种与栽培ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｇｓｓｊｉａｎｇｌｉｌｉ＠ｓｈａｎｄｏｎｇ.ｃｎ通信作者:武冲(１９８３ )ꎬ男ꎬ博士ꎬ副研究员ꎬ研究方向为草莓育种与栽培ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｗｕｃｈｏｎｇｇｅ＠１６３.ｃｏｍ草莓种苗根腐病病原菌鉴定及对１４种杀菌剂的敏感性姜莉莉１ꎬ延义琳２ꎬ宗晓娟１ꎬ王晓芳１ꎬ田中一久１ꎬ武冲１(１.山东省果树研究所/山东省现代设施果树技术创新中心ꎬ山东泰安㊀２７１０００ꎻ２.金乡县高河街道办事处ꎬ山东金乡㊀２７２２１２)㊀㊀摘要:本试验从 章姬 草莓种苗根腐病病根髓心部位分离得到多株病原菌ꎬ其优势株ＧＦ－１经鉴定为类拟盘多毛孢菌(Ｎｅｏｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓｍｅｓｏｐｏｔａｍｉｃａ)ꎬ并采用生长速率法测定其对１４种常用杀菌剂的敏感性ꎮ结果表明ꎬ咯菌腈对草莓种苗类拟盘多毛孢菌的室内毒力最高ꎬＥＣ５０值为０.０７０ｍｇ/Ｌꎬ较腈菌唑的相对毒力指数为６４.９８６ꎻ吡唑醚菌酯㊁苯醚甲环唑㊁咪鲜胺和氟硅唑的室内毒力也较高ꎬＥＣ５０值分别为１.００９㊁１.４９９㊁１.６０６㊁１.７９７ｍｇ/Ｌꎬ生产上可考虑用于草莓种苗根腐病的防治ꎮ关键词:草莓ꎻ种苗ꎻ根腐病ꎻ类拟盘多毛孢菌ꎻ室内毒力中图分类号:Ｓ４３６.６８＋４㊀㊀文献标识号:Ａ㊀㊀文章编号:１００１－４９４２(２０２２)１２－０１２３－０６ＲｏｏｔＲｏｔＰａｔｈｏｇｅｎＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＳｔｒａｗｂｅｒｒｙＳｅｅｄｌｉｎｇｓａｎｄＩｔｓＳｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｏ１４ＦｕｎｇｉｃｉｄｅｓＪｉａｎｇＬｉｌｉ１ꎬＹａｎＹｉｌｉｎ２ꎬＺｏｎｇＸｉａｏｊｕａｎ１ꎬＷａｎｇＸｉａｏｆａｎｇ１ꎬＴａｎａｋａＫａｚｕｈｉｓａ１ꎬＷｕＣｈｏｎｇ１(１.ＳｈａｎｄｏｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｏｍｏｌｏｇｙ/ＳｈａｎｄｏｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒｏｆＭｏｄｅｒｎＰｒｏｔｅｃｔｅｄＦｒｕｉｔＴｒｅｅｓꎬＴａｉａｎ２７１０００ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＧａｏｈｅＳｕｂｄｉｓｔｒｉｃｔＯｆｆｉｃｅｉｎＪｉｎｘｉａｎｇＣｏｕｎｔｙꎬＪｉｎｘｉａｎｇ２７２２１２ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙꎬｓｅｖｅｒａｌｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｃｅｎｔｒａｌｐａｒｔｏｆ Ａｋｉｈｉｍｅｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｓｅｅｄｌｉｎｇｓｉｎｆｅｃｔｅｄｂｙｒｏｏｔｒｏｔ.ＴｈｅｄｏｍｉｎａｎｔｓｔｒａｉｎｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓＮｅｏｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓｍｅｓｏｐｏｔａｍｉｃａ.Ｉｔｓｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｏ１４ｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｇｒｏｗｔｈｒａｔｅｍｅｔｈｏｄ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｆｌｕｄｉｏｘｏｎｉｌｈａｄｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｉｎｄｏｏｒｔｏｘｉｃｉｔｙｔｏＮ.ｍｅｓｏｐｏｔａｍｉｃａｗｉｔｈＥＣ５０ｖａｌｕｅａｓ０.０７０ｍｇ/Ｌꎬａｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎｄｅｘｗａｓ６４.９８６ｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｍｙｃｌｏｂｕｔａｎｉｌ.ＴｈｅｉｎｄｏｏｒｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓｏｆｐｙｒａｃｌｏｓｔｒｏｂｉｎꎬｄｉｆｅｎｏｃｏｎａｚｏｌｅꎬｐｒｏｃｈｌｏｒａｚａｎｄｆｌｕｓｉｌａｚｏｌｅｗｅｒｅａｌｓｏｈｉｇｈｅｒｗｉｔｈＥＣ５０ｖａｌｕｅｓａｓ１.００９ꎬ１.４９９ꎬ１.６０６ꎬ１.７９７ｍｇ/Ｌꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ￣ｌｙ.Ｉｔｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄｆｏｒｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｓｅｅｄｌｉｎｇｒｏｏｔｒｏｔｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ＳｔｒａｗｂｅｒｒｙꎻＳｅｅｄｌｉｎｇꎻＲｏｏｔｒｏｔꎻＮｅｏｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓｍｅｓｏｐｏｔａｍｉｃａꎻＩｎｄｏｏｒｔｏｘｉｃｉｔｙ㊀㊀草莓(ＦｒａｇａｒｉａａｎａｎａｓｓａＤｕｃｈ.)为蔷薇科草莓属宿根性多年生草本植物ꎮ其果实汁多味美㊁营养丰富ꎬ深受消费者喜爱ꎬ素有 水果皇后 的美誉ꎮ我国草莓种植面积和产量均位居世界首位ꎬ其中山东㊁河北㊁辽宁㊁江苏和四川是我国主要草莓产地[１]ꎮ在我国北方ꎬ草莓以设施栽培为主ꎬ高湿和连作易导致多种病害发生ꎬ严重影响草莓产业发展ꎮ根腐病是危害草莓的重要根部病害之一ꎬ属于典型的土传病害ꎬ防治难度较大ꎮ草莓根腐病具有较强的潜伏特性ꎬ症状一旦发生则蔓延迅速ꎬ导致草莓植株大面积死亡[２]ꎮ生产上草莓主要通过种苗抽生匍匐茎苗进行无性繁殖[３]ꎮ种苗繁育是草莓生产的关键环节之一ꎮ种苗的健壮与否直接决定了草莓生产苗繁育数量ꎬ以及后期草莓的生长㊁产量和品质[４]ꎮ目前ꎬ对于草莓病害的研究多集中在生产阶段ꎬ关于种苗病害的研究报道较少ꎮ草莓种苗根腐病的发生直接影响草莓生产苗品质ꎬ进而影响定植后收益ꎮ本研究从山东省沂源县采集 章姬 草莓种苗根腐病病苗ꎬ对根腐病病原菌进行分离㊁纯化和菌种鉴定ꎬ同时评价其对１４种常用杀菌剂的敏感性ꎬ以期为草莓种苗安全生产提供理论依据ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀供试感病植株２０２２年３月１日ꎬ在山东省沂源县某草莓种苗繁育基地选取穴盘种苗３０株ꎬ品种为 章姬 ꎮ１.２㊀供试药剂９５％氟硅唑原药㊁９６％啶酰菌胺原药㊁９５％咯菌腈原药ꎬ山东潍坊润丰化工股份有限公司ꎻ９５％丙硫菌唑原药ꎬ山东海利尔化工有限公司ꎻ９７％氟环唑原药㊁９８％咪鲜胺原药㊁９５％叶菌唑原药ꎬ安道麦辉丰(江苏)有限公司ꎻ９８％氟醚菌酰胺原药㊁９４％腈菌唑原药㊁９６％嘧菌酯原药㊁９８％肟菌酯原药㊁９８％吡唑醚菌酯原药㊁９５％己唑醇原药㊁９７％苯醚甲环唑原药ꎬ山东省联合农药工业有限公司ꎮ氟硅唑原药以环己酮溶解ꎬ其余１３种原药以丙酮溶解ꎬ制备浓度为１０ˑ１０４ｍｇ/Ｌ的母液ꎬ于４ħ保存备用ꎮ１.３㊀病原菌的分离、纯化采用病组织分离法[５]:将草莓种苗根部以无菌手术刀纵向剖开ꎬ切取病健交界组织(图１)ꎬ７５％乙醇消毒１０~１５ｓꎬ无菌水冲洗３次ꎮ无菌滤纸吸干水分后ꎬ接种于ＰＤＡ培养基平板上ꎬ２５ħ黑暗培养３ｄꎮ待菌落形成后ꎬ挑取边缘菌丝ꎬ接种于新的ＰＤＡ培养基平板ꎬ进行菌株纯化ꎮ根据柯赫氏法则[６]ꎬ将在ＰＤＡ培养基上培养７ｄ的菌株连带培养基一同接种至 章姬 草莓穴盘种苗茎基部ꎬ以无菌水处理为对照ꎮ进行常规管理ꎬ观察植株发病症状ꎮ图１㊀草莓种苗根腐病病部１.４㊀病原菌鉴定取培养７ｄ的根腐病菌菌丝０.１ｇꎬ采用ＣＴＡＢ法提取基因组ＤＮＡꎬ以ＩＴＳ引物(ＩＴＳ１/ＩＴＳ４)进行ＰＣＲ扩增ꎮ扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测㊁回收㊁纯化后ꎬ送生工生物工程(上海)股份有限公司测序ꎮ测得序列与ＮＣＢＩ数据库中的序列进行ＢＬＡＳＴ比对ꎬ并采用ＭＥＧＡ５.０软件构建系统发育树[７]ꎮ１.５㊀室内毒力测定采用生长速率法进行１４种杀菌剂对草莓种苗根腐病菌的室内毒力测定ꎮ在预试验的基础上ꎬ对供试药剂母液进行梯度稀释ꎮ咯菌腈的试验浓度为０.０２５㊁０.０５０㊁０.１００㊁０.２５０㊁０.５００ｍｇ/Ｌꎬ咪鲜胺的试验浓度为０.１００㊁０.２５０㊁０.５００㊁１.０００㊁２.５００ｍｇ/Ｌꎬ其余药剂的试验浓度均为０.５００㊁１.０００㊁２.５００㊁５.０００㊁１０.０００ｍｇ/Ｌꎮ在超净工作台上ꎬ取１.０ｍＬ各浓度药液于４９ｍＬ灭菌后冷却至５０~６０ħ的ＰＤＡ培养基中ꎬ混匀后制备３个含药平板ꎮ待平板完全凝固后ꎬ以直径７ｍｍ打孔器在菌落边缘打取菌饼ꎬ倒置接种于ＰＤＡ平板中央ꎬ以无菌水处理为对照ꎮ２５ħ黑暗培养ꎬ待对照菌落长至培养皿１/２~２/３时ꎬ以十字交叉法测定各处理菌落直径ꎮ按照如下公式计算各浓度药剂处理的菌丝生长抑制率(％)ꎮ４２１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５４卷㊀抑制率(％)＝(对照菌落直径－处理菌落直径)/(对照菌落直径－菌饼直径)ˑ１００ꎮ采用ＳＰＳＳ１８.０软件计算各药剂的菌丝生长ＥＣ５０值和９５％置信限ꎮ以抑菌活性最低药剂的ＥＣ５０值为基准ꎬ计算各药剂的相对毒力指数ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀草莓种苗根腐病病原菌分离从草莓种苗病根髓心部位共分离得到１２株真菌ꎬ根据菌落形态合并为５类ꎬ数量分别为７㊁２㊁１㊁１㊁１株ꎬ对其中菌落形态相同且数量占绝对优势的菌株(ＧＦ－１)进行后续试验ꎬ纯化后在ＰＤＡ培养基平板生长的菌落形态如图２所示ꎮ菌落呈白色棉絮状ꎬ较厚实ꎬ有同心轮纹ꎮ菌丝生长速度中等ꎬ７ｄ左右菌落直径可至９ｃｍꎮ后期产生褐色至黑色颗粒状分生孢子角ꎬ培养时间越长ꎬ分生孢子角越多ꎮ与温浩等[８]报道的草莓新拟盘多毛孢菌菌落形态相似ꎮ将纯化后的病原菌回接至 章姬 草莓穴盘种苗上ꎬ１４ｄ后叶片变红㊁植株长势弱(图３)ꎬ与原始症状相同ꎮ图２㊀草莓种苗根腐病病原菌ＧＦ－１菌落形态图３㊀草莓种苗根腐病菌ＧＦ－１回接症状２.２㊀草莓种苗根腐病病原菌分子生物学鉴定采用ＩＴＳ通用引物ＩＴＳ１/ＩＴＳ４对ＧＦ－１菌株ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增ꎬ得到长度为５４３ｂｐ的ＤＮＡ序列ꎮ将其在ＮＣＢＩ数据库进行ＢＬＡＳＴ比对ꎬ发现其与类拟盘多毛孢菌(Ｎｅｏｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ)同源性最高ꎬ采用ＭＥＧＡ５.０构建ＩＴＳ序列系统发育树(图４)ꎬ发现其与Ｎｅｏｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓｍｅｓｏｐｏｔａｍｉｃａ(类拟盘多毛孢菌)聚在一枝ꎮ该菌株最早于１９６９年发现于伊拉克境内的土耳其松[９]ꎬ在草莓植株上为首次报道ꎮＮｅｏｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓｃｌａｖｉｓｐｏｒａ:棒孢拟盘多毛孢ꎻＴｒｕｎｃａｔｅｌｌａａｎｇｕｓｔａｔａ:窄截盘多毛孢ꎻＢｉｐｏｌａｒｉｓｓｏｒｏｋｉｎｉａｎａ:根腐离蠕孢ꎻＮｅｏｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀ｍｅｓｏｐｏｔａｍｉｃａ:类拟盘多毛孢ꎮ图４㊀草莓种苗根腐病菌ＩＴＳ序列系统发育树２.３㊀１４种杀菌剂对草莓种苗根腐病菌菌丝生长的抑制率由表１可以看出ꎬ咯菌腈对草莓根腐病菌的抑制活性最高ꎬ浓度为０.０２５~０.５００ｍｇ/Ｌ时ꎬ抑制率为２２.２１％~９３.４９％ꎻ其次为吡唑醚菌酯和苯醚甲环唑ꎬ浓度为０.５００~１０.０００ｍｇ/Ｌ时ꎬ抑制率分别为２９.８２％~９６.９５％和２３.９４％~８９.００％ꎮ咪鲜胺浓度为０.１００~２.５００ｍｇ/Ｌ时ꎬ抑制率为３０.８３％~７５.１８％ꎮ浓度为０.５００~１０.０００ｍｇ/Ｌ时ꎬ氟硅唑和氟环唑的抑制率分别为１６.４４％~９２.０１％和８.９０％~８９.２９％ꎻ氟醚菌酰胺㊁叶菌唑和己唑醇的抑制率分别为１７.８４％~７３.６０％㊁１３.５６％~７８.７５％和１１.７０％~７３.３１％ꎻ丙硫菌唑㊁啶酰菌胺㊁肟菌酯㊁嘧菌酯和腈菌唑的抑制率分别为２４.０６％~６３.６３％㊁１０.３９％~７０.３１％㊁１３.１９％~６８.４１％㊁１５.５６％~６５.２４％和７.０１％~７１.５８％ꎮ５２１㊀第１２期㊀㊀㊀㊀㊀姜莉莉ꎬ等:草莓种苗根腐病病原菌鉴定及对１４种杀菌剂的敏感性㊀㊀表１㊀１４种杀菌剂对草莓种苗根腐病菌菌丝生长的抑制率药剂浓度(ｍｇ/Ｌ)菌落直径(ｍｍ)抑制率(％)０.０２５３８.４８ʃ０.４０２２.２１０.０５０３１.３５ʃ０.３３３９.８３咯菌腈０.１００２２.６２ʃ０.１８６１.４１０.２５０１４.７８ʃ０.４５８０.７７０.５００９.６３ʃ０.３２９３.４９０.５００３５.４０ʃ０.４８２９.８２１.０００２７.０５ʃ０.６８５０.４６吡唑醚菌酯２.５００１７.１８ʃ０.４０７４.８４５.０００１２.０７ʃ０.２５８７.４８１０.０００８.２３ʃ０.１８９６.９５０.５００３７.７８ʃ０.５１２３.９４１.０００３１.０５ʃ０.１８４０.５７苯醚甲环唑２.５００２３.１５ʃ０.３３６０.０９５.０００１５.０３ʃ０.１９８０.１５１０.０００１１.４５ʃ０.４１８９.０００.１００３２.８３ʃ０.５５３０.８３０.２５０２６.６５ʃ０.２６４３.８６咪鲜胺０.５００１９.５８ʃ０.３５５８.７５１.０００１５.８０ʃ０.５９６６.７２２.５００１１.７８ʃ０.１６７５.１８０.５００４０.８２ʃ０.３５１６.４４１.０００３３.８７ʃ１.１１３３.６１氟硅唑２.５００２４.０５ʃ０.７４５７.８７５.０００１５.９５ʃ０.３５７７.８８１０.０００１０.２３ʃ０.３３９２.０１０.５００４３.８７ʃ０.８６８.９０１.０００３８.４０ʃ０.４３２２.４１氟环唑２.５００２８.４５ʃ０.３８４７.００５.０００１７.２３ʃ０.７７７４.７１１０.０００１１.３３ʃ０.２８８９.２９０.５００４０.２５ʃ０.２５１７.８４１.０００３４.２８ʃ０.５３３２.５８氟醚菌酰胺２.５００２８.１０ʃ０.３８４７.８６５.０００２１.８５ʃ０.５８６３.３１１０.０００１７.６８ʃ０.７４７３.６００.５００４１.９８ʃ０.３８１３.５６１.０００３６.２０ʃ０.６２２７.８５叶菌唑２.５００２８.９２ʃ０.３８４５.８４５.０００２２.５０ʃ０.４４６１.７０１０.０００１５.６０ʃ０.０９７８.７５０.５００４２.７３ʃ０.２５１１.７０１.０００３６.９２ʃ０.０８２６.０８己唑醇２.５００２９.１７ʃ０.２５４５.２３５.０００２３.２７ʃ０.５９５９.８１１０.０００１７.８０ʃ０.５３７３.３１０.５００３６.０５ʃ０.０５２４.０６１.０００３２.０７ʃ０.３５３２.４５㊀㊀表１(续)药剂浓度(ｍｇ/Ｌ)菌落直径(ｍｍ)抑制率(％)丙硫菌唑２.５００２７.１３ʃ０.２０４２.８４５.０００２１.７３ʃ０.７３５４.２２１０.０００１７.２７ʃ０.４０６３.６３０.５００４３.２７ʃ０.０８１０.３９１.０００３７.９０ʃ０.２２２３.６５啶酰菌胺２.５００３１.５２ʃ０.７６３９.４２５.０００２５.７７ʃ０.１６５３.６３１０.０００１９.０２ʃ０.１０７０.３１０.５００４２.１３ʃ０.５４１３.１９１.０００３７.８２ʃ０.３１２３.８５肟菌酯２.５００３２.５８ʃ０.７８３６.７８５.０００２７.０２ʃ０.０３５０.５４１０.０００１９.７８ʃ０.２８６８.４１０.５００４０.０８ʃ０.２１１５.５６１.０００３４.２５ʃ０.７０２７.８５嘧菌酯２.５００２９.３７ʃ０.５９３８.１４５.０００２３.６８ʃ０.２９５０.１１１０.０００１６.５０ʃ０.５２６５.２４０.５００４４.６３ʃ０.７０７.０１１.０００４０.４３ʃ０.２８１７.３９腈菌唑２.５００３４.１５ʃ０.７０３２.９１５.０００２７.０３ʃ１.１３５０.５０１０.０００１８.３８ʃ０.５８７１.５８ＣＫ㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀４７.４７ʃ１.３０㊀㊀注:表中菌落直径为平均值ʃ标准差ꎮ２.４㊀１４种杀菌剂对类拟盘多毛孢菌的室内毒力由表２可以看出ꎬ在１４种供试杀菌剂中ꎬ腈菌唑对类拟盘多毛孢菌菌丝生长的室内毒力最低ꎬＥＣ５０值为４.５４９ｍｇ/Ｌꎮ以其为基准ꎬ计算其它药剂的相对毒力指数ꎬ咯菌腈对草莓种苗类拟盘多毛孢菌的室内毒力最高ꎬＥＣ５０值仅为０.０７０ｍｇ/Ｌꎬ较腈菌唑的相对毒力指数为６４.９８６ꎮ吡唑醚菌酯㊁苯醚甲环唑㊁咪鲜胺和氟硅唑的室内毒力也较高ꎬＥＣ５０值分别为１.００９㊁１.４９９㊁１.６０６㊁１.７９７ｍｇ/Ｌꎬ相对毒力指数分别为４.５０８㊁３.０３５㊁２.８３３和２.５３１ꎮ氟环唑㊁氟醚菌酰胺㊁叶菌唑和己唑醇的ＥＣ５０值分别为２.４５７㊁２.７１９㊁２.８７４㊁３.２６８ｍｇ/Ｌꎬ相对毒力指数分别为１.８５１㊁１.６７３㊁１.５８３和１.３９２ꎮ丙硫菌唑㊁啶酰菌胺㊁肟菌酯和嘧菌酯对类拟盘多毛孢菌的室内毒力相对较低ꎬＥＣ５０值分别为３.７９４㊁４.０１３㊁４.４０７㊁４.５１４ｍｇ/Ｌꎬ相对毒力指数分别为１.１９９㊁１.１３４㊁１.０３２和１.００８ꎮ６２１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５４卷㊀㊀㊀表２㊀１４种杀菌剂对类拟盘多毛孢菌菌丝生长的室内毒力药剂回归方程ＥＣ５０值(ｍｇ/Ｌ)(９５％置信限)卡方(ｄｆ＝３)相关系数相对毒力指数咯菌腈ｙ＝１.９６３＋１.７０３ｘ０.０７０(０.０５９~０.０８３)０.３８８０.９４３６４.９８６吡唑醚菌酯ｙ＝－０.００７＋１.７５０ｘ１.００９(０.８１９~１.２０５)０.４８６０.９２２４.５０８苯醚甲环唑ｙ＝－０.２６３＋１.４９６ｘ１.４９９(１.２１８~１.８０８)０.６０７０.８９５３.０３５咪鲜胺ｙ＝－０.１８４＋０.８９５ｘ１.６０６(１.１３７~２.１５２)０.３９００.９４２２.８３３氟硅唑ｙ＝－０.４５３＋１.７８１ｘ１.７９７(１.５１８~２.１１０)０.４７３０.９２５２.５３１氟环唑ｙ＝－０.７８１＋２.００１ｘ２.４５７(２.１１９~２.８５１)０.７３００.８６６１.８５１氟醚菌酰胺ｙ＝－０.５１０＋１.１７４ｘ２.７１９(２.１６３~３.４６１)０.４７９０.９２４１.６７３叶菌唑ｙ＝－０.６４５＋１.４０６ｘ２.８７４(２.３６６~３.５３３)０.４２００.９３６１.５８３己唑醇ｙ＝－０.６９６＋１.３５２ｘ３.２６８(２.６７１~４.０８２)０.６０１０.８９６１.３９２丙硫菌唑ｙ＝－０.４６７＋０.８０７ｘ３.７９４(２.７４０~５.７６９)０.０９５０.９９２１.１９９啶酰菌胺ｙ＝－０.７９３＋１.３１４ｘ４.０１３(３.２４５~５.１４７)０.５６１０.９０５１.１３４肟菌酯ｙ＝－０.７６２＋１.１８３ｘ４.４０７(３.４７４~５.９０１)０.６３４０.８８９１.０３２嘧菌酯ｙ＝－０.６６８＋１.０２０ｘ４.５１４(３.４３８~６.４０１)０.７３７０.８６５１.００８腈菌唑ｙ＝－１.００５＋１.５２７ｘ４.５４９(３.７５４~５.７００)０.６６６０.８８１１.０００３㊀讨论与结论草莓种苗繁育高峰期主要集中在５ ８月ꎬ高温多雨极易引起病害蔓延ꎮ草莓根腐病是由土传病原真菌侵染引起的重要根部病害之一[１０]ꎮ本研究从 章姬 草莓种苗根腐病病根髓心部位分离得到多株病原菌ꎬ经形态学和分子生物学鉴定ꎬ该病原菌为类拟盘多毛孢菌(Ｎｅｏｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓｍｅ￣ｓｏｐｏｔａｍｉｃａ)ꎮ类拟盘多毛孢菌的寄主范围较广ꎬ可侵染月季㊁牛油果㊁碧根果等ꎮ侵染草莓可引起红叶病ꎬ发病初期叶片为红色ꎬ后期整株萎蔫㊁死亡ꎬ对 甜查理 等品种的危害尤其严重[１１]ꎮ近年来ꎬ该属病原菌危害草莓的报道逐渐增多ꎬ可引起草莓叶斑病㊁根腐病㊁茎腐病等多种病害[１２ꎬ１３]ꎬ但在 章姬 种苗上为首次报道ꎮ目前ꎬ化学杀菌剂仍是防治草莓病害的主要手段ꎮ然而ꎬ«中国农药信息网»显示ꎬ防治草莓根腐病的产品仅包括熏蒸剂棉隆和生防菌剂ꎬ尚无获得登记的化学药剂ꎮ本研究选取１４种常用化学杀菌剂ꎬ对分离得到的类拟盘多毛孢菌进行室内毒力测定ꎬ发现咯菌腈的抑菌活性最高ꎬＥＣ５０值仅为０.０７０ｍｇ/Ｌꎬ较腈菌唑的相对毒力指数为６４.９８６ꎻ吡唑醚菌酯㊁苯醚甲环唑㊁咪鲜胺和氟硅唑的室内毒力也较高ꎬＥＣ５０值分别为１.００９㊁１.４９９㊁１.６０６㊁１.７９７ｍｇ/Ｌꎮ咯菌腈属于苯吡咯类杀菌剂ꎬ为假单胞菌代谢产物硝吡咯菌素的类似物ꎬ其杀菌谱较广ꎬ但不具有内吸性[１４]ꎮ吡唑醚菌酯为甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂ꎬ通过阻碍真菌线粒体呼吸而抑制病原菌孢子萌发和菌丝生长[１５]ꎮ苯醚甲环唑和氟硅唑均为三唑类杀菌剂ꎬ具有保护㊁治疗和内吸活性ꎮ其中ꎬ苯醚甲环唑通过干扰病原菌细胞Ｃ１４脱甲基化作用㊁抑制病原菌麦角甾醇的生物合成㊁破坏细胞膜的生理作用从而导致真菌死亡[１６]ꎻ氟硅唑具有较强的渗透性[１７]ꎮ生产上ꎬ上述药剂均可用于草莓种苗根腐病的防治ꎬ但需合理轮用和混用ꎬ以延缓抗药性的产生ꎮ参㊀考㊀文㊀献:[１]㊀张运涛ꎬ雷家军ꎬ赵密珍ꎬ等.新中国果树科学研究７０年 草莓[Ｊ].果树学报ꎬ２０１９ꎬ３６(１０):１４４１－１４５２. [２]㊀张鹤ꎬ杜国栋ꎬ宋亚楠ꎬ等.防治草莓根腐病的木霉菌筛选㊁鉴定及其防病效果[Ｊ].沈阳农业大学学报ꎬ２０１５ꎬ４６(６):６５４－６６０.[３]㊀左丽娟ꎬ张钟ꎬ张军云ꎬ等.草莓种苗繁育氮磷钾 ３４１４ 施肥效应[Ｊ].北方园艺ꎬ２０１９(４):１８－２４. [４]㊀宫彬彬ꎬ吴晓蕾ꎬ张斌ꎬ等.草莓种苗壮苗指数模型的构建与质量评价[Ｊ].应用生态学报ꎬ２０２１ꎬ３２(８):２８０９－２８１７. [５]㊀姜莉莉ꎬ孙瑞红ꎬ宫庆涛ꎬ等.草莓炭疽病病原菌的分离及高效防治药剂筛选[Ｊ].山东农业科学ꎬ２０２１ꎬ５３(６):８９－９３.[６]㊀李青杰ꎬ朱佳红ꎬ吴佳佳ꎬ等.河北保定地区草莓根腐病病原鉴定及室内毒力测定[Ｊ].河北农业大学学报ꎬ２０２１ꎬ４４(２):１５－２０.[７]㊀姜莉莉ꎬ田中一久ꎬ孙瑞红ꎬ等.草莓灰霉病病原菌的分离鉴定及室内毒力测定[Ｊ].山东农业科学ꎬ２０２１ꎬ５３(８):１０２－１０６.[８]㊀温浩ꎬ魏佳爽ꎬ张桂军ꎬ等.九种杀菌剂对新拟盘多毛孢病菌的室内毒力作用[Ｊ].农药学学报ꎬ２０１９ꎬ２１(４):４３７－４４３.７２１㊀第１２期㊀㊀㊀㊀㊀姜莉莉ꎬ等:草莓种苗根腐病病原菌鉴定及对１４种杀菌剂的敏感性[９]㊀李博勋ꎬ刘先宝ꎬ时涛ꎬ等.国内新发危险性橡胶树拟盘多毛孢叶斑病鉴定及其病原学研究[Ｊ].热带作物学报ꎬ２０２０ꎬ４１(８):１６１６－１６２４.[１０]戴瑞卿ꎬ赖宝春ꎬ吴振强ꎬ等.健康与患根腐病草莓根际 非根际与根内古菌群落多样性[Ｊ].安徽农业科学ꎬ２０２２ꎬ５０(２):１４７－１５０ꎬ１５６.[１１]宁志怨ꎬ伊兴凯ꎬ黄锡桂ꎬ等.甜查理草莓红叶病防治药剂筛选的研究[Ｊ].安徽农业科学ꎬ２０２０ꎬ４８(５):１４６－１４９. [１２]刘艳茹ꎬ曹莹ꎬ孙琰ꎬ等.草莓红叶根腐病病原菌分离与鉴定[Ｊ].植物病理学报ꎬ２０２２ꎬ５１(１):１０４－１０８. [１３]赵景楠ꎬ马喆ꎬ刘正坪ꎬ等.草莓拟盘多毛孢叶斑病的病原菌[Ｊ].菌物学报ꎬ２０１６ꎬ３５(１):１１４－１２０.[１４]娄天成ꎬ左杨ꎬ张心宁ꎬ等.杀菌剂咯菌腈对根腐病的室内毒力测定和田间防治效果[Ｊ].江苏农业科学ꎬ２０２１ꎬ４９(１１):８０－８４.[１５]杨丽娜ꎬ张亮ꎬ韦永淑ꎬ等.吡唑醚菌酯及与生物农药复配防治桃枝枯病[Ｊ].农药ꎬ２０２２ꎬ６１(１):６５－６９. [１６]路妍ꎬ高健ꎬ袁喜丽ꎬ等.１２种杀菌剂对小麦赤霉病病菌的室内毒力及不同植保器械施药效果研究[Ｊ].江苏农业科学ꎬ２０２１ꎬ４９(２１):１２０－１２７.[１７]姜莉莉ꎬ付丽ꎬ薛雯ꎬ等.９种三唑类杀菌剂对苹果轮纹病菌的毒力及田间防效[Ｊ].植物保护ꎬ２０２１ꎬ４７(２):２４３－２４８.８２１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５４卷㊀。

款冬花根腐病的发病情况与病原鉴定张爱香;马海莲;李雪萍;仝在利;李世东;王晓涛【摘要】为找出引起款冬花根腐病的主要病原,对其综合防治提供参考依据,通过田间调查款冬花根腐病的症状以及室内病原物的分离、培养、纯化、回接试验.结果表明:款冬花根腐病的症状主要是萎蔫和根腐,引起根腐病的病原主要是立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum Schlecht).%Symptom of Tussilago far faral root rot was investigated in the field and pathogens of Tussilago farfaral root rot was isolated, cultured, purified and re-inoculated in the laboratory to find out the main pathogens causing root rot of Tussilago farfaral and provide a reference for its comprehensive control. The results showed that the symptoms of the disease were expressed as wilt and root rot. Rhizoctonia solani, Botrytis cinerea and Fusarium oxysporum were the major pathogens of Tussilago far faral root rot.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2011(039)002【总页数】3页(P99-101)【关键词】款冬花;根腐病;病原鉴定;立枯丝核菌;灰葡萄孢菌;尖孢镰孢菌【作者】张爱香;马海莲;李雪萍;仝在利;李世东;王晓涛【作者单位】河北北方学院,农林科技学院农业科学系,河北,张家口,075131;河北北方学院,农林科技学院农业科学系,河北,张家口,075131;河北省蔚县中药材产业发展服务中心,河北蔚县,075700;河北省蔚县中药材产业发展服务中心,河北蔚县,075700;中国农科院,植物保护研究所,北京,100081;河北省张家口市农业局,河北,张家口,075000【正文语种】中文【中图分类】S435.121.4+9款冬花（Tussilago farfara L.）又名冬花，九九花、艾冬花，为菊科多年生草本植物，以花蕾入药，有润肺、化痰、止咳功效。

第1篇一、实验背景随着全球气候变化和农业种植模式的改变，植物病害的发生频率和严重程度不断上升，严重威胁着全球粮食安全和生态环境。

为了有效控制植物病害，研究植物的抗病机制和抗病育种技术显得尤为重要。

本实验旨在通过一系列的实验研究，探讨植物抗病性的机制，为植物病害的防治提供理论依据和技术支持。

二、实验目的1. 探讨植物抗病性的遗传规律。

2. 分析植物抗病相关基因的表达模式。

3. 研究植物与病原菌的互作机制。

4. 评估植物抗病育种技术的应用效果。

三、实验方法1. 抗病性遗传规律研究：采用自交、回交、测交等方法，对植物抗病性进行遗传分析，确定抗病性状的遗传方式。

2. 抗病相关基因表达分析：利用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹等技术，检测植物抗病相关基因在不同抗病性品种和病原菌侵染条件下的表达水平。

3. 植物与病原菌互作机制研究：通过电生理技术、免疫荧光技术等，观察植物与病原菌互作过程中的细胞信号传导、物质运输等过程。

4. 抗病育种技术评估：采用基因转化、分子标记辅助选择等技术，对植物抗病育种效果进行评估。

四、实验结果与分析1. 抗病性遗传规律研究：通过自交、回交等实验，发现植物抗病性状受多基因控制，存在主效基因和微效基因的相互作用。

2. 抗病相关基因表达分析：实验结果显示，在抗病性强的品种中，抗病相关基因的表达水平显著高于抗病性弱的品种。

此外，在病原菌侵染条件下，抗病相关基因的表达水平进一步升高。

3. 植物与病原菌互作机制研究：实验表明，植物与病原菌互作过程中，细胞信号传导和物质运输等过程发挥重要作用。

例如，植物细胞壁蛋白与病原菌效应蛋白的相互作用，以及植物激素的调控作用等。

4. 抗病育种技术评估：通过基因转化、分子标记辅助选择等技术，成功培育出抗病性强的植物品种，为植物病害的防治提供了新的途径。

五、结论与展望1. 植物抗病性受多基因控制，存在主效基因和微效基因的相互作用。

2. 抗病相关基因的表达水平与植物抗病性密切相关。

实习三植物病害的接种一.目的要求了解接种的方法，意义和原理。

二.内容步骤病组织上所见到的微生物，不一定都是病原物，也肯能是腐生的杂菌。

为了证实该微生物是否为引起该病害的真实病原菌，凡能人工培养的，都必须经过分离培养、接种、再分离等步骤才能确定。

接种除了能鉴定病原，对研究病害的发生、发展规律、侵入途径、药剂防治效果以及抗病性的测定等都是及其重要的手段。

树木病原的种类繁多，传播途径和侵入方式各不相同，因此接种也采用不同的方法。

接种是人为的模仿病菌在自然条件下的侵入方式，使植物发病。

接种前对接种材料要详细检查或观察，证明确实健康无病，并且确实具感病性。

此外，菌种和保温保湿装置的器材都应事先备好，并设有对照。

不设对照有时无法证明是接种发病的还是本来就感病了而处于潜伏状态。

接种方法：1 叶部病害的接种：（1）伤口接种：没人取杉木嫩枝二根，除留顶部20~30片针叶外，其余全部摘去。

一根接种，一根对照。

将杉木细菌菌种，加5毫升灭菌水，配成悬浮液，绘图笔尖在火焰上灭菌后，蘸细菌悬浮液在叶上刺孔。

对照蘸无菌水刺孔。

将对照和接种杉枝分别宝石24小时。

再在22~24℃条件下水培，于3、5、7天观察发病情况。

注意对照和接种都要栓标签，注明不同处理、班级和日期。

（2）喷洒接种：A 每人再取杉木嫩梢二根，以上法出去对于叶片，剩下等接种的叶片都用手指蘸清水，在叶表轻轻涂抹，以除表面蜡质层。

取杉炭疽病菌种加10毫升灭菌水，洗下孢子，在低倍镜下检查，使每视野有20~30孢子，用小喷雾器喷洒孢子悬浮液于叶面，叶背面要多喷。

对照喷清水，其它处理相同。

然后放在塑料袋内于22~24℃条件下保湿24小时，到时取出水培于暗处，以后每隔2日观察记载一次。

要拴上注明班级、日期、处理方法的标签。

B 没人取4片毛白杨叶子，再取杨树黑斑病菌种。

加灭菌水调孢子液浓度为每视野20~30孢子，用喷雾器喷至毛白杨叶正面。

对照喷清水。

取中号培养皿2个，放入吸水纸，用水浸湿。

第1篇一、实验目的本次实验旨在通过学习植物病原真菌、细菌、病毒和线虫的分离、培养和接种方法，掌握其基本原理，并了解植物传染性病害研究中常用的接种方法。

通过实验操作，观察不同接种方法对病害发生发展过程与外界环境的影响，为植物病害的防治提供理论依据。

二、实验材料与用具1. 材料：- 新鲜的真菌和细菌病害材料：辣椒炭疽病果、水稻稻瘟病病叶片、水稻白叶枯病叶、烟草花叶病和番茄根结线虫病等。

- 番茄青枯菌/番茄、水稻稻瘟菌/水稻幼苗、水稻白叶枯病菌/稻苗、烟草花叶病/烟草。

2. 用具：- 喷雾器、纱布、酒精灯、酒精缸、火柴、接种饵（针）、长镊子、玻棒、小木块、解剖刀、刀片、载玻片、蒸馏水（滴瓶）、漂白粉精片、研缸、漏斗、皱纹纸、毛笔、针、剪刀、三角瓶、试管、记号笔、标签、金刚砂、保湿罩、弥雾机。

- 70%乙醇、0.1%升汞、灭菌培养皿（吸管）、灭菌水、灭菌培养基（PDA和NA）。

三、实验方法1. 病原真菌的分离和培养：- 在无菌操作室或超净工作台上进行。

- 将受病组织边缘靠近健全组织的部分分离，减少污染。

- 将分离得到的组织块接种于PDA培养基上，置于28℃恒温培养箱中培养。

2. 病原细菌的分离和培养：- 同样在无菌操作室或超净工作台上进行。

- 将受病组织块接种于NA培养基上，置于28℃恒温培养箱中培养。

3. 病原病毒的分离和培养：- 取烟草花叶病叶片，用研磨法提取病毒。

- 将病毒稀释液接种于烟草幼苗上，观察症状。

4. 病原线虫的分离和培养：- 从番茄根结线虫病病根中提取线虫。

- 将线虫接种于含有新鲜植物组织的培养皿中，观察线虫生长情况。

5. 接种方法：- 采用喷雾法、点种法、穿刺法等接种方法，将病原菌接种于健康植物上。

四、实验结果与分析1. 病原真菌的分离和培养：- 成功分离得到辣椒炭疽病菌、水稻稻瘟病菌、水稻白叶枯病菌等。

- 在PDA培养基上，观察到菌落形态、颜色和生长速度等特征。

2. 病原细菌的分离和培养：- 成功分离得到番茄青枯菌、水稻白叶枯病菌等。