普洱茶样中“金花”微生物的分离鉴定

茯砖茶“金花菌”的分类鉴定及其对茯砖茶品质的影响茯砖茶是一种非常重要的砖茶，深受西北少数民族地区居民的欢迎。

在茯砖茶成品的茶叶表面普遍存在俗称“金花”的金黄色小点，这是茯砖茶区别于其它砖茶的重要特征。

“金花”是由一类俗称“金花菌”的真菌在茯砖茶中生长而产生的，“金花”的多少是茯砖茶品质好坏的重要指标。

关于“金花菌”的分类地位，目前还没有定论。

本研究从湖南、四川和湖北的茶厂收集了28份砖茶样品进行微生物分离，根据形态学特征和酯酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，对其中的“金花菌”分离菌株进行了分类鉴定，并研究了“金花菌”对茯砖茶品质的影响。

首先，本研究以不同的砖茶成品、不同制作阶段的茶样和制茶原料为材料，采用不同方法分离“金花菌”。

结果表明，茯砖茶成品中均存在大量“金花菌”；在茯砖茶制茶原料以及部分康砖、金尖及青砖茶成品中都能分离到一定量的“金花菌”。

从同一块茯砖茶分离“金花菌”时，得到了4类菌落形态不同的“金花菌”，说明茯砖茶中“金花菌”的菌落形态具有多样性。

第二，本研究以分离自不同砖茶及茶样中的17株“金花菌”菌株和5株模式菌株及一株冠突散囊菌(Eurotium cristatum)为材料，调查了培养基、温度、培养基pH值、培养基中的NaCl浓度及蔗糖浓度对供试菌株生长的影响。

结果表明，供试菌株在PDA、CZG培养基上，25～35℃，偏酸性条件下生长良好，其中13株分离菌株在普通条件下均进行有性生殖，产生闭囊壳等结构；在40℃条件下培养时或CZG培养基中NaCl浓度达14％或蔗糖浓度达60％时开始进行无性繁殖，产生分生孢子等结构。

根据菌株的菌落形态和生长特性，17株分离菌株中的12株与冠突散囊菌非常相近，另5株分离菌株则差异较大，由此说明砖茶中的“金花菌”具有多样性。

根据供试菌株的生长特性和菌落形态等，本研究将17株“金花菌”分离菌株分为6个类群。

第三，本研究一方面在形态学基础上对17株“金花菌”分离菌株进行鉴定：在光学显微镜下观察其闭囊壳、子囊、子囊孢子和分生孢子等的形态并测量其大小，并在扫描电镜下观察部分菌株的子囊孢子形态。

普洱茶渥堆发酵过程中细菌种群的分离与分子鉴定
姚静;陈迪;郑晓燕;王云
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2013(041)006
【摘要】[目的]对普洱茶渥堆发酵过程中的细菌进行分离、纯化和鉴定.[方法]采用传统培养方法与分子生物学方法相结合,对普洱茶渥堆发酵各阶段的细菌进行了分离、纯化及鉴定.[结果]试验表明,普洱茶渥堆发酵各阶段的细菌包括了芽孢杆菌、克雷伯氏菌、鞘氨醇杆菌、短杆菌、红球菌、假单胞菌、鲍曼不动杆菌7个种类,其中芽孢杆菌所占比例远大于其他细菌,处于绝对优势地位.[结论]研究可为研制普洱茶高效发酵剂、缩短发酵时间、改善普洱茶品质,以及实现普洱茶清洁化和产业化生产提供—定的理论依据.
【总页数】3页(P2667-2668,2671)
【作者】姚静;陈迪;郑晓燕;王云
【作者单位】云南农业大学食品科学技术学院,云南昆明650201
【正文语种】中文
【中图分类】S571.1
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一款10年陈熟普洱茶中可培养微生物的分离鉴定
彭喜春;于淼
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2011(032)015
【摘要】在贮存过程中微生物的种类和数量对普洱茶的品质有很大影响。

本实验用4种不同的选择性培养基对一款10年陈熟普洱茶中的微生物进行选择性培养和计数;不同的微生物菌落被分离,并用显微镜进行形态观察和初步鉴定,根据细菌的16S rRNA进行分类。

结果表明：该款普洱茶的细菌总数为4.3×103CFU/g;霉菌数约为20CFU/g,未发现该普洱茶中存在酵母和放线菌;根据菌落形态分离到的7株细菌都是革兰氏阳性菌,分别属于5个种,即枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）2株、解淀粉芽孢杆菌（B.amyloliqu
【总页数】4页(P196-199)
【作者】彭喜春;于淼
【作者单位】暨南大学食品科学与工程系,广东广州510632;暨南大学食品科学与工程系,广东广州510632
【正文语种】中文
【中图分类】S571.1;Q946
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5.见证广东熟普洱茶的活化石——广云贡饼(广东普洱茶饼) [J], 侯凯东;
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普洱茶发酵过程中微生物类群分析摘要分别对普洱茶制作工序过程中鲜叶、杀青、揉捻、晒干、渥堆茶的样品取样，用不同的培养基分别对样品中的微生物类群进行分离纯化。

统计微生物加工工艺过程中类群和数量，并鉴定分离纯化出的微生物类群，结果表明：霉菌和酵母菌是普洱茶发酵制作过程中的优势微生物类群，决定了普洱茶品质。

霉菌以曲霉为主要种类，酵母以产生酒精和产酯等生香酵母为主要类型。

关键词普洱茶；发酵过程；微生物类群；品质云南普洱茶是一种极受广大消费者喜爱的特种茶，在普洱茶的推动下，使云南省茶叶综合产值达到70～80亿元[1]。

普洱茶以其独特的生产方式——渥堆发酵以及在贮藏陈化中微生物的作用，形成了自己良好的品质特征，甘滑、醇厚和陈香等，微生物代谢的有益物质更是增强了普洱茶的保健功效[2]。

微生物生命活动和代谢产物是普洱茶品质形成的重要因子，普洱茶制作过程中微生物变化是极其复杂的，有的微生物自始至终对普洱茶品质形成发挥着积极的作用，有的微生物是在普洱茶加工的某一阶段发挥着形成普洱茶独特风格的作用，有的微生物则不利于普洱茶品质的形成[3，4]。

本研究将按照普洱茶制作工序，分别取鲜叶、杀青、揉捻、晒干、渥堆茶作为样品，分离纯化出微生物，统计微生物类群和数量，并鉴定分离纯化出的微生物类群，分析各微生物类群对普洱茶品质的作用，找出有利于普洱茶品质提高的微生物类群。

1材料与方法1.1试验材料试验材料为普洱茶制作各工序的茶叶。

1.2试验方法鲜叶茶、杀青茶、揉捻茶、晒干茶、渥堆茶中分别称取1g的茶叶样品，做10-1、10-3、10-5等3个稀释度，涂布到平板上，用牛肉膏蛋白胨培养基，放线菌用高氏1号培养基，PDA培养基，YEPD培养基，分离纯化细菌、放线菌、酵母菌和霉菌，细菌37℃，恒温培养，放线菌、酵母菌、霉菌28℃，恒温培养[5，6]。

并对分离出的细菌、酵母菌和霉菌进行初步的鉴定。

2结果与分析2.1普洱茶发酵过程微生物数量变化通过利用不同的培养基对普洱茶各阶段的微生物进行了分离纯化，微生物数量见表1。

茯砖茶“金花菌”分离鉴定及“发花”效应研究茯砖茶“金花菌”分离鉴定及“发花”效应研究茯砖茶作为一种古老且独特的发酵茶类，是中国传统文化的重要组成部分。

而在茯砖茶的制作过程中，存在着一个神奇的现象，即茯砖茶在特定条件下会产生一种被称为“金花菌”的微生物。

这种微生物具有特殊的功能，被认为是茯砖茶独特的发花效应的关键因素。

本文将对茯砖茶中的“金花菌”进行分离鉴定，并研究其对茯砖茶的“发花”效应的影响。

首先，我们需要分离并鉴定茯砖茶中的“金花菌”。

为此，我们采集了不同产地的茯砖茶样本，并使用无菌的方法将茶叶分离出来。

接着，我们通过细菌培养基和真菌培养基对茶叶进行培养，以使微生物适应培养条件。

通过观察不同培养基上出现的菌落形态、菌丝生长及颜色等特征，我们筛选出了一种与茯砖茶发花相关的菌株。

为验证这种菌株是否为“金花菌”，我们进行了形态学、生理生化和分子生物学的鉴定。

在形态学鉴定上，我们观察了菌株的菌落形态和孢子形态。

结果显示，该菌株的菌落呈灰白色，并呈现出类似金花的形态特征，孢子也表现出金黄色。

生理生化鉴定中，我们测试了菌株的氧需求、温度适应性和代谢产物等，并与已知的金花菌对照。

结果显示，该菌株的生理特点与金花菌相似。

进一步，我们使用PCR技术对菌株的基因序列进行分析，结果显示该菌株与已知的金花菌亲缘关系密切。

接下来，我们研究了“金花菌”对茯砖茶的“发花”效应。

为此，我们选取了同一产地多批次茯砖茶样品，一部分加入分离得到的“金花菌”，另一部分作为对照组。

在相同的发酵条件下，我们对茯砖茶进行了发酵观察并比较了两组样品的发花情况。

结果显示，加入“金花菌”的茯砖茶发花速度更快，发花程度也更高。

进一步研究发现，“金花菌”能够促进茯砖茶中黄酮类化合物的生成。

通过比较不同批次样品中黄酮类化合物的含量，我们发现加入“金花菌”的茯砖茶中黄酮类化合物含量显著增加。

这些黄酮类化合物具有抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，因此可以提高茯砖茶的营养价值和保健功能。

作者简介：宁伟泽，男，北京市中关村中学高二在读，E-mail ：836141023@ 。

云南的金花普洱作为普洱茶中的珍贵种类，在我国已有千年历史[1]。

金花普洱是普洱茶中的极品，用传统工艺制成的普洱茶，除偶尔出现“金花”外，还无法做到人为控制“金花菌”在普洱茶中的增殖。

近来以改良工艺制备的“金花普洱紧压茶”是用云南大叶种茶为原料，经二次发酵制作而成，不仅茶多酚含量高，而且外观有大量金色炫目的“金花”点缀，非常独特[2]。

“金花”民间称“金花菌”，学名叫“冠突散囊菌”，是对人体有益的酵素类菌，能分泌多种胞外酶催化茶叶化合物的转化，改善茶叶品质，并被认为具有强身健体、消食降脂、降糖抗氧化和防癌抗癌作用，而受到茶叶爱好者和研究者的关注[3]。

近来出现的“金花普洱紧压茶”中点缀的“金花”就是“冠突散囊菌”吗？它的大量增殖会对普洱茶发酵的微生物菌群有何影响？传统的微生物菌株鉴定和群落结构分析方法主要依靠选择性培养基计数和形态学及生理生化检测，这些研究方法存在分析不完整和鉴定不准确的问题[4]。

随着第二代高通量测序手段的成熟，宏基因组分析可以提供丰富数据，从ITS 和16sRNA 扩增子序列的聚类读取，到全基因组所有结构域分析，允许样本无须培养，直接进行测序分类[5-6]。

ITS 和16sRNA 分别为真菌和细菌核糖体基因中的一部分，它具有种内基因序列相对一致而种间差异较为明显的特征，通过二代测序技术检测，可以特异准确系统全面地分析普洱金花菌紧压茶中是否存在冠突散囊菌，以及其真菌和细菌的组成谱。

研究结果不仅有助于推广这一新的制茶工艺，而且将有益于全社会的健康事业。

一、材料与方法1.样品制备及建库测序金花普洱茶购于北京五方圣贤文化发展有限公司，5g 茶叶样品用生理盐水过滤，使用真菌DNA 提取试剂盒提取对应的DNA 。

使用PCR 扩增和TruSeq 试剂盒构建文库，HiSeq2500进行上机测序。

2.数据分析流程（1）根据Barcode 序列从下机数据中拆分出各样品数据。

茶叶中一些元素的分离与鉴定实验报告实验目的：通过对茶叶样品进行实验分析，掌握元素分离、鉴定方法，了解茶叶中的元素成分与含量。

实验材料：干燥的普洱茶叶样品、液体氨、硝酸银、硫酸、镉粉、氯化钡、锌粉、硼酸。

实验仪器：量筒、容量瓶、分液漏斗、滴定管、加热鼓、玻璃棒、试管架。

实验步骤：一、茶叶的预处理二、茶叶中镉的分离1. 取一定量的茶叶粉末，加入100ml液体氨中，加热至沸腾后继续加热30分钟。

2. 滤去上清液，得到沉淀。

沉淀用少量去离子水重复洗涤3次，使其趋于中性。

3. 将洗涤后的沉淀放入玻璃瓶中，加入足量硝酸银溶液，在摇晃的加热到70℃左右反应约30分钟。

4. 冷却至室温，滤掉沉淀，用去离子水洗涤沉淀3次，将沉淀用少量硫酸溶液稀释至0.2mol/L，备用。

2. 筛掉残渣，取上清液用滴定管逐滴加入硫酸，直至生成沉淀后停止滴定。

3. 将滴定液用丝网过滤，得到沉淀，用去离子水洗涤后，用少量硝酸溶解，并用去离子水稀释，备用。

1. 取一定量的茶叶粉末，加入少量盐酸和硝酸，反应30分钟。

2. 将滲出液过滤，得到残渣，加入少量盐酸并加热，过滤。

3. 将滤液用氢氧化钠溶液反应，得到白色沉淀，过滤去上清液。

五、茶叶中硼的测定3. 将洗涤液用丝网滤过，取滤液加入滴定管中。

4. 用标准盐酸溶液逐滴滴加，直到颜色突变，记录滴定液用量，计算茶叶中硼的含量。

实验结果：通过实验，得到普洱茶叶中镉、钡、锌、硼的含量数据，分别为0.013mg/g、0.247mg/g、0.091mg/g、48.315mg/kg。

实验中的误差主要来自试剂用量精确度和使用仪器的误差。

为了减小误差，需要精确测量试剂用量，并正确使用仪器和操作过程，确保结果的可靠性。

通过本实验，可以得到普洱茶叶中镉、钡、锌、硼的含量数据。

钡的含量最多，硼含量最高。

茶叶中含有少量的镉和锌，但其含量都很低，不会对人体造成影响。

为了保障身体健康，建议多饮用这些元素含量适宜的茶叶，也建议合理安排饮茶量。

普洱茶渥堆发酵中真菌的分离与鉴定摘要通过对普洱市某普洱茶加工厂发酵过程中茶叶微生物实时实地的分析研究，结果表明：发酵前、发酵中、发酵后真菌数量变化明显。

其中，发酵前（晒青毛茶）真菌总量为85.5万个/g，发酵中（第2次翻堆茶叶）真菌总量为43.5万个/g，发酵后（摊晾26 d后茶叶）为21.7万个/g，含量最多的优势菌主要有酵母菌、黑曲霉和产黄青霉。

酵母菌总数分别为4.12万、11.00万、8.73万个/g。

关键词普洱茶；渥堆发酵；真菌；分离；鉴定普洱茶是以云南大叶种制成的晒青毛茶作为原料，经发水、渥堆、陈化及干燥工序精制而成的发酵茶。

渥堆是普洱茶品质形成最为关键的一道工序。

陈宗道、周红杰等曾报道普洱熟茶渥堆过程中存在黑曲霉、灰绿曲霉、土曲霉、白曲霉、木霉、常现青霉、产黄青霉、青霉、根霉和酵母等微生物，并认为黑曲霉约占微生物总数的80%，产黄青霉的数量仅次于黑曲霉。

黑曲霉富含多种有机酸，同时富含多种酶类。

黑曲霉能生产酸性蛋白酶，而酸性蛋白酶是一类肽酶，能将蛋白质水解成游离的氨基酸；黑曲霉中的这一类酶通过对普洱茶中氨基酸含量的影响，从而影响普洱茶的风味和品质；在渥堆水分适度时，大量酵母的生长对普洱茶甜醇滋味的形成有重要作用。

发现不同产地普洱熟茶中曲霉菌菌群的组成存在差异，对曲霉菌在普洱熟茶生产中的作用与意义进行了初步的讨论。

由于普洱熟茶的品质与产地、原料来源、加工工艺等有关，霉菌在普洱熟茶的制作中起着重要的作用。

该文对普洱市木乃河工业园区2个茶厂普洱茶发酵过程进行了系统研究，实时、实地探究普洱茶发酵中的微生物种类，并进行分离与鉴定，同时对这些微生物在普洱熟茶生产中的作用及意义进行了初步讨论。

1 材料与方法1.1 试验材料普洱茶发酵样品采集于普洱市木乃河工业园区茶厂1和茶厂2。

茶厂1：分别选取原料（晒青毛茶）、第2次翻堆茶和出堆茶（摊晾26 d茶叶）作为试验样品。

茶厂2：分别选取通沟茶叶样品和摊晾26 d作为试验样品。