槐米中芸香苷的提取分离及鉴定

实验三槐米中芸香苷的提取、精制和检识
一、目的要求
掌握芸香苷的主要性质及提取、分离精制和检识方法。

二、实验原理
根据芸香苷可溶于碱水，在酸性条件下又可沉淀析出，采用碱溶酸沉法提取。

根据芸香苷在冷水和热水中溶解度相差较大，以水为溶剂,采用结晶法进行精制。

三、实验方法
（一）芸香苷的提取
1.不锈钢锅中加500毫升水，加热至沸后加入槐米50克，
用石灰乳调pH值8-9，继续加热20分钟，随时补充损失的水分，趁热用纱布过滤，药渣再提取一次，两次滤液合并。

2.用浓盐酸调提取液使pH值2-3，放置过夜。

3.抽滤，将沉淀抽干，置于室温中自然干燥，得芸香苷粗品。

（二）芸香苷的精制
1.取芸香苷粗品2克置800毫升的烧杯中，加水约400毫升，
加热至沸，使芸香苷完全溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜，析晶。

2.抽滤，自然干燥，得芸香苷精制品。

（三）芸香苷的检识(要求写出反应现象)
1.氢氧化钠实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml蒸馏水，振摇。

滴加2-3滴氢氧化钠溶液，芸香苷溶解，呈黄色澄明溶液。

再滴加盐酸溶液2-3滴，观察是否有沉淀生成。

2.α-萘酚—浓硫酸实验（Molish反应）
取芸香苷少许置干燥试管中，加2ml无水乙醇，振摇。

再滴加2-3滴α-萘酚溶液，振摇。

将试管倾斜，沿管壁滴加1ml 浓硫酸，观察两液面交界处颜色变化。

3.盐酸-镁粉实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml 50%的乙醇，水浴加热溶解。

加入少许镁粉，再加入盐酸数滴，观察颜色变化。

槐米中芸香苷（芦丁）的提取与鉴定【实验目的】1、学会运用碱溶酸沉法，从槐米中提取、精制芦丁，并进行水解。

2、学会用显色反应及纸色谱法检识黄酮类化合物。

【实验原理】采用碱溶酸沉法提取，其原理是芸香苷结构中含有酚羟基，具酸性，能溶于碱水，当加入酸溶液后，则芸香苷沉淀析出。

芸香苷的精制是利用其可溶于热水，难溶于冷水的性质与杂质分离。

【实验材料】设备：电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、移液管、纱布、温度计、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、水浴锅、pH 试纸、新华色谱滤纸、紫外灯、展开筒、试管、试管架。

药品：槐米粗粉、浓盐酸、蒸馏水、0.4%硼砂、石灰乳、2%硫酸、95%乙醇、氢氧化钡、葡萄糖标准品水溶液、鼠李糖标准品水溶液、正丁醇、醋酸、芦丁标准品、槲皮素标准品、氨水、三氯化铝、浓硫酸、α–萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉、苯胺-邻苯二甲酸、醋酸镁【实验步骤】实验1、芸香苷的提取：称取槐米粗粉20g，置500 ml烧杯中，加入0.4%硼砂沸水溶液200 ml，在搅拌下加石灰乳，调至pH8～9，加热微沸20分钟（注意保持pH8～9），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用四层纱布滤过。

滤渣同样操作再提取一次，合并两次滤液。

滤液在60℃～70℃用浓盐酸调至pH5左右，静置过夜使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗2～3次至中性，抽干，置空气中晾干，得芸香苷粗品。

实验2、芸香苷的精制：称一定重量的粗品，按约1∶200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。

抽滤，置空气中晾干或60℃～70℃干燥，得精制芸香苷，称重，计算得率。

实验3、芸香苷的水解和鉴定：取芸香苷1g，研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇约15 ml）重结晶即得精制槲皮素。

一、实验目的1. 掌握芸香苷的提取方法。

2. 学习黄酮类化合物的分离纯化技术。

3. 了解芸香苷的鉴定方法。

4. 培养实验操作技能和科学思维。

二、实验原理芸香苷（Rutin）是一种天然黄酮类化合物，广泛存在于槐米、山楂、茶叶等植物中。

本实验采用醇提法提取芸香苷，通过分离纯化得到较高纯度的芸香苷，并对其进行鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 槐米- 甲醇- 氢氧化钠- 碳酸钠- 盐酸- 硝酸- 氢氧化钠溶液- 醋酸铅溶液- 醋酸镁溶液- 香草醛溶液- 水合氯醛溶液- 蒸馏水- 硅胶2. 实验仪器：- 电子天平- 热水浴锅- 超声波清洗器- 烘箱- 分液漏斗- 抽滤装置- 显微镜- 紫外可见分光光度计四、实验步骤1. 芸香苷的提取：（1）称取干燥的槐米粉末10g，置于100mL三角瓶中。

（2）加入50mL甲醇，超声提取30分钟。

（3）过滤，收集滤液。

（4）将滤液浓缩至约5mL，加入适量的氢氧化钠溶液，调节pH值为8.5。

（5）静置过夜，使芸香苷沉淀。

（6）抽滤，收集沉淀。

2. 芸香苷的分离纯化：（1）将沉淀用适量甲醇溶解，加入适量的硅胶，搅拌均匀。

（2）将混合物倒入色谱柱中，采用柱层析法进行分离纯化。

（3）依次用不同极性的溶剂进行梯度洗脱，收集目标峰。

（4）将收集到的目标峰浓缩，得到纯化的芸香苷。

3. 芸香苷的鉴定：（1）紫外-可见光谱法：取适量纯化后的芸香苷，用甲醇溶解，测定其在254nm和364nm处的吸光度值。

（2）薄层色谱法：将纯化后的芸香苷点于薄层板上，用适宜的溶剂进行展开，与对照品进行对比，观察其斑点位置。

（3）红外光谱法：对纯化后的芸香苷进行红外光谱分析，与标准图谱进行对比，确定其结构。

五、实验结果与分析1. 芸香苷的提取：通过醇提法，从槐米中成功提取了芸香苷。

2. 芸香苷的分离纯化：采用柱层析法，从提取液中分离纯化了芸香苷。

3. 芸香苷的鉴定：通过紫外-可见光谱法、薄层色谱法和红外光谱法，对纯化后的芸香苷进行了鉴定，确认其为芸香苷。

实验一槐米中芸香苷粗品的提取
【实验目的】
1、学会运用碱溶酸沉法,从槐米中提取芸香苷
【实验原理】
采用碱溶酸沉法提取,其原理是芸香苷结构中含有酚羟基,具酸性,能溶于碱水,当加入酸溶液后,则芸香苷沉淀析出
【实验材料】
设备:电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、纱布、温度计、滴管、抽滤装置、研钵、pH试纸、新华色谱滤纸
药品:槐米粗粉、浓盐酸、蒸馏水、0.4%硼砂、石灰乳
【实验步骤】
1、芸香苷的提取:
称取槐米粗粉20g,置500 ml烧杯中,加入0.4 %硼砂沸水溶液200 ml,在搅拌下加石灰乳,调至pH 8～9,加热微沸20分钟 (注意保持pH 8～9),并随时补充蒸发掉的水分,趁热用两层纱布滤过.滤渣同样操作再提取一次,合并两次滤液.滤液在60～
70 ℃用浓盐酸调至pH 5左右,静置过夜使沉淀完全,抽滤,沉淀用蒸馏水洗2～3次至中性,抽干,置空气中晾干,得芸香苷粗品。

【实验注意】
1、硼砂的作用，芸香苷分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露在空气中能缓缓氧化变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解。

硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的。

但其价格较高，工业上用较大量的石灰加少量硼砂，同样达到提高质量要求。

2、加入石灰乳，使pH 8～9，既可以达到碱溶解芸香苷的目的，又可以除去槐米中含有的大量多糖黏液质。

但pH不能过高，碱处理时间尽短，以减少酚类氧化分解。

3、用浓盐酸调pH 4～5, pH过低会使芸香苷降低得率。

4、提取时也可以不加碱,直接用沸水提取,得率也比较高。

【实验装置图】【实验结论】【实验注意】。