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微生物培养方法微生物培养是一种用于研究微生物生理生化特性、生长繁殖规律及其与环境条件的关系等的重要技术手段。
以下是一些常见的微生物培养方法：1、固体培养基培养法固体培养基是在培养液中加入凝固剂，使培养基成为凝固状态的培养基。
这种培养基具有良好的稳定性，可以防止培养液中的微生物在培养过程中流失，同时也可以使微生物在固体表面生长繁殖，方便观察和检测。
固体培养基一般用于细菌、放线菌、酵母菌等微生物的培养。
2、液体培养基培养法液体培养基是一种不添加凝固剂的培养基，使培养基呈液体状态。
液体培养基中，微生物在培养液中自由悬浮生长繁殖，可以充分接触培养液中的营养物质，有利于微生物的生长繁殖。
液体培养基一般用于工业生产中的微生物培养，如发酵工业中制备各种发酵产品。
3、半固体培养基培养法半固体培养基是在液体培养基中加入少量凝固剂，使培养基成为半凝固状态的培养基。
这种培养基可以固定培养液中的微生物，同时也可以使微生物在半固体表面生长繁殖。
半固体培养基一般用于观察微生物的运动和生长情况。
4、厌氧培养法有些微生物需要在无氧或低氧分压条件下生长繁殖，因此需要采用厌氧培养法。
厌氧培养法一般采用密闭容器或厌氧手套箱中进行，可以提供无氧或低氧环境。
在厌氧培养法中，需要使用专门的厌氧培养基和厌氧菌株，以保证微生物的生长繁殖。
5、富集培养法富集培养法是一种常用的分离高浓度微生物的方法。
该方法是通过在培养基中添加一些特殊成分，如高浓度营养物质、抑制剂等，以抑制其他微生物的生长繁殖，从而增加目标微生物的数量和浓度。
富集培养法一般用于从自然界或工业生产中分离特定种类的微生物。
微生物培养方法有很多种，每种方法都有其特定的适用范围和特点。
在实际操作中，需要根据具体情况选择合适的培养方法，以达到最佳的培养效果。
还需要注意无菌操作、环境控制等方面的技术细节，以保证微生物生长繁殖的良好环境和条件。
微生物的分离培养方法微生物的分离培养是微生物研究中常用的技术之一，它能够将目标微生物从复杂的微生物群体中分离出来，并进行纯培养。
环境中微生物的检测和分离纯化一、实验目的：1.熟悉常用微生物培养基的配制方法。
2.学习并掌握各种无菌操作技术，并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。
3.用平板划线法和稀释法分离微生物。
4.认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。
二、实验原理：（一）微生物的分离与纯化：土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此，土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离和纯化。
常用的是平板分离法。
为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、温度和氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某些抑制剂，造成抑制其他菌生长而利于此菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物。
再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离，纯化该微生物，直至得到纯菌种。
（二）平板菌落计数法：平板菌落计数法是将样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。
此法缺陷：操作繁琐，结果需要培养一段时间才能取得，测定结果易受多种因素的影响。
此法优点：可以获得活菌的信息，被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等的含菌指数或污染程度的检测。
三、实验材料和仪器：土样10g，未知菌变形杆菌单菌落平板和无菌水。
取液器（5000ul、1000ul各一支），培养箱，培养皿（20个），无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂棒，接种环，5000ul、1000ul无菌吸头，记号笔，酒精灯，火柴，试管架。
四、实验步骤：（一）培养基的制备（第二次实验时准备）：肉汤蛋白胨培养基：牛肉膏2g蛋白胨4gNaCl 2g蒸馏水400mL琼脂8g1. 称量：按上述配方称量各类物质。
微生物计数方法微生物计数是许多领域中重要的分析方法，包括环境科学、食品科学、医学和生物技术。
正确的计数方法能够准确地估计样品中微生物的数量，对于研究和工业应用都是至关重要的。
下面将介绍几种常用的微生物计数方法。
血细胞计数器法是一种使用显微镜进行微生物计数的经典方法。
该方法使用血细胞计数器对微生物样品进行计数，每个格子中的微生物数量被计算出来，然后进行统计分析。
此方法的优点是准确性高，但是耗时长，操作繁琐，需要熟练的操作人员。
流式细胞术是一种使用流式细胞仪进行微生物计数的现代方法。
该方法将微生物样品通过流式细胞仪进行计数和分析，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。
此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，但是设备成本高，维护成本也较高。
自动细胞计数器法是一种使用自动细胞计数仪进行微生物计数的现代方法。
该方法使用自动细胞计数仪对微生物样品进行计数，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。
此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，而且设备相对较为经济实惠，易于推广应用。
平板计数法是一种常用的细菌计数方法。
该方法将微生物样品涂布在平板上，培养后计算菌落数量，从而得出样品中的细菌数量。
此方法的优点是简单易行、成本低，但是结果受培养条件和操作者技能水平的影响，准确性相对较低。
不同的微生物计数方法具有不同的优缺点，应根据具体的研究目标和实际情况选择合适的方法。
为了提高计数的准确性，需要注意样品的采集、保存、制备和处理等方面的问题，确保样品的质量和代表性。
微生物的分离与计数是微生物学中重要的实验技术之一。
通过分离和计数，我们可以获得微生物群体的相关信息，如种类、数量、生长状况等，对于微生物学研究、应用以及工业生产等领域都具有重要的意义。
选择合适的培养基：根据目标微生物的种类和生长需求，选择适合的培养基。
培养基应具有营养丰富、透明度高、易于观察等特点。
制备样品：从目标环境中采集样品，如土壤、水、食品等，并进行预处理，以去除不需要的杂质和大型生物。
微生物的分离纯化及稀释平板菌落计数关键词：微生物分离纯化计数实验原理稀释平板测数是根据微生物在高度稀释条件下固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。
计数时，首先将待测样品制成均匀的繁殖稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使其成单个细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个细胞，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此记数方法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。
一般用于某些产品检定，如根瘤菌剂等产品检定，生物制品检验，土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。
自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体。
为了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。
在自然界中，土壤是微生物生活的良好环境，其中生活的微生物数量和种类都是极其丰富的，因此土壤是人类开发利用微生物资源的重要基地。
土壤中的微生物数量、种类与土壤肥力有关，肥沃的土壤中多，贫瘠土壤中少。
其生理类群则与土壤的其它理化性质，如通气、pH有关，例如在通气良好的菜园土中，好气性微生物占有绝对优势。
本实验以菜园土为材料分离土壤中的好气性细菌，并进行数量测定。
分离微生物时，一般是根据该微生物对营养、pH、氧气等要求的不同，供给它们适宜的生活条件，或加入某种抑制剂造成只利于该菌种生长，不利于其它菌种生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。
分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法，根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单个菌落进一步分离纯化。
在用稀释平板分离微生物时，还可以同时测定待分离的微生物的数量。
(一) 常用的微生物分离纯化方法菌种分离纯化的方法有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离法、选择培养分离法等。
其中前三种方法最为常用,不需要特殊的仪器设备, 分离纯化效果好, 现分别简述如下1. 稀释混合倒平板法平板是指经熔化的固体培养基倒入无菌培养皿中, 冷却凝固而成的盛有固体培养基的平皿。
该法是先将待分离的含菌样品, 用无菌生理盐水作一系列的稀释(常用十倍稀释法, 稀释倍数要适当), 然后分别取不同稀释液少许(0.5-1.0ml)于无菌培养皿中, 倾入已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基, 迅速旋摇, 充分混匀。
待琼脂凝固后, 即成为可能含菌的琼脂平板。
于恒温箱中倒置培养一定时间后, 在琼脂平板表面或培养基中即可出现分散的单个菌落。
每个菌落可能是由一个细胞繁殖形成的。
挑取单一个菌落, 一般再重复该法1-2次, 结合显微镜检测个体形态特征,便可得到真正的纯培养物。
若样品稀释时能充分混匀,取样量和稀释倍数准确,则该法还可用于活菌数测定。
图4 混合倒平板操作法示意图图5 涂布平板操作法示意图2. 稀释涂布平板法采用上述稀释混合倒平板法有两个缺点，一是会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间,缺乏溶氧而生长受影响,形成的菌落微小难于挑取；一是在倾入熔化琼脂培养基时，若温度控制过高,易烫死某些热敏感菌，过低则会引起琼脂太快凝固, 不能充分混匀。
在微生物学研究中, 更常用的纯种分离方法是稀释涂布平板法。
该法是将已熔化并冷却至约50℃(减少冷凝水)的琼脂培养基, 先倒入无菌培养皿中, 制成无菌平板。
待充分冷却凝固后,将一定量(约0.1 ml)的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面, 再用三角形无菌玻璃涂棒涂布,使菌液均匀分散在整个平板表面, 倒置温箱培养后挑取单个菌落。
另一种简单快速有效的涂布平板法, 可省去含菌样品悬液的稀释, 直接吸取经振荡分散的样品悬浮液l滴加入1号琼脂平板上, 用一支三角形无菌玻璃涂棒均匀涂布, 用此涂棒再连续涂布2号、3号、4号平板(连续涂布起逐渐稀释作用，涂布平板数视样品浓度而定), 翻转此涂棒再涂布5号、6号平板, 经适温倒置培养后挑取单个菌落。
微生物纯种的分离方法自然界中的微生物总是杂居在一起，即使一粒土或一滴水中也生存着多种微生物。
要研究其中的某一种微生物，首先必须将它分离出来。
下面介绍几种纯种微生物的分离方法。
平板划线分离将已经熔化的培养基倒入培养皿中制成平板，用接种环沾取少量待分离的材料，在培养基表面平行或分区划线(图5-5)，然后，将培养皿放入恒温箱里培养。
在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。
液体稀释法将待分离的样品经过大量稀释后，取稀释液均匀地涂布在培养皿中的培养基表面，培养后就可能得到单个菌落。
利用选择培养基进行分离不同的微生物对不同的试剂、染料、抗生素等具有不同的抵抗能力，利用这些特点可配制出适合某种微生物生长而限制其他微生物生长的选择培养基。
用这种培养基来培养微生物就可以达到纯种分离的目的。
菌丝尖端切割这种方法适于丝状真菌。
用无菌的解剖刀切取位于菌落边缘的菌丝的尖端，将它们移到合适的培养基上培养后，就能得到新菌落三、细菌的分离与计数（一）背景知识介绍1.细菌的分离与纯化自然界的细菌总是以杂居的方式存在，如土壤、水、空气等都分布着种类繁多的细菌。
我们如何知道这些杂居的细菌是哪种细菌呢？这就需要将这些带菌的材料中混杂的细菌，经过稀释，使其分散成单个存在的菌体，在固体培养基平板上，长成肉眼可见并具有一定特征的菌落。
这些菌落分离出来，进行纯培养。
所谓纯培养即在一个培养物中，所有的细菌都是由一个细菌分裂繁殖而产生的后代。
这种获得单一菌株纯培养的的方法称为细菌的分离。
常用的分离方法有稀释法和划线法。
（二）课题提出：我们的身体和周围的环境有大量的细菌，细菌与我们的生活和健康密切相关。
但是，自然存在的细菌都混杂在一起，我们要想研究和了解各种细菌的形态结构和功能，就要对其进行分离纯化，才能进行深入的研究。
如对一些致病菌的研究，食品卫生的研究，微生物工业的研究等。
在研究过程中，有时需要调查和检测细菌密度，则需要统计细菌的数量。
微生物的纯培养、分离纯化和平板菌落计数法姓名摘要：纯培养技术是进行微生物学研究的基础。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
平板菌落计数法是一种应用广泛的测定微生物生长繁殖的方法，其特点是能测出微生物样品中的活细胞数。
本实验通过稀释涂布平板法和平板划线分离法分离纯化微生物以获得纯培养并进行平板菌落计数，旨在了解微生物的纯培养含义和意义、熟练掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术、了解利用平板菌落计数法测定微生物样品中活细胞的原理、学习平板菌落计数的操作步骤与方法。
实验结果表明，本实验达到了预期的目的。
关键词：微生物的纯培养、微生物的分离与纯化、平板菌落计数法1.引言自然界中各种微生物混杂生活在一起，即使取很少量的样品也是许多微生物共存的群体。
人们要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培养状态。
也就是说培养物中所有细胞只是微生物的某一个种或株，它们有着共同的来源，是同一细胞的后代。
只有纯培养物才能提供可以重复的有意义的结果，纯培养技术是进行微生物学研究的基础。
形状稳定的纯培养（菌种）是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
使用显微操作器单细胞挑取法可以直接得到纯培养。
稀释涂布平板法、稀释混合平板法或平板划线法是分离和纯化微生物的常规方法。
后几种方法不需要特殊的仪器设备，一般情况下都能顺利进行，达到好的效果。
常用的方法有：（1）简易单细胞挑取法：它需要特制的显微操纵器或其他显微技术，因而其使用受到限制。
简易单孢子分离法是一种不需显微单孢操作器，直接在普通显微镜下利用低倍镜分离单孢子的方法。
它采用很细的毛细管吸取较稀的萌发的孢子悬浮液滴在培养皿盖的内壁上，在低倍镜下逐个检查微滴。
将只含有一个萌发孢子的微滴放一小块营养琼脂片，使其发育成微菌落。
再将微菌落转移到培养基中，即可获得仅由单个孢子发育而成的纯培养。
（2）平板分离法：微生物的平板分离纯化技术自1880年Koch发明以来已有100多年的历史。
该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。
该技术的建立和发展为人类获得丰富的微生物资源以及在工、农、医、环境、动植物细胞培养等方面的应用作出了巨大贡献。
由此可见，一项新的重大的微生物学实验技术的建立会对整个生命科学带来革命性的变化。
随着分子生物学的发展和学科的相互渗透，微生物的分离鉴定技术将获得新的突破。
目前发展的PCR、16S rRNA探针杂交技术、荧光抗体技术等已开始用于自然环境中某些特殊微生物的分离、鉴定，特别是对那些现在认为是非可培养的微生物。
平板分离纯化技术的基本原理包括两方面：第一，选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、温度和氧等要求或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
第二，微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。
因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。
值得指出的是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。
因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。
平板菌落计数法是一种应用广泛的测定微生物生长繁殖的方法，适用于细菌、酵母等单细胞微生物以及放线菌和霉菌的孢子，其特点是能测出微生物样品中的活细胞数。
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，我们常用菌落形成单位CFU来表示，由此得到的计数结果的单位是CFU/mL，而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水（包括水源水）等的含菌指数或污染程度的检测。
2.材料和方法2.1材料和试剂实验菌种：大肠杆菌实验培养基：150mL LB固体培养基实验仪器：无菌玻璃涂棒、5支1mL无菌吸管、接种环、10套无菌培养皿、5支盛有4.5mL 无菌水的试管、试管架、恒温培养箱、酒精灯、高压蒸汽灭菌锅、火柴2.2方法2.2.1稀释涂布平板法（1）倒平板。
将150mL LB固体培养基用灭菌锅加热融化（溶解保温，温度100℃，时间30min），之后冷却至55～60℃（不烫手为宜）。
冷却后分别给6套无菌培养皿倒平板。
倒平板的方法是：右手持盛LB培养基的三角瓶置酒精灯火焰旁边，用左手将试管塞轻轻地拔出，试管口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住试管塞。
左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15 mL，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上10分钟以上，待凝后即为平板。
将平板标记分配（10-3、10-4、10-5的稀释度各两套培养皿）。
（2）系列稀释。
取5支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标记10-1、10-2、10-3、10-4、10-5。
用1mL无菌吸管吸取0.5mL已充分混匀的大肠杆菌菌液（待测样品）至10-1的试管中，此即为10倍稀释。
将多余的菌液放回原菌液中。
将10-1的试管振荡使菌液充分混匀。
另取一支1mL无菌吸管插入10-1的试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。
用此吸管吸取10-1已充分混匀的菌液0.5mL于10-2的试管中，此即为100倍稀释。
该支无菌吸管放回封套中，并对应着10-1试管。
依次类推，直至最后用吸管吸取10-4菌液0.5mL已充分混匀的菌液于10-5的试管中，此即为105倍稀释。
（3）涂布。
取6套LB培养基已经凝固的无菌培养皿，分别用记号笔标明10-3、10-4、10-5（稀释度，每个稀释度各2套无菌培养皿），用刚才分别与10-3、10-4、10-5的试管对应的无菌吸管分别由10-3、10-4、10-5三管稀释菌悬液中各吸取0.2mL，对号放入已写好稀释度的平板中。
用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，将培养皿平放于实验台上室温下静置10～15min，使菌液渗入培养基表层内。
平板涂布方法：将0.2 mL菌悬液小心地滴在平板培养基表面中央位置（0.2mL的菌液要全部滴在培养基上，若吸管尖端有剩余的菌液，需将吸管在培养基表面上轻轻地按一下便可）。
右手拿无菌涂棒平放在平板培养基表面上，将菌液先沿一条直线轻轻地来回推动，使之分布均匀，然后改变方向沿另一垂直线来回推动，平板内边缘处可改变方向用涂棒再涂布几次。
（4）培养。
将LB培养基平板倒置于37℃温室中培养24～48h。
（5）计数、计算。
培养48h后，取出培养皿，首先确定培养皿合适的稀释倍数D（-3、-4、-5），然后统计出某个稀释度下几个平板菌数的平均值X，依据平板上加入菌液量Y mL，得到样品中菌数（CFU/mL）＝(X×D)/Y。
（6）挑取单菌落。
将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到上述三种培养基的斜面上，置于37℃的温箱培养，待菌苔长出后，检查其特征是否一致，同时将细胞涂片染色后用显微镜检查是否为单一的微生物。
若发现有杂菌，需再一次进行分离及培养，直至确证纯培养。
最后选择合适的方法保存菌种。
2.2.2平板划线分离法（1）倒平板。
按稀释涂布平板法倒平板，得到3套LB固体培养基。
（2）划线。
在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取大肠杆菌菌液一环在平板上划线。
划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。
我们使用四分区划线法，其接种步骤是：用接种环以无菌操作挑取大肠杆菌菌液一环，先在平板培养基的一边作第一次平板划线3～4条，再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同样的方法通过第二次划线部分做第三次划线和通过第三次平行划线部分做第四次平行划线。
划线完毕后，盖上培养皿盖，倒置于温室培养。
（3）挑取单菌落。
同稀释涂布平板法，进一步划线分离及培养，检测菌落纯度，确证纯培养，选择合适的方法保存菌种。
2.2.3 阴性对照组取一个150mL LB固体培养基作为阴性对照组，不接种大肠杆菌菌悬液，培养方式等其他因素不变。
3.结果图1、图2：用稀释涂布平板法得到的10-3稀释度的两个大肠杆菌培养基图3、图4：用稀释涂布平板法得到的10-4稀释度的两个大肠杆菌培养基图5、图6：用稀释涂布平板法得到的10-5稀释度的两个大肠杆菌培养基图7、图8、图9：用平板划线分离法得到的大肠杆菌培养基图10：阴性对照组，没有接种大肠杆菌的LB固体培养基（1）用稀释涂布平板法系列稀释后可以得到单菌落（图5、图6），培养基涂布均匀，大肠杆菌菌落呈针尖状，达到分离纯化的目的，可以获得纯培养。
（2）用平板划线分离法得到的三个培养基（图7、图8、图9）均有单菌落，培养基涂布均匀，大肠杆菌菌落呈针尖状，达到分离纯化的目的，可以获得纯培养。
（3）用稀释涂布平板法得到的10-5稀释度的两个大肠杆菌菌落培养基中，菌落数分别是840和895。
由此计算得到样品中菌数（CFU/mL）＝（867.5×0.2）／10-5＝1.735×107。
4.讨论（1）用1mL无菌吸管吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸入管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。
（2）吸管尖在向盛有无菌水的试管里放菌液的时候不要碰到液面，而且每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液。
否则稀释不精确，结果误差较大。
（3）涂布平板用的菌液量一般以0.2mL较为适宜。
如果过少，菌液不易涂布开；过多则在涂布完后或在培养时菌液仍会在平板表面流动，不易形成单菌落。
（4）稀释涂布平板法中利用试管稀释的菌液一定要摇匀使细胞分散。
（5）培养皿一般皿底标记，标记要简单明了。
需要标明操作者和组员、浓度、时间、菌样、添加物等。
（6）用无菌玻璃涂棒涂布培养基的顺序是由低浓度向高浓度，即先涂布10-5稀释度的培养基，再先涂布10-4稀释度的培养基，最后涂布10-3稀释度的培养基。
