实验五 土壤中微生物的分离计数

实验五微生物的分离、接种及培养法一目的要求1.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。

2.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。

二实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

常用的分离方法有： 1) 平板划线分离法；2）稀释平板分离法。

在食品发酵工业中，通过微生物的分离、纯化，选育优良的微生物菌种，以提高产品的质量和产量；在食品卫生管理方面，需要进行微生物检测，必须将微生物单一分离出来，加以鉴别和研究。

土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。

因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。

微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。

三实验材料1.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样品。

2.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼脂培养基（斜面、平板）。

3.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。

四实验内容与步骤（一）微生物的分离技术1. 平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个菌落，从而达到分离的目的。

具体方法如下：倒制平板→制备含菌样品稀释液→划线→倒置适温培养→观察记录（1)倒制平板：将固体培养基熔化→冷却至 50-55℃→注入培养皿内 15ml（无菌操作）→旋匀→静置凝固→即成平板→在皿盖边贴标。

（2)含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌悬液即可，能直接划线的样品（如体液、黏液、污水等），可省去这操作。

（3)划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸入培养皿，轻轻划线（切勿把平板表面划破）。

然后将培养皿倒置放入恒温培养箱37℃，培养24-48 小时，观察平板上出现的现象，注意菌落的形状，并做记录。

土壤微生物的分离与平板菌落计数实验二土壤微生物的分离与平板菌落计数一、实验目的(1)几种常用分离纯化微生物的基本操作技术(2)掌握倒平板(3)学习平板菌落计数的基本原理和方法二.实验原理微生物的分离与纯化是指从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程。

分离纯化微生物的常用方法有平板表面画线法、平板表面涂布法和琼脂培养基浇注法等，因为其方法简单、设备简单、分离效果好，所以一直被实验室普遍选用。

活菌计数的基本方法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。

统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。

三.实验器材1.材料:土壤2.培养基:牛肉膏蛋白胨培养基3.仪器或其他用具:无菌培养皿，盛有9ml无菌水的试管，1ml移液器，玻璃涂布器，恒温培养箱四.实验步骤(一)采样取表层以下5-10cm处的土样，放入灭菌的袋中备用，或放在4 ?冰箱中暂存。

(二)倒平板(无菌操作)培养基加热溶化，待冷至55-60? ，然后在无菌操作条件下倒入培养基于无菌培养皿中，并在各培养皿上作好标记。

(三)制备土壤稀释液(无菌操作)1.制备土壤悬液用电子天平称取 5g土于装有45ml无菌水的三角瓶中，振摇约20min,使土壤与水充分混匀2.梯度稀释取1ml土壤悬液加入装有9ml无菌水的试管，以此类推制成10-1 、10-2、10-3等不同稀释度的土壤溶液。

(四)平板分离单菌落(无菌操作)选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量含菌的土壤悬液，在酒精灯旁进行划线操作，用左手控制培养皿，右手捏接种环，在标记处划3-4条连续的平行线作当作初步稀释的菌源。

烧去接种环上的残余菌样。

将烧去残余菌样后的接种环在平板培养基边缘冷却以下，然后将培养基另一区转至划线位置，将接种环通过菌源区而移至现在的划线区，依次类推划上几次。

土壤微生物别离纯化及测数土壤微生物|别离纯化及测数来源：生物秀时间：2021-5-28一、实验目的要求了解土壤微生物的别离纯化及测数的根本原理。

学习并掌握微生物别离纯化技术方法。

学习并掌握微生物平板菌落计数的技术方法。

二、根本原理土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过别离进行纯培养，并能对特定类群进行数量测定。

根本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。

三、实验步骤〔一〕土壤样品采集在待测田块上，假设田块面积小于50平方米那么按对角线三点采样，假设田块面积大于50平方米按对角线五点采样。

采样一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土 1--2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。

〔二〕好气性细菌的别离纯化及测数1.制备土样稀释液吹吸三次混匀无菌操作另留一管不稀释留作对照〔C K〕2.培养基的准备融化牛肉膏蛋白胨培养基，融化后保温在48℃。

并取6个无菌培养皿，分别在皿底贴好标签，注明10-5、10-6、CK〔每个稀释度要两个平行皿，对照要两个平行皿〕。

3.倾注法接种先按10-6，10-5的顺序将不同稀释度菌悬液接入对应平皿中〔每个平皿接入1ml〕，再向每个平皿倾注约15ml的牛肉膏蛋白胨培养基〔48℃〕待冷凝，混合均匀。

4.保温培养将已经接种的平皿静置10min后，放入温箱倒置培养3--5日〔30℃〕，观察结果。

5.分区划线法纯化平板划线别离，其划线方法有以下两种：6.计数要求30~300之间计数。

CK除外。

每克湿土样细菌数量＝平均菌落数×稀释倍数土壤样品水分系数1∕〔1—样品水分百分数〕土壤样品细菌数量〔个∕克干土〕＝每克湿土样细菌数量×样品水分系数四实验报告及思考题记录计数结果并计算土壤样品含菌数。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验方案尿素是一种含氮有机化合物，广泛用作化肥和动物饲料。

土壤中的细菌可以通过分解尿素来获取氮元素，从而促进土壤微生物群落的生长和发展。

为了研究土壤中分解尿素的微生物群落，可以进行以下实验：
1.采集土壤样品，将其通过蒸馏水过滤器过滤，以去除大颗粒物和悬浮物。

2.将过滤后的土壤样品接种到含有尿素的培养基中，利用不同的培养条件(如温度、pH值、氧气含量等)筛选出适宜于生长的细菌。

3.将筛选出的细菌进行单一克隆培养，然后通过染色、显微镜观察和生化测试等方法对其进行鉴定和分类。

4.最后，可以利用计数板等设备对土壤中分解尿素的细菌进行计数。

实验步骤：
1.收集土壤样品，通过蒸馏水过滤器过滤。

2.制备含尿素的培养基，分别设置不同的培养条件，如温度、pH 值、氧气含量等。

3.将过滤后的土壤样品接种到培养基中，进行培养。

4.观察培养基中是否有细菌生长，记录细菌的数量和形态特征。

5.对生长的细菌进行单一克隆培养，然后进行鉴定和分类。

6.利用计数板等设备对土壤中分解尿素的细菌进行计数。

实验注意事项：
1.在实验过程中要注意卫生，避免污染。

2.制备培养基时要严格按照配方和操作步骤进行。

3.培养时要控制好温度、pH值、氧气含量等条件，以便筛选出适宜于生长的细菌。

4.鉴定和分类时要准确和细致，避免误判。

5.计数时要进行多次重复，以提高结果的精度和可靠性。

土壤分离微生物实验报告
实验目的：
1.了解土壤微生物的多样性和数量。

2.研究不同培养基对土壤微生物的影响。

实验原理：
微生物分离可以通过选取合适的培养基和条件，使得某些微生物得到优质的生长环境，从而使其能够生长繁殖。

在本实验中，选用不同的培养基和条件，从土壤中分离出不同的微生物。

实验步骤：
1.准备所需材料和培养基。

2.在实验室制备土壤样品。

3.将土壤样品加入稀释液中稀释，使用平板计数器进行计数。

4.采用分离培养法分离微生物，根据选择的培养基和条件处理
土壤样品，如气氛，温度，pH值等，使其生长繁殖并形成纯
培养物。

5.将分离出的纯培养物鉴定，确定其种属和数量。

实验结果：
本实验中选取多种常用的培养基进行菌落计数和分离培养。

结果表明，菌落计数在不同的培养基中差异较大，而在同一培养基中，不同的土壤样品菌落计数也会有较大的差异。

通过分离培养法，我们在不同的培养基中分离出了多种不同的微生物，并通过特定的鉴定方法确定其种属和数量。

结论：
通过土壤微生物分离实验，我们能够了解土壤微生物的多样性和数量，并且能够研究不同培养基对土壤微生物的影响。

微生物的分离培养为分析细菌的生物学特性、应用微生物工程提供了有力的手段。

⼟壤中微⽣物的分离与计数,微⽣物的实验室培养⼟壤中分解尿素的细菌的分离与计数：1．分离菌株的思路(1)⾃然界中⽬的菌株的筛选①依据：根据它对⽣存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

②实例：PCR技术过程中⽤到的耐⾼温的Taq DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq 细菌中提取出来的。

(2)实验室中⽬的菌株的筛选①原理：⼈为提供有利于⽬的菌株⽣长的条件（包括营养、温度.pH等），同时抑制或阻⽌其他微⽣物⽣长。

培养基选择分解尿素的微⽣物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微⽣物才能分解尿素，以尿素作为氮源。

缺乏脲酶的微⽣物由于不能分解尿素，缺乏氮源⽽不能⽣长发育繁殖，⽽受到抑制，所以⽤此培养基就能够选择出分解尿素的微⽣物②⽅法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素。

配制以尿素为唯⼀氮源的培养基，能够⽣长的细菌就是能分解尿素的细菌。

2．统计菌落数⽬的⽅法(1)稀释涂布平板法（间接）①当样品的稀释庋⾜够⾼时，培养基表⾯⽣长的⼀个菌落，来源于样品稀释液中的⼀个活菌。

②通过统计平板上的菌落数来推测样品中⼤约含有的活菌数。

(2)利⽤显微镜直接计数3．分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。

在以尿素为唯⼀氮源的培养基中加⼊酚红指⽰剂培养细菌，若指⽰剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。

4．实验流程⼟壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯⼀氮源的培养基上→挑选能⽣长的菌落→鉴定知识拓展：1、Taq细菌是耐⾼温的微⽣物。

2、培养基对微⽣物具有选择作⽤。

配置培养基时根据某⼀种或某⼀类微⽣物的特殊营养要求，加⼊某些物质或出去某些营养物质，⼀直其他微⽣物的⽣长，也可以根据某些微⽣物对⼀些物理、化学因素的抗性，在培养基中加⼊某种化学物质，从⽽筛选出待定的微⽣物。

这种培养基叫做选择培养基。

3、测定微⽣物数量的⽅法：①直接计数法：常⽤显微镜直接技术法，⼀般适⽤于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。

实验五环境中微生物的检测和分离纯化一、实验目的1. 熟悉常用微生物培养基的配制方法。

2. 学习并掌握各种无菌操作技术, 并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。

3. 用平板划线法和稀释法分离微生物。

4．认识微生物存在的普遍性, 体会无菌操作的重要性。

二、实验原理(一)微生物的分离与纯化土壤是微生物生活的大本营, 在这里生活的微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。

因此, 土壤是微生物多样性的重要插所, 也是发掘微生物资源的重要基地, 可以从土壤中分离、纯化得到许多有价值的菌株。

从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

常用的是平板分离法。

为了获得某种微生物的纯培养, 一般是根据该微生物对雪养、酸碱度、浓度和氧等条件要求不同, 而供给它适宜的培养条件, 或加入某些抑制剂抑制其他菌生长而利于此菌生长的环境, 从而淘汰其他一些不需要的微生物．再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离, 纯化该微生物, 直至得到纯菌株。

(二)平板菌落计数法平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释, 使其中的微生物充分分散成单个细胞, 取一定量的稀释样液接种到平板上, 经过培养, 由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落, 即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞. 统计菌落数, 根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。

平板菌落计数法虽然操作繁琐, 结果需要培养一段时间才能取得, 而且测定结果易受多种因素的影响, 但是, 由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息, 所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂), 以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。

三、实验材料土样10g, 未知菌变形杆菌单菌落平板和无菌水.取液器(5m1.l000ml各一支), 培养箱, 培养皿(20个), 无菌有帽试管, 三角瓶, 无菌涂棒, 接种环, 5ml、1ml无菌吸头（移液管）, 记号笔, 酒精灯, 火柴, 试管架, 牙签, 。