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MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项一、MTT原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-2)-3,5-diphenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490 nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，须被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
二、MTT溶液的配制方法通常，此法中的MTT浓度为5 mg/mL。
因此，可以称取MTT 0.5 g，溶于100 mL的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22 μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在0-0.7范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4oC避光保存两周内有效，或配制成5 mg/mL保存在-20oC长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
细胞生长检测方法细胞生长检测方法-------MTT法MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
一、基本原理：其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
二、MTT 溶液的配制方法MTT全称：3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide汉语化学名：3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐商品名：噻唑蓝，是一种黄颜色的染料。
MTT 溶液的配制方法：通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
注意：1.在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住，实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光）。
2. 配制MTT时用PBS（ph=7.4）溶解，PBS配方：Nacl 8g ＋Kcl 0.2g ＋Na2HPO4 1.44g ＋KH2PO4 0.24g调pH 7.4,定容1L。
MTT法检测细胞存活及生长【分享】MTT法检测细胞存活及生长什么是MTT?MTT全称为-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
什么是MTT法? 又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm 滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml 保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
简述mtt法能绘制细胞生长曲线的原理
MTT法（即3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）是一种常用的细胞代谢活性检测方法，常用于测定细胞增殖与毒性的活性。
MTT法的原理是通过将MTT激发后生成的水溶性产物还原成紫色的颗粒沉淀，进而通过溶解颗粒沉淀来评估细胞数量和代谢活性。
主要步骤如下：
1. 细胞接种：将待测细胞接种在含有MTT试剂的培养皿中。
2. 细胞培养：细胞在MTT试剂中进行培养，培养期间细胞会代谢活跃并增殖。
3. 溶解颗粒沉淀：经过一定时间的培养后，MTT试剂会被还原成紫色的颗粒沉淀。
将培养皿中的培养液倒掉，然后加入溶解剂（如酒精或二甲基亚硫酸钠溶液）溶解颗粒沉淀。
4. 颜色测定：溶解颗粒沉淀溶解后的溶液会变成紫色，利用酶标仪或多孔板读取器测定溶液的光密度。
MTT法通过测定光密度来间接评估细胞的增殖与活性。
细胞越多，MTT试剂被还原成颗粒沉淀就越多，溶解后的溶液光密度就越高，说明细胞数目越多，代谢活性越高。
因此，通过测定光密度的变化可以绘制细胞生长曲线，反映细胞增殖与活性的变化情况。
生物化学MTT名词解释(一)原理MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide, MTT（噻唑蓝）为基础。
MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。
还原生成的formazan结晶可以用DMSO来溶解，利用酶标仪测定570 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
(二)操作（实用于贴壁细胞）1、接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul、2、:培养细胞：同一般培养条件，培养2-3天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3、显色：分别培养不同时间，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul、继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
4、比色：选择570nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
(三)结果以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生长曲线或计算细胞生长抑制率、细胞相对增殖率等。
【注意事项】1、选择适当得细胞接种浓度。
2、避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。
在显色后尽量吸尽孔内残余培养液。
3、设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。
其他试验步骤保持一致，最后比色以空白调零。
每组设定3复孔。
4、MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。
5、酶联免疫检测仪使用前应打开电源预热半小时。
MTT法测定细胞生长曲线
1、取生长状况良好的细胞，常规消化制成单细胞悬液并计数，调整细胞成六个浓度梯度，依次为：5x103、1x104、2x104、3x104、4x104、5x104/ml，均匀接种细胞于96孔细胞培养板，每孔加细胞悬。
液200ul，每个浓度组设6个复孔,共接种7块培养板，37℃、5%C02浓度，饱和湿度培养箱中连续孵育24/48/72/96/120/148/172小时后。
2、每孔加入20ulMTT溶液(smg/m1用PBS<ph=7.4>配)，继续孵育4h后终止培养。
3、快速翻转培养板,弃去上清液,每孔加入150ulDMSO,振荡10min，使MTT蓝紫色结晶完全溶解。
4、用酶联免疫检测仪于490nm处检测各孔的吸光值(OD值)，并以未接种细胞只加培养基孔的吸光值为空白对照调零，取6孔平均值。
5、实验重复3次，以培养“时间”为横轴，“吸光值”为纵轴绘制细胞生长曲线。
悬浮细胞：MTT分析法是以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT 噻唑蓝为基础。
MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的for mazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。
还原生成的for mazan结晶可在含50%的N, N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
也可以用DMSO来溶解。
MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。
实验的时候建议关闭超净台上的日光灯来避光。
步骤如下：1:接种细胞：用含10％胎小牛血清的培养液配成单个细胞悬液，以每孔 1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul。
2:培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3: 呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS <ph=7.4>配）20ul. 继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加150ul DMSO，振荡10 分钟，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
注意事项：1、选择适当得细胞接种浓度。
2、避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。
在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。
3、设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。
其他试验步骤保持一致，最后比色以空白调零。
生长曲线和细胞生长周期的测定MTT比色法绘制生长曲线生长曲线测定一般可用细胞计数法进行，但数值不够精确，可有20%-30%的误差，需结合其他指标进行分析。
原理：MTT，商品名噻唑蓝，是一种能接受氢原子的染料的四唑盐。
活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜能溶解细胞中的蓝紫色复合物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。
步骤;1.接种：用含%10胎小牛血清的培养液配成细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2细胞培养：同一培养条件，培养3-5天3呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，ph=7.4）20ul.继续孵育4h。
终止培养，小心吸弃孔内培养基上清液，对于悬浮细胞需要分离后再吸弃孔内上清液。
每孔加150ul DMSO，脱色摇床震荡10min，使结晶充分溶解。
4.比色；选择490nm(570nm)波长，在没脸免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录时间，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
流式细胞仪测细胞生长周期：流式测细胞周期，只需在实验结束后收集细胞（细胞数量须达到2-5x105）,离心，用PBS洗三次，再转移到1.5ml的EP管内，用预冷的70百分之的酒精固定1小时，就可以送到流式细胞仪检测。
流式细胞仪细胞周期检测流程1，做前提前换液，调整细胞状态，小皿或大皿（保证细胞达到10--100万个）。
2，遇冷PBS 清洗两次3，加入胰酶（Tripsin），静止2-3分钟（消化时间不要过长，以免损伤细胞），加入2-3mlDMEM慢慢吹打细胞成单细胞悬液。
4，1000rpm 离心3min5，去上清，加入遇冷PBS 1000rpm 离心3min6，去上清，加入0.5ml PBS（预冷）悬浮细胞7，加入1.5ml无水乙醇在漩涡器上涡旋（逐滴加入）8，-20℃固定过夜（overnight）9，拿出已固定细胞，1000rpm 离心3min 去上清10，加入预冷PBS 100rpm 离心3mim11，去上清加入500ul---1000ul 预冷PBS 悬浮细胞12，加入5-10ul RNA酶37℃水浴消化30min13，过400目细胞筛注入EP管,封口膜封口。
MTT 原理、步骤、结果分析方法及注意事项一、MTT 原理MTT 全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-2)-3,5-diphenytetrazoliumromide ，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT 比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan ）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO ）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490 nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT 经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，须被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，也会对实验结果的准确性产生影响，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
二、MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5 mg/mL 。
因此，可以称取MTT 0.5 g ，溶于，溶于100 mL 的磷酸缓冲液（PBS ）或无酚红的培养基中，用0.22 μm 滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
觉得这样比较好。
觉得这样比较好。
需需要注意的是，MTT 法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7范围内。
关于选择MTT法检测睾丸支持细胞细胞数目并绘制生长曲线综述李锦阳作者简介:李锦阳,男,大学本科,学生摘要:目的：绘制睾丸支持细胞的生长曲线，确定其对数增长期准确时间范围，确定出最适宜染毒时间。
方法：MTT法大致检测活细胞数目，根据细胞数目绘制睾丸支持细胞生长曲线。
关键词:MTT 生长曲线睾丸支持细胞细胞增殖前言:20世纪60年代以来，随着组织培养技术的不断完善和细胞系（株）的不断建立，利用细胞系（或原代细胞）进行离体细胞生物测量的方法随之出现。
细胞计数是离体细胞测量培养并绘制细胞生长曲线的基础，也是细胞培养技术中一项耗费时间精力比较大的步骤。
噻唑蓝法（3-4,5diem ethylthiazol-2,5 dipheuyltetrazoliumbrom ide，M TT）是Tim Mosman（1983）首创的一种利用比色测定活细胞量的方法，由于该法灵敏准确、经济简便因而被广泛应用于生物学和医学研究中，现在许多实验采用MTT进行细胞计数，测量细胞生长曲线，大大提高了细胞计数的效率。
目前国内外研究睾丸支持细胞生长曲线的报道尚属少见，因此目前为止，无法准确获悉睾丸支持细胞的体外细胞培养的对数期。
而细胞增殖的对数期是细胞染毒的最佳时期，确定了睾丸支持细胞的增殖对数期将会大大方便今后的研究工作者。
原理：四唑盐是一种能接受氢原子的染料，简称MTT。
活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，经过换算，可间接反映细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。
方法：①配置MTT溶液：称取250mgMTT，放入小烧杯中，加50ml培养液或平衡盐溶液在电磁力搅拌机上搅拌30min，用0.22um的微孔滤器除菌，分装，4℃保存备用，两周内有效。
②接种细胞：将已经制成细胞悬液的睾丸支持细胞和其中混杂的生精细胞计数，使之达到每孔1000~10000的细胞浓度接种与96孔培养板中（每孔体积200ul），按照观察期限7天，共计分装7个板（注意每隔48小时左右换液一次，避免细胞因营养物消耗完毕影响生长，造成测定误差）③培养细胞：将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5% CO2及饱和湿度条件下培养。
MTT法MTT：化学名：3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在490nm或570nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。
MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间，超出这个范围就不是直线关系。
操作步骤：（1）单细胞悬液接种于96孔培养板；每孔培养基总量100微升（96孔培养板每孔容积370微升），37℃、5％CO2培养箱中培养一段时间（根据实验目的决定培养时间）；（2）加入5毫克／毫升（5mg/ml用PBS <pH=7.4>配）的MTT染液（10-20微升／孔）；继续培养3小时；（3）吸出孔内培养液后，加入DMSO液（100微升／孔），将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟，使结晶物溶解；（4）酶标仪检测各孔OD值（检测波长490nm）。
记录结果，绘制细胞生长曲线。
台盼蓝法活细胞不被染色，死细胞染成蓝色；用活细胞占细胞中的百分比表示细胞活力；方法：1、将细胞悬液以0.5ml加入试管中；2、加入0.5ml 0.4%台盼兰染液，染色2一3分钟；3、吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片；4、镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数，计细胞活力；死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。
活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。
MTT实验原理和实验步骤MTT原理：MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromid e，是一种黄颜色的染料。
活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细胞色素C的作用下，生成蓝色（或蓝紫色）不溶于水的甲�H（Formazan），甲�H的多少可以用酶标仪在570nm 处进行测定。
在通常情况下，甲�H生成量与活细胞数成正比，因此可根据光密度OD值推测出活细胞的数目。
由于死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，因此加入MTT 不会有反应。
MTT 溶液的配制方法：通常，此法中的 MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
实验步骤：（1）接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－1 0000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.（2）培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
（3）呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS <ph=7.4>配)20ul.（4）继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
（5）比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
注意事项：（1）选择适当得细胞接种浓度。
（2）避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。
MTT原理、操作方法步骤与注意事项目录MTT原理 (1)简介 (1)MTT 溶液的配制方法 (2)普通MTT法实验步骤： (2)药物MTT法实验步骤 (2)注意事项： (3)简介MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm 波长处（也有用570nm波长的，我目前用的都是570nm)测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
细胞生长检测方法-------MTT法MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
一、基本原理：其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
二、MTT 溶液的配制方法MTT全称：3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide汉语化学名：3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐商品名：噻唑蓝，是一种黄颜色的染料。
MTT 溶液的配制方法：通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
注意：1.在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住，实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光）。
2. 配制MTT时用PBS（ph=7.4）溶解，PBS配方：Nacl 8g ＋Kcl 0.2g ＋Na2HPO4 1.44g ＋KH2PO4 0.24g调pH 7.4,定容1L。
细胞的增殖检测（MTT法）MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法，该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济，但由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测，这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
一、检测原理MTT全称为3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐（商品名：噻唑蓝），是一种黄颜色的染料。
活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值（也有用570nm波长)，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
二、试剂材料准备与实验仪器1、对数生长期细胞2、受试因素（药物）3、5mg.mL-1MTT溶液：称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中（60℃水浴助溶），用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可，在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
（PBS配方：NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4 1.44g，KH2PO4 0.24g，调pH 7.4 ，定容1L）4、DMSO（二甲基亚砜）5、96孔板6、酶联免疫检测仪7、细胞培养箱三、MTT法实验步骤（一）普通MTT法实验步骤1、接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2、培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
MTT实验
实验材料：
1，5%FBS-L-DMEM, 5x104个/ml细胞悬液，5mg/mlMTT溶液，DMSO,0.01M PBS, 2, 96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管，1.5ml离心管，0.22μm滤膜，锡箔纸，MTT 工作液（1ml/管）
实验步骤：
1，分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液，调整细胞密度为5x104/ml。
接种到96孔板，每孔接种200μl细胞悬液进行培养（每孔1x104
细胞）。
2，培养16-48后，每天选择6个培养孔各自加入MTT溶液（5mg/ml）20μl，37℃继续孵育。
3，孵育4h后终止培养，吸出孔内上清，此时应该倾斜96孔板，用枪头小心的将上清液吸去，不可吸去下面的结晶颗粒，慢慢吸去。
每孔加入150μlDMSO,室温振
荡10min，使结晶充分溶解，于试验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照1
孔。
注意事项：
【1】1, 两种方法分离小型猪骨髓间充质干细胞的比较
分别取两组0,1,3代细胞，制成1x103的细胞悬液，接种到96孔板，每孔细胞悬液200微升，置37℃、5%CO2饱和湿度孵箱内孵育，各组每24小时分别取出4孔，每孔加入MTT（2mg/ml）20微升37℃孵育，4h后吸弃孔内培养液，每孔加入150微升分析纯的二甲基亚砜，移至酶联免疫检测仪上振荡10min,用分光光度计在492nm波长处测定每孔的吸光度值（OD492），以OD(492)值为纵坐标，时间为横坐标绘制生长曲线
【2】来自：SD大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养的实验研究
大鼠MSCs生长曲线测定：为了定量测定大鼠BMSCs的生长状况，对来源于同一动物的原代细胞进行连续培养。
分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液，调整细胞密度为5x104/ml。
接种到96孔板，每孔接种200μl细胞悬液进行培养（每孔1x104细胞）。
次日起每天选择6个培养孔各自加入MTT溶液（5mg/ml）20μl，37℃继续孵育4h后终止培养，吸出孔内上清，每孔加入150μlDMSO,室温振荡10min，使结晶充分溶解，于试验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照1孔。
在酶标仪上选择570nm波长，以空白孔调零，测定各孔吸光度（A）值，连续测7天，以时间为横轴，A值为纵轴绘制细胞生长曲线。
来自：2003人骨髓间充质干细胞的分离培养及部分生物学特性的实验研究
来自：2007贴壁法培养大鼠的骨髓间充质干细胞
来自：大鼠骨髓间充质干细胞移植促进皮肤创伤愈合的研究
(3)接种细胞时，尽量混匀后再接种，尽量保持每孔细胞数接近
（4）为防止96孔板的边缘效应，最好在实验组留出一空孔，内加平衡盐溶液，或者培养液以维持适当湿度，减少实验误差。
（5）加入MTT时每孔加入量很少，通常是10-15微升，不宜准确定量，可以事先算好要加入的培养液总量，以及所需MTT量，混匀后再加入培养孔内。
（6）加入MTT时，建议熄灭酒精灯，配置好的MTT应避光冷藏，一周内用完，最好在加入MTT前换一次液。
（7）在进行检测期间需要换液，换液时最好不用PBS洗，这样会损失紫色结晶，可以将96孔板拿掉铺几张滤纸在其上，小心将板翻过来，孔中液体会流出来，且不会损失，肉眼可见的结晶，加入MTT溶解液后，上下吸收可以完全溶解甲簪。
（8）为了防止板来回移动对细胞的影响，因此，把需要测得的孔，做完所有操作后吸出来，放在一个外面用的酶标板里，然后上机检测。
(9)MTT对菌很敏感，所以整个过程都要无菌。
保存在-20℃，防止反复冻融，保存到4℃最多一周。
一旦变为绿色应禁止使用。
（10）加入DMSO前需要去掉原培养液，但是去掉原培养液就怕会丢失结晶，因此。
