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主垦!堕压塞旦堕堂!!!!至!旦箜!鲞箜i塑曼!i些鱼!垫里翌!丛型!塑!坦!!!：!!!：!：盟!：!O～5岁正常健康儿童血浆氨基酸水平测定及临床意义姚梦霖陈耀勇刘丽赵小媛程静李秀珍周伟石国光曾其毅【摘要】目的观察正常健康儿童各年龄组血浆游离氨基酸变化规律，建立儿童正常参考值，为氨基酸代谢相关性疾病的诊治提供依据。
方法应用反相高效液相(R T—H PLC)柱前衍生法对246例5岁以下正常健康儿童进行血浆游离氨基酸水平检测。
结果新生儿组血浆游离氨基酸水平与1个月以上年龄组儿童差异有统计学意义(P<0．05)；6个月龄后血浆游离氨基酸水平趋于稳定(P>0．05)；大部分血浆游离氨基酸水平不存在性别差异(P>0．05)；与15年前国内资料比较半数左右血浆氨基酸有统计学差异。
结论血浆氨基酸与年龄具有一定的关系，与性别可能无关。
【关键词】血浆氨基酸；儿童Pl as m a am i no a ci ds i n nor m al ch i l d r e n under5yea r s ol d Y A O M eng—f i n，C H E N Y ao—yon g，LI U Li，e t a1．C hi l dr en’H ospi t al of G u a ng z ho u，G u a ng z ho u510000，C hi na【A bst r act】O bj ec t i ve To t est pl a sm a a m i no aci ds i n nor m a l chi l dr en un de r5year s ol d f or pr ovi d i ng nor m al val u es a nd he l p i ng di a gnosi s a nd t r e at m e nt of a m i n o aci d m e t abol i sm cor r el at ed di se a se．M et hods T he l evel s of pl as m a a m i n o aci d of di f f er ent age s a nd se x e s246hea l t hy chi l d r en w er e det ect ed by r ev er sed—phase hi gh—per f or m ance l i qui d chr om at ogr aphy(R T-H P LC)．R es ul t s The r e w as t r a ns par e nt di f f er ence of pl as m a f ree a m i no aci d s con cent r at i on bet w ee n ne onat e a nd1-6m ont hs chi l dr en(P<0．05)，and t he pl a sm a a m i no aci d sco ncen t r a t i on di f f er ence w as s i gni f i cant bet w e en chi l dr en bei ngyo un ge ra nd ol de r t ha n6m ont h s(P<0．05)．T he a m i no aci d s l ev el s w e r e not co nsi de r ab l y di f fer ent am ong t he chi l dr en w h o w er e ol der t h an6m ont hs．M os t pl a sm a a m i no aci d s l ev el s w e r e not s i gnif i cant l y di f f er ent bet w ee n di f f er ent sex es．A bou t on e hal f pl a sm a a m i no aci ds con cent r at i on w er e s i gni f i cant l y di f f er ent bet w ee n ou r dat a and i nt er nal da t a15year s ago(P<0．05)．C o nc l us i o n T he pl a sm a a m i no aci ds con cent r at i on i s r el at e d t oag eand pr oba bl y i s not r el at e d t o gend er．【K ey w or ds】Pl a sm a f ree a m i no ac i d；Chi l dr e n血浆氨基酸是氨基酸在各组织间转运和代谢的主要形式，氨基酸的变化不仅反映体内蛋白质的代谢状态，也反映氨基酸自身代谢情况，测定血浆氨基酸水平对于判断体内蛋白质代谢及氨基酸代谢状况具有重要的意义。
氨基酸含量的测定标准曲线绘制准确吸取200ug/ml的氨基酸标准溶液0.0，0.6，0.8，1.0,1.2，1.5，2.0 ml，分别置于25ml容量瓶或比色管中，各加水补充至溶剂为4.0ml，然后加入茚三酮和磷酸缓冲溶液各1ml，混合均匀，于水浴上加热15min，取出迅速冷至室温，再摇匀，加水至标线25ml，摇匀。
静置15min后，在570nm波长下，以试剂空白为参比液夨订其余各溶液的吸光度A。
以氨基酸的微克数为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。
样品的测定：吸取澄清的样品溶液1.5ml，平行三次，按标准曲线制作步骤，在相同条件下测定吸光度A 值，用测得的A值在标准曲线上即可查得氨基酸的微克数。
公式：氨基酸总量（ug/100g）=(c/m*1000)*100式中c是指从标准曲线上查得的氨基酸的ug数；M是指测定的样品溶液相当于样品的质量g；PH计酸度计测量ph的方法：(1)拿下笔帽(2)按on/off键，机器显示运作(3)将ph计放入待测液中(4)轻轻晃动ph计，保证内气泡逸出，使之于溶液充分接触，勿碰撞杯壁(5)ph计会立即显示数值，将笔置入待测液待数值稳定，30秒内将显示正确数值，(特：ph计数值上下浮动或不稳定是正常现象)(6)按hold键锁定数值，可在待测溶液外记录读取，继续按hold键解除锁定(7)按on/off键关闭ph计(8)轻甩PH计测试笔上多于的水，用蒸馏水或脱离子水冲洗，盖上笔帽测量温度方法在测试模式下，温度数值与ph数值同步显示在液晶面板上，但在校准模式下不显示，数值默认为摄氏温度。
（一）挥发性盐基氮（TVB-N）的测定半微量定氮法（1）原理：蛋白质在酶和细菌的作用下分解后产生碱性含氮物质，有氨、伯胺、仲胺等，此类物质具有挥发性，可在碱性溶液中被蒸馏出来，用标准酸滴定，计算含量。
（2）试剂①氧化镁混悬液(10g/L) 称取1.0g氧化镁，加100ml水，振摇成混悬液。
氨基酸的分析方法
氨基酸的分析方法主要有以下几种：
1. 比色法：利用氨基酸中的吸收光谱特性进行定量分析。
对于有色氨基酸，可以直接用此方法进行分析，如色氨酸、酪氨酸等。
对于无色氨基酸，需事先进行衍生化反应，如二羧基二氨基联苯胺(DTNB)法，测定半胱氨酸含量。
2. 氨基酸自动分析仪：常用的分析方法是自动氨基酸分析仪，其原理是利用离子交换色谱技术对氨基酸进行分离和检测。
该方法操作简便，自动化程度高，可同时分析多种氨基酸，用于生化实验和质量检测。
3. 氨基酸序列测定法：利用氨基酸测定仪测定氨基酸的相对分子质量，进而测定氨基酸的分子序列，通常用于蛋白质结构分析和生物活性研究。
4. 纸层析法：利用氨基酸的亲水性和疏水性差异进行分离，通常用于初步鉴定氨基酸的含量和组成。
该方法简便易行，但准确性较低，仅可作为定性或半定量分析方法。
5. 高效液相色谱法：利用高效液相色谱技术对氨基酸进行分离和检测。
该方法灵敏度高、重复性好、分辨率高，可用于生化分析和质量检测。
简述血液中氨基酸含量的测定方法摘要：氨基酸是组成蛋白质的基本物质，当人体出现病理性改变，血液中的氨基酸含量也会随之变化，因此具有一定的诊断价值。
本文综合现有研究报道，阐述了毛细管电泳法、色谱法、仪器法在血液中氨基酸含量测定中的应用，以供同业人员参考。
关键词：血液；氨基酸；理化性质；测定方法血液中的氨基酸，主要来源于三个途径：一是蛋白质消化吸收形成，二是体内组织蛋白降解产生，三是机体合成的非必须氨基酸。
在人体代谢过程中，氨基酸能合成组织蛋白质，变为含氨物质、碳水化合物和脂肪，氧化后为机体提供能量[1]。
从目前研究看，血液中的氨基酸种类较多，且处于稳定状态，测定其含量有助于对疾病进行早期诊断，为后续治疗干预提供数据支持。
1．毛细管电泳法测定血液中的氨基酸含量毛细管电泳，是用具有弹性的毛细管作为分离通道，在高压直流电场的驱动下促使液相分离，优点在于速度快、效率高，在氨基酸检测中应用广泛。
另外，该方法的缺点在于进样量少，因此制备能力差；毛细管的直径小，导致灵敏度较低；而且电渗会影响分离重现性。
为了弥补这些缺点，有学者提出毛细管电泳-质谱联用法，仅需要较少的血液样本，就能对蛋氨酸、谷氨酸、高半胱氨酸、半胱氨酸进行定量检测，不仅检测结果准确，而且重现性较好[2]。
2．色谱法测定血液中的氨基酸含量2.1 气相色谱法气相色谱法使用气体作为流动相，样品组分在固定相和流动相之间，能瞬间达到平衡状态，具有分离效率高、分析速度快的优点。
该方法测定血液中的氨基酸，要将其转变为易气化的衍生物。
国外学者研究称，对血样中的氨基酸先使用甲醇溶液酯化，再加入酸酐酰胺化，最后采用气相色谱法进行测定，其灵敏度高、分离时间短[3]。
但是，由于前处理步骤复杂，且衍生物的干扰因素多，因此实际工作中并不多见。
2.2 高效液相色谱法高效液相色谱法是对液相色谱法的改进，用液体作为流动相，在高压系统作用下流动相进入色谱柱，分离后完成检测，具有高效、高速、高灵敏度的特点。
一、实验目的1. 了解氨基酸的基本性质和分类。
2. 掌握氨基酸的测定方法，包括茚三酮比色法和纸层析法。
3. 通过实验，学会运用化学分析方法测定氨基酸的含量。
二、实验原理氨基酸是构成蛋白质的基本单位，具有酸碱两性。
在酸性条件下，氨基酸可以与茚三酮反应生成紫色产物，通过比色法测定氨基酸含量。
纸层析法是一种分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，通过分析氨基酸在层析纸上的迁移距离，可以判断氨基酸的种类。
三、实验材料与仪器1. 试剂：茚三酮、氨基酸标准品、盐酸、无水乙醇等。
2. 仪器：分光光度计、电子天平、移液器、层析缸、层析滤纸等。
四、实验步骤1. 茚三酮比色法测定氨基酸含量（1）配制标准溶液：准确称取一定量的氨基酸标准品，用无水乙醇溶解，配制成一定浓度的标准溶液。
（2）样品处理：准确称取一定量的待测样品，用盐酸溶解，配制成一定浓度的样品溶液。
（3）反应：将标准溶液和样品溶液分别加入反应管中，加入等量的茚三酮，置于沸水浴中加热5分钟。
（4）比色：用分光光度计在570nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
（5）计算：根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查得氨基酸含量。
2. 纸层析法分离氨基酸（1）点样：将标准氨基酸和待测样品分别点在层析滤纸的原点处。
（2）层析：将点样的滤纸放入层析缸中，加入适量层析溶剂，使溶剂前沿距离滤纸底部约2cm。
（3）观察：待溶剂前沿到达滤纸底部后，取出滤纸，晾干，观察氨基酸在滤纸上的迁移距离。
（4）分析：根据氨基酸在滤纸上的迁移距离，判断氨基酸的种类。
五、实验结果与分析1. 茚三酮比色法测定氨基酸含量通过实验，得到了标准曲线，根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查得氨基酸含量。
2. 纸层析法分离氨基酸通过实验，得到了标准氨基酸和待测样品在层析滤纸上的迁移距离，分析了氨基酸的种类。
六、实验总结1. 本实验成功掌握了氨基酸的测定方法，包括茚三酮比色法和纸层析法。
2. 通过实验，加深了对氨基酸性质和分类的认识。
样本溶血对血浆中16种氨基酸测定准确性的探究作者：陈逢斌任莹赵胜军来源：《湖北畜牧兽医》2019年第02期摘要：为探究样本溶血对国标酸解法测定血浆中16种氨基酸含量的影响，采集60份断奶仔猪颈动脉血液并分为3组，即普通溶血组、机械溶血组与对照组，普通溶血组为血液采集后溶血样本，机械溶血组为血液采集后经超声波处理溶血再离心样本，未溶血血浆为对照组。
采用赛卡姆S433D全自动氨基酸分析仪检测血浆样本中天冬氨酸（Asp）、苏氨酸（Thr）、丝氨酸（Ser）、谷氨酸（Glu）、甘氨酸（Gly）、丙氨酸（Ala）、缬氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、酪氨酸（Tyr）、苯丙氨酸（Phe）、脯氨酸（Pro）、赖氨酸（Lys）、组氨酸（His）、精氨酸（Arg）的含量。
结果表明，普通溶血组Asp、Ala、Val、Leu、His、Lys含量相较于其余两组显著升高（P0.05）。
说明血样溶血对其氨基酸含量存在较大影响，且受非血红蛋白因素影响较小，为了尽可能避免或减少溶血的发生，建议采血操作以及样品的运送、分离检测严格规范，以提高测定的准确性。
关键词：血浆；溶血；氨基酸；准确性中图分类号：R446.1 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2019）02-0005-03血液样本溶血会直接导致生化指标检测出现偏差，从而引发测定误差以及其他问题[1]。
近年来，在医疗领域中血液氨基酸指标可用于筛查苯丙酮尿症、先天性甲状腺功能低下等疾病[2]，科研中作为血液标记物辅助诊断中枢神经系统肿瘤以及胃癌[3，4]，并可用于评估动物肠道健康以及营养物质代谢水平[5，6]。
血液的特殊性致使测试血浆样本弥足珍贵，而在实际操作中却因溶血问题导致样本被弃用或者测定值不可用，给医疗和科研带来巨大损失。
因此，探究血液样本溶血对其氨基酸含量的影响并加以分析能够使筛查或者评估更加精准。
吴小平[7]对溶血导致临床生化检验结果偏差进行了研究，表明溶血对血液中葡萄糖、天冬氨酸转氨酶、谷丙转氨酶、尿酸等有显著影响。
食品营养学填空题10个空，10分（全部来自习题册）；选择题20个，20分（全部来自习题册）；名词解释5个，10分；问答题5个，30分；综合应用题1个，30分。
一、名词解释1、营养不良：指由于一种或一种以上营养素的缺乏或过剩所造成的机体健康异常或疾病状态。
2、必需氨基酸：在人体内不能自身合成或合成速度远不能满足机体的需要，必须从食物中获得。
3、抗生酮作用：当碳水化合物不足时，脂肪酸不能被彻底氧化分解而产生过多酮体，会产生酮症酸中毒；当碳水化合物充足时，可防止酮症酸中毒的发生，这种作用称为抗生酮作用。
4、碱性食品：：指含钾、钠、钙、镁等矿物质较多的食物，在体内的最终代谢产物常呈碱性，包括蔬菜、水果、豆类、牛奶及硬果中的杏仁、栗子等。
5、血糖生成指数：某种食物升高血糖效应与标准食品（通常为葡萄糖）升高血糖效应之比。
GI值越高，说明这种食物升高血糖的效应越强。
6、必需脂肪酸：是指人体不可缺少而又不能自身合成，必须通过食物供给的脂肪酸。
7、限制氨基酸：食物蛋白质中一种或几种必需氨基酸相对含量较低或缺乏，导致其它的必需氨基酸在体内不能被充分利用，造成其蛋白质营养价值降低，这些含量相对较低的必需氨基酸称限制氨基酸。
8、营养价值：指食品中所含热能和营养素能够满足人体需要的程度。
包括营养素是否种类齐全，数量是否充足和相互比例是否适宜，并且是否被人体消化、吸收和利用。
9、营养质量指数：即营养素密度（待测食品中某营养素占供给量的比）与热能密度（待测食品所含热能占供给量的比）之比，作为评价食品营养价值的指标。
10、酸性食品：指含硫、磷、氯等矿物质较多的食物，在体内的最终代谢产物常呈酸性，包括肉、鱼、蛋、禽类、谷类及硬果中的花生、榛子、核桃等11、DRIs ：是在RDAs基础上发展起来的一组每日平均膳食营养素摄入量的参考值，其中包括4项内容：平均需要量（EAR），推荐摄入量（RNI），适宜摄入量（AI），可耐受最高摄入量（UL）。
绪论一、名词解释1、营养2、营养素3、营养价值4、营养不良5、膳食与营养状况变迁二、选择题1、以下()是我国自古就有的均衡营养观念。
A五谷为助、五果为养、五畜为益、五菜为充B五谷为养、五果为助五畜为益、五菜为充C五谷为养、五果为益、五畜为助、五菜为充D五谷为益、五果为养、五畜为充、五菜为助2、葛洪《肘后方》提出“以海藻酒治疗甲状腺肿”，是因为海藻中()作用。
A硒B铁C锌D碘3、陶弘景《本草经集注》中提出“以肝明目”，是因为肝中()的作用。
A维生素BB维生素CC维生素AD维生素K4、世界卫生组织建议每人每天食盐用量为()。
A3克B6克C9克D12克5、我国第一部食疗专著是()。
A《神农本草经》B《食疗本草》C《饮膳正要》D《千金要方》6、我国第一部营养学专著是()。
A《神农本草经》B《食疗本草》C《饮膳正要》D《千金要方》三、填1、营养素根据人体需要量可分为（）和（）。
2、美国提出了膳食和营养状况变迁的阶段，分别是（）、（）和（）三个阶段。
目前我国的膳食和营养状况正处在（）时期。
3、营养不良指由于一种或一种以上营养素的（）或（）所造成的机体健康异常或疾病状态。
4、目前在我国人民的饮食生活中存在着两个不平衡：一个是（营养缺乏和营养过剩同时存在）；另一个是（不同营养素摄入的不平衡）。
四简答1、现代营养学研究可分为哪两个阶段？2、食品营养学有哪些新的研究进展？3、目前我国的膳食与营养状况变迁的主要表现有哪些？4、我国居民目前的营养状况存在的问题及其应对的措施？第一章食物的消化与吸收一、名词解释1、消化2、吸收3、被动转运4、主动转运5、胞饮作用二、选择题1、营养物质消化和吸收的主要场所是（）。
A.小肠B.肝C.胃D.大肠2、胃液的P H值大概为（）。
A.3-4B.4-5C.2-33、下列不属于小肠消化液的是（）。
A.胰液B.胆汁C.胃酸4、唾液对（）具有简单的消化作用。
A.蛋白质B.淀粉C.矿物质5、胃酸是由（）构成的。
