香菇多糖的提取纯化及其理化性质的研究_张欣

香菇多糖的研究报告摘要利用果胶酶、纤维素酶和漆酶对香菇进行酶解，固定料水比( 1∶15) 和反应温度( 40℃) ，以酶解后多糖提取率为指标，考察不同浓度的3 种酶对香菇多糖提取的影响。

在单因素试验的基础上，采用响应面法建立香菇多糖酶法提取的二次多项数学模型，并验证了该模型的有效性; 探讨了果胶酶、纤维素酶、漆酶3 个因子的交互作用及其最佳水平。

响应面分析结果表明: 果胶酶、纤维素酶、漆酶显著影响香菇多糖的提取效果，在果胶酶浓度为7.11%，纤维素酶浓度为6.82%，漆酶浓度为3.69%的优化条件下，香菇多糖的提取率达到37.07%。

关键词:香菇多糖，果胶酶，纤维素酶，漆酶，响应面2.前言糖类的研究已有百余年的历史, 近20 多年来, 随着膜的化学功能, 免疫物质的化学研究的进展以及探寻新药物资源的不断拓展和研究的深入, 发现糖类在生物体中的作用不仅是作为能量资源或结构材料, 更重要的是还参与了生命现象中细胞的各种活动, 具有多种多样的生物学功能。

多糖一般由十个分子以上的单糖通过糖苷键连接而成的高分子多聚物。

多糖按来源大致可分为植物多糖、动物多糖、海藻多糖、微生物多糖即细菌多糖和真菌多糖等。

其中, 具有很强生物活性的真菌多糖的研究日益受到重视, 真菌多糖从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离, 是一类可以控制细胞分裂分化、调节细胞生长和衰老的活性多糖。

真菌多糖作为药物研究始于20 世纪50 年代, 在60 年代以后成为免疫促进剂受到广泛关注, 其中香菇多糖( lent inan, LNT) 是研究得较透彻的多糖之一。

香菇[ Lentinus edodes ( Berk. ) Sing] 为担子菌纲伞形科真菌, 是世界名贵食用菌兼药用菌之一。

1968 年日本千原吴郎首先利用热水从香菇子实体中浸提出6 种胞外多糖, 1970 年Chihard和Sasaki 用热水浸提结合有机溶剂沉淀从香菇中提取到另外4 种多糖, 20 世纪80 年代以来, LNT的研究受到广泛的重视, 取得了一系列进展[ 1] 。

香菇多糖的提取及活性研究进展发表时间：2015-10-28T14:17:02.153Z 来源：《健康世界》2015年3期作者：张玲芝1 姜猛1 丁侃2*[导读] 1.赛珂睿德生物医药科技（上海）有限公司上海 201203； 2.中国科学院上海药物研究所糖化学与糖生物学实验室上海 200031 在保健食品和药品研发方面具有很好的应用前景。

本文综述了香菇多糖的化学结构、分离纯化以及生理活性和作用机制等方面的研究概况。

1.赛珂睿德生物医药科技（上海）有限公司上海 201203；2.中国科学院上海药物研究所糖化学与糖生物学实验室上海 200031摘要：香菇多糖是从香菇中分离纯化的一种主链以β-（1→3）-葡聚糖为主、侧链为β-（1→ 6）-连接的葡聚糖，是以增强T细胞和巨噬细胞功能为主的免疫增强剂，具有通过免疫激活功能发挥抗肿瘤活性等重要的生物活性，疗效好、毒副作用小，在保健食品和药品研发方面具有很好的应用前景。

本文综述了香菇多糖的化学结构、分离纯化以及生理活性和作用机制等方面的研究概况。

关键词：香菇多糖；化学结构；提取；纯化；生物活性多糖来源于高等植物、微生物（细菌和真菌）、地衣和海藻等，是自然界中含量最丰富的生物聚合物，具有能量储存、结构支持、防御功能和抗原决定性等多方面的生物功能[1]。

真菌多糖作为药物研究始于20世纪50年代，在60年代以后成为免疫促进剂受到广泛关注，香菇多糖（1entinan，LNT）是研究得较透彻的多糖之一[2]。

香菇[Lentinus edodes（Berk.）Sing]为担子菌纲伞形科真菌，是世界名贵食用菌兼药用菌之一，素有“蘑菇皇后”之称。

1968年日本千原吴郎首先利用热水从香菇子实体中浸提出6种胞外多糖；1970年Chihard和Sasaki等人证明从香菇中提取出的香菇多糖（一种β-（1→3）-D葡聚糖，LNT），并发现它具有明显的抗肿瘤活性[3，4]。

自此，香菇葡聚糖广受关注，许多研究者[5-7]发现香菇葡聚糖通过刺激人体免疫细胞（如T细胞，巨噬细胞等），对多种肿瘤细胞具有自然杀伤能力。

香菇多糖的提取实验报告1. 掌握香菇多糖的提取方法；2. 了解香菇多糖的物化性质；3. 研究香菇多糖的抗氧化活性。

实验原理：香菇多糖是一种高分子多糖，具有多种保健功效，如抗氧化、抗肿瘤、促免疫等。

香菇多糖的提取方法有多种，其中较为常用的是热水浸提法和酸碱法。

热水浸提法是指将香菇粉末加到一定的温度下的水中，随后进行浸提，加热时间和浸提时间是影响提取率和质量的关键因素。

酸碱法是指将香菇粉末加入一定比例的酸和碱溶液中，进行水解，随后用酒精沉淀，最后用稀酸或碱溶解，并用冷醇进行沉淀和洗涤，得到香菇多糖。

实验材料：香菇粉末、蒸馏水、NaOH、HCl、酒精、醋酸钠、DPPH、卡拉菲指示剂。

实验步骤：实验一：热水浸提法提取香菇多糖1. 取4g香菇粉末，加入200mL蒸馏水中，加热至80℃，并保持2h；2. 将提取液用纱布过滤，分别收集滤液；3. 将滤液浓缩至大约50mL，用三倍体积的酒精沉淀，过滤并收集沉淀；4. 重复上述步骤2和步骤3，直至香菇多糖的浓度达到所需浓度为止。

实验二：酸碱法提取香菇多糖1. 取4g香菇粉末，加入100mL0.1mol/L NaOH中，进行水解，保持100℃，2h；2. 加入等量的0.1mol/L HCl至酸度为2，用酒精沉淀；3. 用10%醋酸钠溶液洗涤沉淀，并用稀棕黑色指示剂观察，直至洗涤液呈现淡黄色；4. 用酒精洗涤沉淀，分别重复上述步骤2-3，将洗涤干燥的沉淀溶解后，混合，加热水浴，调节pH至7左右，沉淀多糖，洗涤，干燥得到香菇多糖。

实验三：测定香菇多糖的抗氧化活性1. 取一定量的DPPH溶液（30mg/L），加入1mL香菇多糖液体，反应30min；2. 测定吸收值，计算香菇多糖的抗氧化活性。

实验结果：通过实验一和实验二分别提取了香菇多糖，得出了两种不同的提取方法的多糖成品。

经过实验三，测得香菇多糖的抗氧化活性，根据吸收值的大小可以判断多糖的抗氧化强弱。

实验结论：热水浸提法和酸碱法提取香菇多糖都是有效的提取方法。

香菇多糖的分离纯化（水提醇沉法）香菇多糖的提取、纯化（水提醇沉法）一、实验目的了解并掌握水提醇沉法提取香菇多糖的原理和方法。

二、实验原理提取香菇多糖的方法有：水提醇沉法（热水浸提法）、碱浸提法和酶解法。

水提醇沉法是最常见的方法。

香菇多糖溶于水。

热水浸提时，香菇的组织细胞破裂，多糖成分浸出，再用乙醇沉淀香菇多糖。

料液比、温度、时间、PH值、乙醇浓度、提取次数都是影响提取效果的重要因素。

最佳提取条件为：料液比1:40（30~40倍均可），提取温度为80~95℃，提取时间2h，提取时的乙醇浓度为75%，PH 值6.0~8.0，提取次数为2次。

三、材料和仪器材料：香菇（取子实体）、蒸馏水、无水乙醇、Sevage试剂、（Sevage试剂配制：取三氯甲烷和正丁醇，按照5﹕1进行混合，放置在棕色瓶中备用。

）仪器：分析天平、高速离心机、离心试管、冷冻干燥机、磁力搅拌器、恒温水浴锅、烧杯等。

四、实验步骤1、提取：将干燥的香菇子实体粉碎后，加入30倍的蒸馏水，用沸水提取2h，过滤，滤渣再按第一次提取工艺提取1次，将上清液合并后于80℃下浓缩。

在冷却后的浓缩液中加入一定量95%的乙醇，使乙醇的浓度为75%，室温下放置过夜，离心，将收集到的沉淀用真空冷冻干燥机冻干，放到后4℃冰箱中保存、备用。

2、sevage法除蛋白：称取得到的样品10g（含水率9.7%）充分溶解于100mL蒸馏水中。

加入一定体积的Sevage试剂，用磁力搅拌器剧烈搅拌20 min 左右，离心，分离粗多糖中蛋白质杂质。

重复2次。

3、乙醇沉淀：往除过蛋白的多糖溶液（上清液）中缓慢加入95%的乙醇，至乙醇体积占溶液总体积的75%，边加边搅拌，使多糖均匀沉淀。

放在4℃冰箱中6h，6000r/min 离心10min，弃去上清液，将沉淀在溶解于蒸馏水中，重复以上过程3次，将最后得到的溶液放在-40℃的冷冻干燥机中冻干，制得香菇粗多糖。

五、含量测定（苯酚-硫酸法）1、标准曲线的绘制精确称取100 mg 葡萄糖，溶解定容于100 mL容量瓶中，得含1 mg/mL葡萄糖的对照品储备溶液，备用。

香菇多糖提取工艺和含量测定方法研究白玉静, 佟丽华( 佳木斯大学化与药学院, 黑龙江佳木斯154007)关键词: 香菇多糖; 提取工艺; 测定方法中图分类号: Q 949. 329+. 89 文献标识码: A 文章编号: 1008- 0104 (2006) 01- 0055- 02食用真菌是人类在长期的实践活动中认识得最早、但并未得到充分利用的一类微生物。

因其具有种类繁多、分布广泛 1 、营养成分丰富、药用保健价值高 2 等优点, 目前已成为国内外学者研究的热点。

有些食用菌中具有能抗癌和增强癌症患者抵抗力的生理活性物质, 称为食用菌多糖, 食用菌多糖的生理功能、化学结构以及构效关系正成为多糖研究的前沿阵地, 取得了很大进展, 其中香菇多糖是研究的比较多的一类食用菌多糖。

香菇多糖是香菇中的主要活性成分。

香菇[L en t i n u s edo de s (B e rk ) S o n g ]为担子菌亚门, 担子菌纲, 伞菌目, 口蘑科, 香菇属真菌, 因其口味鲜美, 香味浓郁, 营养丰富, 有显著的药用及滋补作用而被誉为“蘑菇皇后”、“抗癌新兵”、“菌中之秀”3 、“诸菌之冠蔬菜之魁”, 它的学名很多, 有香蕈、冬菇、花菇、香草、香信等。

常食香菇有降低胆固醇、防止血管硬化、增强人体免疫功能和防治癌症的作用4 。

香菇多糖(L en t in an, LN T ) 是一种天然人体免疫调节剂, 具有抗肿瘤、抗感染和调节免疫力等作用。

由于香菇多糖的特殊活性作用, 因此, 建立高效、经济的香菇多糖的提取方法以及含量测定方法具有重要的现实意义。

现对香菇多糖的提取工艺和含量测定方法进行综述。

1 香菇多糖的提取工艺香菇多糖是一种以Β- D 1 →3 葡聚糖残基为主链, 侧链为(1→6) 葡聚糖残基的葡聚糖5 。

传统香菇多糖的提取方法有水提醇沉法、稀碱浸提法、稀酸浸提法和酶法等, 随着对香菇研究的不断深入, 又出现超滤法、微波辅助浸提法以及超声波法等。