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附件2人感染高致病性禽流感标本采集及实验室检测技术方案为及时、科学地采集和运送人禽流感病例或疑似污染环境等各种类型的标本，规范实验室检测程序和检测方法，提高检测质量，明确诊断或开展相关科学研究，特制定本方案。
1 采集对象1.1 人禽流感医学观察病例、疑似病例、临床诊断病例及需要进一步研究的确诊病例。
1.2 其它需要进行人禽流感诊断或排除者。
1.3 需要采集的环境标本。
2 采集要求2.1 从事人禽流感检测标本采集的技术人员必须经过生物安全培训和具备相应的实验技能。
在标本采集过程中，采样人员参照（附件5）规定的防护措施进行安全防护。
2.2 住院病例的标本由所在医院医护人员在当地疾病预防控制机构专业人员指导下采集。
2.3 标本采集具体种类和数量由现场工作组确定。
2.4 密切接触者标本由当地疾病预防控制机构负责采集。
2.5 根据实验室检测工作的需要，结合病程再次采样。
3 标本种类每个病例应尽可能同时采集上、下呼吸道标本；需要排除人禽流感的死亡病例则依据《传染病病人或疑似传染病病人尸体解剖查验规定》（中华人民共和国卫生部令第43号）的规定采集尸体标本，没有条件进行尸体解剖的，可采集呼吸道灌洗液或经皮穿刺采集肺组织标本。
3.1 上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液。
最佳采集时间为发病后3天内。
3.2 下呼吸道标本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺组织活检标本。
3.3 尸检标本：病人死亡后应依法尽早进行解剖，在严格按照生物安全防护的条件下，进行尸检，主要采集肺、气管组织标本，条件允许下也可采集肝、肾、脾、心脏、脑、淋巴结等组织标本。
3.4 血清标本：每一病例必须采集血清标本，须采集急性期、恢复期双份血清。
第一份血清应尽早（最好在发病后7天内）采集，第二份血清应在发病后1第3～4周采集。
采集量要求5ml，以空腹血为佳，建议使用真空采血管。
3.5 其它标本：如果病例有腹泻症状，可在发病后采集粪便标本；有胸水者可采集胸水标本。
附件医院人感染禽流感病毒核酸检测标准操作程序一、目的确保人感染禽流感病毒核酸检测过程标准化、规范化，降低人为不规范操作对检测结果造成的影响，保证结果的准确性和可重复性。
二、适用范围医疗机构临床基因扩增检验实验室按照《关于医院开展人感染禽流感病毒核酸检测有关工作的通知》（卫办医政函〔〕号）和《关于做好医疗机构人感染禽流感检测试剂供给保障工作的通知》（卫发明电〔〕号）有关要求，使用国家疾病预防控制中心制备或商品化试剂盒开展人感染禽流感病毒核酸检测工作。
三、样本采集、运送和保存尽量采集病例发病早期的呼吸道样本(上呼吸道样本包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液, 下呼吸道样本包括痰液、气管吸取物、肺洗液、肺组织等)。
可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高检出率。
患者有下呼吸道样本时，应优先采集。
根据试剂说明书对样本采集方法有关要求，制订样本采集标准操作程序（），并组织样本采集人员进行培训及考核。
样本的采集应当严格按照进行。
样本采集后，按照《人间传染病的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒的相关规定进行包装，用密封容器立即送往实验室。
若气温高时，需放入冰块降温。
样本抵达实验室后，应尽快进行检测，小时内能检测的样本可置于～℃暂时保存，小时内无法检测的样本则应置于≤-70℃状态保存。
如无-70℃保存条件时，可于-20℃冰箱暂存。
样本避免反复冻融。
样本采集、处理、运输及保存不当时，可因病毒降解出现假阴性结果，也可因为样本“污染”出现假阳性结果。
四、检测（一）样本处理样本的核酸提取应当在样本处理区进行。
按所采用的商品化试剂盒说明书要求，取适量待检样本、阳性及阴性对照进行核酸提取。
样本应尽可能新鲜，提取过程应严防酶污染及操作不当导致的降解。
提取过程如涉及离心步骤，应采用低温冷冻离心机；在生物安全柜内进行加样、提取过程中，为防止降解，可将试管架置于托盘内平铺的碎冰上。
提取好的应及时用于检测，否则应当-70℃保存。
北仑区人民医院检验科人感染H7N9禽流感病毒标本采集、保存、运送实验活动要求根据浙江省卫生厅《关于做好人感染H7N9禽流感病毒实验活动生物安全管理工作的通知》未经培养的临床样本应当在已经市卫生局备案的生物安全二级实验室生物安全柜内分装、灭活和核酸提取。
在生物安全二级实验室开展实验活动时，个人防护应当佩戴眼罩、N95及以上水平的口罩等防护装备。
根据《人感染H7N9禽流感疫情防控方案（第一版）》规定，H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理。
原始标本采集呼吸道病毒的诊断取决于高质量标本的采集，及其保存运输等环节。
多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织。
标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存。
标本采集人员医疗机构的医生、护士或疾病预防控制中心专业人员负责标本采集并填写标本登记表，标本采集人员按照相关要求做好个人防护。
采集前的准备防护用品：1.口罩(N-95 or N/P/R-100)2.手套3.帽子4.鞋套5.防护服6.防护目镜采集物品包参考下图：常用的采样液/病毒运输液(VTM）1.pH 7.4～7.6的Hanks液2.MEM/DMEM液在采样液中需加入抗菌素，可用青霉素（终浓度为100U/ml）、庆大霉素（终浓度为1mg/ml）和抗真菌药物（终浓度为2µg/ml）。
在无菌的带螺旋塑料管分装2-3ml采样液。
采样拭子：使用头部为聚酯纤维的病毒采样拭子（鼻及口咽型），铝或塑料做柄，不推荐棉拭子和木柄。
采集对象1.监测病例，同时具备以下4项条件的病例：（1）发热(腋下体温≥38℃)；（2）具有肺炎的影像学特征；（3）发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数减少；（4）不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎。
2.人感染H7N9禽流感疑似病例与确诊病例，定义参照《人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第1版）》标本种类上呼吸道标本：咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液下呼吸道标本：气管吸取物、肺洗液、肺组织标本血清标本：发病7天内急性期血清和间隔2-4周的恢复期血清如病人死亡，可采集组织标本：肺组织、气管、支气管组织等注意事项：1.应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）。
人感染H7N9禽流感病毒鼻咽拭子标本采集方法
采样物品：
•采样液、专用病毒采样拭子由市疾控中心提供，其他物品（如冷藏箱，采样时的生物安全防护用品等）自备。
•二、鼻咽拭子采样方法
•1、鼻拭子：将带有聚丙烯纤维头的鼻咽拭子轻轻插入鼻道内，轻轻转动鼻咽拭子，并向鼻腔内部推进至鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，将拭子头浸入采样液中，尾部折断弃去。
•2、咽拭子：用带有聚丙烯纤维头的鼻咽拭子用力擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入采样液中，尾部折断弃去。
H7N9禽流感是一种由H7N9亚型甲型流感病毒引起的呼吸道感染疾病。
该病毒首次在2013年在中国被发现，并能够从禽类传播给人类。
H7N9禽流感的诊断标准主要包括流行病学史、临床表现和实验室检测：
1.流行病学史：
-患者在发病前14天内有活禽市场的暴露史，或接触过病死禽或其它H7N9禽流感病例。
-患者有与已知H7N9禽流感病例的密切接触史。
2.临床表现：
-发热（体温≥38°C）。
-呼吸道症状，如咳嗽、咳痰或呼吸困难。
-部分病例可出现头痛、肌肉痛、全身乏力等全身症状。
-重症病例可迅速进展为严重肺炎、急性呼吸窘迫综合症（ARDS）、休克或多脏器功能衰竭。
3.实验室检测：
-通过实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、病毒分离或血清学检测确认H7N9病毒感染。
综合以上因素，当患者符合流行病学史和临床表现，并且实验室检测结果阳性时，可以确诊为H7N9禽流感。
对于疑似病例，应尽快进行实验室检测，并根据检测结果和临床表现进行综合评估。
由于H7N9禽流感具有一定的致死率和人传人的潜在风险，对疑似病例应及时进行报告、隔离和治疗，以防止疾病的进一步传播和爆发。
禽流感实验室采样一、原始标本采集1、标本采集由医生、护士或疾病预防控制中心专业人员负责标本采集并填写标本登记表，标本采集人员按照《禽流感职业暴露人员防护原则》做好个人防护。
2、标本采集种类和时限（1）采集标本的种类：疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液、血清以及死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物。
（2）采集标本时间：①咽、鼻拭子或含漱液在发病的头3天采集；②急性期血清在发病后7天内采集，恢复期血清在发病后2-4周采集；③尸检标本尸检时采集。
3、标本的运送所有采集的标本应在医院采集时立即分装，一式两份，其中一份单独保存，以备复核，采集的标本若不能在24小时内送达，则应尽快在一70℃以下保存。
无一70℃条件的需在一20℃冰箱短时间暂存，井尽快联系递送标本。
4、标本采集的方法（1）鼻拭子将带有聚丙烯纤维头的拭子轻轻插入鼻道内鼻愕处，停留片刻后缓慢转动退出。
以另一拭子拭另侧鼻孔。
将拭子头浸入4-5m1采样液中，尾部弃去。
然后，塞紧或盖好管盖。
（2）咽拭子用带有聚丙烯纤维头的拭子擦拭两侧咽扁桃体及咽后壁，同样将拭子头浸入4-5m1采样液中，尾部弃去，塞紧或盖好管盖。
注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作量。
（3）鼻咽抽取物或抽取气管和支气管分泌物用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取枯液或从气管抽取气管和支气管分泌物。
先将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。
收集抽取的粘液，并用采样液5m1测洗收集器3次。
近来国内有用小孩导尿管接在50m1注射器上来替代收集器。
（4）漱口液用10m1采样液（生理盐水）漱喉。
漱时让患者头部微后仰，发吱声，让洗液在咽部转动。
然后，用平皿或烧杯收集漱液。
（5）鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5m1生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。
然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。
重复此过程洗两侧鼻孔。
（6）肺活检材料肺活检组织在无菌条件下，用灭菌过的乳钵磨碎，用生理盐水配成20%悬液，2000rpm离心10min，取上清加入抗菌素＜X、链霉素，或庆大霉素和抗真菌素）。
