高温大曲中酵母菌的分离_鉴定及耐高温性

高温大曲中微生物的分离与鉴定刘效毅;郭坤亮;辛玉华【摘要】The diversity of microbes in high-temperature Maotai-flavor Daqu was analyzed by traditional separation and culture method and modern molecular biological method.147 microbial strains were separated successfully,among them,97 strains were bacteria includingBacillus,Actinomycetes,Staphylococcus,and Micrococcus,and the other 50 strains were mould including Penicillium,Aspergillusfumigatus,Mucor,Alternaria,Phoma,Chaetomium globosum,Eurotium,and Monascus.The research results further proved the diversity of microbes in high-temperature Daqu.（Tran.by YUE Yang）%采用传统分离培养方法和现代分子生物学方法,对酱香型白酒高温大曲中微生物的多样性进行研究分析。

从酱香型白酒高温大曲中分离出147株微生物,其中97株为细菌,包括芽孢杆菌、放线菌、葡萄球菌、微球菌4类;50株霉菌,包括青霉、曲霉、毛霉、交链孢霉、茎点霉菌、球毛壳、散囊菌、红曲霉8类,研究结果表明,高温大曲中的微生物具有高度的多样性。

【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2012(000)006【总页数】4页(P52-55)【关键词】酒曲;微生物;鉴定;生理生化特性;16S;rRNA基因;ITS【作者】刘效毅;郭坤亮;辛玉华【作者单位】贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025;中国科学研究院微生物所,北京100101【正文语种】中文【中图分类】Q93-3;TS261.1茅台酒是高温大曲酱香型白酒的典型代表，以用曲量大，制曲温度高为特点。

耐高温酿酒酵母及其分离培养方法一、引言在酿酒过程中，酵母起着至关重要的作用。

然而，传统的酿酒酵母在高温环境下会失去其活性，导致酿酒品质下降。

因此，耐高温酿酒酵母的研究与应用具有重要意义。

本文将就耐高温酿酒酵母及其分离培养方法展开讨论，以期为酿酒工业提供有益的参考。

二、耐高温酿酒酵母的重要性1.提高酿酒效率：耐高温酿酒酵母能够在高温环境下生存和繁殖，使得酿酒工艺更为高效。

2.提高酿酒品质：耐高温酿酒酵母具有更好的发酵能力，能够产生更多的酒精和香气物质，提高酿酒品质。

3.降低酿酒成本：耐高温酿酒酵母可以减少酿酒过程中的能耗，降低生产成本。

三、耐高温酿酒酵母的分离方法3.1 准备样品准备含有酒精发酵物质的样品，如发酵酒或酒曲。

样品应在酿酒过程中暴露在高温环境下。

3.2 筛选培养基选择一种适合耐高温酵母分离的培养基。

培养基应包含适宜酵母生长的营养物质，并在高温条件下保持稳定。

3.3 分离培养将样品在筛选培养基上均匀涂布，并在恒温培养箱中进行孵育。

适当的温度范围为40-50摄氏度。

3.4 单菌落分离在培养基上选择纯净的酵母菌落，利用传统的单菌落分离方法将其分离。

四、耐高温酿酒酵母的特性1.耐高温性：耐高温酿酒酵母能够在较高的温度下生存和繁殖，一般耐受温度在40-50摄氏度之间。

2.快速发酵：耐高温酿酒酵母具有较快的发酵速度，能够更快地将葡萄糖转化为酒精。

3.高产酒精：耐高温酿酒酵母产生更多的酒精，能够提高酿酒品质。

4.产香气物质能力较强：耐高温酿酒酵母具有更强的产香气物质的能力，能够增加酿酒的香气。

五、耐高温酿酒酵母的应用前景随着全球气候变暖和高温地区的酿酒业的发展，耐高温酿酒酵母的应用前景十分广阔。

其应用领域包括但不限于以下几个方面： 1. 高温地区的酿酒产业：耐高温酿酒酵母为高温地区的酿酒业提供了一种有效的解决方案，能够提高酿酒品质和效率。

2. 极端气候条件下的酿酒业：在极端气候条件下，耐高温酿酒酵母能够保持其活性，能够有效应对极端气候对酿酒过程的影响。

0引言酿酒酵母()是与人类关系最为广泛的一种酵母，在现代分子和细胞生物学中用作真核模式生物，还用于制作面包和馒头等食品及酿酒生产中[1]，因此酿酒酵母对于酿酒乃至人类的作用是不言而喻的。

本文首次联合利用TTC 显色实验、麸曲发酵力活力实验和液体酒精度发酵实验逐级筛的方法对中高温大曲发酵过程中的酿酒酵母菌进行了筛选及鉴定，一方面对中高温大曲的应用具有理论指导意义，更重要的是在逐步认清中高温大曲生物结构的同时，对于大曲机械化进程打下了夯实的研究基础。

1材料和方法1.1主要仪器及设备粉碎机，高压蒸汽灭菌锅，超净操作工作台，1ml 移液枪，200μL 移液枪，玻璃涂布棒，恒温培养箱，蒸馏装置，发酵栓。

1.2主要试剂及培养基孟加拉红培养基：蛋白胨5.0g ，葡萄糖10g ，磷酸二氢钾1.0g ，硫酸镁0.5g ，孟加拉红0.03g ，琼脂20g ，氯霉素0.1g ，水1000mL ，pH 7.2±0.2。

PDA 培养基：马铃薯200g ，葡萄糖20g ，琼脂中高温大曲发酵过程酿酒酵母的筛选与鉴定李燕荣，杨勇，张龙云，姜雷，谭洪弟，贾亚伟，郭风雪（江苏洋河股份有限公司，江苏宿迁223800）摘要:为了确立一种简单且高效筛选中高温大曲发酵过程中酿酒酵母的方法，利用TTC 显色实验对中高温大曲发酵过程中的22株酵母菌进行了产酒精能力初筛，并联合酵母菌麸曲发酵力和液态酒精发酵实验对初筛到的酵母菌株进行复筛和三级筛，最后通过分子生物学鉴定，确定4#和8#酵母菌株均为酿酒酵母（）。

首次对中高温大曲发酵全过程酵母菌的变迁做了较为细致的研究，将鉴定结果比对中高温大曲发酵过程酵母菌变迁表1可知，两株菌均分离自主发酵阶段。

4#菌来自于主发酵2d 曲心，8#菌分离于主发酵4d 的曲皮。

关键词：中高温大曲；酿酒酵母；TTC 显色中图分类号：TS262.3；TS261.15文献标识码：BScreening and Identification of During theFermentation of Medium-and High Temperature DaquLI Yanrong,YANG Yong,ZHANG Longyun,JIANG Lei,TAN Hongdi,JIA Yawei,GUO Fengxue(Yanghe Distillery Co.Ltd.,Suqian 223800,Jiangsu,China)Abstract:In order to develop a simple and efficient screening method for cerevisiae cerevisiae in high-temperature daqu,this paper attempts to screen 20yeast strains during mid-high temperature daqu fermentation through TTC color development experiments.In combination with yeast gluten fermentation and liquid alcohol fermentation experiments,the yeast strains that were initially screened were re-screened and tertiary screened.Finally,through molecular biology identification,it was determined that both 4#and 8#yeast strains were Saccharomyces cerevisiae..And for the first time,the changes of yeast in the middle and high temperature hyperbolic fermentation process were studied in detail,and the identification results were compared to the yeast transition table in the fermentation process.4#bacteria come from the main fermentation 2D cleft,and 8#bacteria are separated from the main fermentation 4D cleft.Key words:medium and high temperature Daqu;Saccharomyces cerevisiae;TTC color display收稿日期：2020-03-07作者简介：李燕荣（1984.3.29-），女，江西抚州人，工程师，微生物学硕士，现工作于江苏洋河酒厂股份有限公司技术部，从事项目研究工作。

两株耐高温酵母菌的鉴定及其特性研究耐高温酵母菌是一类在高温环境下能够生存和繁殖的微生物。

这些酵母菌通常能够生长在温度超过50摄氏度的环境中，且具有一系列特殊的适应性和生理特性。

由于其在高温下的活性和稳定性，耐高温酵母菌在食品工业、发酵工业和生物燃料产业等领域具有巨大的应用潜力。

为了鉴定和研究耐高温酵母菌的特性，一般可以采用以下步骤：1.从耐高温环境中采集样品：耐高温酵母菌通常存在于高温的自然环境中，如温泉、地热能源、火山喷发附近等。

为了寻找耐高温酵母菌，可以从这些环境中采集土壤、水样、空气等样品。

2.分离耐高温酵母菌：将采集到的样品在适当的培养基上进行分离培养。

选择培养基中含有高温下菌落能够生长的组分，如葡萄糖、酵母提取物等。

通过培养基上出现的菌落形态、颜色和生长速度等特征，分离出耐高温酵母菌。

3.重复分离纯化菌株：将分离得到的耐高温酵母菌进行重复分离，以得到纯化的菌株。

4.鉴定菌株：通过形态学、生理特性和分子生物学方法，对纯化的菌株进行鉴定。

形态学鉴定包括观察菌落形状、孢子形态等；生理特性鉴定包括菌株生长温度范围、对极端环境的适应性等；分子生物学鉴定包括通过PCR扩增和测序分析菌株的基因序列。

在鉴定和研究耐高温酵母菌的特性时，还可以进行以下方面的研究：1.生理特性和生长环境的影响：通过调整培养基的成分和温度，研究耐高温酵母菌的生长特性和生理反应。

比如可以研究耐高温酵母菌对不同碳源的利用、对酸碱度和盐度的耐受性等。

2.发酵特性和产酶能力：通过测定耐高温酵母菌在不同温度和培养条件下的生长速率和产酶能力，研究其在发酵工业中的应用潜力。

可尝试研究发酵过程中产生的酶种类和活性，以及产酶的适宜温度和pH值等特性。

3.基因组和基因表达分析：通过对耐高温酵母菌的基因组进行测序和分析，研究其在适应高温环境中的基因表达调控机制。

可以筛选并分析与高温适应性相关的基因，探究耐高温酵母菌的抗热适应机制。

总之，耐高温酵母菌的鉴定和特性研究可以为其在食品工业、发酵工业和生物燃料产业等领域的应用提供重要的科学依据，同时也有助于我们对这类酵母菌的生物学特性和适应机制有更深入的了解。

1株耐热产乙醇酵母的分离、鉴定与性能测试摘要：以江苏省灌南县汤沟酿酒厂的大曲、窖泥及发酵酒醅为样品，经富集、分离得到18株初筛酵母菌株，从中经复筛分离出1株能在42 ℃下发酵产乙醇的酵母菌，命名为NR11。

经过形态观察、BIOLOG微生物检定系统以及18S rDNA基因的分析，将该酵母菌鉴定为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。

对其特性及发酵性能的研究结果显示，NR11可以在12%乙醇溶液及55%糖溶液下正常发酵，致死温度可达60 ℃，在30、38、40、42 ℃条件下，乙醇产量分别可以达到109.0、93.2、73.8、44.0 g/L。

关键词：酿酒酵母；富集；分离；性能测试；菌株鉴定；耐热性；乙醇中图分类号：TS261.1 文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）03-0319-04乙醇为一种可再生的清洁能源，可用作液体燃料替代或部分替代石油燃料，并且其生产工艺成熟，原料来源广泛[1-3]。

酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）是使用最广泛的乙醇发酵出发功能菌株，然而传统的酿酒酵母的最适发酵温度为28～33 ℃，一般不超过36 ℃，因此在气温较高地区和夏季会严重影响正常生产。

研究显示，应用耐高温酵母生产乙醇具有节约能源、提高出酒率、缩短发酵周期、提高设备利用率及维持高温下正常生产等诸多优势[4]。

耐高温高产乙醇酵母菌的选育和发酵工艺的改进是实现浓醪发酵工业的关键，因此分离、筛选和应用耐高温高产乙醇酵母菌的研究已经受到广泛重视，成为当前国内外乙醇生产行业研究的热点[5-7]。

白酒的传统酿造过程是以含有复杂微生物种类的酒曲作为发酵剂，以淀粉质、糖质为原料，在窖池中完成乙醇发酵的过程。

在发酵过程中，窖泥和发酵糟醅密封接触，大量微生物在两者间扩散、交换，最终使得作为发酵容器的窖泥中含有包括酵母菌在内的非常丰富的微生物种群。

这些微生物在白酒生产后期，能利用含高浓度乙醇的酒醅进行发酵，并且发酵温度高，经过长期驯化可以具有比其他环境微生物更强的耐高温、耐乙醇能力[8-9]，因此白酒厂窖池中的窖泥、酒曲成为分离选育酵母菌及其他微生物的良好来源[10]。

两株耐高温酵母菌的鉴定及其特性研究近年来，随着石油化工工业的发展，许多耐高温酵母菌的研究正在受到越来越多的关注。

耐高温酵母菌具有较高的耐温性，可以在温度较高的环境中维持正常的生物活性，因此具有十分重要的应用价值。

本研究以两株耐高温酵母菌(Pichia thermohyalospora Y-1/2)为研究对象，通过对Pichia thermohyalospora Y-1/2的鉴定及其相关特性的研究，探究其在石油化工及其他领域中的应用潜力。

1、两株酵母菌的鉴定首先，我们从环境中分离出了两株高温耐受菌，采用多孔物质培养基进行培养，搭配28℃以上的高温条件，以确保酵母菌的正常生长。

经过活动性检测，这两株菌株显示出较强的生物活性，可在较高温度下维持正常的生长，因此被称为耐高温酵母菌。

通过16S rDNA测序和形态特征鉴定，将这两株高温耐受菌分类为Pichia thermohyalospora Y-1/2。

2、Pichia thermohyalospora Y-1/2的生物学特性经实验表明，Pichia thermohyalospora Y-1/2在室温（28℃）时可以正常生长，而在37℃时更加旺盛，活力也更强。

此外，它们还表现出对抗素的抗性，可以抵御来自环境的抗生素污染，有效抵御外源性抗生素的毒性，具有较强的抗病毒性，能够迅速抵御病原体侵染。

由于具有良好的抗药性和环境适应性，Pichia thermohyalospora Y-1/2在微生物技术领域有着广阔的应用前景。

3、Pichia thermohyalospora Y-1/2的细胞生物学特性通过细胞膜特性分析，Pichia thermohyalospora Y-1/2的细胞膜主要由诸如脂肪酸、烷醇和多糖组成，具有良好的抗药性和结构稳定性，能够有效抵御外界的抗生素和其他有害物质的侵害，具有较强的环境耐受性和抗病毒性。

此外，Pichia thermohyalospora Y-1/2也具有优良的抗氧化性能，能够有效地抵御氧化剂的侵袭并阻止自由基的形成，同时还可以在高温环境中维持正常的生化活性。

两株耐高温酵母菌的鉴定及其特性研究近年来，随着环境温度的不断升高，全球变暖正在加剧。

这对生物的种类和分布造成了巨大的影响，因此，高温耐受性的真菌受到了广泛的关注。

酵母菌特别是大菌属（Saccharomyces）的研究成为发展高温耐受性的真菌的新兴研究方向，高温耐受酵母菌通常表现出各种特性，如耐高温性、耐酸性、耐药性和耐抗生素性。

本研究以系统发酵实验为基础，研究了两株高温耐受酵母菌的特性，其中一株（细胞来源：工业酿造的微生物鉴定公司）在45℃时具有活性，而另一株（细胞来源：科研林场）可在60℃时维持活性。

首先，我们进行了基质复杂度和抗性水平的分析，评估了两株高温耐受酵母菌系统中的遗传多样性。

其次，我们检测了耐抗生素性，研究了在可变温度下细胞存活率和生长率，最后，我们研究了细胞增殖和繁殖能力，以及细胞体积变化的模式。

结果表明，这两株高温耐受酵母菌的基因多样性显著高于传统菌株，两株菌株的耐抗生素性也显著高于传统菌株，表现出抗性水平的显著差异。

此外，这两株菌株在35-75℃的温度范围内均有活性，在低温下细胞存活率较高，而在高温下，其细胞存活率和生长率仍然很高。

最后，在不同温度下这两株菌株的细胞体积和繁殖能力也表现出显著的差异，其中较低温度下的细胞体积较小，而较高温度下其细胞体积较大，繁殖能力也更强。

因此，本研究表明，这两株高温耐受酵母菌是一种特殊的菌种，可以深入研究它们的耐受性、耐抗生素性及其他特性。

本研究增加了对此类特殊类型酵母菌的认识，为发展更多高温耐受真菌提供了启发。

总之，本研究鉴定了两株高温耐受酵母菌，检测了它们在不同温度条件下的耐受性、耐抗生素性及其他特性，表明这两株高温耐受酵母菌具有显著的耐抗生素性、繁殖性及其他特性。

因此，本研究为高温耐受真菌的开发及应用提供了参考。

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中高温大曲中耐高温酵母菌的筛选及其发酵特性的研究赖颖;赵锦慧;胡炳义;栾春雪【摘要】In the experiment, 10 yeast strains capable of growing at above 45 ℃ were screened out from high-temperature Daqu. Among them, strian L7 could grow well at 58℃. The analyis of its physiological and biochemical properties suggested that strain L7 was Saccharomyces. The time of strain L7 at rapid growth phase, stationary phase and decline phase were 5 h, 24 h, and 30 h after the fermentation respectively. And its maximum alcohol yield was 55%.%以中高温大曲为样品，筛选出10株能在45℃以上生长的菌株，其中L7能在58℃条件下正常生长。

生理生化特征鉴定L7为Saccharomyces属的接合酵母。

酵母菌L7在5 h后进入快速生长期，24 h后进入稳定期，30 h后进入衰亡期。

L7的酒精发酵产量最高，酒精得率为55%。

【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2014(000)011【总页数】4页(P35-38)【关键词】微生物;酵母菌;筛选;生理生化特征;生长特性;酒精得率【作者】赖颖;赵锦慧;胡炳义;栾春雪【作者单位】周口师范学院，生命科学与农学学院，河南周口466001;周口师范学院，生命科学与农学学院，河南周口466001;周口师范学院，生命科学与农学学院，河南周口466001;周口师范学院，生命科学与农学学院，河南周口466001【正文语种】中文【中图分类】TS261.1;Q93-3;TS262.2酒精广泛应用于化学工业、医药卫生、食品工业等领域，可用作浸提剂、酒基、溶剂等[1]。

赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选与产酶条件优化赊店老酒大曲是一种传统的酿酒曲，广泛应用于中国传统酿酒工艺中。

在酿酒过程中，大曲中的霉菌起着至关重要的作用，可以促进淀粉的水解和糖化，从而产生酒精和香味物质。

随着酿酒技术的发展和环境的变化，大曲中的霉菌种类和数量也发生了变化，一些新的问题逐渐浮出水面。

在高温条件下，大曲中的霉菌容易受到影响，从而影响酒的品质。

本文旨在对赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选与产酶条件进行优化研究，以期为酒曲生产和酿酒工艺提供技术支持。

一、耐高温霉菌的筛选1.1 样品的采集和处理为了筛选出耐高温的霉菌菌株，我们从传统的赊店老酒酿酒坊中采集了一些发酵过程中的样品，如曲面、酒醅等。

将这些样品带回实验室后，首先进行了简单的处理，包括加热消毒和稀释。

经过样品的处理后，我们利用琼脂平板对样品中的霉菌进行了分离和培养。

将样品涂布在琼脂平板上，利用厌氧箱和恒温培养箱进行培养。

在37℃的高温条件下，筛选出了一些耐高温的霉菌菌株。

1.3 耐高温霉菌的鉴定所得的耐高温霉菌菌株，我们进行了形态学、生理生化特性和分子生物学鉴定。

通过显微镜观察霉菌的形态特征，并比对已知的霉菌菌株进行鉴定，确认了这些菌株的种属和特性。

二、产酶条件优化2.1 霉菌产酶条件的影响因素在酿酒过程中，霉菌产酶活性对酒的品质和口感具有重要影响。

我们对耐高温霉菌的产酶条件进行了优化研究。

我们对产酶条件的影响因素进行了分析，包括温度、pH值、碳源和氮源等。

2.2 产酶条件的优化方法针对产酶条件的影响因素，我们进行了一系列的实验研究，以期找到最适宜的条件来促进霉菌的产酶活性。

通过单因素试验和正交试验，我们逐步确定了最佳的产酶条件。

经过产酶条件的优化，我们发现在适宜的温度、pH值和营养条件下，耐高温霉菌的产酶活性得到了明显提高。

通过比较实验组和对照组的产酶活性，我们验证了优化条件的有效性，并获得了较好的实验结果。

三、研究结论与展望值得注意的是，本次研究是基于实验室条件下的小样品进行的，实际应用中还需要进一步的验证和实践。

赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选与产酶条件优化赊店老酒大曲是一种传统的发酵剂，广泛应用于中国传统酒类酿造中。

随着生产工艺的不断改进和酒类市场的不断需求，人们对酿造过程中的微生物菌种进行深入研究的需求也越来越迫切。

耐高温霉菌作为赊店老酒大曲中的重要微生物菌种，对酿造过程中的发酵效果和酒质具有重要影响。

本文旨在对赊店老酒大曲中的耐高温霉菌进行筛选与产酶条件优化的研究。

一、耐高温霉菌的筛选1. 样品收集及处理我们从已经成功酿造过酒的赊店老酒厂家处获得了一批大曲样品。

然后，我们将这批样品进行了一系列的处理，包括消毒、干燥等，以确保其在后续的实验过程中不受外界干扰。

针对赊店老酒大曲中的耐高温霉菌的筛选，我们采用了以下方法：（1）高温培养筛选法将处理后的大曲样品分别接种入不同培养基，并在不同温度条件下进行培养。

通过观察菌落的形态、颜色和数量变化，筛选出耐高温生长的霉菌。

（2）酶活筛选法将筛选出的耐高温霉菌进行相应的酶活性测试，如淀粉酶、蛋白酶等的活性测定。

筛选出具有较高酶活性的霉菌菌株。

二、产酶条件优化1. 培养基的优化针对筛选出的耐高温霉菌菌株，我们进行了不同培养基成分、pH值、温度和培养时间等条件的优化试验。

最终确定了一种最适合该菌株生长和酶活性表现的培养基配方。

2. 发酵条件的优化通过以上的优化试验，我们成功地获得了一套耐高温霉菌产酶的最优条件，并在实际的酿造生产中进行了验证。

三、研究成果及应用前景1. 筛选出了具有耐高温霉菌产酶能力的菌株，并对其进行了鉴定和保存。

2. 确定了该菌株的最适培养基成分和最佳发酵条件，获得了高产酶的最优条件。

3. 在实际赊店老酒酿造生产中应用，取得了良好的效果并得到了生产厂家的认可。

根据以上研究成果，我们认为该研究对于提高赊店老酒酿造工艺的稳定性和提高酿造效率具有重要的意义。

未来，我们将继续深入研究赊店老酒大曲中的微生物菌种，不断完善酒类酿造的相关技术，为中国传统酒类酿造业的发展做出更大的贡献。

耐高温酿酒酵母及其分离培养方法
耐高温酿酒酵母是一种能够在高温环境下进行发酵的酵母菌，其在酿
造高温酒类饮品中具有重要的应用价值。

为了获得高质量的高温酒类
饮品，需要使用具有高温耐受性的酿酒酵母。

本文将介绍耐高温酿酒
酵母及其分离培养方法。

一、耐高温酿酒酵母的特点
耐高温酿酒酵母是一种能够在高温环境下进行发酵的酵母菌，其最适
生长温度一般在40℃以上。

相比于普通酿酒酵母，耐高温酿酒酵母具有以下特点：
1. 能够在高温环境下进行发酵，使得酒类饮品具有更高的酒精度和更
浓郁的口感。

2. 能够在高温环境下生存，不易受到细菌和其他微生物的干扰，保证
了酿酒的质量和稳定性。

3. 能够适应不同的酿酒工艺和酿酒原料，具有较强的适应性和稳定性。

二、耐高温酿酒酵母的分离培养方法
1. 样品采集：从高温酒类饮品中采集样品，如啤酒、黄酒、米酒等。

2. 分离酵母：将样品进行稀释，然后在含有葡萄糖、酵母氮源和微量元素的培养基上进行培养。

待酵母生长到一定程度后，进行分离和筛选，选取具有高温耐受性的酵母菌株。

3. 鉴定酵母：对分离出的酵母菌株进行形态学、生理生化和分子生物学等方面的鉴定，确定其属于哪一种酵母。

4. 培养酵母：将分离出的酵母菌株进行培养，使其适应于高温环境下的生长和发酵。

5. 应用酵母：将培养好的酵母菌株应用于高温酒类饮品的酿造中，获得高质量的高温酒类饮品。

三、结语
耐高温酿酒酵母是一种具有重要应用价值的酵母菌，其在高温酒类饮品的酿造中具有重要作用。

通过分离培养方法，可以获得具有高温耐受性的酵母菌株，为高温酒类饮品的酿造提供了有力的支持。

耐高温高产酒精酵母的分离鉴定及其应用研究的开题报告一、研究背景及研究意义酒精酵母是酿酒和工业发酵的重要微生物菌种，其发酵能力和产酒效率直接影响着产品的质量和产量。

在高温条件下进行发酵，能够缩短发酵周期、提高产品产量和产品质量，但是普通酵母在高温条件下的生长和发酵效果往往不理想，因此耐高温高产酒精酵母的筛选及研究对于提高酒精工业的发展具有重要意义。

二、研究目的本研究旨在分离筛选出耐高温高产酒精酵母，并对其进行鉴定和应用研究，探讨其在酿酒和工业发酵中的应用价值。

三、研究内容及方法(一) 酵母菌样品的采集和筛选从酒精发酵中获取样品，通过传统和分子生物学的方法筛选出耐高温高产酒精酵母菌株，并进行保存和培养。

(二) 耐高温高产酒精酵母的鉴定通过遗传学、生理学、生化学、形态学等多种方法对所分离出的耐高温高产酒精酵母进行鉴定和分类。

(三) 耐高温高产酒精酵母在酿酒中的应用研究利用所筛选出的耐高温高产酒精酵母菌株在模拟实验条件下进行酿酒发酵，对发酵效果、产酒效率和酒质进行评估。

(四) 耐高温高产酒精酵母在工业发酵中的应用研究在实际工业发酵过程中，将所筛选出的耐高温高产酒精酵母应用于工业生产中，对发酵效率和产品质量进行评估。

四、预期研究成果(一) 筛选出一株耐高温高产酒精酵母菌株，对其进行鉴定和分类。

(二) 探索新的高产酒精酵母菌株在酿酒和工业发酵中的应用价值。

(三) 提高酿酒和工业发酵的产量、效率和质量，推动酒精工业的发展。

五、可行性分析(一) 本研究选取酿酒和酒精工业生产中得到应用的样品进行研究，具有较好的可行性和实际意义。

(二) 采取传统和分子生物学相结合的方法，可以较快速、准确地分离出耐高温高产酒精酵母。

(三) 在本研究过程中，可以与相关酿酒和酒精工业企业合作，加强实践应用和市场推广。

六、研究进度安排第一年：酵母菌样品的采集和筛选，分离出一株耐高温高产酒精酵母菌株。

第二年：对耐高温高产酒精酵母进行鉴定和分类，探索其在酿酒中的应用价值。

酵母菌的分离筛选方法酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条件下，液体培养比霉菌快。

菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明，菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色，圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。

含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。

1.培养基：1.1葡萄糖50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L KH2PO42.5g/LNa2HPO40.5g/L MgSO41g/L FeSO4 0.1g/L 酵母膏 0.5g/L 孟加拉红 0.03g/L PH4.5-5.0 （富集用）★1.2乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用蔗糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。

（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养用）（富集用）★1.3麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤，10-15波林，氯霉素0.1g/L PH6.0-6.4 121℃ 20min（分离保存用）灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用）★1.4虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨5.0g/L 葡萄糖10g/LKH2PO41.0g/L MgSO40.5g/L 孟加拉红0.033g/L 氯霉素0.1g/L 琼脂15g/L PH自然（分离纯化用）★1.5 豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。

100g 黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L1.6察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾0.5g/L 硫酸镁0.5g/L 硫酸亚铁0.01g/L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。

赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选与产酶条件优化赊店老酒大曲是一种传统的发酵食品，其中的菌丝菌种多样，其中耐高温霉菌是一种重要的酶生产菌株。

本文旨在对赊店老酒大曲中的耐高温霉菌进行筛选，并优化其产酶条件。

我们从赊店老酒大曲中分离出菌丝样本，并对样本进行处理，除去表面的杂质。

然后，通过对菌丝样本进行连续稀释涂布法，将其分布在含有琼脂的培养基上，利用均匀的铅笔尖将菌丝样本划横线，形成菌斑。

将培养基进行高温处理，一般设置在40℃以上的温度，培养一段时间后观察菌斑的生长情况。

在高温处理的过程中，耐高温霉菌会展现较好的生长能力，表现为菌斑的扩散和明显的孢子形成。

根据菌斑的形态和孢子形态，选择出能够耐受高温的菌株。

在筛选出耐高温霉菌菌株后，我们需要优化其产酶条件。

在培养基的选择上，可以采用含有丰富碳源和氮源的培养基，如葡萄糖、麦芽粉等。

在培养温度方面，可以根据不同菌株的特性进行调节。

一般来说，耐高温霉菌的适宜生长温度在30℃-40℃之间，可以根据实际情况进行调整。

pH值也是一个重要的因素，一般来说，大多数耐高温霉菌在中性pH 条件下生长较好。

在菌液产酶的过程中，采用摇瓶培养的方法。

将优选出的耐高温霉菌菌株接种到含有适量培养液的摇瓶中，根据实验需要添加不同浓度的培养基，如葡萄糖、麦芽粉等。

然后，将摇瓶置于恒温摇床上，进行培养。

在培养过程中，需要控制好摇床的转速，一般来说，10-15转/分钟的转速是比较适宜的。

培养时间一般根据不同菌株的特性进行调整。

在培养过程中，需要注意的是每天进行一次颠倒培养液，以保证菌体的充分接触氧气。

通过上述步骤，我们可以得到较好的产酶效果。

对产酶的评价可以采用酶活力的测定方法，如酶活力试纸片法、比色法等。

可以通过调整培养条件，如培养时间、培养基浓度等，进一步优化产酶效果。

本文介绍了赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选方法，以及对其产酶条件的优化。

通过这些步骤，我们可以得到较好的耐高温霉菌菌株，并优化其产酶条件，为赊店老酒大曲的生产提供一定的理论支持和实验基础。