Earle's平衡盐溶液(1×EBSS,含钙镁糖)

北京雷根生物技术有限公司
Earle's 平衡盐溶液(1×EBSS,含钙镁糖酚红)
简介：
常见的平衡盐溶液有Eargle's 液、Hank's 液、磷酸盐缓冲溶液(PBS)等。

Earle's 平衡盐溶液是最常用的磷酸盐缓冲溶液之一，又称Earle 's Balanced Salt Solution 、Earle's BSS 、EBSS, 主要由氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、碳酸氢钠等组成，有时亦含钙镁、葡萄糖、酚红，pH 值一般为7.2～7.4。

Earle's 平衡盐溶液(1×EBSS,含钙镁糖酚红)，含Ca 2+、Mg 2+、葡萄糖、少量酚红，用去离子水或双蒸水配制，pH 值7.4，经严格过滤除菌处理，内毒素含量低，可用于胰蛋白酶-EDTA 细胞消化液等各种无或低钙镁细胞培养用液的配制以及组织和细胞的漂洗等。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 无需配制，直接使用。

注意事项：
1、 在进行细胞培养过程中细胞的洗涤时，应注意无菌操作，避免被微生物污染。

2、 由于含钙离子，易产生少许沉淀，出现该种情况后，一般置于温浴至沉淀溶解即可，如
果产生的沉淀较多应弃用。

3、 该试剂经过滤除菌。

编号 名称 CC0043 Storage Earle's 平衡盐溶液(1×EBSS,含钙镁糖酚红) 500ml 4℃ 使用说明书 1份。

磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)产品简介：平衡盐溶液(Balanced Salt Solution，BSS)与细胞生长状态下的pH值、渗透压等环境状态一致，具有维持渗透压、控制酸碱平衡、供给细胞生存代谢所必需的能量和无机盐成分等作用，可满足体外实验中，细胞生存并维持一定的代谢的基本需要。

平衡盐溶液(BSS)主要由无机离子组成，有时含有碳酸氢钠、葡萄糖、酚红等，如果有必要还可以加入HEPES，加入少量的HEPES后，可以减少氯化钠的加入量，以维持渗透压的平衡。

平衡盐溶液可以作为完全培养基的基液，亦可以用于稀释浓缩的氨基酸、维生素溶液以配制完全培养基。

BBS配方常有改动，如Hank’s BBS由不含钙镁或酚红的，也有含钙镁含酚红的等等, Dulbecco’s PBS由不含钙镁或含钙镁的等。

HBSS、EBSS、PBS等都是与较弱的磷酸盐缓冲液相关的盐溶液。

常见的平衡盐溶液有Eargle液，Hanks’液、低钙镁和无钙、镁平衡盐溶液及磷酸盐缓冲液 (PBS)等。

磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)即Phosphate-Buffered Saline，是最常用的磷酸盐缓冲溶液，又称Dulbecco’s磷酸缓冲盐溶液、Dulbecco’s PBS、D-PBSA、CMF-DPBS 或D-PBS、DPBS溶液, 主要由氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾组成，不含钙离子和镁离子，pH值为7.4，该试剂经过高压灭菌，常用于细胞培养过程中细胞的洗涤或其他常规用途。

该试剂为10×浓缩液，使用之前应稀释到1×。

主要成分：主要由NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4等组成。

操作步骤（仅供参考）：1、进行细胞培养过程中细胞的洗涤时，按10×PBS:无菌水=1:9进行稀释，即取10×PBS 1份、无菌水9份，充分混匀，即获得PBS工作液。

2、进行常规实验（不要求无菌）时，按10×PBS:双蒸水或去离子水=1:9进行稀释，即取10×PBS 1份、双蒸水或去离子水9份，充分混匀，即获得PBS工作液。

earle’s平衡盐标准一、背景介绍平衡盐是人体内一种重要的电解质，对于维持人体生命和健康至关重要。

近年来，随着人们健康意识的提高，平衡盐的摄入量也逐渐受到关注。

然而，市场上平衡盐的种类繁多，品质参差不齐。

因此，制定一个平衡盐的标准对于保证平衡盐的品质和安全性具有重要意义。

earle’s平衡盐是一种经过科学配方制成的平衡盐产品，其特点在于富含人体所需的多种矿物质和微量元素，同时保持低钠、低盐、低卡路里等特性，适合各类人群食用。

earle’s平衡盐的生产过程严格遵循国际卫生标准，确保产品的安全和品质。

1. 原料来源：earle’s平衡盐的原料必须来自无污染、无公害的优质土地，确保原料的天然、纯净。

2. 配方比例：earle’s平衡盐的配方必须科学合理，符合国际卫生标准，各种矿物质和微量元素的比例必须均衡。

3. 生产工艺：earle’s平衡盐的生产过程必须严格遵循国际卫生标准，确保产品的安全和品质。

生产过程中不得添加任何化学添加剂和防腐剂。

4. 包装标识：earle’s平衡盐的包装上必须明确标明产品名称、生产厂家、生产日期、保质期、营养成分表等信息，同时需要注明产品为平衡盐产品。

5. 检测认证：e arle’s平衡盐需要通过相关部门的检测和认证，确保产品的安全和品质。

制定earle’s平衡盐标准的意义在于规范平衡盐市场，提高平衡盐的品质和安全性，保障消费者的健康权益。

同时，通过标准的实施，可以促进平衡盐产业的健康发展，提高企业的竞争力和市场占有率。

五、实施earle’s平衡盐标准面临的挑战1. 执行难度：由于平衡盐市场的庞大和复杂，标准的执行可能会面临一定的难度和挑战，需要相关部门和企业的共同努力和支持。

2. 成本问题：实施标准需要一定的成本投入，包括检测费用、认证费用等，对于一些中小企业可能会带来一定的经济压力。

3. 市场竞争：实施标准可能会对一些不符合标准的企业产生影响，导致市场竞争格局的变化，需要企业做好应对措施。

绪论现代生物制药技术快速发展，采用动物细胞大规模培养生产抗体药物、基因工程药物、人用以及兽用疫苗等生物制品日益增长。

这些生物制品生产的核心技术之一——动物细胞大规模培养技术也在快速发展，集中在细胞系、细胞培养基和细胞生物反应容器三个方面。

其中细胞是病毒、蛋白的表达载体，细胞质量直接影响表达量，故筛选、驯化优质细胞是关键。

只有好的细胞培养基才可能筛选、驯化出优质的细胞。

细胞生物反应容器也在不断发展，以转瓶、反应器为主要细胞生产设备，配合高密度培养、微载体培养、悬浮培养技术，均需要相适应的细胞培养基以充分发挥作用。

清大天一公司秉承清华大学校训和学风，以技术领先的细胞培养基产品研发、生产为基础，不断开发和引进国内外动物细胞大规模培养技术，并结合国内生物制品企业现状，努力搭建细胞培养技术平台，不断研发出特定疫苗生产专用培养基、疫苗生产高密度转瓶细胞培养技术、疫苗生产悬浮细胞培养技术、抗体药物生产悬浮细胞培养技术等生物制品生产关键技术，为生物制品企业服务。

培养基作为生物制品生产的主要原料之一，应该实施药品生产管理，遵循药品生产质量管理规范。

培养基专业生产企业——北京清大天一生物技术有限公司就是按照药品要求研发、生产和销售培养基产品的。

清大天一实施GMP管理，所有产品均按照相应质量标准生产和检验合格方可交付用户。

源于不断技术研发和吸收引进国际最新科技，清大天一独创了分子级混合技术和干燥技术，从根本上解决了产品均一性和溶解性的难题；同时清大天一的产品领先策略使得公司不断推出包括无血清培养基、低血清培养基在内的培养基新产品。

清大天一实行无缝隙服务，服务贯穿产品售前咨询、试用、商务、技术培训和交流、访问、质量投诉处理等全过程服务，将产品功能最大化延伸。

同时清大天一还提供培养基相关的个性化服务、增值服务。

技术无止境，服务无止境，我们每天都在努力做得更好一些。

敬请关注清大天一网站：/。

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earle's平衡盐是一种非常重要的化学试剂，常用于细胞培养和生物实验中，是一种模拟真实细胞环境的培养基成分。

在科研和医药领域，尤其是细胞培养实验方面，其重要性不言而喻。

对于earle's平衡盐在实验室中的使用，FDA也有一定的标准和规定。

我们来看一下earle's平衡盐的成分和作用。

earle's平衡盐包含多种无机盐和氨基酸，能够提供细胞培养所需的营养物质和稳定的环境。

它能够维持细胞内外的渗透压平衡，保持细胞的正常形态和功能。

在细胞培养和生物实验中，使用earle's平衡盐可以更好地模拟体内环境，使实验结果更加真实可靠。

针对earle's平衡盐的使用，FDA也有一些规定和标准。

在细胞培养实验中，特别是在药物检测和生物制品研发中使用earle's平衡盐时，需要确保其符合FDA的标准。

这些标准主要包括对制备工艺、原料质量和产品质量的要求。

需要保证earle's平衡盐的配方合理，无机盐和氨基酸的含量和比例符合要求，且无重金属和微生物污染等不良物质。

在实际使用earle's平衡盐时，我们也需要注意一些使用上的注意事项。

要根据实验需要选择合适的类型和规格的earle's平衡盐，确保其质量和纯度符合要求。

在使用过程中需要严格按照规定的配制方法和浓度来使用，避免浓度过高或过低对细胞产生不良影响。

另外，还需要对使用后的废弃物进行正确的处理，避免对环境造成污染。

从个人的角度来看，我认为对earle's平衡盐的使用需要非常重视其质量和标准要求。

作为细胞培养和生物实验中的重要试剂，其质量直接关系到实验结果的可靠性和准确性。

在选择和使用earle's平衡盐时，应该严格遵循FDA的标准和规定，确保其质量达标，从而保证实验结果的可靠性。

earle's平衡盐作为细胞培养和生物实验中的重要试剂，其质量和标准至关重要。

我们需要充分了解其成分和作用，在使用时严格按照FDA 的标准来选择和配制，确保其质量符合要求。

北京吉美生物技术有限公司Earle's平衡盐溶液(10×EBSS,含钙镁糖)产品简介：平衡盐溶液（Balanced Salt Solution,BSS）与细胞生长状态下的pH值、渗透压等环境状态一致，具有维持渗透压、控制酸碱平衡、供给细胞生存代谢所必需的能量和无机盐成分等作用，可满足体外实验中细胞生存并维持一定的代谢的基本需要。

BBS配方常有改动，如Hank，s BBS有不含钙镁或酚红的，也有含钙镁含酚红的等等，Dulbecco，s PBS有不含钙镁或含钙镁的等。

Eargle，s平衡盐溶液是最常用的磷酸盐缓冲溶液之一，又称Eargle，s Balanced Salt Solution、Eargle，s BSS、EBSS，主要由氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、碳酸氢钠等组成，有时亦含钙镁、葡萄糖、酚红，pH值一般为7.2~7.4。

Jimei Earle's平衡盐溶液(10×EBSS,含钙镁糖)，含Ca2+、Mg2+，葡萄糖，不含酚红，用去离子水或双蒸水配制，pH值7.4，经严格过滤除菌处理，内毒素含量低，可用于胰蛋白酶-EDTA细胞消化液等各种无或低钙镁细胞培养用液的配制以及组织和细胞的漂洗等。

尤其适用于神经细胞。

该试剂为10×浓缩液，使用之前应稀释至1×。

产品组成：操作步骤（仅供参考）：1、进行细胞培养过程中细胞的洗涤时，按10×EBSS溶液：无菌水=1：9进行稀释，即取10×EBSS溶液1份、无菌水9份，充分混匀，即获得EBSS工作液。

2、进行常规实验（不要求无菌）时，按10×EBSS溶液：双蒸水或去离子水=1：9进行稀释，即取10×EBSS溶液1份、双蒸水或去离子水9份，充分混匀，即获得EBSS工作液。

注意事项：1、在进行细胞培养过程中细胞的洗涤时，应注意无菌操作，避免被微生物污染。

2、Jimei Earle's平衡盐溶液(10×EBSS,含钙镁糖)由于含有钙离子，易产生少许沉淀，出现少许沉淀情况后，一般置于温浴至沉淀溶解即可，如果产生较多沉淀应弃用。

MDC:取12 mg粉末溶于720 nl DMSO使其浓度为50 mmol/L,分装后-20冰箱保存。

临用前用MEM稀释到终浓度50 umol/L;Rapamycin:用MEM培养基配成终浓度为1 umol/L,现用现配;400ng/ml喹乙醇:称取4 mg喹乙醇,DMSO预溶(体积<0.1%)后加入10 ml MEM培养液至完全溶解,现用现配,避光保存;3-MA:首先用PBS溶解粉末,临用前加热至完全溶解后再加入MEM培养基至终浓度10mmol/L; PI3K抑制剂（3-MA，Wortmannin）可干扰或阻断自噬体的形成用RAPAMYCIN诱导自噬我也查过一部分文献，有用无血清的，也有用，一般培养基的，浓度从25nM到100nM都有，用的是50nM的雷帕霉素，加入一般的培养基中，目的是排除无血清所诱导出来的自噬。

文献说饥饿初期激活的是大分子自噬，在4-6小时活力达到最大，24h后以CMA途径为主Earle's balanced salts solution (EBSS) for 48 hsigma的EBSS，货号E2888，有碳酸氢钠，有酚红的，酚红到不是很必须，只是一个PH指示作用，好看些无血清诱导自噬：EBSS 诱导6个小时就可以了。

EBSS一定可以诱导出来，只是需要说明的是时间点的设置，因为从饥饿诱导开始半个小时就可能开始自噬了，一直到24小时都持续，所以应该设置不同的时间点观察这个作用。

另外一个很大的问题是，饥饿诱导的一个很大的弊端是细胞死亡，这也是我面临的问题，就是在细胞收养的时候蛋白浓度太小了。

24小时就很少了，更不要说48小时和72小时了Hank's诱导，也就是通常所说的饥饿诱导，细胞培养到对数生长期后以Hank's替代常规完全培养基，3h后就可诱导出自噬。

我用Hank's诱导了3h后电镜观察有30%细胞都有自噬这种现象，但不如国外报道的高。

细胞培养常见问题及其解决1、如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。

在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。

总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。

2、何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。

3、可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。

每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。

4、可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。

血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。

来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

5、何谓FBS, FCS, CS, HS ?FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼，请不要再使用。

CS (calf serum) 则是指小牛血清。

HS (horseserum) 则是指马血清。

6、培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。

当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时，则应使用5 % CO2 培养细胞。

7、Hank's 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。

原因是什么？Hank's 平衡盐溶液(HBS)和Earle's平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。

北京雷根生物技术有限公司
乐氏液
简介：
平衡盐溶液(Balanced Salt Solution ，BSS)与细胞生长状态下的pH 值、渗透压等环境状态一致，具有维持渗透压、控制酸碱平衡、供给细胞生存代谢所必需的能量和无机盐成分等作用，可满足体外实验中细胞生存并维持一定代谢的基本需要。

Leagene 乐氏液也属于平衡盐溶液的一种，主要由氯化钠、磷酸盐、氯化钙、葡萄糖等组成，不含HEPES 。

用于哺乳动物离体实验，肌体灌流、清洗组织，并维持离体组织的正常生理功能。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 根据实验具体要求，保存或清洗离体组织。

注意事项：
1、 由于乐氏液含钙离子，容易产生沉淀。

如果产生少许沉淀，可以加热溶解或过滤后使用，产生大量沉淀应弃用。

2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 6个月有效。

相关：
编号 名称 CZ0048 Storage 乐氏液 500ml 4℃ 使用说明书 1份 编号 名称 CC0005 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁) CC0022 D-Hanks 平衡盐溶液(1×,含酚红) CC0032
Hanks 平衡盐溶液(1×HBSS,含酚红) CZ0047
任氏液 CZ0063
改良台氏液 DH0006
苏木素伊红(HE)染色液 R00228 Tris-HCl 缓冲液(1mol/L,pH8.0)。

D-Hanks平衡盐溶液(1×,含酚红)产品简介：平衡盐溶液（Balanced Salt Solution，BSS）与细胞生长状态下的pH值、渗透压等环境状态一致，具有维持渗透压、控制酸碱平衡、供给细胞生存代谢所必需的能量和无机盐成分等作用，可满足体外实验中，细胞生存并维持一定的代谢的基本需要。

平衡盐溶液（BSS）主要由无机离子组成，有时含有碳酸氢钠、葡萄糖、酚红等，如果有必要还可以加入HEPES，加入少量的HEPES后，可以减少氯化钠的加入量，以维持渗透压的平衡。

平衡盐溶液可以作为完全培养基的基液，亦可以用于稀释浓缩的氨基酸、维生素溶液以配制完全培养基。

BBS配方常有改动，如Hank’s BBS由不含钙镁或酚红的，也有含钙镁含酚红的等等, Dulbecco’s PBS由不含钙镁或含钙镁的等。

HBSS、EBSS、PBS等都是与较弱的磷酸盐缓冲液相关的盐溶液。

常见的平衡盐溶液有Eargle液，Hanks’液、低钙镁和无钙、镁平衡盐溶液及磷酸盐缓冲液 (PBS)等。

D-Hanks平衡盐溶液是最常用的磷酸盐缓冲溶液之一，又称CMF-Hanks' Balanced Salt Solution、CMF-HBSS溶液或D-Hanks’ BSS, 主要由氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、葡萄糖等组成，不含钙离子和镁离子，pH值一般为7.2～7.4。

Leagene D-Hanks平衡盐溶液(1×,含酚红)，不含钙离子和镁离子，含酚红，用重蒸超纯水配制，pH值7.4，经严格过滤除菌处理，内毒素含量低，可用于胰蛋白酶和EDTA 细胞消化液等各种无或低钙镁细胞培养用液的配制，组织和细胞的漂洗等。

主要成分：主要由 KCl、KH2PO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4、葡萄糖等组成，含少量酚红。

操作步骤（仅供参考）：1、无需配制，直接使用。

注意事项：1、在进行细胞培养过程中细胞的洗涤时，应注意无菌操作，避免被微生物污染。

Hanks平衡盐溶液(1×HBSS,无酚红)产品简介：平衡盐溶液(Balanced Salt Solution，BSS)与细胞生长状态下的pH值、渗透压等环境状态一致，具有维持渗透压、控制酸碱平衡、供给细胞生存代谢所必需的能量和无机盐成分等作用，可满足体外实验中，细胞生存并维持一定的代谢的基本需要。

平衡盐溶液(BSS)主要由无机离子组成，有时含有碳酸氢钠、葡萄糖、酚红等，如果有必要还可以加入HEPES，加入少量的HEPES后，可以减少氯化钠的加入量，以维持渗透压的平衡。

平衡盐溶液可以作为完全培养基的基液，亦可以用于稀释浓缩的氨基酸、维生素溶液以配制完全培养基。

BBS配方常有改动，如Hank’s BBS由不含钙镁或酚红的，也有含钙镁含酚红的等等, Dulbecco’s PBS由不含钙镁或含钙镁的等。

HBSS、EBSS、PBS等都是与较弱的磷酸盐缓冲液相关的盐溶液。

常见的平衡盐溶液有Eargle液，Hanks’液、低钙镁和无钙、镁平衡盐溶液及磷酸盐缓冲液(PBS)等。

Hanks平衡盐溶液是最常用的磷酸盐缓冲溶液之一，又称Hanks' Balanced Salt Solution、Hanks’BSS, 或HBSS, 主要由氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、葡萄糖等组成，含钙离子和镁离子，pH值一般为7.2～7.4。

Leagene Hanks平衡盐溶液(1×,无酚红)，含钙离子和镁离子，无酚红，用重蒸超纯水配制，pH值7.4，经严格过滤除菌处理，内毒素含量低，可用于胰蛋白酶和EDTA细胞消化液等各种无或低钙镁细胞培养用液的配制，组织和细胞的漂洗等，直接使用。

主要成分：主要由KCl、KH2PO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4、葡萄糖、Mg2+、Ca2+等组成，不含酚红。

操作步骤（仅供参考）：1、无需配制，直接使用。

注意事项：1、在进行细胞培养过程中细胞的洗涤时，应注意无菌操作，避免被微生物污染。

《深入了解earle's平衡盐质量标准》一、引言在生物学和生物化学领域，earle's平衡盐是一种经常被使用的培养基盐。

它是由美国生物学家默里·斯坦利·earle发明的，被广泛用于细胞培养、细胞生长等领域。

在这篇文章中，我们将深入探讨earle's平衡盐的质量标准，并从多个角度对其进行评估。

二、质量标准的定义和重要性质量标准是用于衡量一个产品或物质质量优劣的标准。

在生物科技领域中，对于培养基盐来说，质量标准尤为重要。

优质的earle's平衡盐应该具有清晰的化学成分及其比例，能够满足细胞培养的基本需求，同时不含有对细胞生长有害的杂质。

三、成分分析earle's平衡盐的成分非常丰富，包括多种无机盐和氨基酸。

其中，关键的成分包括氯化钠、氯化钾、磷酸盐、硫酸钙等。

这些成分对于细胞的正常生长和代谢起着至关重要的作用。

在评估一个批次的earle's 平衡盐时，我们需要对这些成分的含量进行严格的分析和检测，确保其符合质量标准要求。

四、杂质和纯度除了主要成分外，earle's平衡盐中可能会存在一些杂质，比如重金属离子、微生物污染等。

这些杂质会对细胞的生长和培养产生负面影响，因此在评估earle's平衡盐的质量时，需要对其杂质含量和纯度进行严格检测。

只有确保其纯度达到标准要求，才能够保证其在细胞培养中的良好表现。

五、个人观点和总结对于earle's平衡盐的质量标准，我个人认为需要从成分分析、杂质和纯度等多个方面进行综合评估。

只有确保每一批次的earle's平衡盐都符合严格的质量标准，才能够保证细胞培养的质量和结果的可靠性。

在生物科技领域中，对earle's平衡盐的质量标准要求十分严格和重要。

总结而言，earle's平衡盐的质量标准是生物科技领域中的一个关键问题，对其进行全面评估和严格把关，能够确保细胞培养实验的可靠性和稳定性。

收稿日期:2009-04-27基金项目:广东省联合基金资助项目(编号:U0632007);广东省高等学校自然科学研究重点资助项目(编号:06Z007)作者简介:李树基(1981-),男,广东罗定人,硕士研究生,主要研究方向为神经生物学。

钾通道阻断剂四乙铵对氧葡萄糖剥夺诱导大鼠海马神经元死亡的保护作用李树基,陈 荷,陈 明,李勃兴,朱心红,高天明(南方医科大学神经生物学教研室,广东 广州 510515)摘要: 目的 研究钾通道阻断剂四乙铵(TEA )对氧葡萄糖剥夺(OGD )诱导的培养海马神经元死亡的保护作用。

方法 培养12d 的海马神经元培养基更换为Earle s 平衡盐溶液(EBSS)后置于37 三气缺氧(N 2:CO 2:O 2=94%:5%:1%)培养箱内培养,4h 后恢复正常条件培养,同时在培养液内加入不同浓度钾通道阻断剂TEA,继续培养24h 后噻唑蓝(M TT )比色法检测神经元死亡情况。

结果 OGD 组、OGD +不同浓度TEA 组与对照组比较,海马神经元细胞存活率明显降低(P <0.05);OG D +10 mo l L -1TEA 组和OGD +500 mo l L -1TEA 组与OGD 组比较,海马神经元细胞存活率明显升高(P <0.05);而OGD +1 mo l L -1TEA 组和OGD +5mm o l L -1T E A 组与OGD 组比较,海马神经元细胞存活率差异无统计学意义(P >0.05)。

结论 钾通道阻断剂TEA 能保护OGD 诱导的培养海马神经元免于死亡,提示某些类型的钾通道活动增强可能参与了OGD 诱导的培养海马神经元死亡。

关键词: 海马神经元;氧葡萄糖剥夺;钾通道阻断剂中图分类号:R 338 文献标识码:A 文章编号:1004 7239(2009)04 0331 03P rotection of potassiu m channel ant agonist tetrae t hyla mm oni u m agai n st rat s neuronal deat h induced by oxygen and glucose deprivati o n LI Shu j,i C H E N H e ,C H E N M i n g ,et al(D epart men t of N eurobiology,Southern M edical Universit y,Guangzhou 510515,Ch i na)Abstrac t : Ob jec tive T o i nvesti g ate the effects o f po tassi um channel antagon ist on oxygen and g l ucose(OGD ) i nduced death o f cultured hi ppocampal neurons .M ethod s A fter 12d s cu lt ue ,Ear l e s ba lanced sa lts(EBSS)took the place and then h i ppoca m pa l neurons we re put i nto the i ncuba t o r w it h 37and three anox i c gases(N 2:CO 2:O 2=94%:5%:1%).4h l a tercu lt ure under nor m a l cond iti on v itro was done ag ain .M eanwh ile ,d ifferen t concentrati ons o f po tassi um channel antagon ist te tra e t hy l a mm oni um (TEA )w ere appli ed to t he cu lt ure so luti on .A fter 24h ,the neurona l death w as ana l yzed w i th M TT assay .R e sults Co m pared w ith the contro l g roup ,i n OGD g roup and the group w ith diff e rent concentrations of OGD +TEA,the surv i va l ra te of h i ppoca m pa l neurons was obv i ousl y lower(P <0.05);Co m pa red w ith OGD g roup ,i n OGD +10 m o l L -1T E A group and OGD +500 m o l L -1TEA group ,the surv ival ra te of hi ppocampal neurons w as obv i ousl y h i gher(P <0.05);Co m pa red w it h OGD group ,i n OGD +1 m o l L -1TEA group and OGD +5mmo l L -1TEA g roup ,the re w as no statistical si gn ifi cance i n the d ifference of the surv ival rate o f hippo campa l neurons (P >0.05).Con cl u si onPo tassiu m channel antagon i st TEA canprotect h i ppoca m pa l neurons i nduced by oxygen and g l ucose depr i vation fro m dea t h ,w hich i nd ica tes that enhanced acti v ity o f so m e ki nd po t assi u m channe lmay get i nvolved i n t he death of cu l tured h i ppoca mpa l neurons i nduced by oxygen and g l ucose depri vati on .K ey word s : h i ppca m pa l neurons ;oxygen and g l ucose depr i va tion ;po tassi u m channe l an tagonist脑缺血缺氧导致的神经元死亡是造成脑中风临床症状和后遗症的主要原因,严重影响患者的生活质量[1 2]。

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MES Buffer(0.1mol/L,pH6.0)
产品简介：
2-(N-吗啉)乙磺酸简称MES，分子式为C6H13NO4S，相对分子量为195.24, CAS号为 4432-31-9。

MES主要用作生物缓冲剂，在25℃下pKa为6.15，有效缓冲范围在pH5.5～6.7之间。

MES常用作生物缓冲液，常用pH值为 5.5、6.0、6.5。

Leagene MES buffer(0.1mol/L,pH6.0)采用进口MES、去离子水配制而成，未经15psi高压灭菌。

产品组成：
操作步骤（仅供参考）：
1、根据实验具体要求操作。

注意事项：
1、对人体有刺激性，请注意适当防护。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：3个月有效。

相关产品：
产品编号 产品名称
CC0005磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁)
CC0023D-Hanks平衡盐溶液(1×,无酚红)
CC0044Earle's平衡盐溶液(1×EBSS,无钙镁糖)
CC0065HEPES溶液(1mol/L,pH7.4)
CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
CZ0063改良台氏液(Tyrode's solution)
R00067MES buffer(0.1mol/L,pH5.5)
R00224Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH7.0-9.0)。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线: 400-1683301或800-8283301订货e-mail:******************技术咨询: *****************网址: 碧云天网站 微信公众号Earle's Balanced Salt Solution (with Ca2+ & Mg2+, 自噬诱导试剂)产品编号产品名称包装C0214-500ml Earle's Balanced Salt Solution (with Ca2+ & Mg2+, 自噬诱导试剂)500ml产品简介：碧云天生产的Earle's Balanced Salt Solution (with Ca2+ & Mg2+, 自噬诱导试剂)，简称EBSS with Ca2+ & Mg2+，含117.24mM NaCl, 5.33mM KCl, 26.19mM NaHCO3, 1.01mM NaH2PO4, 1.80mM CaCl2, 0.813mM MgSO4, 5.56mM D-Glucose。

本Earle's Balanced Salt Solution溶液经过过滤除菌，可以直接用于细胞培养过程中细胞的洗涤、溶液的配制、细胞计数时的稀释等常规用途。

使用前不必再进行稀释或过滤除菌等任何处理。

本产品简称EBSS，常用于诱导细胞自噬。

诱导细胞自噬时，吸净细胞培养液，用EBSS洗涤1-3次，然后在EBSS中孵育例如10、20、40或60min就可以诱导细胞发生非常显著的自噬。

多次充分洗涤细胞，可以确保发生非常显著的自噬。

不同细胞诱导发生自噬所需的时间有所不同，初次实验需要适当摸索一下诱导自噬的时间。

推荐使用碧云天生产的C3012 AdPlus-mCherry-GFP-LC3B、C3011 Ad-mCherry-GFP-LC3B、AF5225 LC3B Rabbit Polyclonal Antibody (KO Validated)或AL221 LC3B抗体(兔多抗)检测细胞自噬。

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Spinner 盐溶液(1×,含酚红)
简介：
HBSS 、EBSS 、PBS 等都是与较弱的磷酸盐缓冲液相关的盐溶液。

常见平衡盐溶液有Eargle 液、Hanks 液、磷酸盐缓冲溶液(PBS)等。

Spinner 盐溶液(1×,含酚红)同s-MEM 盐溶液, 主要由氯化钠、氯化钾、磷酸盐、碳酸氢钠、葡萄糖等组成，不含Ca 2+、Mg 2+，但含酚红，pH 值一般为7.2～7.4。

经严格过滤除菌处理，内毒素含量低，可用于胰蛋白酶-EDTA 细胞消化液等各种无或低钙镁细胞培养用液的配制以及组织和细胞的漂洗等，直接使用。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 无需配制，直接使用。

注意事项：
1、 在进行细胞培养过程中细胞的洗涤时，应注意无菌操作，避免被微生物污染。

2、 Leagene Spinner 盐溶液(1×,含酚红)不含钙离子，不易产生沉淀，出现该种情况后，
一般置于温浴至沉淀溶解即可, 如果产生较多沉淀应弃用。

3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

编号 名称 CC0092 Storage Spinner 盐溶液(1×,含酚红)
500ml 4℃ 使用说明书 1份。

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磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,含钙镁)
简介：
HBSS 、EBSS 、PBS 等都是与较弱的磷酸盐缓冲液相关的盐溶液。

常见的平衡盐溶液有Eargle 's 液、Hank's 液、磷酸盐缓冲溶液(PBS)等。

Leagene 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,含钙镁)即Phosphate-Buffered Saline ，是最常用的磷酸盐缓冲溶液之一，又称Dulbecco 's 磷酸缓冲盐溶液、Dulbecco 's PBS 、D-PBSB, 主要由氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾组成，含少量Ca 2+、Mg 2+，pH 值为7.4，该试剂经过高压灭菌，常用于细胞培养过程中细胞的洗涤或其他常规用途，该试剂为1×工作液，直接使用。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 无需配制，直接使用。

注意事项：
1、 在进行细胞培养过程中细胞的洗涤时，应注意无菌操作，避免被微生物污染。

2、 Leagene 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,含钙镁)由于含有钙离子，易产生少许沉淀，出现该
种情况后，一般置于温浴至沉淀溶解即可，如果产生较多沉淀应弃用。

3、 该试剂经高压灭菌处理。

编号 名称 CC0004 Storage 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,含钙镁) 500ml 4℃ 使用说明书 1份。

Leagene 。

com 北京雷根生物技术有限公司
Ficoll 溶液(20% m/v)
简介：
Ficoll 400又称聚蔗糖400，分子量40KD ，具有无毒、低渗透压、密度高等特性，容易使细胞聚集，是分离细胞或细胞器较好的介质。

Ficoll 溶液主要用于分级梯度分离细胞器如完整酵母包囊等，主要由Ficoll 梯度缓冲液、Ficoll 400、蛋白酶抑制剂等组成。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、根据实验要求操作。

注意事项：
1、 注意无菌操作，避免反复冻融。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 6个月有效。

4℃可储存1个月。

相关：
编号 名称 CS0033 Storage Ficoll 溶液(20% m/v) 100ml -20℃ 使用说明书 1份 编号 名称
CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
CC0045 Earle's 平衡盐溶液(1×EBSS,无钙镁糖酚红)
CC0130 胰蛋白酶-EDTA 溶液(0.25%:0.02%)
CS0001 ACK 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
DC0032 Masson 三色染色液
TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD 比色法)。

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平衡盐溶液(10×BBS)
简介：
平衡盐溶液(Balanced Salt Solution ，BSS)与细胞生长状态下的pH 值、渗透压等环境状态一致，具有维持渗透压、控制酸碱平衡、供给细胞生存代谢所必需的能量和无机盐成分等作用，可满足体外实验中细胞生存并维持一定的代谢的基本需要。

Leagene 平衡盐溶液(10×BBS)由磷酸盐、氯化钠氯化钾等组成，含Ca 2+、Mg 2+，不含酚红，用重蒸超纯水配制，pH 值7.4，经严格过滤除菌处理，内毒素含量低，可用于胰蛋白酶-EDTA 细胞消化液等各种无或低钙镁细胞培养用液的配制以及组织和细胞的漂洗等，直接使用。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 无需配制，直接使用。

注意事项：
1、 在进行细胞培养过程中细胞的洗涤时，应注意无菌操作，避免被微生物污染。

2、 Leagene 平衡盐溶液(10×BBS)由于含钙离子，易产生沉淀，出现该种情况后，一般置于温浴至沉淀溶解即可, 如果产生较多沉淀应弃用。

3、 该试剂经过滤除菌。

4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

编号 名称 CC0200 Storage 平衡盐溶液(10×BBS) 500ml 4℃ 使用说明书 1份。