凝血酶时间(TT)检测试剂盒

凝血酶时间测定
凝血酶时间（thrombin time，TT）测定主要用于纤溶治疗的监测；过筛检测纤维蛋白原缺陷、循环中有肝素、类肝素的存在等。

（一）检验原理
凝血酶法：在血浆中加入标准化的凝血酶溶液后，使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，血浆凝固所需的时间即为凝血酶时间。

（二）检验方法学
1.试剂
凝血酶溶液用生理盐水调节至使正常血浆的凝固时间在16～18秒为宜。

2.标本采集
受检全血与0.109mol/L枸橼酸钠溶液或0.1mol/L草酸钠溶液作9∶1抗凝，充分混匀，1500r/min离心10分钟，以此制备乏血小板血浆。

3.标本检验
取玻璃小试管1支，加入受检血浆0.1ml，置37℃水浴中，再加入凝血酶溶液0.1ml，立即启动秒表，轻轻摇动试
管，记录血浆凝固时间，重复上述检测，取平均值。

（三）方法学评价
离心时间及特殊的标本类型均会对检测构成影响（详见凝血酶原时间测定）。

（四）质量保证
1.正常对照
每次使用的凝血酶试剂的活性不尽相同，故应以正常人混合血浆作正常对照。

2.检验温度
水浴温度应恒定在36～38℃，温度过高或过低均可使凝血酶时间延长。

3.检验周期
应在采血后4小时内完成检测，否则可使凝血酶时间假性延长。

（五）参考范围
16～18秒。

（六）临床意义
TT延长指超过正常对照3秒以上，主要见于肝素或类肝素物质增多，系统性红斑狼疮、肝脏疾病、肾脏疾病、低（无）
纤维蛋白原血症、异常纤维蛋白原血症及F（g）DP增多如DIC、原发性纤溶等。

出凝血凝血酶时间（TT）测定（第四版）出凝血原理：在37℃条件下，在血浆中加入“标准化”的凝血酶溶液后，血浆凝固所需要的时间。

出凝血标本处理：患者处于休息状态下，采空腹静脉血（急诊病人除外）。

采血者应技术熟练，“一针见血”，以防止组织损伤，使外源性凝血因子进入标本。

最好不与其它实验一起采集而使血液停留在针管的时间延长。

采完血后，将血液沿管壁缓缓注入试管，避免产生气泡；然后迅速将血液和抗凝剂轻轻颠倒混匀，避免用力震荡。

全血要在1小时内分离血浆。

分离乏血小板血浆时，要在室温下3000rpm离心10分钟，室温下可存放4小时。

全部试验不能在4小时内完成，应将乏血小板血浆分装在～的小试管中快速冷冻，储存于-20℃冰箱中。

冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果会不准确。

冷冻血浆融化时，应将盛冷冻血浆的容器置于37℃水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化。

出凝血试剂：TT试剂购于天津威士达公司：德灵Test Thrombin Reagent试剂（试剂盒代号OWHM13）。

内含凝血酶测定试剂冻干品：标准浓度的牛凝血酶，牛白蛋白；凝血酶测定试剂缓冲液（25mmol/l,）。

按要求的量用缓冲液溶解小瓶中的试剂，测试之前必须将试剂溶解液预温到37℃。

复溶的试剂从冰箱中取出后室温平衡15min后上机分析。

出凝血仪器：使用Sysmex公司的CA-7000型全自动血液凝固仪。

出凝血操作：按仪器操作步骤执行标准操作。

出凝血4.６.1开机：按下机器侧面的POWER 按钮。

开机后机器进行自检，当屏幕上边显示“Ready:”时可以进行试验。

出凝血4.６.2检查消耗品：1、准备反应杯：打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量，不足时，需及时添加。

（一次性最多可放1000 个杯子）2、准备试剂：按照仪器对试剂的要求，把试剂准备好，放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期。

如还不熟悉试剂位置时，可在主屏幕上选Reagent Setting，按屏幕显示放置试剂。

修改纪录：1目的本操作书的制定的目的是，为操作者进行血浆凝血酶时间测定提供正确的操作方法。

2适用范围适用于血浆凝血酶时间测定3定义凝血酶时间（TT）是一个快速而简易地评价纤维蛋白形成的试验，因子X III 缺乏时，TT保持正常。

当PT，APTT延长，不能解释结果时，在进行其他试验之前，应先测定TT，再做其他确诊测试。

4测定原理和临床意义4.1测定原理在过量的凝血酶存在下，被稀释血浆的凝固时间可直接反映血浆中纤维蛋白原水平。

4.2临床意义反映血浆中纤维蛋白的减少和FDP的增多，可作为异常纤维蛋白原的筛选试验。

延长：血循环中纤维蛋白（原）降解产物（FDP）（如DIC继发纤溶亢进、溶拴治疗后））；肝素或类肝素物质增多；AT-Ⅲ活性增高；纤维蛋白原严重减少（如先天性无纤维蛋白血症、严重肝脏疾病）等。

异常FDP（骨髓瘤，风湿性关节炎）缩短：见于高凝状态。

5实验室条件5.1实验场所中心实验室临检室5.2温湿度要求室温：15-30℃湿度：20-80%6标本要求6.1标本种类6.1.1标本种类血浆6.1.2标本量最适量：3ml最小量：2ml分析量：200ul不适标本的处理：采集量过少、抗凝剂错误、血液凝固等情况下，拒收标本，及时与临床联系，并做好登记。

6.1.3容器枸橼酸钠抗凝管---9体积血采集到1体积0.109 M枸椽酸钠抗凝剂中（NCCLSH3-A3，H21-A21标准）6.1.4采集条件采集时间：检查对象生活饮食处于日常状态，安静。

拒收标准：采血量不足、严重乳糜血、抗凝不充分、严重乳糜血、抗凝剂有误等采集部位：静脉采血。

6.2使用条件6.2.1保存条件---标本血浆在20℃保存8小时，如果采用肝素治疗，标本保存2小时。

* 不要将血浆置于2 - 8℃保存。

6.2.2保存事项必须及时检验，放置过久可影响检验结果。

6.2.3保存天数：1天6.2.4保存场所：临检室6.2.5特殊容器：无6.2.6预防措施标本为可感染性标本，应注意人员及环境的防护，防护措施请使用眼镜，口罩，手套等。

修改纪录：1目的本操作书的制定的目的是，为操作者进行血浆凝血酶时间测定提供正确的操作方法。

2适用范围适用于血浆凝血酶时间测定3定义凝血酶时间（TT）是一个快速而简易地评价纤维蛋白形成的试验，因子X III 缺乏时，TT保持正常。

当PT，APTT延长，不能解释结果时，在进行其他试验之前，应先测定TT，再做其他确诊测试。

4测定原理和临床意义4.1测定原理在过量的凝血酶存在下，被稀释血浆的凝固时间可直接反映血浆中纤维蛋白原水平。

4.2临床意义反映血浆中纤维蛋白的减少和FDP的增多，可作为异常纤维蛋白原的筛选试验。

延长：血循环中纤维蛋白（原）降解产物（FDP）（如DIC继发纤溶亢进、溶拴治疗后））；肝素或类肝素物质增多；AT-Ⅲ活性增高；纤维蛋白原严重减少（如先天性无纤维蛋白血症、严重肝脏疾病）等。

异常FDP（骨髓瘤，风湿性关节炎）缩短：见于高凝状态。

5实验室条件5.1实验场所中心实验室临检室5.2温湿度要求室温：15-30℃湿度：20-80%6标本要求6.1标本种类6.1.1标本种类血浆6.1.2标本量最适量：3ml最小量：2ml分析量：200ul不适标本的处理：采集量过少、抗凝剂错误、血液凝固等情况下，拒收标本，及时与临床联系，并做好登记。

6.1.3容器枸橼酸钠抗凝管---9体积血采集到1体积0.109 M枸椽酸钠抗凝剂中（NCCLSH3-A3，H21-A21标准）6.1.4采集条件采集时间：检查对象生活饮食处于日常状态，安静。

拒收标准：采血量不足、严重乳糜血、抗凝不充分、严重乳糜血、抗凝剂有误等采集部位：静脉采血。

6.2使用条件6.2.1保存条件---标本血浆在20℃保存8小时，如果采用肝素治疗，标本保存2小时。

* 不要将血浆置于2 - 8℃保存。

6.2.2保存事项必须及时检验，放置过久可影响检验结果。

6.2.3保存天数：1天6.2.4保存场所：临检室6.2.5特殊容器：无6.2.6预防措施标本为可感染性标本，应注意人员及环境的防护，防护措施请使用眼镜，口罩，手套等。

SIEMENS 凝血酶时间测定试剂盒（凝固法）说明书【产品名称】通用名称：凝血酶时间测定试剂盒（凝固法）英文名称：Test Thrombin Reagent【包装规格】凝血酶时间测定试剂：10*5ml；凝血酶时间测定试剂的缓冲液：1*50ml。

【预期用途】在临床上用于检测人血浆的凝血酶时间（TT）。

【检验原理】凝血酶可使血浆标本制度纤维蛋白原转化为纤维蛋白，形成凝块。

形成凝块的时间即检测时间。

【主要组成成份】凝血酶时间测定试剂，冻干品：标准浓度的牛凝血酶，牛白蛋白。

凝血酶时间测定试剂的缓冲液：HEPES（25mmol/L），pH7.4。

防腐剂：5-氯-2-甲基-4-乙噻唑-3-1（6mg/L）、2-甲基-4-乙噻唑-3-1（2mg/L）。

【储存条件及有效期】未开瓶试剂贮存在2-8℃，有效期24个月。

复溶后稳定期：37℃8小时15-25℃10小时2-8℃7天-20℃4周在原瓶中，复溶后试剂可冷冻保存。

开瓶后缓冲液的稳定期：2-25℃稳定12周。

不同血凝分析仪有各自的稳定数据。

【适用仪器】全自动凝血分析仪：CA-510/CA-520/CA-530/CA-540/CA-550/CA-560/CA-1500/CS2000i/CS-2100i/CA6000/CA7000 【样本要求】采集血浆，将枸橼酸钠（0.109mol/L）1份与静脉全血9份混合，避免产生气泡，按不小于1500g，离心至少10min，出去上层血浆，保存在15-25℃备用。

更详细的步骤请参照CLSI文件H21-A5的第3条。

15-25℃标本稳定时间：4小时，含肝素标本在2小时内进行检测。

按试剂标签上标明的量用缓冲液复溶凝血酶时间测定试剂。

测试前，必须将原瓶或塑料试管内试剂预温到37℃，并小心混匀。

【检验方法】自动方法：适用于手工或者全自动凝血分析仪，Siemens公司提供几种凝血分析仪的参考指南（应用表）。

参考指南中包括分析仪和分析方法的详细操作方法以及可能和操作手册中提供的内容不同的性能指标。

凝血酶时间测定（TT）一、测定原理：1、在凝血酶作用下，待检血浆中纤蛋白原变位纤维蛋白。

当待检血浆中抗凝物质增多是，凝血酶时间延长。

二、标本要求：1、凝血专用管（CTAD管，枸椽酸钠0.109M，蓝帽）抽取静脉血至刻度线，充分混匀。

1000转离心10分钟后2小时内测定完毕。

2、测定量 100ul血浆三、试剂：1、STAGO公司原装试剂STA®-THROMBIN®2、保存条件：2-8℃3、使用条件：使用前干粉与稀释液混匀，放入搅拌珠，以保持试剂为混悬液，条码扫描后放入仪器试剂柜特定位置。

四、仪器和材料：1、STA全自动血凝仪2、含有磁珠的反应杯五、标准和质控：1、预定标，标准曲线由厂家在试剂中提供。

2、质控品为原装STA-COAG CONTROL N+P两批号定值血浆干粉，保存条件2-8℃。

使用前加蒸馏水1ml，混匀即可使用，试剂开启后在试剂柜内稳定8小时。

编写：伍海波制定日期：2011.12.1六、操作程序：1、装卸试剂：F2键打开试剂柜，条码扫描后确认试剂量，放入特定孔（带搅拌珠混匀功能）即可。

2、定标与室内质控：更换试剂批号时仪器根据每批试剂的标准曲线自动定标，24小时室内质控自动测定一次，未通过则仪器会提示报警。

3、标本测定：F1键打开标本柜，输入号码后随机插入标本孔，选择测定项目后关闭标本柜。

吸样针加100ul血浆入反应杯，预温240秒后加入50ul TT试剂并开始计时。

秒数计算均由仪器根据曲线自动完成换算。

4、传送并核收结果。

5、注意事项：a、血量与抗凝剂比例适宜，离心时间充分以确保血浆中无血小板干扰测定结果。

b、标本无凝固。

七、计算和参考值由仪器自动完成，正常参考值：14-21秒编写：伍海波制定日期：2011.12.1。

凝血酶原时间检测试剂盒（凝固法）适用范围：用于体外检测人血浆凝血酶原时间。

1.1 包装规格冻干型试剂规格如下：（其中PT试剂为冻干型）PT试剂： 4×1ml、稀释液：51ml；PT试剂： 4×2ml、稀释液：51ml；PT试剂： 4×4ml、稀释液：51ml；PT试剂： 4×5ml、稀释液：51ml；PT试剂： 4×8ml、稀释液：51ml；PT试剂： 4×10ml、稀释液：51ml；PT试剂： 5×1ml、稀释液：51ml；PT试剂： 5×2ml、稀释液：51ml；PT试剂： 5×4ml、稀释液：51ml；PT试剂： 5×5ml、稀释液：51ml；PT试剂： 5×8ml、稀释液：51ml；PT试剂： 5×10ml、稀释液：51ml；PT试剂： 10×1ml、稀释液：51ml；PT试剂： 10×2ml、稀释液：51ml；PT试剂： 10×4ml、稀释液：51ml；PT试剂： 10×5ml、稀释液：51ml；PT试剂： 10×8ml、稀释液：2×51ml；PT试剂： 10×10ml、稀释液：2×51ml。

液体型试剂规格如下：4×1ml；4×2ml；4×4ml；4×5ml；4×8ml；4×10ml；5×1ml；5×2ml；5×4ml；5×5ml；5×8ml；5×10ml；10×1ml；10×2ml；10×4ml；10×5ml；10×8ml；10×10ml。

1.2 主要成份2.1 外观a) 试剂盒外观应该整洁，文字符号标识清晰。

凝血酶时间试剂盒（凝固法）检测步骤【包装规格】4 x 8/5/2 ml牛凝血酶1 x 9ml缓冲液【预期用途】适用于体外诊断，在IL凝血系统上对人枸橼酸钠血浆进行凝血酶时间（TT）定量测定。

【检验原理】进行TT检验的主要意义：- 评估弥散性血管内凝血（DIC）- 监测肝素抗凝和纤溶治疗- 检测是否存在FDP (纤溶蛋白/纤溶蛋白原降解产物),遗传性或获得性纤维蛋白原质量和数量异常以及纤维蛋白溶解增加。

在样品中加入纯化的凝血酶，将其中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，测量形成凝块所需要的时间。

【主要组成成份】【储存条件及有效期】2-8℃冷藏保存，竖直放置。

未经开封的试剂，稳定期可持续至标签上所指明的有效期。

首次使用后的试剂保存于原装瓶中，2-8℃条件下稳定性可以维持15天，15-25℃环境下可以维持24小时。

为了达到最佳稳定性，应将试剂从检测系统中移出， 2-8℃ 环境下保存于原装瓶中。

【适用仪器】ACL血凝分析系统【样本要求】1.标本采集通过静脉穿刺，直接将标本采集到含有抗凝剂的蓝色帽真空采血管内。

2.如果采用注射器采集标本，应注意根据患者年龄、采血量及血管的粗细使用适当的针头和注射器容量。

注射器容量过大会增大血液凝固的机会，一般推荐使用容量<20ml的注射器。

针头过小，容易引起溶血。

3.抗凝剂及比例采用109mmol/L（3.2%）的枸橼酸钠作为抗凝剂（其他抗凝剂如草酸盐、肝素、EDTA盐不适用）。

血与枸橼酸钠（109mmol/L）的比例为9：1。

这个比例实际上是指抗凝剂与正常血细胞比容（Hct）条件下所含血浆的比例而言，故Hct异常时，应根据患者Hct来计算抗凝剂的用量。

如果HCT >55%，根据公式C = 1.85 ×10 -3 (100－H) V（注：C = 抗凝剂的体积(mL)，V = 全血体积(mL)，H = HCT (%)）计算所需抗凝剂的量。

4.注意：如果采用注射器采集标本，血液抽出后应在1min内与适当量的抗凝剂混合。