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木瓜蛋白酶的原料鉴别方法
木瓜蛋白酶是一种天然的酶，通常从木瓜果实中提取。
其原料鉴别方法可以从多个角度进行考虑：
1. 外观特征，木瓜蛋白酶的原料主要是木瓜果实，因此外观上应具有木瓜的特征，如外皮颜色、形状和大小等。
成熟的木瓜果实通常呈现为黄色或橙色，外表光滑且有特殊的香味。
2. 化学成分分析，通过化学分析可以鉴别木瓜蛋白酶的原料。
木瓜果实中含有丰富的木瓜蛋白酶，可以通过化学方法检测木瓜蛋白酶的含量，如酶活力测定和蛋白质含量测定等。
3. 酶活性测定，木瓜蛋白酶的原料可以通过酶活性测定来确定其含有活性酶的水平。
一般来说，木瓜蛋白酶具有一定的酶活性，可以通过酶活性测定方法来鉴别原料。
4. 微生物学检测，通过检测木瓜蛋白酶原料中的微生物含量和种类，可以判断原料的质量和纯度。
微生物学检测可以帮助排除原料受到污染的可能性。
5. 原产地证明，木瓜蛋白酶的原料通常应该有明确的原产地证明，通过追溯原料的产地和生产过程，可以确保原料的质量和安全性。
综上所述，通过外观特征、化学成分分析、酶活性测定、微生物学检测和原产地证明等多种方法，可以全面鉴别木瓜蛋白酶的原料。
这些方法的综合应用可以有效确保木瓜蛋白酶原料的质量和纯度。
木瓜蛋白酶的正确使用方法木瓜蛋白酶是一种天然的酶类蛋白，具有促进食物消化和改善肠道健康的作用。
它可以帮助人体分解蛋白质，促进食物的消化吸收，对于一些消化不良、胃肠道问题的人群来说，木瓜蛋白酶的正确使用方法尤为重要。
本文将详细介绍木瓜蛋白酶的正确使用方法，希望能够帮助大家更好地使用这一天然酶类蛋白，改善身体健康。
首先，我们需要了解木瓜蛋白酶的作用原理。
木瓜蛋白酶主要是从木瓜中提取得到的一种酶类蛋白，它能够在酸性环境下发挥作用，帮助人体分解蛋白质，促进食物的消化吸收。
因此，在使用木瓜蛋白酶时，我们需要注意保持胃酸的正常分泌，这样才能更好地发挥木瓜蛋白酶的作用。
其次，正确的使用方法是非常重要的。
一般来说，我们可以在餐前30分钟左右服用木瓜蛋白酶，这样可以更好地帮助食物的消化吸收。
在服用木瓜蛋白酶时，我们需要根据自身的情况来确定剂量，一般建议按照产品说明书上的剂量来服用，不宜过量。
另外，木瓜蛋白酶最好不要与热水一起服用，因为高温会破坏木瓜蛋白酶的活性，影响其效果。
此外，木瓜蛋白酶的使用还需要注意一些禁忌。
孕妇、哺乳期妇女、以及有胃溃疡、出血性胃炎等胃肠道疾病的患者不宜服用木瓜蛋白酶。
在服用木瓜蛋白酶的过程中，如果出现过敏反应或者不良反应，应立即停止使用，并及时就医。
最后，我们需要注意存放木瓜蛋白酶。
木瓜蛋白酶应存放在阴凉干燥处，避免阳光直射和高温，以免影响其活性。
另外，木瓜蛋白酶的包装应密封保存，避免受潮和受污染，以保证其质量和效果。
总之，木瓜蛋白酶作为一种天然的酶类蛋白，对于促进食物消化和改善肠道健康具有重要作用。
正确的使用方法可以更好地发挥其作用，改善消化不良和胃肠道问题。
在使用木瓜蛋白酶时，我们需要注意保持胃酸的正常分泌，正确掌握使用剂量和时间，避免与禁忌人群，注意存放环境，这样才能更好地享受木瓜蛋白酶带来的益处。
希望本文能够帮助大家更好地了解木瓜蛋白酶的正确使用方法，改善身体健康。
木瓜蛋白酶营养成分木瓜蛋白酶是一种天然的酵素，广泛存在于木瓜的果肉和种子中。
它不仅在烹饪中被广泛应用，还具有丰富的营养成分，对我们的健康非常有益。
下面将为您详细介绍木瓜蛋白酶的营养成分及其对身体的益处。
1. 蛋白酶活性：木瓜蛋白酶具有较高的蛋白酶活性，能够有效分解蛋白质。
这对于消化系统的健康非常重要，能够帮助身体更好地吸收和利用蛋白质。
此外，它也有助于消化不良和胃痛的缓解。
2. 天然酶：木瓜蛋白酶是一种天然酶，无添加剂和化学成分。
与人工消化酶相比，木瓜蛋白酶更容易被身体吸收和利用。
它不会对身体产生负担，特别适合消化系统较弱或胃口较差的人群。
3. 富含维生素C：除了蛋白酶活性外，木瓜蛋白酶还富含维生素C。
维生素C是一种强力的抗氧化剂，能够抵抗自由基的损害，增强免疫系统的功能。
它还有助于胶原蛋白的合成，促进肌肤的保湿和延缓衰老。
4. 丰富的纤维素：木瓜蛋白酶还富含纤维素，这对于肠道健康至关重要。
纤维素可以增加肠道蠕动，促进食物和废物的通畅排泄，预防便秘和其他消化问题。
同时，它还有助于调节血糖和胆固醇水平，降低心脏病和糖尿病的风险。
如何充分利用木瓜蛋白酶的营养成分呢？1. 食用新鲜木瓜：新鲜木瓜是最佳的来源，因为它含有最高浓度的蛋白酶活性和维生素C。
您可以将木瓜切成块状，直接食用或加入水果沙拉、果汁中。
2. 选择未成熟的木瓜：未成熟的木瓜含有更丰富的蛋白酶活性，适用于需要更强消化帮助的人群。
您可以将未成熟的木瓜切成薄片，腌制后食用。
3. 煮熟的木瓜种子：木瓜种子中也富含蛋白酶活性，煮熟后可以直接食用。
您可以将木瓜种子煮熟后剥皮，作为零食或添加到糕点中，增加营养价值和口感。
总结起来，木瓜蛋白酶不仅具有较高的蛋白酶活性，还富含维生素C和纤维素。
它能够帮助促进消化系统的健康，增强免疫力，改善肠道功能，并有助于预防心脏病和糖尿病。
在食用木瓜时，建议选择新鲜木瓜和未成熟木瓜，同时充分利用木瓜种子的营养价值。
加入木瓜蛋白酶，让身体更健康！。
木瓜蛋白酶的正确使用方法木瓜蛋白酶是一种天然的酶类蛋白，广泛应用于食品、医药、化妆品等领域。
它具有促进食物消化、改善皮肤质地、去除角质等作用。
正确的使用方法能够充分发挥木瓜蛋白酶的功效，本文将为您介绍木瓜蛋白酶的正确使用方法。
首先，选择适合的木瓜蛋白酶产品。
市面上有各种形式的木瓜蛋白酶产品，包括口服片剂、口服液、面膜、护肤品等。
在购买时，要根据自己的需求选择合适的产品，比如想要改善肠胃消化功能的可以选择口服片剂，想要改善皮肤质地的可以选择面膜或护肤品。
其次，根据产品说明书正确使用木瓜蛋白酶。
不同的产品在使用方法上可能会有所不同，因此在使用前一定要仔细阅读产品的说明书，按照说明书上的指导正确使用。
比如口服片剂的用法可能是每日一次，饭后服用，而面膜的使用方法可能是每周使用一到两次，涂抹在清洁的脸部皮肤上，按摩片刻后洗净。
再者，注意使用木瓜蛋白酶的时间和频率。
在使用木瓜蛋白酶产品时，要注意时间和频率的控制。
比如口服片剂一般建议在饭后使用，而面膜一般建议每周使用一到两次。
在使用过程中，要注意不要过量使用，以免产生不良反应。
此外，注意木瓜蛋白酶与其他产品的搭配使用。
在使用木瓜蛋白酶产品时，要注意避免与其他产品混合使用，特别是一些化学性较强的产品，以免产生化学反应，对皮肤或肠胃造成伤害。
最后，注意存放木瓜蛋白酶产品。
木瓜蛋白酶产品在存放时要放置在阴凉干燥处，避免阳光直射或高温，以免影响产品的效果和稳定性。
总之，正确的使用方法能够充分发挥木瓜蛋白酶的功效，希望本文的介绍能够帮助您更好地使用木瓜蛋白酶产品，获得更好的效果。
木瓜蛋白酶的纯化和鉴定方法研究木瓜蛋白酶（Papain）是一种广泛存在于木瓜中的天然酶，具有优异的蛋白水解能力和广泛的应用领域。
对于木瓜蛋白酶的纯化和鉴定方法的研究，可以为其在食品、药物和生物技术等领域的应用提供重要的理论和实践基础。
纯化木瓜蛋白酶的常用方法主要包括：硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析和亲和层析等。
首先，通过将木瓜果肉或木瓜乳剂进行初步的提取和分离，得到粗木瓜酶液或浓缩液。
接下来，通过酸性、碱性或酶处理等方法，将杂质蛋白质去除，然后经过一系列的层析纯化步骤，最终获得纯度较高的木瓜蛋白酶。
其中，离子交换层析是最常用的纯化方法之一。
离子交换层析是根据蛋白质与固定在固定相上带电的离子交换基团之间的相互作用进行纯化的。
通常使用阳离子交换剂如DEAE-Sepharose CL-6B或阴离子交换剂如CM-Sepharose CL-6B作为固定相，可实现木瓜蛋白酶与其他蛋白质之间的分离。
通过控制缓冲液的pH和离子强度，可以调节木瓜蛋白酶在层析柱上的吸附和洗脱，从而实现对其的纯化。
凝胶过滤层析是另一种常见的纯化方法，其基本原理是根据蛋白质分子大小的差异进行纯化。
凝胶过滤层析对分子量较大且较纯的蛋白质具有较好的分离效果。
在纯化木瓜蛋白酶时，可以选择适当的凝胶过滤层析介质，如Sephadex G-75或Sephadex G-100等，将混合溶液在凝胶柱上进行层析，分离出目标蛋白质。
除了纯化方法的研究外，正确鉴定木瓜蛋白酶的纯度和活性也是非常重要的。
鉴定木瓜蛋白酶的常用方法主要包括：SDS-PAGE电泳、活性测定和质谱鉴定等。
其中，SDS-PAGE电泳是一种常用的蛋白质分子量分析方法，它可将蛋白质按照分子量大小进行分离和定量。
通过在分离凝胶上染色或通过Western blotting方法检测，可以确定木瓜蛋白酶的纯度和分子量。
活性测定是评价木瓜蛋白酶酶活性的重要手段。
常用的活性测定方法包括卟啉-酪蛋白分光光度法、酪蛋白分解能力法等。
木瓜蛋白酶的生物合成和分泌机制研究木瓜蛋白酶（Papain）是一种重要的天然蛋白酶，广泛存在于木瓜等植物中。
其生物合成和分泌机制的研究对于深入了解蛋白质合成过程及其应用具有重要意义。
本文将探讨木瓜蛋白酶的生物合成和分泌机制以及相关研究进展。
生物合成是指在细胞内通过基因表达、转录和翻译等过程，将DNA信息转化为具有生物活性的蛋白质的过程。
而分泌则是指细胞将合成的蛋白质经过适当的转运和包装作用释放到细胞外的过程。
研究发现，木瓜蛋白酶的生物合成和分泌过程主要发生在木瓜果实细胞中。
首先，木瓜蛋白酶的合成依赖于相关基因的表达和转录。
在转录过程中，DNA中的木瓜蛋白酶基因被转录为mRNA分子。
该mRNA分子随后通过RNA聚合酶酶的作用将其转录为mRNA前体。
经过转录的mRNA进一步经过剪接和修饰等过程，形成成熟的mRNA。
该mRNA含有编码木瓜蛋白酶的氨基酸序列。
随后，该mRNA通过核糖体进行翻译，将氨基酸按照特定的顺序合成为蛋白质链。
在木瓜果实细胞中，成熟的木瓜蛋白酶由内质网（ER）合成并进入到高尔基体（Golgi）。
在内质网中，木瓜蛋白酶的氨基酸链被翻译后进一步经过蛋白质修饰，如糖基化和硫醇化等。
这些修饰过程可以增加蛋白质的稳定性和生物活性。
经过修饰后的木瓜蛋白酶进入高尔基体进行包装和排序。
在高尔基体，蛋白质会经过进一步的修饰和包装，形成成熟的蛋白质颗粒。
这些颗粒包含了大量的木瓜蛋白酶，并且被液泡所包裹。
这些液泡可以将成熟的木瓜蛋白酶从高尔基体运输到细胞膜的负责分泌的区域。
经过运输的成熟的木瓜蛋白酶颗粒和液泡最终融合在细胞膜上，并释放到细胞外环境中。
这个过程被称为分泌。
在此过程中，细胞膜扮演了关键角色，它通过与液泡融合，将木瓜蛋白酶包裹在囊泡内，并释放到细胞外环境。
尽管对木瓜蛋白酶的生物合成和分泌机制的研究已经有了一定的进展，但仍然有许多问题需要进一步探讨。
例如，目前尚不清楚木瓜蛋白酶的mRNA剪接和修饰等过程中所涉及的详细机制。
食品添加剂木瓜蛋白酶学院:食品与营养工程学院专业:食品加工班级:食工102学号:010*******姓名:王瑞真木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶又称木瓜酶，是一类疏基蛋白酶。
广泛存在与番木瓜的根、茎、叶和果实内，在未成熟的乳汁中含量最丰富。
它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特色，因此在食品、医药、饲料、皮革及纺织等行业得到广泛应用[1]。
一、木瓜蛋白的组分工业用的木瓜蛋白酶一般都是未经纯化的多酶体系。
由木瓜乳胶提取粗制酶,除含有木瓜蛋白酶外,还含有半耽氨酸蛋白酶、纤维素酶、溶菌酶、谷氨酞胺以及低相对分子质量的疏基化合物,还有葡萄糖酶等。
其中大部分都是疏基蛋白酶,主要的两种组分是木瓜凝乳酶和木瓜蛋白酶[2]。
二、木瓜蛋白的结构木瓜乳汁中四种已知半肤氨酸蛋白酶的一级结构具有高度同源性,其氨基酸数目和同源性比较如表1所示。
除chymopapain含有8个半肤氨酸外,其余三种酶都只含有7个半肤氨酸。
25位的流基是活性位点,不参与二硫键的形成（chymopapain的117位琉基也不参与二硫键的形成 ）,其余疏基以相同的方式形成三个二硫键，具有同样的保守性。
人们在不同清晰下得到了四种酶的X 一射线结构。
四种酶的肤链折叠方式相似,形成两个大小相、构型不同的区域。
一个是由a一螺旋构成的L一区,另一个是由大量反向平行的片层构成的R一区。
活性位点氨基酸残基Cys25,Asn179和His159 就位于这些区域的表面,其中Cys25位于 L一区,起始a一螺旋上。
木瓜蛋白酶家族的Cys25 ，Gly23，Gly65 形成的S。
亚部位是一个大口袋，对底物专一性影响较小；S亚部位由于酶不同其氨基酸组成不同,几何形状亦不同,对酶的性质影响较大[3]。
三、木瓜蛋白酶的提取工艺1.过去的常规提取方法木瓜蛋白酶最原始的提取方法是烘干法，就是在番木瓜浆液中加入保护剂，然后将浆液离心取上清液放置于鼓风干燥箱中，在55～60℃烘干，粉碎后即得到粗酶制品。
木瓜蛋白酶一、名称和属性广义的木瓜酶指的是木瓜蛋白酶（Papain）、木瓜凝乳蛋白酶（Chymopapain）、淀粉酶（Amylase）等等组成的复合酶，这里主要讨论木瓜蛋白酶。
木瓜蛋白酶（Papain），或简称木瓜酶、木瓜酵素，又称嫩精或木瓜粉，是存在于木瓜果实中的一种半胱氨酸酶，属于蛋白水解酶。
二、作用机制木瓜蛋白酶是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶。
它的外观为白色至浅黄色的粉末，微有吸湿性；木瓜蛋白酶溶于水和甘油，水溶液为无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。
木瓜蛋白酶是一种含巯基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，但几乎不能分解蛋白胨。
木瓜蛋白酶的剪切肽键的机制包括：在His-159作用下Cys-25去质子化，而Asn-158能够帮助His-159的咪唑环的摆放，使得去质子化可以发生；然后Cys-25亲核攻击肽主链上的羰基碳，并与之共价连接形成酰基－酶中间体；接着酶与一个水分子作用，发生去酰基化，并释放肽链的羰基末端。
三、应用情况木瓜酶具有纯天然、无毒无害、使用安全等功能特性，而被广泛用于食品、美容化妆品、医药保健品、日化品、饲料、皮革、纺织品等行业，并远销日本、韩国、美国、俄罗斯、马来西亚等国外市场。
国际上FAO／WHO把木瓜蛋白酶列为A级食品添加剂，其使用量可不受限制；中国食品添加剂标准化技术委员会也已批准将木瓜蛋白酶列入使用品种。
3.1食品行业木瓜蛋白酶主要被用于将硬的肉纤维（蛋白质组成）切断，并且该用途已经被南美洲的土著居民使用了数千年。
该酶是嫩肉粉（在大多数的超级市场都可以买到）的成分之一。
3.2生化行业木瓜蛋白酶在准备细胞培养液（cell culture）的第一步中被用于分离细胞。
用酶处理小组织块10分钟后，就可以将连接细胞的细胞外基质打断；然后再用蛋白酶抑制剂来停止反应，防止木瓜蛋白酶进一步裂解细胞本身；最后用Pasteur pipette将组织块打散为单细胞悬浮液。
木瓜蛋白酶的功能
木瓜蛋白酶是一种重要的酶类物质，具有多种功能。
它是由木瓜果实中提取的一种蛋白酶，可以在食品加工、医药、生物工程等领域发挥重要作用。
木瓜蛋白酶在食品加工中起到了重要的作用。
它可以帮助食品的消化和吸收，使食物更容易被人体吸收。
例如，在制作嫩肉酱、酱油等食品中，添加适量的木瓜蛋白酶可以使肉质更嫩滑，口感更好。
此外，在制作乳制品时，木瓜蛋白酶可以帮助乳制品凝固，提高产品的质量。
木瓜蛋白酶在医药领域也具有重要的应用价值。
它可以帮助人体分解蛋白质，促进消化吸收。
因此，木瓜蛋白酶常被用于治疗消化不良、胃病等消化系统疾病。
木瓜蛋白酶在生物工程领域也发挥着重要的作用。
它可以作为一种重要的工具酶，用于基因工程、蛋白质工程等领域。
通过对木瓜蛋白酶的研究和改造，科学家可以设计出更具活性、稳定性和特异性的木瓜蛋白酶，用于生物工程的研究和应用。
木瓜蛋白酶具有多种功能，在食品加工、医药、生物工程等领域发挥着重要作用。
它不仅可以改善食品的口感和质量，还可以帮助人体消化吸收，治疗消化系统疾病，具有抗炎、镇痛、抗菌等作用，同时也是生物工程领域的重要工具酶。
木瓜蛋白酶的研究和应用将
进一步推动食品科学、医药领域的发展，为人类健康和生活品质的提升做出贡献。
木瓜蛋白酶水解igg分子摘要：1.木瓜蛋白酶简介2.木瓜蛋白酶对IgG分子的水解作用3.木瓜蛋白酶水解IgG分子的实验方法4.木瓜蛋白酶在水解IgG分子中的应用5.总结正文：【1.木瓜蛋白酶简介】木瓜蛋白酶（Papain）是一种来源于木瓜的巯基蛋白酶，具有广泛的应用前景。
它是一种高效、特异性强的蛋白酶，可以水解蛋白质分子。
由于其温和的催化条件和相对简单的操作流程，木瓜蛋白酶在生物化学和分子生物学研究中备受关注。
【2.木瓜蛋白酶对IgG分子的水解作用】IgG是免疫球蛋白的一种，具有抗原结合活性，参与机体免疫反应。
木瓜蛋白酶可以特异性地识别和水解IgG分子中的某些部位，从而影响其生物活性。
研究发现，木瓜蛋白酶对IgG分子的水解作用具有种属特异性，不同物种的IgG分子可能被水解的部位有所不同。
【3.木瓜蛋白酶水解IgG分子的实验方法】实验过程中，首先需要提取IgG分子，然后采用适当的方法纯化。
接下来，通过酶促反应，将木瓜蛋白酶与IgG分子混合，观察水解反应的进程。
可以通过电泳、光谱分析等方法检测水解产物，从而确定木瓜蛋白酶对IgG分子的水解效果。
【4.木瓜蛋白酶在水解IgG分子中的应用】木瓜蛋白酶水解IgG分子的研究在生物化学、分子生物学和免疫学等领域具有广泛应用。
例如，通过研究木瓜蛋白酶对IgG分子的水解作用，可以揭示免疫系统中抗原-抗体复合物的形成与降解机制。
此外，在药物研发中，木瓜蛋白酶水解IgG分子有助于优化药物分子设计，提高药物的生物利用度和疗效。
【5.总结】木瓜蛋白酶作为一种重要的生物催化剂，对IgG分子的水解作用具有显著的特异性和高效性。
研究木瓜蛋白酶水解IgG分子不仅有助于深入了解免疫系统的相关机制，还为药物研发和生物化学研究提供了新的思路和方法。
温度对木瓜蛋白酶活性的影响实验目的1.1掌握蛋白酶活性的测定方法1.2 理解酶促反应的最佳温度、酶的热稳定性1.3 了解蛋白酶的催化反应机理2实验原理酶既具备一般非生物催化剂的加快反应速度的功能，又具有一般催化剂所不具备的生物大分子的特征。
酶与一般非生物催化剂相比，具有以下几个特点：a.酶的主要成分是蛋白质。
b.酶促反应所需的活化能较低。
c.酶的催化效率非常高。
d.酶具有高度的专一性。
影响酶作用的因素有酶的浓度、底物浓度、pH、温度、激活剂及抑制剂等。
木瓜蛋白酶属于中性蛋白酶，它的催化作用受温度的影响较大。
在最适温度下，酶的反应速度最高。
大多数动物酶的最适温度为37-40℃，植物酶的最适温度为50-60℃。
另外，酶的热稳定性也是酶性质研究的重要内容。
酶对温度的稳定性与其存在形式有关。
有些酶的干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显的改变，但在100℃的溶液中却很快地完全失去活性，但不能使酶失活。
木瓜蛋白酶是一种具有广泛底物专一性的巯基类蛋白酶。
有很强的分解蛋白质的能力，此外还具有水解酰胺键和酯键的特性。
由于它具有适用pH范围广，热稳定性好等优点，广泛应用于食品，工业，医药生产中。
位于木瓜蛋白酶活性中心的巯基（-SH）具有很强的亲核性，一般是蛋白质分子中最容易反应的侧链基团，极易被氧化形成二硫键（-S-S-）而导致木瓜蛋白酶失活。
3 主要仪器与药品3.1试剂：钨酸钠、钼酸钠、磷酸、浓盐酸、硫酸锂、浓溴水、无水碳酸钠、三氯乙酸、NaOH、磷酸二氢钠、酪蛋白、酪氨酸、木瓜蛋白酶福林试剂的制备：于250mL磨口回流装置中加入钨酸钠10.0g、钼酸钠2.50g、蒸馏水70.0mL、85%磷酸5.0mL、浓盐酸10.0mL，小火沸腾回流10h，取下回流冷凝管，在通风橱中加入硫酸锂5.0g、蒸馏水5.0mL和数滴浓溴水（99%），再微沸15min，以除去多余的溴。
冷却后仍有绿色，再加入数滴溴水，煮沸，冷却，加水定容至100mL。
混匀，过滤。
制得的试剂呈金黄色，贮存于棕色瓶内。
（使用液：1份福林试剂与2份水混合，摇匀。
）0.4mol/L Na2CO3溶液：称取无水碳酸钠42.4g，用水溶解并定容至1000mL。
0.4mol/L 三氯乙酸溶液：称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000mL。
0.5mol/L NaOH溶液：称取NaOH固体2.0g，用水溶解并定容至100mL。
1mol/L HCl溶液：量取浓盐酸（13mol/L）7.6mL，用水稀释至100mL。
缓冲溶液（pH=7.0）:称取磷酸二氢钠3.12g，加水溶解并定容至1000mL。
最后滴加浓NaOH调节pH为7.0。
10mg/mL 酪蛋白溶液：称取酪蛋白1.000g，精确至0.001g，用少量0.5mol/L NaOH溶液湿润后，加入pH=7.0的缓冲溶液80mL，在沸水浴中边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，转入100mL容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。
此溶液贮存于冰箱。
100μg/mL L-酪氨酸标准溶液：（1）称取预先于105℃干燥至恒重的L-酪氨酸0.1000g，用1mol/L HCl 60mL溶解后定容至100mL，即为1mg/mL酪蛋白标准溶液。
（2）吸取1mg/mL 酪蛋白标准溶液10.00mL，用0.1mol/L HCl溶液定容至100.0mL，即得到100μg/mL L-酪蛋白标准溶液。
1.0mg/mL 木瓜蛋白酶：准确称取木瓜蛋白酶50.0mg，用pH=7.0的缓冲溶液定容至50.00mL，于4℃下保存。
3.2仪器：250mL圆底烧瓶、回流冷凝管、电热套、棕色试剂瓶、50mL容量瓶、100mL 容量瓶、1000mL容量瓶、电子天平、分析天平、冰箱、试管、分光光度计、恒温水浴4 实验方法与步骤4.1酸标准曲线的绘制：取6支干燥的试管按照表1分别移取相应溶液，置于40℃水浴中显色20min，取出，用分光光度计于波长680nm，1.00cm比色皿，以不含酪氨酸的0号管为空白，分别测定其吸光度，以吸光度A为纵坐标，酪氨酸的浓度C为横坐标，绘制标准曲线。
表1 酪氨酸标准曲线溶液的配制管号酪蛋白标准溶液的浓度c/(μg/mL)100μg/mL L-酪氨酸标准溶液的体积V/mL水的体积V/mLNa2CO3溶液的体积V/mL福林试剂的体积V/mL0 0 0.00 1.00 5.00 1.001 10 0.10 0.90 5.00 1.002 20 0.20 0.80 5.00 1.003 30 0.30 0.70 5.00 1.004 40 0.40 0.60 5.00 1.005 50 0.50 0.50 5.00 1.004.2 木瓜蛋白酶活性测定：4.2.1先将酪素溶液放入40℃恒温水浴中，预热5min。
4.2.2按下列程序操作：试管A（空白）↓加酶液1.00mL↓40℃ 2min加三氯乙酸2.00mL↓40℃ 10min加酪蛋白1.00mL↓离心（每分钟2500转）5min试管B（酶试样）↓加酶液1.00mL↓40℃ 2min加酪蛋白1.00mL↓40℃ 10min加三氯乙酸2.00mL↓离心（每分钟2500转）5min↓ 过滤 ↓取1.00mL 滤液↓加碳酸钠溶液5.0mL↓加福林试剂使用液1.00mL↓40℃ 显色20min于680nm 波长，用1cm 比色皿测其吸光度 ↓ 过滤 ↓取1.00mL 滤液↓加碳酸钠溶液5.0mL↓加福林试剂使用液1.00mL↓40℃ 显色20min于680nm 波长，用1cm 比色皿测其吸光度4.2.3 酶活力的定义：在上述条件下，每分钟水解酪蛋白产生1μg 酪氨酸，定义为1个蛋白酶活力单位（U ）。
蛋白酶活力=)/(00.1104sin mg U C C emzymee tyro ⨯⨯⨯式中：C tyrosine —由样品测得A 680值，查标准曲线得相当的酪氨酸浓度（μg/mL ）； 4—4毫升反应液取出1mL 测定（即4倍）； 10—反应10min ；1.0×10-3—取酶试液1mL ；C emzyme —木瓜蛋白酶浓度（mg/L ）4.2 酶促反应动力学：按照表2分别配制不同浓度的酪蛋白溶液，然后测定40℃不同底物浓度下的木瓜蛋白酶的活力。
以1/V i 对1/[S]作图，可得Lineweaver-Burk 图，由直线的斜率和截距可求K m 和V max 值。
表2 不同浓度酪蛋白溶液配制管号 酪蛋白溶液的浓度c/(mg/mL)10mg/mL 酪蛋白溶液的体积V/mLpH=7.0的缓冲溶液的体积V/mL1 1 0.40 0.362 2 0.80 0.3234 0.16 0.24 4 6 0.24 0.165 8 0.32 0.80 6104.004.4 最适反应温度：改变反应体系的温度测定其酶活。
以40℃为起点，每升10℃作一个测试，直至酶活力明显下降为止。
以吸光度A 为纵坐标、温度T 为横坐标绘制曲线。
4.5 热稳定性的测定：将酶液分别在60℃、70℃、80℃温度下受热，每隔10min 分别取出少量酶液，于冰箱中冷却至4℃，然后测定它们的酶活。
为吸光度A 为纵坐标、时间t 为横坐标绘制曲线。
5 实验数据记录与处理5.1酪氨酸标准曲线的绘制图-1酪氨酸标准曲线5.2木瓜蛋白酶活性测定管号酪蛋白溶液的浓度c/(mg/mL) 吸光度A酪氨酸浓度c/(μg/mL)蛋白酶活力1 0.25 0.073 0.017 0.00682 0.5 0.217 0.267 0.10683 1.0 0.267 0.349 0.13964 1.5 0.296 0.402 0.16085 2.0 0.322 0.449 0.17966 2.5 0.338 0.476 0.1904图-2 40℃不同底物浓度下的木瓜蛋白酶的活力图-3 Lineweaver-Burk图1/Vmax=14.7mL.min.μg-1 km/Vmax=13710.8 minVmax=7.09×10-2 μg.mL-1.min-1\ Km =934.6μg.mL-15.3最适反应温度图-4木瓜蛋白酶催化最适反应温度5.4热稳定性的测定图-5 60℃木瓜蛋白酶热稳定性图-6 70℃木瓜蛋白酶热稳定性图-7 80℃木瓜蛋白酶热稳定性6．实验结果与讨论6.1 酪氨酸标准曲线的绘制酪氨酸标准曲线的绘制图如图-1所示，所得标准曲线方程y=0.56961x+0.06699, R 2=0.98934.相对偏差较小，较符合实验要求。
6.2 木瓜蛋白酶活性测定 根据图2所示，底物浓度较小时，木瓜蛋白酶的催化活力随底物酪蛋白的浓度的升高而升高；当底物酪蛋白的浓度升高至一定值时，木瓜蛋白酶的催化活力不再随底物浓度的升高而变化；此时，该实验条件下，木瓜蛋白酶的活性基本接近最大值。
6.3 酶促反应动力学根据图2可知，当底物的浓度很低时，反应速率的增加和底物浓度的增加呈线性关系；但随着底物浓度继续增加，反应速度的增加就比较慢；当底物浓度增加某种程度时，反应速度就不增加，趋向接近最大反应速率的现象。
显然，这是属于单底物酶促反应动力学的特点，明显区别于化学催化剂催化。
同时较符合Victor Henri 提出的，酶催化底物转化产物之前，底物与酶首先形成中间复合物，最后由中间复合物转变成产物并释放出酶的观点。
即E+S ES E+P 模型。
40℃时，测得不同底物浓度下的木瓜蛋白酶的活力。
以1/V i 对1/[S]作图，可得Lineweaver-Burk 图，由直线的斜率和截距可求得Vmax=7.09×10-2μg .mL -1 .min -1和 Km =934.6μg/mL 。
根据文献可知木瓜蛋白酶在60℃，Km 值分别为2.53mg·ml -1，而本实验中的Km =934.6μg/mL 明显小于文献值；其原因40℃并不是木瓜蛋白酶最适反应温度60℃左右，会很大程度影响Km ，此外还受pH.离子强度等影响也将导致与文献值存在较大偏差。
7．思考题7.1福林试剂于酪氨酸显色的原理是什么？福林试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色(钼蓝和钨蓝混合物)，由于酪氨酸分子中有含酚基，可使酪氨酸与福林试剂呈上述反应，且蓝色的深浅与液中酪氨酸量成正比。
7.2根据酶活力的定义，如何推导出酶活力的计算公式？酶活力的定义：酶催化一定化学反应的能力。
在特定条件下，1分钟内转化1微克底物所需的酶量为一个活力单位(U)。
酶活力=)/(n mg U C V t C emzyme⨯⨯⨯底物式中：C 底物—由样品测得A 680值，查标准曲线得相当的底物浓度（μg/mL ）； n —n 毫升反应液取出1mL 测定（即n 倍）； t —反应时间 min ；V —取酶试液体积mL ；C emzyme —蛋白酶浓度（mg/L ）7.3lineweaver-buck 图中直线的斜率和截距分别是什么？ 截距为1/Vmax ；斜率为km/Vmax7.4最适温度下酶的稳定性最高吗？如何理解温度对酶的影响？不一定，酶的催化作用受温度的影响很大，一方面与一般化学反应一样，提高温度可以增加酶促反应的速度。
