相对荧光定量法检测人体2',5'-寡聚腺苷酸合成酶相对表达水平

分生必背大题1.写出乳糖操纵子的结构并试述乳糖单独存在和葡萄糖、乳糖共存两种情况下乳糖操纵子基因表达的调节过程。

乳糖操纵子的结构组成：含有三个结构基因；一个操纵序列o和启动序列p以及分解物激活蛋白（或CAP）结合位点；编码阻遏蛋白的调节基因i。

调节过程：乳糖单独存在使转运入细胞产生的半乳糖，作为诱导剂结合阻遏蛋白使其变构与操纵序列分离，基因开放，此时CAP发挥正性调控作用，Lac操纵子被诱导表达，细胞利用乳糖；葡萄糖、乳糖共存时，乳糖操纵子基因被半乳糖诱导开放，但由于葡萄糖的存在，cAMP 浓度降低，失去了CAP的正性调控，乳糖操纵子基因不能表达，表现为细胞优先利用葡萄糖。

2.以β肌球蛋白基因的克隆与表达为例，阐述基因工程的主要步骤(可画图加以说明)①目的基因的获取;②克隆载体的选择和构建;③外源基因与载体的连接;④重组DNA导入受体菌;⑤重组体的筛选;⑥克隆基因的表达RT-PCR肌球蛋白基因连接目的基因和载体Western-blot鉴定筛选表达阳性菌落的目的蛋白，提取纯化鉴定3.已获得人体某一细胞总mRNA,欲从该mRNA中克隆某一基因，且将该目的基因在大肠杆菌中表达，以获得该基因表达的蛋白质。

请写出利用基因工程方法获得该目的基因表达的蛋白质的步骤以及鉴定该目标蛋白的方法。

、将该mRNA逆转录获得cDNA → 以cDNA为模板进行目标基因PCR扩增，且在引物两侧设计酶切位点→ PCR扩增产物双酶切→ 与载体连接，构建重组体→ 重组体导入宿主细胞→重组体的筛选→克隆基因的表达→ 用western blot方法鉴定该重组蛋白。

4.DNA复制如何保证其保真性①遵守严格的碱基配对规律②聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能③复制出错时DNA-pol I的及时校读功能5.为什么野生型P53蛋白被冠以“基因卫士”的称号?P53基因定位于17号染色体p13，有11个外显子，转录2.8kb mRNA，编码蛋白P53，是核内磷酸化蛋白。

2–δδct公式原理
2-ΔΔCt（2-ΔΔCt method）是一种常用于基因表达分析的相对定量方法。

它是基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术的数据分析方法，用于比较不同样本之间的基因表达水平差异。

该公式的原理如下：
1. Ct值，Ct值是荧光定量PCR实验中，检测到荧光信号超过背景噪音的阈值周期数。

Ct值越小，说明目标基因的起始量越高。

2. ΔCt值，ΔCt值是相对表达量的计算，表示目标基因的Ct 值减去参考基因的Ct值。

参考基因通常是在不同样本中表达稳定的基因。

3. ΔΔCt值，ΔΔCt值是比较不同样本之间的基因表达水平差异的计算，表示目标样本的ΔCt值减去参考样本的ΔCt值。

ΔΔCt值越小，说明目标基因在目标样本中的表达水平相对较低。

4. 2-ΔΔCt值，2-ΔΔCt值是将ΔΔCt值转化为相对表达量的计算。

它表示目标样本的相对表达量相对于参考样本的相对表达
量的倍数。

如果2-ΔΔCt值为1，表示目标样本和参考样本的表达量相等；如果2-ΔΔCt值大于1，表示目标样本的表达量高于参考样本；如果2-ΔΔCt值小于1，表示目标样本的表达量低于参考样本。

通过使用2-ΔΔCt公式，可以相对定量地比较不同样本之间的基因表达水平差异，而不需要绝对定量的标准曲线。

这种方法在生物医学研究中广泛应用，特别是在基因表达调控、药物研发和疾病诊断等领域。

需要注意的是，2-ΔΔCt方法的前提是基因的放大效率在不同样本中是相似的，并且参考基因在各个样本中的表达稳定。

因此，在使用该方法时，选择合适的参考基因和进行合适的实验设计非常重要，以确保结果的准确性和可靠性。

抗病毒蛋白（12种）(Antiviral protein)摘要：病毒进入机体后，能刺激人体的巨噬细胞、淋巴细胞以及体细胞产生干扰素。

干扰素具有广谱抗病毒作用，是抗病毒免疫中重要的蛋白质，它能诱生抗病毒白蛋白来阻止新病毒的产生。

但在机体内还存在着其它很多种具有抗病毒作用的的蛋白质，在抗病毒免疫中发挥重要的作用。

本文就主要介绍了其它种类的抗病毒蛋白。

关键字：抗病毒蛋白;作用机制Abstract: After the virus enters the body, wich can stimulate macrophages, lymphocytes and cells to produce interferon.which is the important proteins that can induce an antiviral albumin to prevent the generation of new viruses with broad-spectrum antiviral activity. However, in vivo there is a w variety of other proteins that having antiviral activity and play an important role in anti-viral immunity.This article introduces the other types of anti-viral proteins.Key Word: antiviral protein; mechanism of action一、干扰素（Interferon,IFN）1、干扰素的分类病毒进入机体后，能刺激人体的巨噬细胞、淋巴细胞以及体细胞产生干扰素。

干扰素具有广谱抗病毒作用。

根据干扰素产生的来源和结构不同，分为I型干扰素（IFN-α和IFN-β）和II型干扰素（IFN-γ）。

利用实时定量PCR和2－△△CT法分析基因相对表达量METHODS 25, 402–408 (2001)Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitati ve PCR and the 2－△△CT MethodKenneth J. Livak* and Thomas D. Schmittgen¶,1*Applied Biosystems, Foster City, California 94404; and ¶ Department of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy,Washington State University, Pullman, Washington 99164-6534摘要：现在最常用的两种分析实时定量PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。

绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数；相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异。

2－△△CT方法是实时定量P CR 实验中分析基因表达相对变化的一种简便方法，即相对定量的一种简便方法。

本文介绍了该方法的推导，假设及其应用。

另外，在本文中我们还介绍了两种2－△△CT衍生方法的推导和应用，它们在实时定量 PCR 数据分析中可能会被用到。

关键词：反转录PCR 定量PCR 相对定量实时PCR Taqman反转录 PCR （RT-PCR ）是基因表达定量非常有用的一种方法（1 - 3 ）。

实时PCR 技术和RT-PCR 的结合产生了反转录定量 PCR 技术（4 ,5 ）。

实时定量PCR 的数据分析方法有两种：绝对定量和相对定量。

绝对定量一般通过定量标准曲线来确定我们所感兴趣的转录本的拷贝数；相对定量方法则是用来确定经过不同处理的样品目标转录本之间的表达差异或是目标转录本在不同时相的表达差异。

2 -δδct 相对定量法
2 -δδct相对定量法是一种常用的基因表达定量方法。

它使用实时荧光定量PCR（qPCR）技术来测量基因的表达水平，并相对于参考基因或对照样品进行比较分析。

在这种方法中，首先需要选择一个合适的参考基因，该基因应具有在实验条件下稳定的表达水平。

然后，通过qPCR测量感兴趣的基因和参考基因的Ct值（阈值循环数）。

Ct值是表示当荧光信号达到特定阈值时样品中的目标基因或参考基因的PCR循环数。

接下来，计算相对表达量的差异（2-ΔΔCt）。

ΔCt是目标基因Ct值减去参考基因的Ct值，表示目标基因与参考基因的相对表达水平差异。

2-ΔΔCt为ΔCt的对数转化，表示目标基因在不同样品之间的相对表达量差异。

通过使用2-δδct相对定量法，研究人员可以相对定量地比较不同样品中的基因表达水平，例如，在实验组与对照组之间比较基因表达差异。

这种方法广泛应用于生物医学研究和基因功能研究等领域。

2’-5’寡聚腺苷酸合成酶(OAS)的活化及抗病毒作用研究进展摘要】目的2’-5’寡聚腺苷酸合成酶(2’-5’oligoadenylates synthesis,OAS)是一种干扰素诱导产生的抗病毒蛋白(antiviral protein,AVP)。

OAS在机体的抗病毒免疫过程中发挥着重要作用。

在信号传导中，OAS通过介导细胞内信号转导而发挥抗病毒作用，对多种RNA病毒和部分DNA病毒均有抑制作用。

活化的OAS发挥对病毒RNA的水解作用，以阻止病毒复制。

OAS蛋白具有极大的临床应用价值和广阔的研究前景。

近年来国内外关于OAS的研究成果不断出现，现就OAS的研究现状进行综述【关键词】OAS 信号转导病毒【Abstract】2’-5’oligoadenylates synthesis(OAS)is a kind of interferon inducedprotein,antiviral antiviral protein(AVP).OAS antiviral immune process plays an important role.In signal transduction of OAS,mediated by intracellular signalling the role.In recent years,the research results about the OAS at home and abroad,we reviewed the research status of OAS.【Key words】OAS Signal transduction virus病毒入侵机体后，可诱导机体产生多种细胞因子(CK)，CK在机体抗病毒免疫中起着非常重要的作用，在CK中，干扰素(IFN)是一种人类和动物细胞在对各种病毒等因素刺激的应答中产生的具有多种功能的一类蛋白或糖蛋白，具有广谱抗病毒及免疫调节等作用[1]。

荧光定量pcr基因相对表达量计算方法Quantitative Polymerase Chain Reaction (qPCR) is a widely used technique in molecular biology to measure gene expression levels. It is often used to analyze the relative expression of genes in different samples. For researchers studying gene expression, calculating the relative gene expression levels is crucial for understanding the biological processes underlying various cellular activities.荧光定量PCR（qPCR）是分子生物学中广泛使用的一种技术，用于测量基因表达水平。

它通常用于分析不同样本中基因的相对表达量。

对于研究基因表达的研究人员来说，计算基因的相对表达水平对于理解各种细胞活动背后的生物过程至关重要。

One common method for calculating gene expression is the 2^-ΔΔCT method. This method involves first determining the threshold cycle (CT) values for both the gene of interest and the reference gene in each sample. The ΔCT value is then calculated by subtract ing the reference gene CT value from the gene of interest CT value. The ΔΔCT value is obtained by subtracting the ΔCT value of the control sample from the ΔCT value of the experimental sample.一种常见的计算基因表达的方法是2^-ΔΔCT方法。

pcr的相对表达量的取值范围PCR（聚合酶链式反应）是一种在体外将特定DNA片段快速扩增的技术。

在基因表达研究中，我们通常会通过实时定量PCR（qPCR）来定量某个基因在样本中的相对表达量。

相对表达量是一个重要的参数，它可以帮助我们了解基因在生物体不同组织、不同发育阶段或者不同处理条件下的表达差异。

首先，我们来定义一下相对表达量。

相对表达量是指目标基因在某个样本中的表达水平与内参基因（也称为参照基因，通常为管家基因，如β-actin或GAPDH等）在同一样本中的表达水平的比值。

通过计算相对表达量，我们可以消除实验操作和样本间差异带来的影响，更准确地比较不同样本或处理条件下基因表达的差异。

接下来，我们来探讨一下PCR相对表达量的取值范围。

通常情况下，相对表达量的取值范围在0到无穷大之间。

当相对表达量为0时，表示目标基因在样本中的表达水平与内参基因相比为零，这意味着目标基因在这个样本中没有表达。

当相对表达量为1时，表示目标基因在样本中的表达水平与内参基因相同，这表明目标基因在这个样本中的表达与参考基因相当。

当相对表达量大于1时，表示目标基因在样本中的表达水平高于内参基因，说明目标基因在这个样本中得到了更强烈的表达。

相反，当相对表达量小于1时，表示目标基因在样本中的表达水平低于内参基因，这意味着目标基因在这个样本中的表达相对较弱。

值得注意的是，PCR相对表达量的取值范围会受到多种因素的影响。

实验操作因素包括样本提取与纯化、PCR扩增条件以及数据分析方法等。

生物学因素则包括基因本身的特性、样本来源与处理以及实验分组与设计等。

因此，在分析PCR相对表达量时，我们需要结合实际情况来正确理解其取值范围。

最后，为了更好地理解PCR相对表达量的取值范围，我们还需要注意以下几点：1.结合实际研究背景分析。

不同的研究目的和实验设计可能对相对表达量的取值范围有不同的要求。

因此，在分析数据时，我们需要充分考虑实验目的和实际情况。

荧光定量PCR技术检测人类疾病基因为了确定人们是否患有某种疾病或是否有可能患有某种疾病，现代医学采用了许多不同的技术。

其中一项非常有效的技术就是PCR技术。

PCR技术是一种分子生物学技术，用于在DNA或RNA样本中扩增或检测特定位点的序列，以解决一些医学疾病问题，其中包括研究遗传性疾病、检测病原体和肿瘤等。

荧光定量PCR技术（qPCR技术）是PCR技术的一种扩展，它通过在PCR反应中添加荧光染料来定量PCR产物。

荧光定量PCR技术可以更加准确地检测PCR 反应中的DNA数量，进而确定是否存在目标DNA。

这种技术也被广泛应用于基因表达、药物筛选、病原体检测和组织移植等方面。

在基因体内，相邻两个基因上游序列RAFTK和下游序列ATK的不规则截断发生于某些肿瘤中。

在这种情况下，PCR技术可以用来检测ATK基因和RAFTK 基因间的这一截断，以确认肿瘤是否存在。

荧光定量PCR技术可以用来直接定量PCR反应的结果，进一步提高诊断肿瘤的准确性。

荧光定量PCR技术还被广泛用于抑制RNA表达水平的基因研究中。

生物学研究人员可以利用荧光定量PCR技术来检测在RNA分子中加入小干扰RNA （siRNA）或其他RNA类似物的后续效应。

通过检测RNA中的定量荧光物质，研究人员可以确定siRNA的抑制效应。

这种方法可以用来研究肿瘤基因神经纤维瘤素和磷脂激酶C（PI3K）等基因的抑制效应。

荧光定量PCR技术具有非常高的特异性和灵敏度，这使得它在临床和实验室中都得到广泛应用。

为了提高诊断效果，研究人员正在利用荧光定量PCR技术进行基因测序。

这种方法可以非常快速且准确地对患者的基因进行测序，提供更加详细和精确的基因信息。

因此，荧光定量PCR技术在人类疾病基因测序和基因治疗中具有广泛的应用前景。

总之，荧光定量PCR技术是一种强大而精确的工具，可用于检测人类疾病基因，研究基因表达和RNA处理。

随着技术的不断发展和改进，我们相信它将会更好地服务于临床和实验室的各个领域。

-405 •第30卷第5期2621年5月新乡医学院学报Jourual of Xiuxiang Medical UniversityVol. 30 No. 3May 2621♦oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・oo ・I 本文引用：王寅彪，冯继伟,陈礼朋，等.2S0寡聚腺苷酸合成酶的抗病毒作用及机制研究进展［J ］.新乡医学院：♦ 学报,4721 ,30(5) ：285E07.DOI ：r 0.6703/7xyxyxP.2721.65.610. : 【综述】♦oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・2'P'寡聚腺苷酸合成酶的抗病毒作用及机制研究进展王寅彪6冯继伟6陈礼朋/宋 杰6吴卫东-(-.新乡医学院公共卫生学院，河南 新乡453043;2.固始县动物疫病预防控制中心，河南 信阳425202)摘要：2'E ，寡聚腺苷酸合成酶(OAS )是干扰素诱导产生的重要抗病毒蛋白,可利用细胞内游离的三磷腺苷合成2'6'-磷酸二酯键连接的寡聚腺苷酸(2EAs)，后者活化核糖核酸酶L(RNase L)，进而抑制DNA 病毒和RNA 病毒感染。

OAS 也是细胞内识别病毒双链核糖核酸(UsRNA 、的模式识别受体,能够识别具有一定长度或基序特征的病毒UsRNA 分子，避免自身免疫应答产生，维持细胞稳态。

本文对活化OAS 蛋白的SRNA 特征、活化机制、OAS 的抗病毒作用以及病毒逃逸OAS-RNase L 通路的作用机制进行总结,以期为后续研究提供参考。

荧光定量相对表达量
荧光定量相对表达量是一种定量PCR（qPCR）技术，用于测量基因在不同样品中的相对表达水平。

该技术利用荧光探针对PCR产物进行荧光信号检测，从而精确地测定基因在不同样品中的表达水平。

荧光定量相对表达量分析通常包括以下步骤：
1.设计引物和荧光探针，保证其特异性和灵敏性。

2.提取RNA并转录成cDNA。

3.利用qPCR方法测定每个样品中基因的荧光信号强度，并标准化至内部参照基因。

4.计算相对表达量，将每个样品中基因的荧光信号强度与参照样品进行比较。

相对表达量的计算可以采用2^-ΔΔCt方法，即先计算每个样品中目标基因Ct值与内部参照基因Ct值之差（ΔCt），然后计算每个样品相对于参照样品的ΔCt值之差（ΔΔCt）。

最终，将ΔΔCt值带入公式2^-ΔΔCt中，即可计算相对表达量。

pcr的相对表达量的取值范围摘要：1.PCR 技术的基本原理2.相对表达量的概念3.相对表达量的取值范围4.影响相对表达量取值范围的因素5.相对表达量在实际应用中的意义正文：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）是一种在体外将特定DNA 片段快速扩增的技术。

通过特定引物与模板DNA 的结合，以及DNA 聚合酶的作用，使得目标DNA 片段在短时间内得到大量复制。

在PCR 技术中，我们通常会关注一个重要的参数，那就是相对表达量。

相对表达量是指在实验过程中，目标基因与内参基因（也称为参照基因，通常是稳定表达的基因，如β-actin 或GAPDH 等）的表达量比值。

这个比值可以反映目标基因在实验组与对照组之间的表达差异，从而为研究基因在生物过程中的作用提供依据。

相对表达量的取值范围通常是无限大到无限小。

理论上，如果目标基因在实验组中的表达量是内参基因的100 倍，那么相对表达量为100。

同样地，如果目标基因在实验组中的表达量是内参基因的1/100，那么相对表达量为0.01。

然而，在实际操作过程中，由于PCR 反应的效率、扩增片段的长度等因素的影响，相对表达量的取值范围可能会受到一定的限制。

影响相对表达量取值范围的因素主要有以下几点：1.PCR 反应的效率：不同的PCR 反应体系对目标基因和内参基因的扩增效率可能不同，从而导致相对表达量的上限和下限受到限制。

2.扩增片段的长度：通常情况下，扩增片段的长度会影响PCR 的效率。

较长的扩增片段可能使得相对表达量的上限降低，而较短的扩增片段则可能导致相对表达量的下限升高。

3.内参基因的选择：不同的内参基因在表达水平和稳定性方面可能存在差异，因此选择合适的内参基因对相对表达量的取值范围也有一定影响。

相对表达量在实际应用中具有重要意义。

通过比较不同实验组之间的相对表达量，我们可以了解目标基因在不同处理条件下的表达变化，从而为研究基因功能和调控机制提供依据。