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关于高效液相色谱的流动相使用的注意事项高效液相色谱的流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。
它是影响分离的一个非常重要因素。
在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的主要工作。
一、流动相溶剂的选择1.所选用的流动相溶剂要有一定的化学稳定性，不与固定相和样品组分起反应，其纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求。
2.溶剂应当不干扰检测器的工作，溶剂应与检测器匹配，选择不影响检测器正常工作应选择在测定波长范围内无吸收的流动相。
3.在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。
4.溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5.从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。
二、流动相溶剂使用的注意事项1.流动相溶剂应选择HPLC的溶剂或依此为标准的溶剂。
流动相使用前用0.45μm 滤膜过滤、脱气，清除微粒和灰尘。
在送液泵内，为了防止杂物（固体）进入流路，装有吸滤器，但网孔径为10μm，比此更小的颗粒仍然可通过，这会导致流路和柱子堵塞和污染。
为此，建议常用0.45μm滤膜过滤。
流动相溶剂须经脱气，如不脱气，在溶剂混合时，或压力温度变化时容易产生大量气泡，会导致泵误动作和输液不畅，检测器产生噪声信号等。
2.流动相恢复到室温后使用。
流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基线水平很难稳定，特别是发生漂移，也容易产生气泡等现象。
水与有机溶剂混合时，混合液变化大，往往会与室温相差很大，务必注意。
3.做HPLC流动相的试剂应用HPLC级的、水应用二次蒸馏水，水相流动相需经常更换，防止长菌变质。
使用去离子水、针剂水、纯净水（炊用）并不合适、尤其是做梯度洗脱时，水中的不纯物会成为鬼峰，从而干扰分析结果。
4.流动相的pH值过高或过低，流动相使用纯水，使用高浓度磷酸盐缓冲溶液，使用离子对试剂等，均可能造成色谱柱填料被化学破坏，这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的5.用缓冲盐做流动相时，在使用前和使用后都要用水清洗流路，绝对禁止将缓冲溶液留在流路中静置过夜或更长时间。
万通离子色谱流动相配制注意事项1.选择合适的溶剂：在配制离子色谱流动相前，首先要选择合适的溶剂。
一般来说，溶剂要具备一定的溶解能力，能够将需要分析的样品溶解，并且不能与固定相发生化学反应。
常用的溶剂包括水、乙腈、甲醇等。
2.确定适当的流速：流速是影响色谱分离的一个重要因素。
过高或过低的流速都会对分离效果产生不良的影响。
一般来说，流速过高会导致峰形变宽、尾峰扩散，流速过低会导致分离时间过长。
因此，在配制离子色谱流动相时需要根据实际需求确定适当的流速。
3.pH值的调节：pH值是离子色谱中一个非常重要的参数。
在配制离子色谱流动相时，要根据分析物的特性和分析需求来确定适当的pH值。
一般来说，pH值的调节可以通过溶剂的选择、缓冲溶液的添加等方式进行。
4.缓冲剂的选择：缓冲剂的选择也是离子色谱流动相配制的重要步骤之一、缓冲剂的选择要考虑其缓冲范围、溶解性、稳定性等因素。
常用的缓冲剂包括磷酸盐、醋酸盐等。
5.溶解气体的去除：在配制离子色谱流动相过程中，要注意去除其中的溶解气体。
溶解气体的存在会对离子色谱仪的运行产生一定的影响，包括峰形变宽、气泡生成等问题。
一般可以通过使用超声波清洗溶液、用氮气替代空气等方式去除溶解气体。
6.过滤和除气：配制离子色谱流动相前，需要对溶剂进行过滤和除气处理。
过滤可以去除其中的杂质和微粒，提高流动相的纯度；除气可以去除其中的氧气和二氧化碳，减少对离子色谱仪的影响。
7.定期检查：使用离子色谱仪前，要定期检查流动相的状态，包括pH值、流速等参数的调整，加装缓冲剂的情况等。
同时，要检查流动相中的溶解气体和杂质的情况，确保流动相的质量。
总之，配制离子色谱流动相是一个非常重要的步骤，需要注意溶剂的选择、流速的调节、pH值的调整、缓冲剂的选择等因素。
同时，要定期检查流动相的状态，确保流动相的质量。
只有做好流动相的配制，才能保证离子色谱分析的准确性和可靠性。
液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分离和分析方法，它使用液体作为流动相，在不同组分之间进行分配和分离。
在液相色谱分析中，流动相是至关重要的，它直接影响分离效果、分析速度和结果准确度。
合理选择液相色谱流动相并注意使用时的一些问题是非常重要的。
一、液相色谱流动相的选择依据1. 样品的性质液相色谱中流动相的选择应考虑样品的性质，包括溶解性、稳定性、挥发性等。
对于极性样品，常使用极性溶剂作为流动相；对于不容易溶解的非极性样品，可以选择非极性溶剂作为流动相。
2. 柱子的选择不同的柱子需要选择不同的流动相，以保证分离效果。
对于反相色谱柱，一般使用的是乙腈或甲醇和水的混合物作为流动相；对于正相色谱柱，则需要选用不同的极性溶剂作为流动相。
3. 分离效果流动相的选择应考虑到所需的分离效果。
对于需要高分离效果的分析，流动相的组成和流速需要进行精细调控；对于一些不需要高分离效果的分析，可以适当简化流动相的组成，提高分析效率。
4. 色谱柱的保护对于某些对色谱柱有损害的物质，可以考虑在流动相中添加一些保护剂，以延长柱子的使用寿命。
二、使用注意事项1. 流动相的配制在使用液相色谱分析时，需要注意流动相的配制。
流动相的配制应准确、稳定，避免在实验中因流动相的质量问题导致结果失真。
2. 流速的控制流速的控制对于分析结果的准确性和重现性有着重要影响。
在选择流速时，需要根据分离效果的要求以及柱子的性能来进行合理的设定。
3. 流动相的贮存流动相在储存和使用过程中需要注意避免受到污染和氧化。
定期更换和清洗流动相的储存容器，保持流动相的纯净度和稳定性。
4. 流动相的回收在实验结束后，应注意对流动相进行回收和处理，避免对环境造成污染。
总结回顾：液相色谱分析中流动相的选择和使用是至关重要的。
合理选择流动相，可以提高分析的准确性和重现性；注意使用时的一些问题，可以延长柱子的使用寿命并保护环境。
需要根据样品的性质、柱子的选择以及分离效果来综合考虑流动相的配制和使用。
流动相配制注意事项文章一：写给实验室新手的流动相配制秘籍刚进实验室的小伙伴们，是不是一听到流动相配制就有点头疼？别担心，今天就来给大家讲讲这里面的小窍门。
咱们先来说说水。
水可是流动相里的常客，但可不是随便什么水都能用哦！比如说，不能用自来水，得用超纯水。
为啥呢？就像咱们喝的矿泉水，里面有各种杂质，会影响实验结果的。
我有个同学，刚开始做实验的时候，图省事用了自来水，结果出来的数据那叫一个乱七八糟，被老师狠狠批评了一顿。
还有啊，配制的时候要准确称量和量取。
就好比做菜放盐，多了太咸，少了没味。
有个师兄做实验，因为量取不准确，结果重复了好多次才成功，浪费了好多时间和试剂。
小伙伴们，记住这些注意事项，咱们的实验就能顺顺利利啦！文章二：科研人员必知的流动相配制要点亲爱的科研朋友们，咱们天天和实验打交道，流动相配制可不能马虎。
你想想，如果流动相没配好，那得出的结果能靠谱吗？就像盖房子，地基没打好，房子能结实吗？配制的环境也很重要，要干净、整洁。
不能有灰尘啥的掉进去，不然就像一颗老鼠屎坏了一锅粥。
还有比例问题，得严格按照要求来。
有一次我参加一个学术交流，有个同行分享他的经验，就是因为比例稍微有点偏差，整个实验都得重来。
另外，搅拌要充分，让各种成分均匀混合。
这就像调鸡尾酒，得摇匀了才有好味道。
大家可别小看这些细节，做好了才能让咱们的科研之路更顺畅！文章三：给化学老师的流动相配制小贴士老师们，咱们在给学生讲流动相配制的时候，这些注意事项可别忘了跟他们强调。
先说说安全问题，这是重中之重。
让学生们知道有机溶剂的危险性，告诉他们不能随意混合试剂，就像不能把鞭炮和火柴放在一起一样。
在课堂上做演示的时候，要一步一步讲清楚，让学生看明白每个步骤。
比如说过滤，要让他们知道为什么要过滤，用什么样的滤纸。
还有，鼓励学生自己动手配制，但是要在旁边监督指导。
有个学生自己配制的时候不小心加错了试剂，还好及时发现纠正了。
另外，给学生布置作业的时候，可以让他们写一写配制的步骤和注意事项，加深印象。
流动相配制及色谱方法注意事项流动相是影响液相色谱的关键因素。
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制。
选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别的。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，水性溶剂也常用于缓冲液。
常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同，而产生流动相的差异，影响了色谱图和分析结果。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。
溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。
只要没有特别标明，就可按体积比进行混合，但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相溶解度达不到要求时，尽量选用流动相中含有的比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响造成基线不稳。
b、流动相与样品不产生化学反应，选用流动相配置对色谱峰影响最小。
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
流动相组成溶剂均达不到要求时，选取的溶剂应保证在设定波长内无紫外吸收。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
下面21项注意让你更懂液相流动相。
1、选择流动相应注意过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
高效液相色谱的流动相与色谱柱注意事项高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入柱内，根据各物质分配系数的差异，实现各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
高效液相色谱刘路图高效液相色谱法（HPLC）具有其他色谱法无可比拟的优势，具有检测速度快、分离效能高、检测灵敏度高、选择性好、应用范围广等特点，广泛应用于食品、药品检测和临床分析等方面。
流动相、固定相是决定物质能否被高效分离的关键因素。
一、影响流动相的因素1、pH 值的影响流动相的pH 值应控制在２～７之间。
当pH值大于７时可使硅胶载体溶解；当pH 值小于２时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。
当色谱系统中需使用pH 值大于７的流动相时，应选用耐碱的填充剂；当需使用pH 值小于２的流动相时，应选用耐酸的填充剂。
2、缓冲盐的水相溶液的影响含有缓冲盐的流动相应尽可能少用，必须使用时，缓冲盐的浓度应尽可能低，否则容易阻塞管路。
由于十八烷基链在纯水相溶液中易产生弯曲，所以对于十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动相中水相溶液的比例通常应低于９５％，否则C１８链的随机弯曲将引起组分保留值变化，导致色谱系统的重现性很差。
3、流动相的组成比例、变化幅度的影响流动相的成份不能随意改变，但是比例可适当调整。
每次调整流动相组成比例时，以组分比例较低者（小于或等于５０％）相对改变量不超过± ３０％且绝对改变量不超过± １０％为宜，如４０％相对改变量的数值超过３０％时，则绝对改变量以± １０％为宜。
4、流动相的保存期限配好的流动相都有一定的保存期限，因此为避免流动相变质而导致浪费，建议根据实际实验情况和有效期，合理配制一次所需的用量。
在将配制好的新鲜流动相倒入储液瓶前，需先将储液瓶润洗３次。
然后把填写好的《储液瓶标签》（内容包括流动相成分、配比、配制人、配制日期及有效期等信息）粘贴到储液瓶上。
液相色谱柱的使用注意事项流动相和样品处理液相色谱操作规程液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出，堵塞色谱柱。
2. 流动相：1）在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。
流动相确定要使用色谱级别的溶剂。
如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避开细菌产生。
2）流动相使用前需用微孔滤膜过滤,除去流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。
缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避开溶解度变化造成产生新的沉淀。
不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。
还可以使色谱柱更简单平衡）。
3）流动相需脱气后使用，可避开因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。
假如测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区分，应当使用过度分布的形式进行平衡。
避开由于流动相的蓦地变化造成柱压加添过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。
正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
4）流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水*好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
5）以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0，BDSC18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
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液相色谱流动相注意事项液相色谱如何做好保养一、流动相溶剂的选择 1.所选用的流动相溶剂要有确定的化学稳定性，不与固定相和样品组分起反应，其纯度和化学特性必需充分色谱过程的稳定性和重复性的要求。
2.一、流动相溶剂的选择1.所选用的流动相溶剂要有确定的化学稳定性，不与固定相和样品组分起反应，其纯度和化学特性必需充分色谱过程的稳定性和重复性的要求。
2.溶剂应当不干扰检测器的工作，溶剂应与检测器匹配，选择不影响检测器正常工作应选择在测定波长范围内无吸取的流动相。
3.在制备分别中,溶剂应当易于除去,不干扰对分别组分的回收。
4.溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5.从应用角度考虑，溶剂应当价格低廉，简单购得，使用安全，纯度要高。
二、流动相溶剂使用的注意事项1.流动相溶剂应选择HPLC的溶剂或依此为标准的溶剂。
流动相使用前用0.45μm滤膜过滤、脱气，清除微粒和灰尘。
在送液泵内，为了防止杂物（固体）进入流路，装有吸滤器，但网孔径为10μm，比此更小的颗粒仍旧可通过，这会导致流路和柱子堵塞和污染。
为此，建议常用0.45μm滤膜过滤。
流动相溶剂须经脱气，如不脱气，在溶剂混合时，或压力温度变化时简单产生大量气泡，会导致泵误动作和输液不畅，检测器产生噪声信号等。
2.流动相恢复到室温后使用。
流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基线水平很难稳定，特别是发生漂移，也简单产生气泡等现象。
水与有机溶剂混合时，混合液变化大，往往会与室温相差很大，务必注意。
3.做HPLC流动相的试剂应用HPLC级的、水应用二次蒸馏水，水相流动相需常常更换，防止长菌变质。
使用去离子水、针剂水、纯洁水（炊用）并不合适、尤其是做梯度洗脱时，水中的不纯物会成为鬼峰，从而干扰分析结果。
4.流动相的pH值过高或过低，流动相使用纯水，使用高浓度磷酸盐缓冲溶液，使用离子对试剂等，均可能造成色谱柱填料被化学破坏，这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的5.用缓冲盐做流动相时，在使用前和使用后都要用水清洗流路，确定禁止将缓冲溶液留在流路中静置或更长时间。
流动相是影响液相色谱的关键因素。
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制。
选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别的。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，水性溶剂也常用于缓冲液。
常因资料上表示的容和实际的配制方法不同，而产生流动相的差异，影响了色谱图和分析结果。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。
溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。
只要没有特别标明，就可按体积比进行混合，但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相溶解度达不到要求时，尽量选用流动相中含有的比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响造成基线不稳。
b、流动相与样品不产生化学反应，选用流动相配置对色谱峰影响最小。
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
流动相组成溶剂均达不到要求时，选取的溶剂应保证在设定波长无紫外吸收。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
下面21项注意让你更懂液相流动相。
1、选择流动相应注意过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），先用1～2mL甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。
2、注意保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。
3、注意保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。
4、注意流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。
可试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用更有效的脱气方法或两种方法配合使用；改系统混合为系统外预混合。
HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统逸出气泡，影响泵的工作。
系统中气泡的产生：流动相本身存在，梯度淋洗混合后放出气泡；气泡的影响：存在于管路中，系统压力不稳定，实验结果有偏差；存在于单向阀中，易造成液体回流，流量不准确，甚至是不吸液存在于检测器中，出现鬼峰，影响检测准确性。
所以做液相对流动相的气泡和杂质要求比较严格。
气泡会影响柱的分离效率，检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。
（噪声增大，基线不稳，突然跳动）。
此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。
溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。
溶解氧能与某些溶剂（如，甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰（假峰）。
在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。
在某些情况下，荧光响应可降低达95%。
在电化学检测中（特别是还原电化学法），氧的影响更大。
除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。
常用的脱气方法有：加热煮沸、抽真空、超声、吹氦等。
对混合溶剂，若采用抽气或煮沸法，则需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。
（1）氦气脱气：氦气脱气是很有效的脱气方法。
氦气缓缓的通过流动相赶去溶入的空气，如果使用得当，在10min可除去80%～90%的溶入气体。
由于氦气在流动相中的溶解度极低，所以用氦气脱气保护的流动相可以认为是一个无气体溶解体系。
其缺点是氦气价格比较昂贵，会增加检验成本。
一般说来有机溶剂中的气体易脱除，而水溶液中的气体较顽固。
在溶液中吹氦是相当有效的脱气方法，这种连续脱气法在电化学检测时经常使用。
但氦气昂贵，难于普及。
（2）真空脱气：也是比较常用的脱气方法。
现在多数企业都最常用这种办法，贮液器被抽成部分真空，溶入的气体蒸发形成气泡溢出，其效果仅次于氦气脱气。
象Agileng1200液相色谱使用的是在线脱气机。
在线脱气只适合脱完气之后的流动相，在使用过程中的微量脱气。
（3）超声波脱气：将配制好的流动相连容器放入超声水槽中脱气10～20min。
这种方法比较简便，又基本上能满足日常分析操作的要求，所以，目前仍广泛采用。
这种方法只能除去30%的溶解气体，有时还会引起气体溶解度的增加。
对氧敏感的检测器不宜用此法。
超声脱气比较好，10~20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了（一般500ml溶液需超声20~30min方可），关于超声时间问题众说纷纭，各实验室5～30分钟不等，一般来说流动相组成为无机（缓冲盐溶液）时，5～15分钟即可，流动相为是水和有机容积混合时，超声时间要相对长一些，这个方法只能除去30%的溶解气体，时间的延长不和效果成正比，且其中气泡对色谱峰基线稳定性与信噪比有一定影响，一般来说影响不大，15min超声即可足够。
此法不影响溶剂组成。
超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器液面不要高出水面太多。
（4）加热回流脱气：该方法虽然效果很好，但是适用围较窄。
对于有机溶剂或混合流动相不适合用此法，因为挥发性组分会损失掉，改变流动相的组成。
综合来说，用真空抽滤后，再用超声脱气还是最常用的办法，用氦气的方法是效果最好的办法，而在线脱气本身也是真空脱气，但它可以放到仪器上使用，是一种保证性的办法。
A.离线（系统外）脱气法不能维持溶剂的脱气状态，在你停止脱气后，气体立即开始回到溶剂中。
在1~4小时，溶剂又将被环境气体所饱和。
B.在线（系统）脱气法无此缺点。
最常用的在线脱气法为鼓泡，即在色谱操作前和进行时，将惰性气体喷入溶剂中。
严格来说，此方法不能将溶剂脱气，它只是用一种低溶解度的惰性气体（通常是氦）将空气替换出来。
此外还有在线脱气机。
5、注意流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。
应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。
输液管道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。
过滤器阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。
过滤器被微粒所阻塞或长霉，去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，换上新的过滤器则可。
有时候换上新的过滤器仍然不畅，那就需要查查流动相的制备过程，或者换大孔径的过滤器。
不管如何，流动相都需要重新过滤。
流速过高、阻力大，造成空化现象，这是由于过滤器孔径、管道径、流速和溶剂黏度等引起的。
如果流速大于10mL/min，常会出现这种现象。
使用下列方法解决：（1）使用低流速；（2）换大孔径的过滤器；（3）增加进液管道径；（4）抬高或加压储液器；（5）不用过滤器，但流动相一定要先过滤；（6）储液器盖子太紧，在储液器形成真空，打出的流动相不连续。
应松开盖子或留有1mm 的缝隙；（7）进液管道阻塞或弯曲使泵抽不到液，注意调整进液管道或更换新的。
其它问题包括渗漏或接头松动、泵部件损坏等，都能引起供液不正常。
6、注意防止流动相和储液器被污染由于污染，噪音越来越大，检测器基线上升。
污染物可能被泵以稳定的浓度打入系统，而再以稳定的浓度流出来，所以在色谱图中不出多余的峰。
用梯度洗脱时弱流动相可以使污染物聚在柱顶，流动相强度增加后污染物可能被洗脱出来一个大的伪峰。
有时基线噪音突然增大或突然提高，都是因为反复加进新的流动相或系统用得太久（通宵）所造成的。
新加进的流动相有污染物或者流动相长霉，繁殖了细菌。
脏的储液器会污染清洁的流动相。
每种流动相备有专用的储液器，或者定期报废储液器。
流动相污染来自这几个方面：试剂质量不高，玻璃器皿不合格；微生物的影响；配制流动相时操作不当等，因此要求高纯度化学试剂和HPLC 级溶剂。
要注意玻璃器皿按规定清洗干净；为防止微生物生长，每天要用甲醇清洗系统；怀疑系统生长了微生物，可用稀硝酸冲洗即可（注意不要损坏柱和管道系统）；真空脱气时防止泵油带入流动相；用清洁的惰性塞子、搅棒、过滤器和玻璃器皿配制流动相；已经污染的流动相一定要废弃掉。
7、注意选择流动相应不改变填料的任何性质低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
8、选择流动相应注意纯度色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
9、选择流动相应注意必须与检测器匹配使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。
当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
10、选择流动相应注意粘度要低（应<2cp）：高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长，最好选择沸点在100℃以下的流动相。
11、选择流动相应注意对样品的溶解度要适宜如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。
12、选择流动相应注意样品易于回收应选用挥发性溶剂13、选择流动相应注意由强到弱一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
14、选择流动相应注意三倍规则每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
这是一个聪明而又省力的办法。
调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
15、选择流动相应注意粗调转微调当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
16、流动相的配制注意有机溶剂和水性溶剂的混合方法有机溶剂和水性溶剂的混合液作为流动相是经常的，但由于混合方法不同，有时分析结果相差很大。
