牛肉膏蛋白胨培养基的制备

实验五牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌一实验目的：掌握培养基的配制原则与方法；熟悉手提式高压灭菌器的使用方法和注意事项；二实验材料：器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。

试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等三实验原理：牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。

高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。

将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。

待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。

此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。

四实验步骤：1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备（1）称量准确称取各种成分。

一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放称量纸上称量，然后连同称量纸一起放入烧杯中。

（2）溶解向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，加热搅拌全溶后稍放冷。

（4）调pH值精密pH试纸测定其pH值，并用NaOH调至所需pH值（5）分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。

注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。

如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。

（6）包扎试管扎成捆。

纸上表明培养基的名称、配制日期等。

（7）灭菌培养基用0.1Mpa高压蒸汽灭菌15~20min，五注意事项1.要严格按配方配制。

2.调pH不要过头。

3.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。

配方：牛肉膏：1.5g 蛋白胨5.0g 氯化钠2.5g水500mL 琼脂 7.5g pH 7.2。

1、实验原理
牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学研究最常用的天然培养基。

在配方中不加琼脂时称之为肉汤培养基。

加入琼脂配制的固体培养基一般用于细菌的分离、培养和测数等。

2、培养基配方
牛肉膏5.0g、蛋白胨10.0g、NaC1 5.0g、琼脂20.0g、自来水1000 mL、pH7.0。

牛肉膏蛋白胨液体培养基：5g牛肉膏，10g蛋白胨，5gNaCl，1000mL蒸馏水，pH 7.0。

牛肉膏蛋白胨固体培养基：5g牛肉膏，10g蛋白胨，5g NaCl，20g琼脂, 1000mL蒸馏水，pH 7.0。

3、操作步骤
⑴在100 mL小烧杯中称取牛肉膏5.0g、蛋白胨10.0g，加50 mL自来水，置电炉搅拌加热至牛肉膏、蛋白胨完全溶解。

⑵向小铝锅中加入500 mL自来水，将溶解的牛肉膏、蛋白胨倒入铝锅中并用自来水洗2～3次。

加入5.0gNaC1，在电炉上边加热边搅拌。

⑶加入洗净的琼脂条，继续搅拌，加热至琼脂完全熔化，补足水量至1000 mL。

⑷用玻棒沾少许液体，用pH试纸测定pH值。

用NaOH或HC1调至pH7.0。

⑸分装漏斗分装于10mm×180mm试管中，塞好棉塞，装入小铁丝筐，然后用旧报纸将棉塞部分包好。

★是否可以搁置几天后进行灭菌？
⑹高压蒸汽灭菌，121℃灭菌30min。

⑺灭菌后摆放斜面。

一、实验目的1. 掌握培养基的基本制备原理和方法。

2. 学会牛肉膏蛋白胨培养基的配制过程。

3. 了解培养基灭菌的重要性及常用灭菌方法。

4. 熟悉实验室无菌操作的基本规范。

二、实验原理培养基是微生物生长繁殖的营养基质，主要由碳源、氮源、无机盐、生长因素和水等成分组成。

根据微生物的种类和实验目的，培养基可以有不同的配方和种类。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌基础培养基，适用于培养大多数细菌。

三、实验材料与仪器实验材料：- 牛肉膏- 蛋白胨- 氯化钠- 琼脂- 蒸馏水- pH试纸- 灭菌棉塞- 高压蒸汽灭菌锅- 三角瓶- 烧杯- 量筒- 移液管- 玻璃棒- 培养皿- 等等。

四、实验步骤1. 称量：根据牛肉膏蛋白胨培养基的配方，准确称取牛肉膏、蛋白胨、氯化钠等成分。

2. 溶解：将称量好的牛肉膏、蛋白胨等成分放入烧杯中，加入适量的蒸馏水，用玻璃棒搅拌使其充分溶解。

3. 调整pH值：用pH试纸测定溶液的pH值，根据需要加入适量的1M盐酸或氢氧化钠溶液调整pH值至7.2-7.6。

4. 灭菌：将溶解好的培养基转移至三角瓶中，加入灭菌棉塞，用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，灭菌时间为15-20分钟。

5. 冷却：灭菌后，待培养基冷却至50-60℃，加入适量的琼脂，充分搅拌使其溶解。

6. 分装：将冷却后的培养基分装至培养皿中，待凝固后备用。

7. 无菌操作：在无菌操作条件下，用移液管吸取适量的菌液，接种至培养基中。

五、实验结果与分析1. 培养基制备：成功制备了牛肉膏蛋白胨培养基，颜色呈淡黄色，透明度高。

2. 灭菌效果：通过高压蒸汽灭菌，确保了培养基的无菌状态，避免了微生物污染。

3. 接种结果：接种后，培养基上出现了菌落生长，表明培养基对细菌具有良好的培养效果。

六、实验讨论1. 在培养基的制备过程中，称量、溶解、调整pH值等步骤对培养基的质量至关重要，应严格按照实验步骤进行操作。

2. 灭菌是防止培养基污染的关键环节，应选择合适的灭菌方法，确保灭菌效果。

实验一培养基的制备一、目的与要求（一）学习制备培养基的基本技术。

（二）制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。

二、原理牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基，这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供作繁殖之用，制作固体培养基时须加2%琼脂，培养细菌时，应用稀酸或稀碱将PH调至中性或微碱性。

牛肉膏蛋白培养基的配方：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，NaCl0.5%，pH7.4～7.6。

三、材料与仪器（一）试剂牛肉膏，蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。

(二)其他试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，pH试纸，电炉，台称。

四、操作步骤（一）称量根据用量按比例依次称取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要迅速。

（二）溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，ZHU一加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。

加热时应注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。

溶好后，补足所需水分。

（三）调PH 用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH调至所需范围。

（四）过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特殊要求时可省去此步骤。

（五）分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内，分装装置如实验图8所示；分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。

1．液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜，分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。

2．固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。

分装三解瓶，以不超过容积的1/2为宜。

3．半固体分装装置以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

（六）加棉塞分装完毕后，在试管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。

牛肉膏蛋白胨培养基配方成分克/升牛肉膏10.0胨5.0酵母粉5.0盐5.0葡萄糖1.0琼脂15.0酚红0.025培养基PH值调整至7.0±0.2，于121℃高压灭菌20分钟即可。

下面解释每个成分的作用和影响：1.牛肉膏：提供氮源、维生素和矿物质，为微生物提供生长所需的营养物质。

3.酵母粉：富含维生素B群和其他营养物质，能够促进微生物的生长。

4.盐：提供微量元素，维持细胞内渗透平衡。

5.葡萄糖：提供微生物的碳源和能量，促进微生物的繁殖。

6.琼脂：用于凝固培养基，使其固化，提供坚固的基质，方便微生物生长。

7.酚红：作为指示剂，用于检测培养基的酸碱度，在碱性条件下呈现红色。

配方中的每个成分都起到了重要的作用，为微生物的生长提供了必要的营养物质。

同时，配方还可以根据需要进行适当的改动和调整，以满足特定微生物的生长需求。

在制备培养基时，需要注意的事项有：1.每个成分的浓度：每个成分的浓度都对微生物的生长产生影响，需要严格按照配方中的比例加入。

2.PH值调整：PH值对微生物的生长也有影响，需要根据具体的需求和微生物的要求进行调整。

3.培养基的制备和高压灭菌：制备培养基时，要注意加热和溶解的过程，确保所有成分充分溶解。

高压灭菌可以杀灭培养基中的细菌和其他微生物，保证培养基的无菌状态。

总结起来，牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的培养基，通过提供丰富的营养物质，可以有效地支持微生物的生长和繁殖。

配方中的每个成分都具有重要的功能和作用，制备时需要注意每个成分的浓度和PH值的调整。

此外，高压灭菌可以保证培养基的无菌状态。

通过合理的制备和使用，牛肉膏蛋白胨培养基可以为微生物学实验和研究提供坚实的基础。

牛肉膏蛋白胨培养基的制备一、目的要求（1）明确培养基的配制原理。

（2）通过对培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。

二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用广泛和最普通的细菌基础培养基，又称普通培养基。

它含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供微生物生长繁殖之用。

基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI。

其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCI提提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量的琼脂作为凝固剂。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至碱性，以利于细菌的生长繁殖。

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 3.0gNaCI 5.og蛋白胨10.0g水1000mlpH 7.4～7.6三、操作器材（1）溶液与试剂牛肉膏，蛋白胨，NaCI,琼脂，1mol/LNaOH,1mol/LHCI。

（2）仪器及其他用具试管，锥形瓶，烧杯，量筒，玻璃棒培养基分装器，，天平，高压蒸汽灭菌器，PH试纸，棉花，牛皮纸，麻绳，纱布等。

四、操作步骤1、称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCI放入烧杯中。

2、融化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀。

然后加热使其溶解。

各试剂完全溶解后，补充水到所需的总体积。

配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。

3、调pH用试纸测培养基的原始PH,如果偏酸，用滴管向培养基中加入1mol/LNaOH,边滴边搅拌，并随时用pH试纸测其pH,直至pH达7.6。

反之，用1mol/LHCI进行调节。

4、分装和加塞将配制的培养基分装入试管内，在试管口或锥形瓶口上塞上棉塞。

5、包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一根麻绳扎好。

用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。

6、灭菌将上述培养基以1210C,20min,0.103MPa高压蒸汽灭菌。

实验一牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌一、目的要求1．明确培养基的配制原理。

2．通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。

3．了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。

4．学习高压蒸汽灭菌的操作方法。

二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。

其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl 提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。

琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。

琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。

固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl5g 琼脂15—20g 水1000mlpH7.4—7.6三、器材牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH，1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5.5—9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。

四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。

牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。

也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。

蛋白胨很容易吸潮，在称取时动作要迅速。

另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。

2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。

牛肉膏蛋白胨培养基配方
配方：
1.牛肉膏粉：10克
2.蛋白胨：10克
3.氯化钠：5克
4.水：1000毫升
制备过程：
1.将牛肉膏粉、蛋白胨和氯化钠加入烧杯中。

2.加入适量的水，充分搅拌，直到完全溶解。

3.将溶液转移到一个大容量瓶中。

4.加入适量的水，使总体积达到1000毫升。

5.用盖子或气密塞封闭瓶口，避免细菌的污染。

6.将培养基在121摄氏度的高压灭菌器中高压灭菌20分钟。

7.灭菌后，将培养基冷却至室温，并存储在4摄氏度的冰箱中。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种富含营养物质的培养基，适用于广泛的细菌种类。

牛肉膏提供了蛋白质、胆碱和其他有机物质，支持细菌的生长。

蛋白胨是由动物和植物的蛋白质消化得到的营养物质，富含氨基酸，可提供能量和生长因子。

氯化钠提供细菌所需的离子平衡。

制备好的牛肉膏蛋白胨培养基可用于分离和培养广谱细菌。

在培养细菌时，可以向培养基中添加其他适当的抗生素或指示剂来选择特定的细菌
菌种。

此外，还可以向培养基中添加其他营养物质，如血清、糖类、氨基酸等，以增强培养基的适用性，满足特定细菌的生长需求。

总结：
牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基，它以富含营养的牛肉膏和蛋白胨为基础，提供了细菌所需的能量、氨基酸和生长因子。

配方简单，制备过程相对简单，适用于广泛的细菌菌种的培养。

根据具体的实验需求，可以对配方进行适当的修改和补充，以提高培养基的适用性和选择性。