下载文档原格式
几种培养基的配方培养基是用于培养和繁殖微生物的营养物质的混合物。
根据微生物的特性和应用需求，可以设计出不同成分和配方的培养基。
以下是几种常见的培养基配方：1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）的配方：-牛肉膏：5g-蛋白胨：5g-水解酵母膏：1.5g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将牛肉膏、蛋白胨和水解酵母膏溶解在蒸馏水中，添加纯化琼脂，混合并加热直至溶解，然后倒入培养皿中。
2. EMB（Eosin Methylene Blue）培养基的配方：-蛋白胨：17g-明胶胨：3g-乳糖：10g-酵母提取物：3g-果糖：1g- Eosin Y：0.4g-亚甲蓝：0.065g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将蛋白胨、明胶胨、乳糖、酵母提取物和果糖溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至溶解，然后添加Eosin Y和亚甲蓝，最后加入纯化琼脂，混合并倒入培养皿中。
3. 铡锰培养基（Sabouraud Agar）的配方：-葡萄糖：40g-酵母膏粉：5g-水解麦粉：15g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将葡萄糖、酵母膏粉和水解麦粉溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至溶解，然后添加纯化琼脂，混合并倒入培养皿中。
4.胰蛋白酶-大豆酪蛋白肉汤培养基（TRYPTICASE™SOYBROTH）的配方：-胰蛋白酶胨：15g-大豆酪蛋白胨：5g-食盐：5g-葡萄糖：20g-蒸馏水：1000mL将胰蛋白酶胨、大豆酪蛋白胨、食盐和葡萄糖溶解在蒸馏水中，混合并加热至溶解，然后冷却至室温。
5. M9盐碱培养基（M9 minimal medium）的配方：-磷酸一氢二钾：3g-硫酸镁：0.5g-氯化钠：0.5g- 氨氯化铁：7.5mg-葡萄糖：4g-去离子水：1000mL将磷酸一氢二钾、硫酸镁、氯化钠和氨氯化铁溶解在去离子水中，混合并加热至溶解，然后冷却至室温后添加葡萄糖。
这只是几种常见的培养基配方，实际上还有很多不同成分和配方的培养基。
1、实验原理
牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学研究最常用的天然培养基。
在配方中不加琼脂时称之为肉汤培养基。
加入琼脂配制的固体培养基一般用于细菌的分离、培养和测数等。
2、培养基配方
牛肉膏5.0g、蛋白胨10.0g、NaC1 5.0g、琼脂20.0g、自来水1000 mL、pH7.0。
牛肉膏蛋白胨液体培养基：5g牛肉膏，10g蛋白胨，5gNaCl，1000mL蒸馏水，pH 7.0。
牛肉膏蛋白胨固体培养基：5g牛肉膏，10g蛋白胨，5g NaCl，20g琼脂, 1000mL蒸馏水，pH 7.0。
3、操作步骤
⑴在100 mL小烧杯中称取牛肉膏5.0g、蛋白胨10.0g，加50 mL自来水，置电炉搅拌加热至牛肉膏、蛋白胨完全溶解。
⑵向小铝锅中加入500 mL自来水，将溶解的牛肉膏、蛋白胨倒入铝锅中并用自来水洗2～3次。
加入5.0gNaC1，在电炉上边加热边搅拌。
⑶加入洗净的琼脂条，继续搅拌，加热至琼脂完全熔化，补足水量至1000 mL。
⑷用玻棒沾少许液体，用pH试纸测定pH值。
用NaOH或HC1调至pH7.0。
⑸分装漏斗分装于10mm×180mm试管中，塞好棉塞，装入小铁丝筐，然后用旧报纸将棉塞部分包好。
★是否可以搁置几天后进行灭菌？
⑹高压蒸汽灭菌，121℃灭菌30min。
⑺灭菌后摆放斜面。
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化
，必须原创
牛肉膏蛋白胨（Bacto-Proteose-Peptone，由蛋白质和多种水解物组成）培养基是分
离和纯化微生物的优质培养基，它可为微生物提供养分、气味和增强细胞代谢的稳定性，
有利于微生物的成长和繁殖，因此被广泛应用于细菌的鉴别、分离、纯化研究。
本实验介
绍牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化。
1、配制牛肉膏：将牛肉的去油干片以40倍的水为底料，煮沸约30min，冷却至室温
后用离心设备至0.75—1％的浊度；
2、添加蛋白质：分别将卵白袋、硝酸蛋白、胱蛋白分别以大约6:2:2的比例添加到
牛肉膏液中，再将二次离心液收集并稀释成1:200；
3、添加添加剂：用 0.1N 的 NaOH 调盐，加入 0.2 ％的 Na2CO3、1.0 ％的 K2HPO4 和 0.007 ％的 MnCl2，使液体 pH 值为7.2 ± 0.2。
二、微生物的分离与纯化：
1、微生物的分离：将牛肉膏蛋白胨作为培养介质，以碗杯离心法将培养基放在26-28℃的恒温器中培养24-48h；
2、筛选：用滤筛得到培养液粒子，将其留在高性能液相色谱仪（HPLC）上；
3、纯化：用不同浓度的氯化钾，盐酸混合溶液或二乙醇胺溶液去除悬浮粒子，再用
离子交换树脂法去除其他污染物，萃取物可用电泳分离成单体；
4、鉴定：根据抗原或抗体鉴定微生物，将其分类编号。
三、结论：
经过牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化实验，成功地实现了牛肉膏蛋
白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化。
通过该实验，我们可以进一步学习、提高分离
微生物的能力，为临床抗感染药物的研究提供有力的支持。
1．营养肉汤成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH7.4。
制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，121℃高压灭菌15min。
2．营养琼脂培养基成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，pH7.2。
制法：将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，分装于烧瓶内，121℃，15min高压灭菌备用。
3．MRS培养基成分：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K2HPO4 2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温80 1mL，MgSO4 .7H2O 0.58g，MnSO4 4H2O 0.25g，（琼脂15~20g），蒸馏水1000mL。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.2~6.4，分装于三角瓶中，121℃,灭菌15min。
4．脱脂乳培养基成分：牛奶，蒸馏水。
制法：将适量的牛奶加热煮沸20~30min，过夜冷却，脂肪即可上浮。
除去上层乳脂即得脱脂乳。
将脱脂乳盛在试管及三角瓶中，封口后置于灭菌锅中在108℃条件下蒸汽灭菌10~15min，即得脱脂乳培养基。
5．培养基A成分：蛋白胨10.0g，酵母提取物1.0g，葡萄糖10.0g，NaCL5.0g，琼脂15.0g，水1000mL。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至7.0~7.2，分装于三角瓶中，121℃，灭菌15min。
6．PTYG培养基成分：胰胨Tryptone（Oxoid）5g，大豆蛋白胨5g，酵母粉（Oxoid）10g，葡萄糖10g，吐温80 0 1mL，琼脂15~20g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，盐溶液4mL。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.8~7.0，分装于三角瓶中，115℃灭菌30min。
盐溶液制备：无水氯化钙0.2g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，MgSO4 。
7H2O 0.48g，NaCO3 10g，NaCL 2g，蒸馏水1000mL，溶解后备用。
配置牛肉膏蛋白胨培养基的操作步骤
嘿，朋友们！今天咱就来讲讲怎么配置牛肉膏蛋白胨培养基，这可是个很有趣的事儿呢！
先准备好各种材料，就像厨师做菜前要把食材都备好一样。
你得有牛肉膏，这可是培养基的重要成分，就像菜里的盐，少了它可不行。
还有蛋白胨，那也是宝贝呀，能给微生物提供丰富的营养。
然后就是氯化钠，就像是给培养基加点味道。
再加上琼脂，这琼脂啊，就像是给微生物搭个小房子，让它们能舒舒服服地待着。
接下来，就是动手操作啦！把这些材料按照一定的比例放到水里，就像是调一碗特别的汤。
这可不是随便搅和搅和就行的，得仔细点，不然比例不对，培养基可就不完美啦。
然后，把这锅“汤”放到火上加热，让它们慢慢融合在一起。
看着它们咕嘟咕嘟地冒泡，你是不是觉得很有意思呀？就好像在看着一群小精灵在跳舞。
等它们都融合好了，就可以分装啦。
把这热乎乎的培养基分到一个个小瓶子或者培养皿里，可别洒出来哦，就像给小朋友分糖果一样，要公平公正。
然后把它们盖好盖子，就等着它们冷却凝固啦。
凝固后的培养基，就像是一个个小蛋糕，等待着微生物们来大快朵颐。
你想想，那些小小的微生物在上面快乐地生长，是不是很神奇？
这配置牛肉膏蛋白胨培养基呀，说难也不难，说简单也不简单。
就好像骑自行车，一开始可能会摇摇晃晃，但多练几次就熟练啦。
你只要认真去做，肯定能成功的。
而且当你看到自己配置的培养基培养出了好多微生物，那种成就感，简直没法形容！
所以呀，别害怕，大胆去尝试吧！让我们一起在微生物的世界里遨游，感受科学的魅力！。
实验一培养基的制备一、目的与要求（一）学习制备培养基的基本技术。
（二）制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。
二、原理牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基，这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供作繁殖之用，制作固体培养基时须加2%琼脂，培养细菌时，应用稀酸或稀碱将PH调至中性或微碱性。
牛肉膏蛋白培养基的配方：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，NaCl0.5%，pH7.4～7.6。
三、材料与仪器（一）试剂牛肉膏，蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
(二)其他试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，pH试纸，电炉，台称。
四、操作步骤（一）称量根据用量按比例依次称取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要迅速。
（二）溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，ZHU一加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。
加热时应注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。
溶好后，补足所需水分。
（三）调PH 用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH调至所需范围。
（四）过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特殊要求时可省去此步骤。
（五）分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内，分装装置如实验图8所示；分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。
1．液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜，分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。
2．固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。
分装三解瓶，以不超过容积的1/2为宜。
3．半固体分装装置以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
（六）加棉塞分装完毕后，在试管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。
牛肉膏蛋白胨培养基配方成分克/升牛肉膏10.0胨5.0酵母粉5.0盐5.0葡萄糖1.0琼脂15.0酚红0.025培养基PH值调整至7.0±0.2，于121℃高压灭菌20分钟即可。
下面解释每个成分的作用和影响：1.牛肉膏：提供氮源、维生素和矿物质，为微生物提供生长所需的营养物质。
3.酵母粉：富含维生素B群和其他营养物质，能够促进微生物的生长。
4.盐：提供微量元素，维持细胞内渗透平衡。
5.葡萄糖：提供微生物的碳源和能量，促进微生物的繁殖。
6.琼脂：用于凝固培养基，使其固化，提供坚固的基质，方便微生物生长。
7.酚红：作为指示剂，用于检测培养基的酸碱度，在碱性条件下呈现红色。
配方中的每个成分都起到了重要的作用，为微生物的生长提供了必要的营养物质。
同时，配方还可以根据需要进行适当的改动和调整，以满足特定微生物的生长需求。
在制备培养基时，需要注意的事项有：1.每个成分的浓度：每个成分的浓度都对微生物的生长产生影响，需要严格按照配方中的比例加入。
2.PH值调整：PH值对微生物的生长也有影响，需要根据具体的需求和微生物的要求进行调整。
3.培养基的制备和高压灭菌：制备培养基时，要注意加热和溶解的过程，确保所有成分充分溶解。
高压灭菌可以杀灭培养基中的细菌和其他微生物，保证培养基的无菌状态。
总结起来，牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的培养基，通过提供丰富的营养物质，可以有效地支持微生物的生长和繁殖。
配方中的每个成分都具有重要的功能和作用，制备时需要注意每个成分的浓度和PH值的调整。
此外，高压灭菌可以保证培养基的无菌状态。
通过合理的制备和使用，牛肉膏蛋白胨培养基可以为微生物学实验和研究提供坚实的基础。
牛肉膏蛋白胨蛋白胨培养基2克琼脂0.5克氯化钠（盐）1克牛肉蛋白胨在烧杯中称0.5克牛肉膏，将氯化钠，和牛肉蛋白胨置于烧杯中，加不超过100毫升的水搅匀，放在酒精灯上，使材料熔化，加入2克琼脂，加热至溶化，将溶液加至100毫升，测试并调节溶液的酸碱度（PH值）至7.5左右，，加氢氧化钠溶液（1毫升每升）（碱性）（增加PH），或氯化氢溶液（1毫升每升）（酸性）（减少ph），没有的话用醋代替，搅拌，检测PH值，给试管制作大小合适的棉塞（直径15毫米15厘米长），做成长圆柱形，让棉塞长度的3分之2再试管里，将培养基趁热分装在试管内，分装时，不能让培养基粘在试管口，试管上端培养基液体的高度约为试管的五分之一，分装完毕，塞好棉塞，将每十只试管用线绳捆成一捆（10个以下不用捆），用牛皮纸包住管口一端的外面，用绳子扎好，标明制作日期，制作人，培养及类型。
放入蒸蛋器，蒸10到20分
当试管温度约为50度时，将试管斜放，斜放后的液面长度不能超过试管的一半，静置试管，等待琼脂凝固，凝固后保存。
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与
纯化
实验目的：掌握培养基的配制原则与方法；
掌握划线分离纯化微生物的原理与方法
熟悉手提式高压灭菌器的使用方法和注意事项；
实验材料：器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。
试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等
实验原理：
培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。
培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素、能源和水。
根据微生物的种类和实验目的不同，培养基要选择合适的配比关系；选择合适的理化性质；配后要及时灭菌。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法等
实验内容：
1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备
（1）计算根据配方计算出实验中各种药品所需要的量，然后再分别称量。
（2）称量准确称取各种成分。
一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放硫酸纸上称量，然后连同硫酸纸一起放入烧杯中。
（3）溶解向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，取出硫酸纸弃去。
加热搅拌全溶后稍放冷。
（4）调pH值用酸度计或精密pH试纸测定其pH值，并用10％NaOH调
至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。
一般比要求的pH高出0.2，
因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。
（5）分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内（附图1-1）。
注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌
污染。
如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高
度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
（6）包扎试管扎成捆。
试管和三角瓶的棉塞外用硫酸纸和牛皮纸包扎，纸上表明培养基的名称、配制日期等。
（7）灭菌培养基用0.1Mpa（15lb/in2）高压蒸汽灭菌15~20min，
2.培养基的高压蒸汽灭菌
灭菌原理：水的沸点可随压力的增加而提高，当高压蒸汽灭菌锅中水煮沸时，因锅是密闭的，蒸汽不能溢出，而使压力增加，水的沸点和温度也随之增加。
因此，高压蒸汽灭菌是利用高压蒸汽产生的高温，以及热蒸汽的穿透能力来达到灭菌的目的。
一般在0.1Mpa（15lb/in2）的压力时，温度可达121℃只要维持15~20min，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。
灭菌方法：
(1)加水于灭菌器内到规定的水平面。
(2)需灭菌的物品（分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基），棉塞、
硅胶泡沫塞等用防潮纸包好（防止锅内水汽把棉塞淋湿），放入灭菌锅
内的套筒中。
摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍蒸汽流通，影响灭菌
效果。
(3)将灭菌锅盖的排气管插人套筒侧壁的凹槽内，关闭灭菌锅盖旋紧螺栓，
切勿漏气。
(4)打开放气阀，加热，热蒸汽上升，以排除锅内冷空气，排气约5~ l0min，
关闭放气阀。
(5)关闭放气阀后，整个灭菌锅成为密闭状态，而蒸汽又不断增多，这时压
力和温度都上升，直至压力表指针达到所需压力时，开始计时，通过
调节热源，维持此压力到所需时间。
(6)灭菌完毕，待压力自然降至0时，打开放气阀，注意不能打开过早，否
则突然降压致使培养基冲腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器
以外。
(7)打开灭菌锅盖，取出已灭菌的器皿及培养基。
(8)灭菌锅用完后，将锅内剩余的水倒掉，以免日久腐蚀。
3.微生物的分离与纯化
借助于划线将混杂的细菌材料逐步稀释，最后在琼脂平板上分散开来，使之出现单一菌落而达到分离纯化的目的。
4. 注意事项
1.要严格按配方配制。
2.调pH不要过头。
3.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。
4. 划线法分离纯化微生物注意各区勿相互交叉。
5. 示教内容：
微生物的分离纯化
高三下册生物书我记得有。
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：
牛肉膏3g
蛋白胨10g
NaCl 5g
琼脂15—20g
水1000ml
pH 7．4—7．6
三、器材
牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；
1mol/L NaOH，1mol/L HCl；
试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5．5—9．0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤
1．称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。
最后补足所失的水分。
3．调pH
在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7．6。
反之，则用1mol/L HCl进行调节。
注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。
对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。
4．过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。
一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去（本实验无需过滤）。
5．分装
按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。
分装装置见图Ⅴ-1。
分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，如图Ⅴ-2。
分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
6．加塞
培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）。
7．包扎
加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
8．灭菌
将上述培养基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃，20分钟高压蒸汽灭菌。
如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。
9．搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
10．无菌检查
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。
