实验一 蛋白质的沉淀及变性

实验五蛋白质的沉淀和变性实验一、实验目的1.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。

2.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。

3.了解蛋白质变性与沉淀的关系。

二、实验原理在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。

蛋白质的沉淀反应可分为两类。

1.可逆的沉淀反应。

此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解在原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。

如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。

提纯蛋白质时，常利用此类反应。

2.不可逆沉淀反应。

此时蛋白质分子内部结构发生大改变，蛋白质常因变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。

如加热引起的蛋白质沉淀于凝固，蛋白质于重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类反应。

蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷）并不析出。

因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。

三、实验材料、器材与试剂1. 材料鸡蛋清的水溶液（新鲜鸡蛋清：水=1：9）。

2. 器材（1）试管及试管架；（2）吸量管；（3）滴灌；（4）小烧杯；（5）容量瓶。

3. 试剂（1）3%硝酸银溶液；（2）5%三氯乙酸溶液（3）95%乙醇；（4）饱和硫酸铵溶液；（5）硫酸铵结晶粉末。

四、实验方法1.蛋白质的盐析中性无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。

盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。

如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。

由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析是可逆的过程。

加蛋清溶液5mL于试管中，再加入等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。

倒出少量浑浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白。

蛋白质的沉淀反应实验报告
实验目的，通过对蛋白质的沉淀反应进行实验，掌握蛋白质的沉淀方法和技巧，了解蛋白质的性质和特点。

实验原理，蛋白质的沉淀反应是利用蛋白质与醋酸和酒精混合后在酸性条件下
沉淀出来的特性进行实验。

醋酸和酒精可以使蛋白质变性并沉淀出来，酸性条件有利于蛋白质的沉淀。

实验步骤：
1. 取少量蛋白质溶液放入试管中；
2. 加入少量醋酸，并充分混合；
3. 加入适量酒精，再次充分混合；
4. 观察蛋白质的沉淀情况。

实验结果，经过以上步骤，观察到蛋白质在酸性条件下与醋酸和酒精混合后发
生了沉淀反应，沉淀物呈现白色。

实验分析，蛋白质的沉淀反应是由于醋酸和酒精的作用下，蛋白质发生变性并
沉淀出来。

酸性条件有利于蛋白质的沉淀，而酒精可以加速蛋白质的沉淀过程。

因此，通过本实验可以初步了解蛋白质的性质和特点。

实验结论，蛋白质的沉淀反应是一种常见的实验方法，通过本实验可以掌握蛋
白质的沉淀技巧，并了解蛋白质的性质和特点。

在实际应用中，蛋白质的沉淀反应可以用于蛋白质的提取和分离，具有一定的应用价值。

实验注意事项：
1. 实验操作要注意安全，避免醋酸和酒精的接触；
2. 实验过程中要注意观察蛋白质的沉淀情况，及时记录实验结果；
3. 实验结束后要及时清理实验器材，保持实验环境整洁。

通过本实验，我对蛋白质的沉淀反应有了更深入的了解，掌握了蛋白质的沉淀
方法和技巧，对蛋白质的性质和特点有了更清晰的认识。

希望通过今后的实验实践，能够进一步提高自己的实验技能，为科学研究和实际应用做出更多的贡献。

实验一蛋白质的颜色反应和沉淀反应一、实验目的（1）掌握鉴定蛋白质的原理和方法（2）熟悉蛋白质的沉淀反应；进一步掌握蛋白质的有关性质二、实验原理（1）蛋白质颜色反应原理：蛋白质分子中的某些或某种基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，是一些常用蛋白质定量测定的依据；但颜色反应不是蛋白质的专一反应；1、米伦反应原理：米伦试剂是硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚硝酸汞的混合物。

他能与苯酚及某些二羟基苯衍生物起颜色反应。

组成蛋白质的氨基酸中只有酪氨酸含苯酚基团，因此该反应为蛋白质中酪氨酸存在的依据。

2、双缩脲反应原理：尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲。

双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫色的化合物，此反应称为双缩脲反应。

蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似，故也能进行此反应。

双缩脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。

3、黄色反应原理：蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸（如酪氨酸、色氨酸等），于浓硝酸可反应并生成黄色物质，此物质在碱性环境下变为桔黄色的硝基苯衍生物硝醌酸等。

4、茚三酮反应原理：蛋白质与茚三酮共热，产生兰紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。

此反应为一切蛋白质及a-氨基酸所共有。

亚氨基酸（脯氨酸和羟脯氨酸）与茚三酮反应呈黄色，含有氨基的其他物质亦呈此反应。

（2）蛋白质沉淀反应原理：多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定因素被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后，即产生沉淀。

1、蛋白质的盐析作用原理：向蛋白质中加入大量的中性盐（硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等），使蛋白质胶体颗粒脱水，破坏其水化层，同时它所带有的电荷亦被中性盐上所带的相反电荷的离子所中和。

于是稳定因素被破坏，蛋白质聚集沉淀。

盐析作用一般不使蛋白质变性。

2、有机溶剂沉淀蛋白质原理：某些有机溶剂（如乙醇、甲醇、丙醇等），因引起蛋白质脱去水化层以及降低介电常数而增加带电质点间的相互作用，致使蛋白质颗粒容易凝聚而沉淀3、重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质原理：重金属离子（如Pb2+、Cu2+等）与蛋白质的羧基等结合生成不溶性的金属盐类而沉淀，同时蛋白质发生变性。

蛋白质的沉淀与变性实验报告蛋白质的沉淀与变性实验报告蛋白质是生物体内非常重要的一类有机化合物，它们在细胞的结构、功能和代谢中发挥着关键的作用。

为了研究蛋白质的性质和功能，科学家们经常进行各种实验。

本实验旨在探究蛋白质的沉淀与变性过程。

实验首先进行的是蛋白质的沉淀实验。

我们选取了鸡蛋清作为实验样品，因为鸡蛋清中含有丰富的蛋白质。

我们将鸡蛋清倒入试管中，并加入适量的乙醇。

乙醇可以与蛋白质发生相互作用，使其沉淀下来。

实验中我们使用了不同浓度的乙醇溶液，观察其对蛋白质沉淀的影响。

实验结果显示，随着乙醇浓度的增加，蛋白质的沉淀量逐渐增加。

这是因为乙醇能够与蛋白质中的水分子发生氢键作用，导致蛋白质分子间的相互作用力增强，从而使蛋白质变得不溶于水而沉淀下来。

当乙醇浓度达到一定程度时，蛋白质的沉淀量达到最大值，此后再增加乙醇浓度并不会引起更多的蛋白质沉淀。

这是因为乙醇的浓度过高会导致蛋白质分子间的相互作用力过强，使其聚集成大块而不是沉淀下来。

在进行蛋白质的变性实验时，我们选取了鸡蛋清中的卵清蛋白作为实验样品。

卵清蛋白是一种具有稳定的三维结构的蛋白质，通过变性处理可以使其失去原有的结构和功能。

我们采用了两种方法对卵清蛋白进行变性处理：热变性和酸变性。

首先进行的是热变性实验。

我们将卵清蛋白溶液加热至80摄氏度，并保持一段时间。

实验结果显示，随着加热时间的增加，卵清蛋白的结构逐渐破坏，失去了原有的透明度，变得浑浊。

这是因为高温可以破坏蛋白质分子内部的氢键、疏水作用力和范德华力等相互作用，使蛋白质分子失去稳定的三维结构。

接下来进行的是酸变性实验。

我们将卵清蛋白溶液加入适量的盐酸，使其呈酸性。

实验结果显示，随着酸性溶液的加入，卵清蛋白的结构发生了明显的改变，透明的溶液变得浑浊。

这是因为酸性条件下，蛋白质分子中的氨基酸残基带正电荷，导致蛋白质分子间的相互排斥增强，结构发生变化。

通过这两个实验，我们可以看到蛋白质在不同条件下的沉淀和变性过程。

蛋白质的沉淀与变性实验报告一、实验目的1、掌握蛋白质沉淀和变性的原理及方法。

2、观察蛋白质沉淀和变性的现象，区分二者的不同。

3、了解影响蛋白质沉淀和变性的因素。

二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物，其分子表面带有许多可解离的基团，如氨基、羧基等，在一定的溶液 pH 值条件下，这些基团会解离而使蛋白质带电。

此外，蛋白质分子还具有亲水基团，能够与水分子形成氢键，从而使其溶解于水溶液中。

当溶液的条件发生改变时，如加入某些试剂、改变溶液的 pH 值、温度等，蛋白质的性质会发生改变，可能会出现沉淀或变性的现象。

蛋白质沉淀是指蛋白质分子从溶液中析出的过程，其原因可能是由于蛋白质分子表面电荷被中和、水化膜被破坏等。

蛋白质沉淀后，如果去除引起沉淀的因素，蛋白质可以重新溶解，恢复其原有的性质。

蛋白质变性是指蛋白质在某些物理或化学因素的作用下，其空间结构被破坏，从而导致其生物活性丧失的现象。

蛋白质变性后，通常不能再恢复其原有的结构和功能。

三、实验材料与仪器1、材料鸡蛋清溶液牛奶饱和硫酸铵溶液乙醇硝酸银溶液硫酸铜溶液氢氧化钠溶液盐酸溶液乙酸铅溶液2、仪器试管滴管玻璃棒酒精灯恒温水浴锅四、实验步骤（一）蛋白质的沉淀实验1、盐析沉淀取两支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。

向其中一支试管中逐滴加入饱和硫酸铵溶液，边加边振荡，直至出现沉淀。

静置一段时间，观察沉淀现象。

2、有机溶剂沉淀取两支试管，分别加入 2ml 牛奶。

向其中一支试管中逐滴加入乙醇，边加边振荡，直至出现沉淀。

静置一段时间，观察沉淀现象。

3、重金属盐沉淀取三支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。

向第一支试管中滴加几滴硝酸银溶液，向第二支试管中滴加几滴硫酸铜溶液，向第三支试管中滴加几滴乙酸铅溶液。

观察沉淀现象。

4、生物碱试剂沉淀取两支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。

向其中一支试管中滴加几滴氢氧化钠溶液，向另一支试管中滴加几滴盐酸溶液。

观察沉淀现象。

实验一蛋白质的沉淀与凝固蛋白质溶液是一稳定的亲水性胶体溶液。

其稳定的因素有二：一是蛋白质胶粒上的电荷使之相互排斥;不易凝集成团；二是胶粒表面的水化膜，它使胶粒与水融恰相依，又在胶粒之间起了隔离作用。

如果上述二种稳定蛋白质溶液的因素被破坏，蛋白质将于溶液中沉淀析出。

一.蛋白质的盐析[原理]高浓度的盐离子可与蛋白质胶粒争夺水化膜，同时盐又是强电解质，可抑制蛋白质的解离。

因而用高浓度的中性盐，使蛋白质带电量减少，水化膜破坏而从溶液中沉淀出来。

盐析沉淀蛋白质一般不引起蛋白质变性，故常用于分离各种天然蛋白质。

由于蛋白质的组成及性质不同，所以盐析时所需中性盐的浓度也不相同。

例如半饱和的硫酸铵沉出球蛋白，饱和的硫酸铵则沉出清蛋白。

[操作]1.取一试管，加入3m15％蛋白质溶液及3m1饱和硫酸铵溶液，摇匀静止数分钟后观察现象。

2.将试管内容物过滤，加硫酸铵粉末于滤液中，使达饱和状态。

摇匀后观察现象。

(注意固体硫酸铵加到过饱和则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混淆。

)3.取上项混浊液1m1，加水2ml，观察是否复溶。

二.乙醇沉淀蛋白质[原理]乙醇是脱水剂，可与蛋白质争夺水化膜，此外，加入乙醇可使水的介电常数变小，蛋白质解离度降低，带电量减少。

故加入乙醇可使蛋白质沉淀。

用此法在低温下操作可使沉出的蛋白质保持其理化特性及生物学活性，但于室温中操作则往往使蛋白质变性。

[操作]1.取试管4支，标以1、2、3、4号码，按下表操作2.将3管及4管置冰水浴中，放置5分钟，然后将第4管的冰乙醇倒入第3管中并混匀，同时向第1及第2管中加入未冰浴的乙醇2ml混匀。

观察各管的沉淀情况并立即向第1、2及3管中各加入蒸馏水10ml，混匀(注意此步要求迅速)比较各管变化并解释之。

三.重金属盐、生物碱试剂沉淀蛋白质[原理]在溶液的PH值大于或小于蛋白质的等电点时，带负电荷或带正电荷的蛋白质可与Pb2+、Hg2+、Cu2+、Ag+等重金属离子或苦味酸、三氯醋酸、钨酸、磷钼酸等生物碱试剂(能使生物碱沉淀的试剂)结合成盐而沉淀析出。