高效液相操作规程

高效液相色谱操作规程（配示差折光检测器RID）一、开机前准备1.检查桌面是否清洁、整齐。

2.检查设备是否清洁，连接管线是否正常，色谱柱是否需要更换。

3.检查电源线有无破损。

4.接通电源，检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常。

5.准备好超声过的流动相和流路冲洗溶剂。

二、开机1.运行检查，打开仪器各部件开关，待机器自检，核实无异常。

2.打开电脑，并打开软件。

（连接仪器与电脑）3.设定柱温箱温度一般为30℃。

4.拧松脱气阀（大约1.5圈左右），设定purge程序约5min,停止后拧紧阀门。

5.执行自动进样器清洗的三个命令（灌注注射器/Prime Syrings、清洗缓冲环/Wash Buf fer Loop和清洗真外壁/Wash Needle Externally）,并将进样阀切换至lnject的状态进行平衡（WPS带T的型号才可进行样品盘温度设置）6.打开示差折光检测器，设定purge程序约5min，停止后用配置好的有机相水溶液平衡30min。

7.监测基线，待平衡后开始测样分析。

三、关机1.关闭仪器各部件上的电源开关,并关闭电脑。

2.拔掉机器电源插头四、安全及操作注意事项1.流动相冲洗用的水，必须是重蒸水或2次蒸馏水，并用微孔滤膜过滤，而且要定期更换，防止长细菌堵塞仪器管路。

建议每周至少更换两次。

2.按比例配置流动相于一个泵中，并在测样时只使用一个泵中的流动相。

3.流动相中有盐或酸时，在流动相冲洗前后一定要用水冲洗流路，防止柱效下降、堵塞或柱塌陷。

4.设置梯度时维持同一梯度浓度至结束。

5.示差折光检测器对温度敏感，维持室内在一定温度。

6.仪器长期不用时，应用甲醇冲洗各流路。

lc20at高效液相色谱仪操作规程
《LC20AT高效液相色谱仪操作规程》
一、设备准备
1. 打开色谱仪电源，确认仪器是否处于正常工作状态。

2. 打开色谱软件，连接色谱仪，确认软件和仪器能够正常通讯。

3. 检查色谱柱是否安装正确，连接管路是否畅通。

二、样品准备
1. 将待测样品溶解于适当的溶剂中，确保样品溶液的浓度适宜且清澈透明。

2. 过滤样品溶液，去除悬浮物和杂质。

三、色谱条件设置
1. 根据实际需要，设置色谱柱类型、流动相和流动相梯度。

2. 设置检测波长和响应时间，根据样品的特性选择合适的波长进行检测。

四、系统平衡
1. 开始启动色谱软件，并依照预设条件进行系统平衡，确保色谱柱内部的平衡和稳定。

2. 检查泵流速、进样器和检测器的工作状态，确认无异常。

五、进样测定
1. 启动自动进样器，进行样品的进样。

2. 根据实验需求，设置进样体积和进样方式，确保样品进样量和方式的准确性。

六、数据处理
1. 实时监控色谱图谱，确保分离效果与预期一致。

2. 根据检测结果，进行数据分析和处理，生成结果报告。

七、仪器关闭
1. 实验结束后，关闭色谱软件，断开色谱仪与电脑之间的连接。

2. 关闭色谱仪电源，清洁仪器表面，确保仪器干净整洁。

八、日常维护
1. 定期检查和清理色谱柱和管路，防止堵塞和杂质积聚。

2. 记录仪器使用情况，定期进行保养和维修，确保仪器的正常运转。

以上即是《LC20AT高效液相色谱仪操作规程》，希望操作人
员严格遵守操作规程，确保实验数据的准确性和仪器的长期稳定运行。

文件制修订记录1.目的建立高效液相色谱（荧光检测器）的操作规程，使检验员正确使用高效液相色谱，确保实验结果准确性。

2.适用范围适用于检验人员使用高效液相色谱。

3.操作规程3.1开机：按下输液泵和检测器模块电源开关，蜂鸣器短暂鸣响，进入自检界面，然后进入程序主界面。

打开柱温箱，设置柱温。

3.2排液：将进液管及过滤头放入相应流动相，将排液阀旋钮以逆时针方向旋转180°，以打开排液阀。

开启purge键，以9mL/min的流速开始排空，3min后自动停止排空。

3.3流量设定：在输液泵模块，按“Func”光标在“流量设定”字段中闪烁，按照标准要求，输入0.8或1.0mL，按“Enter”确认。

开始走基线，以低流速运行30min左右。

3.4波长设定：在检测器模块，按“Func”键，光标闪烁，根据国标输入标准中要求的Ex和Em波长，按“Enter”确认。

按“CE”回到初始界面。

按“zero”基线归零。

3.5登录在线用户：电脑开机，打开色谱工作站软件“N2000+在线”，点击仪器1登陆，阶层：管理员，密码：123456。

3.6设置实验方法：点击“实验信息”编辑项目、单位、简介，设置保存路径，勾选是否扣除背景。

点击“方法”设置仪器配置、组分表、计算、谱图显示、报告编辑。

在“仪器配置”菜单下的“仪器描述1”模块中设置波长、流速、柱温等仪器信息，在“进样阀”模块下设置进样体积、结束时间和标题格式（样品批号），点击“采用”，保存方法。

下次可直接调用方法。

3.7设置积分方法：在“采集数据”模块下，点击“零点校正”下方的按钮，可显示隐藏菜单，在“方法：全局参数”的积分参数表中设置峰宽、峰高、最小面积、锁定时间、漂移、负峰阈值、扣除背景，点击“采用”完成设置并保存。

在“方法：手动积分”模块下，可以对谱图进行手动积分。

在“结果”模块下，可以查看谱图积分结果。

3.8数据采集：在进样信息模块下输入样品批号后，点击“采集数据”，进入采集界面，点击“查看基线”，待基线走稳后，点击“零点校正”，并在检测器上按“zero”按钮，使基线归零。

高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生命科学、环境监测等领域。

为了保证色谱仪的正常运行和准确分析结果，需要遵守以下操作规程：1. 准备工作a. 首先，确保色谱仪及其附件的电源已接通，并确认仪器处于正常工作状态。

b. 检查溶剂桶内的溶剂是否充足并无杂质，并确认管路连接正常。

c. 检查流动相液位是否正常，并调整泵的流速和梯度程序参数。

2. 样品制备和准备a. 样品应充分溶解并过滤净化，以避免样品中的杂质对色谱分离产生干扰。

b. 选择合适的进样方式（自动或手动），并根据进样方式调整进样器的参数。

3. 进样器操作a. 将样品注射器插入进样口，并注意不要损坏色谱柱。

b. 设置进样体积和进样速度等参数，并进行一次空白进样以清洗进样器。

4. 色谱柱准备a. 定期检查色谱柱是否损坏，并根据需要更换。

b. 根据实验需要选择合适的色谱柱，并注意记录色谱柱的批号和使用次数。

5. 柱温控制a. 根据分析需要选择合适的柱温，并使用温度控制系统保持恒定。

b. 注意避免温度突变和波动，以保证分析结果的准确性和重复性。

6. 检测器操作a. 根据需要选择合适的检测器，如紫外-可见光检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电导检测器等。

b. 设置检测器的参数，如波长、增益和灵敏度，并进行基线校准。

7. 数据采集与处理a. 启动数据采集系统，并设置采集参数，如采样率、数据类型和运行时间等。

b. 对采集到的数据进行处理和分析，如峰识别、定量分析和峰面积计算。

8. 清洗和维护a. 实验结束后，关闭色谱柱和进样器的阀门，并用溶剂清洗色谱柱和进样器，以防止堵塞和降低杂质残留。

b. 清洗完成后，注意关闭色谱仪的电源，并按照要求对色谱柱和进样器进行维护和保养。

总结：高效液相色谱仪的操作规程包括准备工作、样品制备、进样器操作、色谱柱准备、柱温控制、检测器操作、数据采集与处理以及清洗与维护等。

遵守这些规程可以确保色谱仪的正常运行和准确分析结果，提高实验效率。

高效液相色谱法标准操作规程1. 目的建立高效液相色谱法标准操作规程，规范高效液相色谱法检验操作，保证检验操作规范化。

2. 范围适用于高效液相色谱法检验操作。

3. 术语或定义N/A4. 职责质量控制部对本规程的实施负责。

5. 程序5.1依据《中国药典》2020年四部及2019年版《中国药品检验标准操作规范》。

5.2 简述高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

5.3 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。

5.3.1色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等) 也有使用。

正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。

离子交换色谱系统使用离子交换填充剂; 分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。

填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。

孔径在15nm(lnm=10A)以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。

除另有规定外，分析柱的填充剂粒径一般在3～10μm之间。

粒径更小(约2μm)的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm) 。

使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。

当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。

高效液相色谱仪的操作规程
说明：高效液相色谱仪应安装在有强力通风的实验室中，实验室的高处和低处应设置两个通风口，以利于低沸点和高沸点有机溶剂蒸汽的排放，以保证实验室工作
人员的安全。

一．目的：提供通用的高效液相色谱仪的操作规程
二．范围：适用于侨昌化学有限公司高效液相色谱仪的操作
三．操作规程
1.准备好用作流动相的各种溶剂，经过滤（通过≤0.5um的滤膜）、脱气后，按比例配好
置于储液罐中。

梯度洗脱时，每种溶剂置于一个储液罐中，将溶剂过滤器插入储液罐底部，
2.将选用的高效液相色谱柱安装在流路中，拧紧连接的柱接头。

3.检查并连接好电路，将检测器输出信号线与数据处理系统连接好。

4.打开高压输液泵电源开关，调节色谱流动相流量 1.0ml/min。

（对内径 4.6mm、柱长
10—25cm色谱柱，填充5—10um填料，柱前压约6—15MPa）。

5.PURGE,冲洗泵头3-5MIN
6.开泵，平衡色谱柱系统。

7.打开可变波长紫外吸收检测器电源，调节好检测波长，排除吸收池中的气泡，待检测器
输出的基线稳定后，就可进行分析。

8.检测
9.若使用折光指数检测器，打开电源后，首先确定检测器温度，待恒温后，再选定待测的
折光指数间隔，待基线稳定后可进行分析。

10.如欲进行梯度洗脱，可由梯度控制单元设定欲进行的梯度洗脱程
序，进样后就可按梯度洗脱程序进行分析。

11.分析结束后，继续用流动相清洗进样阀和检测器约10—20min。

12.依次关闭检测器、梯度洗脱装置，高压输液泵的电源。

高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography, HPLC）是一种对样品进行分离、检测的仪器。

对于化学、生物等领域的研究者来说，熟练掌握HPLC 的操作规程非常重要。

本文将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。

设备准备在操作HPLC仪器之前，需要先对设备进行准备。

首先，需要检查仪器周围的环境是否清洁整洁。

注意检查废液罐、洗涤液罐的液位，以免在后续的使用中发生意外。

其次，需要准备好各种试剂和标准品，确保它们的适用性和相应的浓度范围。

需要使用高纯度的溶剂，在使用之前应先过滤，去除其中的杂质，保证后续操作的准确性和稳定性。

最后，对仪器进行预热操作。

通常情况下，需要对色谱柱和检测器进行预热，保证它们的温度稳定。

样品的制备样品的制备是至关重要的一步。

通常情况下，为了提高样品的净化程度和浓度，需要使用不同的制备方法，如提取、稀释、过滤等。

在进行样品制备时，需要注意以下几点：1.确认样品是否熔点低于所用的溶剂的沸点；2.确认样品是否需要进行提取或加强洗涤效果；3.对于样品的稀释和过滤操作，需要注意其可能带来的影响。

色谱柱的选择选择合适的色谱柱对于操作效果的影响很大，需要充分考虑实验的目的和测试要求进行选择。

选择色谱柱时，应注意以下几点：1.选择合适的材料和孔径；2.确认所选柱是否能够满足测量要求；3.确认所选柱的分离效应是否满足实验要求。

操作流程1.开机操作：根据仪器所得操作指南进行开机操作。

2.准备工作：将所需样品移至自动进样器，调整电量，并确认流速和溶剂比例是否正确。

3.洗涤操作：洗涤色谱柱，将废液排出废液罐中。

4.样品进样：按照操作指南将样品注入样品进样器中。

5.柱温控制：调节色谱柱的温度以控制柱的温度稳定。

6.流速控制：根据样品要求调节流速。

7.数据收集操作：实时收集并记录数据，如果需要，可以修改柱温、流速等操作参数。

8.数据处理：对数据进行处理和分析。

高效液相操作规程一、目的本操作规程旨在规范高效液相色谱（HPLC）的使用流程，确保实验的准确性和重复性，同时保障操作人员的安全。

二、适用范围本规程适用于所有使用高效液相色谱仪进行分析的实验室人员。

三、操作步骤1. 准备工作a. 确保所有使用的试剂纯度符合要求，且无污染。

b. 检查并清洁色谱柱，保证无残留物影响分析结果。

c. 根据实验要求准备流动相，并调整至适当比例。

2. 仪器开机a. 打开电源，预热仪器至工作温度。

b. 检查并确保所有管道连接正确无漏液现象。

c. 启动色谱软件，进行系统自检。

3. 样品准备a. 根据实验要求，准确称量并溶解样品。

b. 通过适当方式（如过滤或离心）去除样品中的不溶物。

4. 样品注射a. 使用适当的注射器抽取样品。

b. 打开注射口，准确注射样品，然后封闭注射口。

5. 分析运行a. 根据实验方法设置流动相流速、柱温等参数。

b. 启动分析程序，实时监控色谱图谱。

c. 记录并保存分析数据。

6. 结束操作a. 关闭分析程序，停止流动相输送。

b. 清洗系统，包括色谱柱和注射器。

c. 关闭仪器电源，清理工作台面。

四、注意事项1. 在操作过程中应穿戴适当的实验室防护装备。

2. 避免直接接触有毒或腐蚀性的试剂和样品。

3. 定期对仪器进行维护和校准，确保分析结果的准确性。

4. 遇到任何异常情况，应立即停止操作并报告给实验室负责人。

五、安全措施1. 熟悉并遵守实验室安全规程。

2. 操作过程中应使用防护眼镜、实验服和手套。

3. 对于易挥发或有毒溶剂，应在通风良好的环境下操作。

4. 紧急情况下，立即启动紧急冲淋设备，并寻求医疗救助。

六、记录与报告1. 记录所有操作参数和样品分析结果。

2. 对于任何偏离标准操作的情况，应详细记录并报告。

3. 定期对操作记录进行审核，以优化操作流程和提高分析质量。

WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）1流动相的处理1.1过滤溶剂溶剂在使用前要用过滤器过滤，有机相和纯水相通常可以不过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。

同时一些缓冲盐溶液过夜后易生菌，使用前要抽滤或者重新配制。

实验室应有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水相时，要先用1-2ml 水润湿过滤膜，有助于快速抽滤。

1.2保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。

流动相瓶子要保持清洁。

1.3保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。

1.4 故障及解决方法1.4.1 流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。

可试用下列方法解决问题：a、流动相再脱气；b、采用更有效的脱气方法（如抽滤）或两种方法配合使用；c、改系统内混合为系统外预混合。

1.4.2 流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。

应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。

输液管道上装滤头沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。

过滤器阻塞会引起管道和泵腔进气泡，压力不稳。

压力不稳时，如果已经排除流动相混合不均匀的状况，则观察滤头外部是否长毛（一般水相滤头易长毛），去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，是过滤器被微粒所阻塞或长霉。

解决方法：a、换上新的过滤器（滤头）。

b、将滤头拆下，先用纯水超声15min，再换50%甲醇水溶液超声，再换纯甲醇超声，如果是水相的滤头，在安装前还需要用纯水超声。

如果上述还不能解决问题，则使用10%稀硝酸水溶液超声滤头，可起到除去菌类微生物的作用。

1.4.3 检测器和流动相管路被污染由于污染，噪音越来越大，检测器被污染。