4CN显色试剂盒(HRP显色)

hrp显色技术的基本流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!HRP显色技术基本流程。

1. 样品制备，将待检测的样品用适当的溶剂稀释或处理，以达到检测要求的浓度范围。

●产品简介※ Galaxybio 公司研发的活化HRP，对优质辣根过氧化物酶次序偶联，再活化，使辣根酶富含活性基团。

一经活化的HRP，极易和含氨基NH2的小分子或蛋白氨基NH2的共价结合。

因此使用本方法标记物，具有标记率高、活性好、本底低及非常敏感等特点。

敏感性一般是传统过碘酸法标记3~5倍。

微量包装的活化HRP，特别适合科研用的昂贵抗体的标记。

也适合抗体抗原活性的检测。

※一步标记，简便快速。

与待记抗原或抗体混合后（约12个小时过夜标记或37℃2小时。

）※可以微量标记，节省昂贵的抗原抗体※无需透析，即时使用；※标记率极高，可大于95%；敏感性一般是传统过碘酸法标记3~5倍。

※本试剂盒针对氨基进行标记，故只对含有氨基的分子。

可以进行抗原或其他蛋白的标记。

小分子的标记，如瘦肉精、DNA、多肽等等，标记时，如要提高HRP的利用率，可以加入过量的小分子，然后透析除去游离的小分子；如果要即时使用，参考蛋白抗原的标记，减少小分子的用量，从而减少游离的小分子。

※本底远远低于其它方法。

●注意事项：1. 抗原抗体如果是存在于硫酸铵、甘氨酸或Tris缓冲液中，需以PBS缓冲液充分透析，也可以超滤离心管进行超滤；微量的含NH2 的小分子，会严重影响标记率。

2. 反应体系一般100μl～300ul /1mgHRP；太小，可能发生自身交联；也不要太大，太大会影响标记率。

3. REAGENT Ⅲ 终止液，封闭残余活化基团。

4. 注意反应 pH值约维持在9.5左右。

pH值太低，多加反应启动剂。

5.特别提醒，是后续试验中，酶标板条种类不同，本底差异特别大。

当本底高时，以较高浓度蛋白溶液封闭的酶标板，同时把酶标稀释液的蛋白浓度加大。

如果问题依旧存在，请联系我们技术咨询。

6 本试剂仅用于科学研究；●操作步骤：以1mg活化HRP，标记抗体为例（反应体系根据HRP的mg数相应增加）1. 准备待标记物：以蒸馏水或超纯水把待标记物溶解成约1mg/ml。

Western Blot显色篇WB蛋白印迹在生物化学这一块是常规实验，就像有人说炒菜中境界最高也最难的是蛋炒饭一样，实验中常规实验也是很考验技能的，除了潜心研究原理、认真揣摩技巧以外，对于新实验试剂的信息把握，勇于尝试新方法也是非常之重要的——各大厂家都在不断开发更方便更灵敏的新产品，“idea是生产力”嘛，因此生物通这里介绍一些能把我们从日常操作中解脱出来，获得“升级版”效果WB产品。

讲完了Western Blotting的电泳转移仪器，蛋白分子量标准和转移膜之后，我们最后来探讨一下WB的检测系统。

一般的WB检测过程中，都会有封闭、一抗、二抗和底物显色这四道工序要“加工”。

我个人觉得底物显色这最后一步是最关键的，也是最有文章可以作的一个部分。

你看，光标记方式就有生物素标记，地高辛标记，各种酶标记等等，酶标的底物又有各种生色底物、化学发光法底物和荧光底物可供选择；就连识别一抗的配体也不一定非要二抗不可，也可以是抗生物素蛋白，链亲和素或者Protein A或G等，更别说各种试剂盒琳琅满目，叫人好像无从下手！不过不急，生物通帮你作个参考，让你对各种产品的优点缺点一览无遗，真正成为一个WB高手。

另外如果实验室有已经建立的固定的显色方法，那也没关系，有时候不经意浏览到的方法可能就会对你的实验有莫大的帮助——这也就达到我们的目的了。

与蛋白质组学一线专家面对面，赶快报名参加第二期蛋白质组学技术与应用高级培训班！封闭和一抗的选择没有太多的选择余地——封闭前面介绍过了；一抗？现在的抗体产品说明书一般都有注明应用范围的，说明可以用于WB的就OK。

如果没有这些信息可以遵从以下原则：单抗专一性高，但是经过SDS-PAGE变性胶电泳的蛋白质可能由于原来的识别位点构象发生改变而不被识别，多抗不如单抗专一性高但更容易得到结果。

如果还有多种抗体选择，那当然是来源于兔或者小鼠抗体为好，因为后继的检测试剂盒一般都是针对兔鼠的居多，因而选择范围更大通用性也更强。

多色免疫荧光染色试剂盒使用说明多色免疫荧光染色试剂盒使用说明酪酰胺信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA技术同样采纳HRP标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤(HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。

之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，重复下一种一抗-hrp二抗来其次轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。

TSA具体原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与四周的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到10-100倍增加。

简洁来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP(而不是直接偶联荧光素)，来催化后续添加入体系的非活性荧光素。

荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟接近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。

然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。

再换个一抗来其次轮孵育，周而复始。

等到全部抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最终去检测结果。

由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担忧抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大削减了试验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。

也就是说，假如用TSA技术，同一张片子上全部的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。

搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以进行试验，而且信号放大的倍数大大增加。

茹创生物开发的试剂盒详细酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种：TYR-480，TYR-520，TYR-570，TYR-620，TYR-690，TYR-780。

人4-羟基壬烯酸（4-HNE）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆,组织及相关液体样本中4-羟基壬烯酸（4-HNE）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人4-羟基壬烯酸（4-HNE）水平。

用纯化的人4-羟基壬烯酸（4-HNE)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入4-羟基壬烯酸（4-HNE），再与HRP标记的4-羟基壬烯酸（4-HNE）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的4-羟基壬烯酸（4-HNE）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人4-羟基壬烯酸（4-HNE）浓度。

样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。

神经HRP 示踪显色液(TMB 法)简介：上个世纪70年代，Kristensopn 和Olsson 报道了HRP 可神经末梢摄取，经轴浆逆行运输至神经元胞体，经组织化学方法可显示出神经元的轮廓，从而开发出HRP 追踪神经元示踪技术，即为HRP 法。

3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)是非常优越的酶免试验显色剂，能溶解于多种有机溶剂和双蒸水中，为稳定的无色溶液，与适量过氧化脲或双氧水与缓冲液混匀后，与过氧化物酶作用产生清晰的蓝色产物，极易观察，在辣根过氧化物酶的催化下, TMB 会产生蓝色沉淀，该沉淀不溶于水和乙醇，显色后呈蓝色，可在显微镜下观察。

Leagene 神经HRP 示踪显色液(TMB 法)是动物经麻醉、注入HRP 后，游离或络合型的HRP 与氧化剂反应生成络合物，该络合物氧化供氢的TMB 显色剂，呈蓝色，在显微镜下清晰可见，该检测法较DAB 法灵敏。

该显色液仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：(一)、准备工作1、动物麻醉：多用(3.5%)戊巴比妥钠作为麻醉剂，大鼠的麻醉剂量。

2、导入HRP ：有压力注射法、电泳法以及周围神经系统的注射涂抹等法。

3、确定动物存活期。

4、动物灌注：麻醉后，经左心室升主动脉插管行心内灌注固定。

先用生理盐水或PBS 快速灌注。

随后用的多聚甲醛固定液灌注，先快后慢，时间控制在30-40min 。

最后用蔗糖磷酸缓冲液(pH7.4)。

5、取材：取组织置于蔗糖磷酸盐缓冲液中，切片，存于蔗糖磷酸盐缓冲液备用。

(二)、显色反应1、配制TMB 孵育液：取适量的TMB assay buffer 和TMB 显色液，TMB assay buffer ：TMB 显色液按一定的比例混合，即为TMB 孵育液，即配即用，不宜保存。

编号 名称DK0045 50T Storage试剂(A): TMB assay buffer 2×500ml RT 避光 试剂(B): TMB 显色液 30ml -20℃ 避光 试剂(C): TMB 增强剂 2×1mlRT使用说明书1份2、配制TMB显色工作液：取适量的TMB孵育液和TMB增强剂，TMB孵育液：TMB增强剂按一定的比例混合(具体比例应根据具体时间摸索确定)，即为TMB显色工作液，即配即用，不宜保存。

hrp标记二抗的显色原理
HRP（Horseradish Peroxidase，辣根过氧化物酶）标记二抗是一种被广泛用于免疫
染色的技术。

该技术是一种非常敏感的技术，能够快速准确的检测和定位细胞的特定抗原。

它的基本原理是利用多氧化物酶HRP的特定特性配合荧光物质和碘醛来染色检测抗原，具
体的检测过程如下：
首先，把HRP标记的抗体和抗原结合在一起，结合相应的抗原，无论是单链抗体还是
双链抗体，它们都能够与抗原结合形成特异性抗原抗体复合物，HRP标记抗体在此过程中
就充当特异性抗原抗体的角色。

接着，在抗原抗体复合物的反应中添加一种叫做TMB的化学物质，此时HRP标记的抗
体就会利用原子氧做过氧化反应，产生了装着三价碘原子的化合物，即碘醛。

碘醛与TMB
发生反应，溶解发生发蓝色，最终形成显色物质，就可以对抗原进行检测出来。

HRP标记二抗的显色原理是基于HRP标记抗体发挥结合特异性反应，以及HRP多氧化
活性，HRP标记抗体结合到目标抗原所产生的特异性抗原抗体复合物中，利用HRP的多氧
化特性加氧反应，将氧化现象应用到与其体外透明的TMB的溶液系统中，TMB与碘醛发生
反应，并生成特征的蓝色，形成蓝色沉淀，而这种蓝色沉积的大小就代表了物体存在的抗
原抗体的数量，因此我们就可以用这种来方法判断抗原的存在数量。

TMB和HRP显色原理TMB和HRP是两种常用的生化试剂，它们可以被用于检测蛋白质、核酸等生物分子。

这两种试剂在实验室中被广泛应用，尤其是在免疫学和分子生物学领域。

本文将介绍TMB和HRP显色原理的基本知识，并探索它们在实验中的应用。

TMB显色原理TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯基二胺）是一种常用的底物，它可以被氧化酶催化剂转化成可见的蓝色产物。

这种催化剂通常是过氧化物酶（POD）或碱性磷酸酶（AP）。

TMB的显色原理可以用以下反应式表示：TMB + H2O2 + POD/AP → OX-TMB + H2OOX-TMB是一种氧化物，它的颜色比TMB更深。

因此，当TMB被氧化后，溶液会从无色或浅黄色变为蓝色或深紫色。

这种反应的灵敏度很高，因此可以用于检测很低浓度的蛋白质或其他生物分子。

HRP显色原理HRP（辣根过氧化物酶）是一种常用的酶标记试剂，它可以与抗体或其他分子结合，用于检测蛋白质、核酸等生物分子。

HRP的显色原理也是氧化还原反应。

HRP可以将底物（如TMB）氧化成可见的产物。

HRP的显色原理可以用以下反应式表示：HRP + H2O2 + Substrate → OX-Substrate + H2OOX-Substrate是一种氧化产物，它的颜色比底物更深。

因此，当底物被氧化后，溶液会从无色或浅黄色变为蓝色或深紫色。

这种反应的灵敏度很高，因此可以用于检测很低浓度的蛋白质或其他生物分子。

应用TMB和HRP显色原理在实验室中被广泛应用，尤其是在免疫学和分子生物学领域。

以下是一些应用示例：1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA是一种常用的免疫学检测方法，它可以用于检测蛋白质、抗体、荷尔蒙等生物分子。

在ELISA中，TMB和HRP被用作底物和酶标记试剂，用于检测特定分子的存在和浓度。

这种技术被广泛应用于医学、生物技术和环境监测等领域。

2. 蛋白质印迹（Western blot）Western blot是一种常用的蛋白质检测方法，它可以用于检测特定蛋白质的存在和表达量。

WB蛋白印迹在生物化学这一块是常规实验，就像有人说炒菜中境界最高也最难的是蛋炒饭一样，实验中常规实验也是很考验技能的，除了潜心研究原理、认真揣摩技巧以外，对于新实验试剂的信息把握，勇于尝试新方法也是非常之重要的——各大厂家都在不断开发更方便更灵敏的新产品，“idea是生产力”嘛，因此生物通这里介绍一些能把我们从日常操作中解脱出来，获得“升级版”效果WB产品。

讲完了Western Blotting的电泳转移仪器，蛋白分子量标准和转移膜之后，我们最后来探讨一下WB的检测系统。

一般的WB检测过程中，都会有封闭、一抗、二抗和底物显色这四道工序要“加工”。

我个人觉得底物显色这最后一步是最关键的，也是最有文章可以作的一个部分。

你看，光标记方式就有生物素标记，地高辛标记，各种酶标记等等，酶标的底物又有各种生色底物、化学发光法底物和荧光底物可供选择；就连识别一抗的配体也不一定非要二抗不可，也可以是抗生物素蛋白，链亲和素或者Protein A或G等，更别说各种试剂盒琳琅满目，叫人好像无从下手！不过不急，生物通帮你作个参考，让你对各种产品的优点缺点一览无遗，真正成为一个WB高手。

另外如果实验室有已经建立的固定的显色方法，那也没关系，有时候不经意浏览到的方法可能就会对你的实验有莫大的帮助——这也就达到我们的目的了。

封闭和一抗的选择没有太多的选择余地——封闭前面介绍过了；一抗？现在的抗体产品说明书一般都有注明应用范围的，说明可以用于WB的就OK。

如果没有这些信息可以遵从以下原则：单抗专一性高，但是经过SDS-PAGE变性胶电泳的蛋白质可能由于原来的识别位点构象发生改变而不被识别，多抗不如单抗专一性高但更容易得到结果。

如果还有多种抗体选择，那当然是来源于兔或者小鼠抗体为好，因为后继的检测试剂盒一般都是针对兔鼠的居多，因而选择范围更大通用性也更强。

除了无标记的一抗，还有生物素等各种标记一抗。

还听说有用荧光标记的一抗直接检测而降低背景和非特异结合，不过由于少了二抗的级联放大信号扩增，信号也会比较弱，所以需要选择荧光信号特别明亮的标记（Invitrogen 收购了著名的Molecular Probes后有推出Alexa Fluor的抗体标记试剂盒，生物通这里有详细而精彩的介绍，我们就不罗嗦了。

人4-羟基壬烯醛（4-HNE）试剂盒（ELISA）使用说明书●本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人4-羟基壬烯醛（4-HNE）的含量。

●有效期：6个月●保存条件：2-8℃●本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被人4-羟基壬烯醛（4-HNE）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的人4-羟基壬烯醛（4-HNE）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。

为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。

最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

Western Blot显色篇WB蛋白印迹在生物化学这一块是常规实验，就像有人说炒菜中境界最高也最难的是蛋炒饭一样，实验中常规实验也是很考验技能的，除了潜心研究原理、认真揣摩技巧以外，对于新实验试剂的信息把握，勇于尝试新方法也是非常之重要的——各大厂家都在不断开发更方便更灵敏的新产品，“idea是生产力”嘛，因此生物通这里介绍一些能把我们从日常操作中解脱出来，获得“升级版”效果WB产品。

讲完了Western Blotting的电泳转移仪器，蛋白分子量标准和转移膜之后，我们最后来探讨一下WB的检测系统。

一般的WB检测过程中，都会有封闭、一抗、二抗和底物显色这四道工序要“加工”。

我个人觉得底物显色这最后一步是最关键的，也是最有文章可以作的一个部分。

你看，光标记方式就有生物素标记，地高辛标记，各种酶标记等等，酶标的底物又有各种生色底物、化学发光法底物和荧光底物可供选择；就连识别一抗的配体也不一定非要二抗不可，也可以是抗生物素蛋白，链亲和素或者Protein A或G等，更别说各种试剂盒琳琅满目，叫人好像无从下手！不过不急，生物通帮你作个参考，让你对各种产品的优点缺点一览无遗，真正成为一个WB高手。

另外如果实验室有已经建立的固定的显色方法，那也没关系，有时候不经意浏览到的方法可能就会对你的实验有莫大的帮助——这也就达到我们的目的了。

与蛋白质组学一线专家面对面，赶快报名参加第二期蛋白质组学技术与应用高级培训班！封闭和一抗的选择没有太多的选择余地——封闭前面介绍过了；一抗？现在的抗体产品说明书一般都有注明应用范围的，说明可以用于WB的就OK。

如果没有这些信息可以遵从以下原则：单抗专一性高，但是经过SDS-PAGE变性胶电泳的蛋白质可能由于原来的识别位点构象发生改变而不被识别，多抗不如单抗专一性高但更容易得到结果。

如果还有多种抗体选择，那当然是来源于兔或者小鼠抗体为好，因为后继的检测试剂盒一般都是针对兔鼠的居多，因而选择范围更大通用性也更强。

增强型DAB 显色试剂盒（20×）说明书货号：DA1016规格：3ml/10ml 试剂盒内容：DA1016-3DA1016-10保存温度溶液A3ml 10ml 2-8℃避光溶液B3ml 10ml 2-8℃避光溶液C 60ml 100ml ×22-8℃保存：2-8℃避光密闭保存，请勿冻存；复检期至少1年。

产品简介：增强型DAB 显色试剂盒是一种借助辣根过氧化物酶(HRP)，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western 、Southern 、Northern 、EMSA 等膜显色的试剂盒。

DAB 是辣根过氧化物酶的常用底物。

在辣根过氧化物酶的催化下，DAB 会产生棕色沉淀。

该棕色沉淀不溶于水和乙醇。

本产品采用特殊配方，灵敏度高，背景低，重复性好，储存稳定，使用方便，适合于蛋白印迹、免疫组织化学和免疫细胞化学、斑点印迹和生物芯片等的染色和显色反应。

操作说明（仅供参考）：1.对于组织切片或蛋白质印记膜，在与辣根过氧化物酶（HRP ）标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。

2.50μl 溶液A 、50μl 溶液B 、900μl 溶液C ，并混合均匀，即为DAB 工作液，1h 内使用。

3.向组织切片或膜上加入适量DAB 工作液，确保能充分覆盖样品。

4.室温避光孵育1-30分钟，显色时间过长可引起本底增高，故应密切观察显色过程（一般3-10分钟最理想），并在本底较浅且达到适当显色强度时以流水漂洗终止显色反应。

5.对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后可对其进行其他染料复染。

对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。

注意事项：1.DAB 溶液A 切勿冻存，以免影响染色效果；2.显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用；3.DAB 在常温下不稳定，每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱，以免因DAB 分解影响实验，或因渗漏造成实验环境污染。

hrp标记二抗的显色原理
HRP标记二抗显色原理
HRP标记二抗显色原理（Peroxidase Labeling Principle）是一种常用的分子生物学技术，该技术通过检测亚抗体保护体中的抗原，在显微镜下可见地观察抗原，从而实现细胞和分子解剖学研究的目的。

HRP标记二抗显色原理可用于检测细胞表面标志物，研究细胞内基因表达，可视化细胞和组织的结构，以及研究细胞间动态变化。

HRP标记二抗显色原理的基本原理是，通过将特定的抗原与抗体结合，将HRP标记的抗体酶结合到标记物上，以显示抗原的位置。

HRP（horseradishperoxidase）是一种多功能酶，其催化效率很高，能够快速催化氧化反应，从而将过氧化物转化为颜色物质。

HRP标记的特定抗体酶与特定抗原结合，当HRP标记的抗体与抗原结合时，HRP酶会催化反应，并将过氧化物转化为颜色物质，从而显示抗原的位置。

HRP标记二抗显色原理的应用范围非常广泛，主要用于细胞和组织分析，其中包括细胞表面标志物的检测，细胞和组织的结构研究，细胞间动态变化的检测，以及抗原的定位和检测。

此外，它还可以用于早期癌症诊断和疾病病理诊断。

HRP标记二抗显色原理是一种有效的分子生物学技术，能够有效地
检测抗原的位置，从而实现细胞和分子解剖学研究的目的。

该技术的应用范围很广，可以在细胞表面标志物检测，细胞结构研究，细胞间动态变化检测，以及早期癌症诊断和疾病病理诊断中得到广泛应用。

HRP 免疫组织化学试剂盒（兔）Horseradish Peroxidase Immunohistochemistry Kit (Rabbit)产品编号：E670016包装规格：100 Tests/500 Tests/1000 Tests 产品简介HRP 免疫组织化学试剂盒系列用于细胞或组织切片的免疫组织化学染色。

本试剂盒的检测原理为，HRP 标记的IgG (H+L)与组织切片上的一抗结合，再加入DAB 显色液，HRP 可以催化DAB 显色液中的H 2O 2分解，使联苯胺氧化变成联苯亚胺，在组织切片的一抗结合的抗原位点上出现黄色或棕黄色着色。

本试剂盒适用于石蜡切片、冰冻切片和细胞涂片。

产品特点1. 由于本试剂盒不再使用生物素，从而可以避免可能由生物素引起的非特异性背景显色，使得显色背景更清晰，阳性结果更特异。

2. 本试剂盒操作简便，适用于进行大批量切片免疫组织化学染色。

保存条件HRP 标记的山羊抗兔IgG -20°C 保存，其它试剂2-8°C 保存，保质期12个月。

试剂盒组成 组分100 Tests 500 Tests 1000 Tests 试剂 A 内源性过氧化物酶阻断剂 (Endogenous PeroxidaseBlocking Solution)10 mL 50 mL 100 mL 试剂 B 封闭液 (Blocking Solution)10 mL 50 mL 100 mL 试剂 C HRP 标记的山羊抗兔IgG (HRP Conjugated Goat Anti-Rabbit IgG)25 μL 125 μL 250 μL 试剂 D1 DAB 缓冲液 (20×) (DAB Buffer (20×))0.5 mL 2.5 mL 5 mL 试剂 D2 DAB 底物 (20×) (DAB Substrate (20×)) 0.5 mL 2.5 mL 5 mL 试剂 D3 DAB 色原 (20×) (DAB Chromogen (20×)) 0.5 mL2.5 mL5 mL操作步骤A. 免疫组织化学染色的准备工作 1. DAB 显色工作液的配制按照850 μL 蒸馏水分别加入试剂DAB 缓冲液(20×)、DAB 底物(20×)和DAB 色原(20×)各50 μL 的比例稀释，混匀，即为DAB 显色工作液。

免疫印迹法免疫印迹法（immunobiotting test，IBT）亦称酶联免疫电转移印斑法（enzyme linked immunoelectrotransfer blot，EITB），因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法 Southern blot 相类似，亦被称为Western-blot。

免疫印迹法分三个阶段进行。

第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷，在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳动速度就越快。

此阶段分离效果肉眼不可见（只有在染色后才显出电泳区带）。

第二阶段为电转移：将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上，选用低电压（100V）和大电流（1～2A），通电45min 转移即可完成。

此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。

第三阶段为酶免疫定位：将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜（相当于包被了抗原的固相载体）依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。

常用的HRP底物为3，3’-二氨基联苯胺（呈棕色）和4-氯-1-萘酚（呈蓝紫色）。

阳性反应的条带清晰可辨，并可根据SDS-PAGE时加入的分子量标准，确定各组分的分子量。

本法综合了SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特异性和敏感性，是一个有效的分析手段，不仅广泛应用于分析抗原组分及其免疫活性，并可用于疾病的诊断。

在艾滋病病毒感染中此法作为确诊试验。

抗原经电泳转移在硝酸纤维素膜上后，将膜切成小条，配合酶标抗体及显色底物制成的试剂盒，可方便地在实验室中供检测用。

根据出现显色线条的位置可判断有无针对病毒的特异性抗体。

一． SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）基本原理是聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体acr聚合成长链并通过双功能化合物甲叉双丙烯酰胺Bis交联而成的三维网状结构凝胶。

聚丙烯酰胺凝胶的机械性、弹性、透明度、粘着度取决于凝胶的总浓度，总浓度越大，平均孔径越小，机械强度越强。

细菌内毒素测定试剂盒（显色法）适用范围：用于体外定量测定人血液中的革兰氏阴性菌脂多糖含量。

.规格24人份/盒、48人份/盒、96人份/盒1.2 主要组成成分校准品靶值批特异，详见靶值单质控范围批特异，详见靶值单2.1 外观反应主剂、校准品、质控品为白色冻干块状物，样品处理液、溶解液、反应缓冲液和主剂复溶液为无色透明液体。

2.2 装量处理液、溶解液、反应缓冲液和主剂复溶液装量不小于标示量。

2.3 准确度试剂盒对细菌内毒素标准溶液检测的相对偏差不大于10%。

2.4 线性2.4.1在浓度[0.03EU/mL,0.5EU/mL]范围内，其线性相关系数的绝对值r≥0.990;2.4.2在浓度[0.125EU/mL,0.5EU/mL]范围内，其线性相对偏差的绝对值不大于10%。

2.4.3在浓度[0.03EU/mL,0.125EU/mL）范围内，其线性绝对偏差的绝对值不大于0.0125EU/mL。

2.5 空白限空白限不高于0.01EU/mL。

2.6 检出限检出限不高于0.03EU/mL。

2.7 重复性检测浓度为0.06EU/mL、0.125EU/mL的溶液，重复检测10次，其变异系数（CV）值均应不大于10％。

2.8 批内瓶间差2.8.1同批次10瓶反应主剂的测量值无显著性差异；2.8.2同批次10瓶校准品的测量值无显著性差异；2.8.3同批次10瓶质控品的测量值无显著性差异。

2.9 批间差批间差应不大于15％。

2.10 分析特异性制备浓度为250pg/mL的真菌（1-3）-β-D葡聚糖作为干扰物质，加入干扰物质前后的检测浓度差值的绝对值应不超过空白限。

2.11 质控品赋值有效性检测质控品，检测结果应在质控范围内。

2.12 溯源性根据GB/T21415的有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定等内容，溯源至国家细菌内毒素标准品（品种编号：150800）。

2.13 稳定性2.13.1 2℃～8℃保存，有效期36个月，取过有效期6个月以内的试剂盒进行测定，应符合2.3～2.8、2.10、2.11的要求；2.13.2 校准品溶解后，-20℃保存10天后进行测定，应符合2.3的要求；2.13.3 质控品溶解后，-20℃保存10天后进行测定，应符合2.11的要求；2.13.4反应主剂溶解后，立即冻存至-20℃保存7天后进行测定，应符合2.3、2.4的要求。