微生物检验实验室沙门菌属标准操作规程
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微生物检验实验室沙门菌属标准操作规程
1.概述
沙门菌属是一大群寄生于人和动物肠道中的形态、培养特性、生化反应和抗原构造相似的革兰阴性杆菌,其血清型别繁多、抗原复杂的肠道病原菌,分为6个亚属、2200种以上的血清型。伤寒沙门菌属亚属I,多价O抗血清D群,是临床上最为重要的沙门菌。
2.标本类型
粪便、血液等额标本。
3.鉴定
3.1 形态与染色:革兰阴性杆菌,菌体细长,大小为(0.7~1.5um)×(2~5um)。有周鞭毛,无芽胞,无荚膜。
3.2 培养特性:在麦康凯琼脂平板上形成无色、透明的菌落;SS琼脂平板上呈无色、透明,但大部分菌落中央呈黑色(产H2S);在XLD琼脂平板上也产生中央黑色的菌落(产H2S);HE琼脂平板上菌落呈蓝绿色。CHROMagar显色培养基上呈紫色菌落。半固体琼脂中均匀混浊生长,无穿刺线。
3.3 生化反应:氧化酶试验阴性,TSI为K/A;发酵葡萄糖,不发酵乳糖;IMViC-+--或-+-+,H2S试验阳性或阴性,动力、赖氨酸脱羧酶和硝酸盐还原试验阳性,鸟氨酸脱羧酶、尿素酶试验阴性,氰化钾(KCN)培养基不生长。
3.4 鉴别要点:
3.4.1 本菌特征:鉴别平板上无色透胆或半透明的菌落,TSI为K/A,H2S阳性或阴性,有动力,IMViC-+--或-+-+,尿素酶试验阴性。符合上述特性者,可通过血清凝集试验)作出诊断。
3.4.2 与志贺菌属的鉴别:少数伤寒沙门菌在TSI上H2S阴性,动力不明显,易与志贺菌属混淆,可用血清凝集反应相鉴别。
3.5 操作步骤
3.5.1 观察菌落特征,挑取可疑菌落,做TSI试验。参见细菌鉴定标准操作构规程。
3.5.2 血清学鉴定参见沙门菌血清学检测标准操作规程。
3.5.3 鉴定从SS琼脂平板上挑取可疑菌落,用微生物鉴定仪或传统生化法进行细菌鉴定。
4. 药敏
参见药物敏感性试验标准操作规程及CLSI M100-S20最新版本文件。
5. 质量控制
参见质量管理程序。
6.检验结果解释与分析
沙门菌的鉴定依赖于传统或商品化系统生化反应和血清学两种方法。若生化反应符合沙门菌,但A-F多价血清不
凝集,首先考虑是否存在表面抗原(Vi抗原),若有应将细菌制成菌悬疑,放入沸水中加热15-30分钟,冷却后再次做凝集试验。若去除Vi抗原后仍不凝集,应考虑是否为A-F 以外的菌群,应送专业实验室进行鉴定。
7.临床意义
主要通过污染食品和水源经口感染,引起人类和动物的沙门菌病,主要有3种类型。(1)胃肠炎:此型最为常见,引起轻型和暴发型腹泻,伴有发热、恶心和呕吐。(2)菌血症和败血症:多发生于儿童和免疫力低下的老年人,可经血流到达组织,导致脑膜炎、心内膜炎、胆囊炎、骨髓炎等。往往出现血培养阳性而粪便阴性。(3)肠热症:表现为发热,血培养或肥达氏反应阳性。
8.鉴定流程
参考文献
[1] 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明.2008
编写人:AAA、BBB 操作人:本室操作人员
批准人: