解析:正常人p53基因终于两个限制酶E的识别序列, 完全切割后可产生三个片段,患者p53基因中有一个限 制酶E的识别序列发生突变,且突变点位于识别位点内, 这样患者就只有一个限制酶E的识别序列,切割后产生 两个片段,分别为290+170=460对碱基,220对碱基。
PP
(4)如果某人的P53基因部分区域 经限制酶E完全切割后,共出现170、 220、290和460碱基对的四种片段,那 么该人的基因型是__P_+_P_-___(以P+表 示正常基因,Pn表示异常基因)。
(3)有利于选择的标记基因, 可以很方便地 知道外源DNA已经插入,以及把接受了载体的受体 细胞选出;
(4)具有促进外源DNA表达的调控区。
常用的运载体主要有两类: (1)噬菌体或某些动植物病毒 (2)细菌细胞质的质粒
大肠杆菌
噬菌体λ
当噬菌体感染宿主细胞后, 双链DNA分子通过 cos而成环状。在感染早期, 环状DNA 分子进行转 录.在此期间, 噬菌体有两条复制途径可供选择:
特点:专一性。 即一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序 列,并且能在特定的切点上切割DNA分子。
实例
如下图所示,大肠杆菌中的内切酶a可 以准确的在G和A之间将基因片段切开。
a
重播
DNA被限制酶切断后,两条单链的切口各有几 个伸出的核苷酸,它们正好互补配对,这样的切 口称“黏性末端”。被同一种限制酶切断的几个 DNA具有相同的黏性末端,能够通过碱基互补配对 原则进行配对。
课堂小结
(一)基因工程的原理 1.基因操作的“工具” (1)限制性内切酶-剪刀 (2)DNA连接酶-针线 (3)基因的运载工具-运载体
2.基因工程的步骤 (1)提取目的基因 (2)目的基因与运载体结合 (3)将目的基因导入受体细胞 (4)目的基因的检测和表达