高效液相色谱法测定五加参颗粒中紫丁香苷含量

ｄｏｉ：１０．１１７５１／ＩＳＳＮ．１００２－１２８０．２０１８．１０．１１高效液相色谱法测定刺五加甘草颗粒中紫丁香苷的含量姚路路１，张聪１，潘贵珍１，周德刚１，田晓龙２，张晓会１（１．洛阳惠中兽药有限公司，洛阳４７１０００；２．普莱柯生物工程股份有限公司，洛阳４７１０００）［收稿日期］２０１８－０６－１１㊀［文献标识码］Ａ㊀［文章编号］１００２－１２８０（２０１８）１０－００７８－０５㊀［中图分类号］Ｓ８５３．７［摘㊀要］㊀建立并验证了刺五加甘草颗粒中紫丁香苷含量的测定方法㊂采用高效液相色谱法，色谱柱为ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８（２５０ｍｍˑ４．６ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈－水梯度洗脱；检测波长为２６５ｎｍ；流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ；柱温为３０ħ㊂试验结果表明紫丁香苷进样浓度在０．０１２１８ ０．０８１２０ｍｇ／ｍＬ范围内，与峰面积呈良好的线性关系（ｒ＝０．９９９９），加样回收率在９６．４６％ ９９．５３％之间，平均回收率为９８．４％（ｎ＝６），ＲＳＤ为１．２％㊂试验建立的方法简便㊁准确度高㊁专属性强，可用于刺五加甘草颗粒中紫丁香苷含量的测定㊂［关键词］㊀刺五加；紫丁香苷；高效液相色谱法；含量；甘草作者简介：姚路路，女，硕士，从事新兽药质量标准研究工作㊂Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｌｌｃｐｕ＠１６３．ｃｏｍＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＳｙｒｉｎｇｉｎｉｎＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａＧｒａｎｕｌｅｓｂｙＨＰＬＣＹＡＯＬｕ－ｌｕ１，ＺＨＡＮＧＣｏｎｇ１，ＰＡＮＧｕｉ－ｚｈｅｎ１，ＺＨＯＵＤｅ－ｇａｎｇ１，ＴＩＡＮＸｉａｏ－ｌｏｎｇ２，ＺＨＡＮＧＸｉａｏ－ｈｕｉ１（１．ＬｕｏｙａｎｇＨｕｉｚｈｏｎｇＡｎｉｍａｌＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏ．，Ｌｔｄ，Ｌｕｏｙａｎｇ４７１０００，Ｃｈｉｎａ；２．ＰｕｌｉｋｅＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｏ．，Ｌｔｄ．Ｌｕｏｙａｎｇ４７１０００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓｙｒｉｎｇｉｎｉｎＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｇｒａｎｕｌｅｓｂｙＨＰＬＣｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｎｄｖａｌｉｄａｔｅｄ．ＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａｎＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｍｍˑ４．６ｍｍ，５μｍ）．Ｔｈｅｇｒａｄｉｅｎｔｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－ｗａｔｅｒ，ａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２６５ｎｍ．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１．０ｍＬ／ｍｉｎａｎｄｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ３０ħ．Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｏｆｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｆｏｒｓｙｒｉｎｇｉｎｗａｓ０．０１２１８ ０．０８１２０ｍｇ／ｍＬ（ｒ＝０．９９９９），ａｎｄｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９８．４％（ｎ＝６）ｗｉｔｈＲＳＤｏｆ１．２％．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅｗｉｔｈｈｉｇｈｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓｙｒｉｎｇｉｎｉｎＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｇｒａｎｕｌｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ；ｓｙｒｉｎｇｉｎ；ＨＰＬＣ；ｃｏｎｔｅｎｔ；Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ㊀㊀刺五加为五加科植物刺五加Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎ⁃ｔｉｃｏｓｕｓ（Ｒｕｐｒ．ｅｔＭａｘｉｍ．）Ｈａｒｍｓ的干燥根和根茎或茎，具有抗炎㊁提高机体免疫力㊁抗病毒㊁抗过敏等功效，刺五加多糖对鸡免疫功能具有显著的增强作用，其中紫丁香苷是刺五加的重要活性成分［１－２］㊂甘草（ＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓＦｉｓｃｈ．）为豆科植物甘草属的干燥根和根茎，甘草中的甘草酸具有抗炎㊁抗过敏㊁免疫调节㊁抗病毒等多种生物活性［３－４］，总黄酮有抗慢性不可预知应激抑郁作用［５］，多糖具有调节机体免疫等作用［６］㊂刺五加甘草颗粒是由刺五加和甘草两味药材组成，采用水提醇沉法，上清液减压浓缩后，加入适量的辅料，制粒即得，可提高畜禽免疫力，用于鸡传染性支气管炎的治疗㊂紫丁香苷作为刺五加的重要活性控制指标，文献中报道的刺五加中紫丁香苷含量测定主要为刺五加药材或刺五加单方制剂中紫丁香苷的含量测定［７－１３］，对刺五加甘草颗粒中紫丁香苷的含量测定方法进行了相关研究，建立了刺五加甘草颗粒中紫丁香含量的高效液相色谱测定方法，可为刺五加甘草颗粒质量标准的建立提供参考㊂１㊀仪器与试药１．１㊀仪器与试剂㊀Ｗａｔｅｒｓｅ２６９５高效液相色谱仪，配２４８９型紫外检测器，美国Ｗａｔｅｒｓ公司；ＫＱ－５００超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司，ＡＢ１３５－Ｓ型电子分析天平，瑞士梅特勒托利多公司；乙腈，ＨＰＬＣ级，ＭＥＲＫ公司；水为超纯水㊂１．２㊀试药㊀紫丁香苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：１１１５７４－２００６０３，含量：１００％）㊁刺五加甘草颗粒（洛阳惠中兽药有限公司，批号：２０１７０８０１，２０１７０８０２，２０１７０８０３，规格：每１００ｇ相当于原生药１６０ｇ）㊂２㊀方法与结果２．１㊀色谱条件与系统适用性㊀色谱柱：ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒ⁃ｂａｘＳＢ－Ｃ１８（２５０ˑ４．６ｍｍ，５μｍ）；梯度洗脱，流动相：乙腈－水（０－７ｍｉｎ，乙腈１１％；７－８ｍｉｎ，乙腈由１１％上升到４０％；８－１３ｍｉｎ，乙腈４０％；１３－１４ｍｉｎ，乙腈由４０％下降到１１％；１４－２０ｍｉｎ，乙腈１１％），流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：３０ħ；检测波长：２６５ｎｍ；进样量：１０μＬ㊂理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于５０００㊂２．２㊀溶液的制备２．２．１㊀对照品贮备液的制备㊀取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加甲醇制溶解制成每１ｍＬ含１ｍｇ的溶液，即得㊂２．２．２㊀对照品溶液的制备㊀精密吸取对照品贮备液１ｍＬ，置２５ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得㊂２．２．３㊀供试品溶液的制备㊀取本品，研细，称取粉末约１．５ｇ，精密称定，置小烧杯中，用５０％甲醇２０ｍＬ，分次溶解，转移至２５ｍＬ量瓶中，超声处理（功率２５０Ｗ，频率５０ｋＨｚ）３０ｍｉｎ，取出，放冷，加５０％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得㊂２．２．４㊀阴性对照溶液的制备㊀按处方制备缺刺五加的阴性对照样品，按 ２．２．３ 项下方法制成阴性对照溶液，２．３㊀专属性试验㊀分别取上述对照品溶液㊁供试品溶液及阴性对照溶液各１０μＬ注入液相色谱仪，记录色谱图（图１）㊂从图中可见，供试品溶液在与对照品色谱中紫丁香苷相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，阴性对照在紫丁香苷相应保留时间处无干扰峰㊂２．４㊀线性试验㊀取 ２．２．１ 项下对照品贮备液，分别精密量取对照品贮备液适量，加甲醇稀释，制得浓度为０．０１２１８，０．０２０３０，０．０４０６０，０．０６０９０，０．０８１２０ｍｇ／ｍＬ的一系列溶液，分别精密吸取１０μＬ注入液相色谱仪，记录色谱图㊂以进样浓度（Ｃ，ｍｇ／ｍＬ）为横坐标，峰面积（Ａ）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Ａ＝３ˑ１０７Ｃ－１３８００，ｒ＝０．９９９９㊂表明紫丁香苷进样量在０．０１２１８ ０．０８１２０ｍｇ／ｍＬ范围内与峰面积呈良好的线性关系㊂２．５㊀精密度试验㊀取对照品溶液（０．０４０６０ｍｇ／ｍＬ），精密吸取１０μＬ注入液相色谱仪，连续进样６针，记录峰面积，结果ＲＳＤ为０．１％，表明仪器精密度良好㊂２．６㊀重复性试验㊀取刺五加甘草颗粒（批号：２０１７０８０１），按照 ２．２．３ 项制备供试品溶液，分别制备６份，精密吸取１０μＬ注入液相色谱仪，记录峰面积，结果ＲＳＤ为０．９％，表明方法重复性良好㊂２．７㊀溶液稳定性试验㊀取刺五加甘草颗粒（批号：２０１７０８０１），按照 ２．２．３ 项制备供试品溶液，分别于０㊁２㊁４㊁８㊁１２㊁２４ｈ测定峰面积，结果ＲＳＤ为０．６％，表明供试品溶液在２４ｈ内稳定㊂１．紫丁香苷对照品２．供试品３．阴性对照１．ＲｅｆｅｒｅｎｃｅＳｕｂｓｔａｎｃｅｏｆＳｙｒｉｎｇｉｎ２．Ｔｅｓｔｓａｍｐｌｅ３．ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ图１㊀专属性考察色谱图Ｆｉｇ１㊀ＴｈｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｏｆＳｐｅｃｉｆｉｃｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ２．８㊀加样回收率试验㊀取已知含量的刺五加甘草颗粒样品６份（批号：２０１７０８０１，紫丁香苷含量：０．７３８ｍｇ／ｇ），每份约０．８ｇ，精密称定，置小烧杯中，各精密加入０．１０１５ｍｇ／ｍＬ的紫丁香苷对照品溶液５ｍＬ，按照 ２．２．３ 项制备供试品溶液，按含量测定方法操作，精密吸取１０μＬ注入液相色谱仪，记录色谱图，测定样品含量并计算回收率，结果见表１，加样回收率在９６．４６％ ９９．５３％之间，平均值为９８．４％，ＲＳＤ为１．２％，表明方法准确度良好㊂２．９㊀耐用性试验㊀取刺五加甘草颗粒（批号：２０１７０８０１），按照 ２．２．３ 项制备供试品溶液，当柱温㊁流速发生微小变化以及使用不同型号的色谱柱，分别测定样品的峰面积，精密吸取１０μＬ注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表２㊂结果表明，当柱温㊁流速发生微小变化以及使用其他型号的色谱柱时，对含量测定结果基本无影响，表明方法耐用性良好㊂表１㊀回收率试验结果Ｔａｂ１㊀Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｒｅｃｏｖｅｒｙｔｅｓｔ编号样品称量／ｇ紫丁香苷含量／ｍｇ对照品加入量／ｍｇ测得总量／ｍｇ回收率／％均值／％ＲＳＤ／％１０．８４２４３０．６２１８０．５０７５１．１２６９９９．５３２０．７８３４８０．５７８３０．５０７５１．０８２０９９．２７３０．７８７６７０．５８１３０．５０７５１．０８４０９９．０４４０．７５１５８０．５５４７０．５０７５１．０４４３９６．４６５０．７８２６３０．５７７６０．５０７５１．０７８６９８．７１６０．７５３０４０．５５５８０．５０７５１．０４９９９７．３５９８．４１．２表２㊀耐用性试验结果Ｔａｂ２㊀Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｄｕｒａｂｉｌｉｔｙｔｅｓｔ变化项目变化情况含量／（ｍｇ㊃ｇ－１）柱温／ħ２５０．７４１３００．７３８３５０．７３９流速／（ｍＬ㊃ｍｉｎ－１）０．８０．７４２１．００．７３８１．２０．７３９色谱柱变化ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８０．７３８ＡｇｉｌｅｎｔＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ－Ｃ１８０．７４１ＡｇｉｌｅｎｔＸｂｒｉｄｇｅＣ１８０．７２６２．１０㊀三批样品含量测定㊀取刺五加甘草颗粒样品（２０１７０８０１，２０１７０８０２，２０１７０８０３），按 ２．２．３ 项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取１０μＬ注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算刺五加甘草颗粒中紫丁香苷的含量，三批样品测定结果见表３㊂表３㊀样品含量测定结果Ｔａｂ２㊀Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｓａｍｐｌｅｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ批号含量／（ｍｇ㊃ｇ－１）２０１７０８０１０．７３８２０１７０８０２０．７１６２０１７０８０３０．７５８３㊀讨论与结论３．１㊀检测波长的选择㊀通过紫外扫描，紫丁香苷在２６５ｎｍ处有最大吸收，因此选择２６５ｎｍ为检测波长㊂３．２㊀提取溶剂及提取时间的选择㊀参考‘中国兽药典“二部中刺五加药材及刺五加浸膏含量测定项下供试品的处理方法，比较了甲醇㊁７５％甲醇㊁５０％甲醇作为提取溶剂对紫丁香苷含量的影响，结果５０％甲醇对紫丁香苷的提取效果最好，因此选择５０％甲醇作为提取溶剂；同时考察了超声１０㊁２０㊁３０ｍｉｎ对紫丁香苷含量的影响，结果超声３０ｍｉｎ紫丁香苷的提取效果最好，因此选择超声３０ｍｉｎ㊂３．３㊀色谱条件的考察㊀本试验考察了甲醇－水（２０ʒ８０）㊁乙腈－水（１１ʒ８９）㊁乙腈－０．１％磷酸溶液，结果发现甲醇－水（２０ʒ８０）㊁乙腈－０．１％磷酸溶液条件下，阴性对照品在紫丁香苷对照品相应的保留时间处有干扰，乙腈－水（１１ʒ８９）条件下阴性对照品在紫丁香苷对照品相应的保留时间处无干扰，重复进样发现阴性对照品在紫丁香苷对照品相应保留时间处会有干扰，研究发现阴性对照品中干扰峰保留时间过长，在第二针色谱图中出峰，因此为确保阴性对照品中色谱峰能被完全洗脱，将流动相改为梯度洗脱，紫丁香苷的保留时间为８ｍｉｎ左右，与相邻峰分离度好，峰型良好㊂采用高效液相色谱法测定刺五加甘草颗粒中紫丁香苷的含量，方法简便㊁准确度高㊁专属性强㊁重现性好㊂参考文献：［１］㊀白雪，胡文忠，姜爱丽，等．刺五加活性成分的研究进展［Ｊ］．食品工业科技，２０１６（４）：３７８－３８１．㊀ＢａｉＸ，ＨｕＷＺ，ＪｉａｎｇＡＬ，ｅｔａｌ．Ｒｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅｏｎａｃａｎｔｈｏ⁃ｐａｎａｘｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ［Ｊ］．ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＦｏｏｄＩｎｄｕｓｔｙ，２０１６（４）：３７８－３８１．［２］㊀张英楠，杨树宝，单春兰，等．刺五加多糖对雏鸡脾脏中Ｔ㊁Ｂ淋巴细胞定位分布的影响［Ｊ］．中国兽药杂志，２０１６，５０（４）：３５－４０．㊀ＺｈａｎｇＹＮ，ＹａｎｇＳＢ，ＳｈａｎＣＬ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｏｎｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＴａｎｄＢｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｉｎｃｈｉｃｋｅｎｓｐｌｅｅｎ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＤｒｕｇ，２０１６，５０（４）：３５－４０．［３］㊀高雪岩，王文全，魏胜利，等．甘草及其活性成分的药理活性研究进展［Ｊ］．中国中药杂志，２００９，３４（２１）：２６９５－２７００．㊀ＧａｏＸＹ，ＷａｎｇＷＱ，ＷｅｉＳＬ，ｅｔａｌ．ＲｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅｏｎｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ［Ｊ］．ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，２００９，３４（２１）：２６９５－２７００．［４］㊀韩瑶聃，王彬，王政雨，等．甘草酸药理作用的研究进展［Ｊ］．中国新药杂志，２０１２，２１（２１）：２４９９－２５０５．㊀ＨａｎＹＤ，ＷａｎｇＢ，ＷａｎｇＺＹ，ｅｔａｌ．Ｒｅｃｅｎｔｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃａｃｉｄ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒ⁃ｎａｌｏｆＮｅｗＤｒｕｇｓ，２０１２，２１（２１）：２４９９－２５０５．［５］㊀华冰，程瑞凤，景晶，等．甘草总黄酮抗大鼠应激抑郁作用及对突触可塑性关键蛋白ＳＹＰ／ＰＳＤ－９５的调节作用［Ｊ］．中国新药杂志，２０１４，２３（１０）：１１８０－１１８７．㊀ＨｕａＢ，ＣｈｅｎｇＲＦ，ＪｉｎｇＪ，ｅｔａｌ．ＡｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔｅｆｆｅｃｔｏｆｌｉｃｏｒｉｃｅｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓｏｎｓｔｒｅｓｓ－ｉｎｄｕｃｅｄｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｔｈｅｋｅｙｐｒｏｔｅｉｎＳＹＰ／ＰＳＤ９５ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｓｙｎ⁃ａｐｔｉｃｐｌａｓｔｉｃｉｔｙｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｅｗＤｒｕｇｓ，２０１４，２３（１０）：１１８０－１１８７．［６］㊀刘三侠，吴俊伟，林永乐．甘草多糖药理作用研究进展［Ｊ］．中国兽药杂志，２０１３，４７（１）：６４－６７．㊀ＬｉｕＳＸ，ＷｕＪＷ，ＬｉｎＹＬ．Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉ⁃ｃａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＤｒｕｇ，２０１３，４７（１）：６４－６７．［７］㊀杨红．刺五加胶囊中紫丁香苷含量的ＨＰＬＣ测定［Ｊ］．时珍国医国药，２０１３，２４（２）：４０４－４０５．㊀ＹａｎｇＨ．ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｙｒｉｎｇｉｎｉｎＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｃａｐｓｕｌｅ．ＬｉｓｈｉｚｈｅｎＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＭａｔｅｒｉａｌＭｅｄｉｃａＲｅｓｅａｒｃｈ［Ｊ］．２０１３，２４（２）：４０４－４０５．［８］㊀任晋，廖娴，谢镇山，等．ＨＰＬＣ法测定刺五加㊁五加皮与红毛五加皮中３种成分的含量［Ｊ］．广东药学院学报，２０１５，３１（５）：６０２－６０６．㊀ＲｅｎＪ，ＬｉａｏＸ，ＸｉｅＺＳ，ｅｔａｌ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｃｏｎｓｔｉｔｕ⁃ｅｎｔｓｉｎＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎｔｉｃｏｓｉＲａｄｉｘｅｔＲｈｉｚｏｍａｓｅｕＣａｕｌｉｓ，Ａｃ⁃ａｎｔｈｏｐａｎａｃｉｓＣｏｒｔｅｘａｎｄＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｇｉｒａｌｄｉｉＣｏｒｔｅｘｂｙＨＰＬＣ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１５，３１（５）：６０２－６０６．［９］㊀赵敏，郭天琦，唐金艺，等．刺五加片剂质量标准提高的研究［Ｊ］．现代中药研究与实践，２０１５，２９（５）：５９－６２．㊀ＺｈａｏＭ，ＧｕｏＴＱ，ＴａｎｇＪＹ，ｅｔａｌ．ＳｔｕｄｙｏｎｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｓｔａｎｄａｒｄｓｏｆＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｔａｂｌｅｔ．ＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｎＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅｓ，２０１５，２９（５）：５９－６２．［１０］王绍青．刺五加浸膏指纹图谱及多成分含量测定方法的研究［Ｄ］．黑龙江：黑龙江中医药大学，２０１４：１７－５７．㊀ＷａｎｇＳＱ．ＭｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎｔｉ⁃ｃｏｓｕｓｅｘｔｒａｃｔｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔａｎｄｍｕｌｔｉｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｃｏｎｔｅｎｔ［Ｄ］．Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ：ＨｅｉｌｏｎｇｊａｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０１４：１７－５７．［１１］刘莹．刺五加浸膏中指标性成分的含量测定及富集方法研究［Ｄ］．黑龙江：黑龙江中医药大学，２０１２：２５－３２．㊀ＬｉｕＹ．Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎｔｉｃｏｃｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｓｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓｉｎｄｅｘｅｓｉｎｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓｒｅｓｅａｒｃｈ［Ｄ］．Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ：ＨｅｉｌｏｎｇｊａｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２：２５－３２．［１２］孔祥臣，闫秋野，林兰波，等．ＨＰＬＣ法测定刺五加浓缩液中紫丁香苷的含量［Ｊ］．中国实用医药，２０１０，５（６）：６５－６６．㊀ＫｏｎｇＸＣ，ＹａｎＱＹ，ＬｉｎＬＢ，ｅｔａｌ．ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｙｒｉｎｇｉｎｉｎｃｉｗｕｊｉａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄｌｉｑｕｉｄｂｙＨＰＬＣ［Ｊ］．ＣｈｉｎａＰｒａｃｔｉｃａｌＭｅｄｉｃａｌ，２０１０，５（６）：６５－６６．［１３］史磊，张涛，李峰，等．ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定刺五加滴丸中紫丁香苷含量研究［Ｊ］．山东中医杂志，２０１４，３３（１１）：９２６－９２８．㊀ＳｈｉＬ，ＺｈａｎｇＴ，ＬｉＦ，ｅｔａｌ．ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓｙｒｉｎｇｉｎｉｎｃｉｗｕｊｉａｄｒｏｐｐｉｎｇｐｉｌｌｂｙＨＰＬＣ［Ｊ］．ＳｈａｎｄｏｎｇＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｒａｄｉ⁃ｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０１４，３３（１１）：９２６－９２８．（编辑：陈希）。

HPLC法测定刺五加软胶囊中紫丁香苷的含量作者：叶新崔玉海李绍铭孙玉艳李男来源：《中国新技术新产品》2011年第16期摘要：目的：建立了刺五加软胶囊中紫丁香苷的含量测定方法。

方法：采用高效液相法测定，使用Diamonsil C18(250mm×4.6mm, 5μm)色谱柱,流动相：甲醇-水（20:80）,流速：1.0ml/min,检测波长:265nm。

结果：紫丁香苷对照品在16.28?滋g/ml～146.52?滋g/ml范围内有良好线性关系(r=0.9998),平均回收率为98.79%, RSD=1.03%(n=6)。

结论该法操作简便、准确、重现性好，可作刺五加软胶囊中紫丁香苷的质量控制方法。

关键词：紫丁香苷；五加软胶囊；高效液相色谱法中图分类号：TU246.1+3文献标识码：A刺五加软胶囊是由刺五加浸膏、精制玉米油等成分混合制成的中药软胶囊，具有益气健脾、补肾安神的作用。

临床用于体虚乏力，食欲不振，腰膝酸痛，失眠多梦。

本文参考有关文献,建立了高效液相色谱法（HLPC）测定刺五加软胶囊中紫丁香苷的含量方法,实验结果表明，该法操作简便、准确、重现性好，可作刺五加软胶囊中紫丁香苷的质量控制方法。

1仪器与试药1.1 仪器Agilent1100型高效液相色谱仪； TU-1901 紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；十万分之一天平(梅特勒)。

1.2 试药。

紫丁香苷对照品(中国药品生物制品检定所提供批号111574-200502供含量测定用)；刺五加软胶囊（自制批号: 20100301、20100302、20100303 规格为0.3g)；甲醇为色谱纯,水为去离子水。

2方法与结果2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Diamonsil C18(250mm×4.6mm, 5μm)；流动相：甲醇：水（20:80）；流速：1.0ml/min；检测波长：265nm；柱温：室温；进样量：10μl，理论板数以紫丁香苷计不得低于2000。

HPLC法测定刺五加浓缩液中紫丁香苷的含量作者：孔祥臣闫秋野林兰波王厚伟来源：《中国实用医药》2010年第06期【摘要】目的采用高效液相色谱法测定刺五加浓缩液中紫丁香苷的含量。

方法选用AgilentC18色谱柱,流动相:甲醇-水(20:80);检测波长:265 nm。

结果紫丁香苷对照品线性范围0.130 5～1.044 0μg(r=1.000 0),平均回收率为99.42%,RSD=0.82%(n=6)。

结论 HPLC法简便,准确,重现性好。

可用于刺五加浓缩质量控制。

【关键词】刺五加浓缩液;紫丁香苷;HPLCDetermination of syringin in ciwujia concentrated liquid by HPLCKONG Xiang-chen, YAN Qiu-ye,LIN Lan-bo,et al.Heilongjiang agricultural college of vocational technology, Heilongjiang Jiamusi 154002,China【Abstract】 Objective A HPLC methods was developed for the contents determination of Syringin in Ciwujia Concentrated Liquid.Methods The AgilentC18 column was used with a mobil phase was Methanol-Water(20:80).The detection Wavelength was 265nm.ResultsThe Linear range of reference substance of Syringin was 0.130 5-1.044 0 μg(r=1.000 0),The average recovery rate was 99.42%and the RSD=0.82%(n=6).Conclusion The method simple,sensitive and accurate.It can be used for quality of Ciwujia Concentrated Liquid.【Key words】 Ciwujia Concentrated Liquid;Syringin;HPLC作者单位:154002黑龙江省农业职业技术学院刺五加浓缩液为生产刺五加注射液的原料,厂方内控标准仅采用可见-紫外分光光度法测定总黄酮的含量,笔者采用高效液相色谱法对刺五加浓缩液中活性成分紫丁香苷进行含量测定,方法简便,结果准确,可做为刺五加浓缩液的质量控制方法。

HPLC法测定不同采收期刺五加叶中丁香苷的含量陆珞;阎墨;赵晓红;丛登立;鞠会艳【期刊名称】《人参研究》【年(卷),期】2011(023)003【摘要】目的为了制定刺五加的质量标准提供参考数据。

方法利用Alltech高效液相色谱仪对不同采收期刺五加的丁香含量进行测定。

色谱柱为ODS-C18（4.6mm×250mm,5um）;测定丁香苷的流动相为乙腈：水（20：80）;体积流量：1ml/min;柱温：室温;检测波长：265nm。

结果丁香苷在0.1-2.0μg与峰面积具有良好的线性关系。

结论本方法简便可靠、快速、重现性好,适用于刺五加中丁香苷的含量测定,为进一步研究刺五加成分及其药理作用提供了参考数据。

【总页数】4页(P15-18)【作者】陆珞;阎墨;赵晓红;丛登立;鞠会艳【作者单位】吉林省食品药品审评中心,吉林长春130062;吉林省食品药品审评中心,吉林长春130062;吉林省食品药品审评中心,吉林长春130062;吉林大学药学院植物科学学院,吉林长春130041;吉林大学药学院植物科学学院,吉林长春130041【正文语种】中文【中图分类】TS207.3【相关文献】1.HPLC法测定刺五加软胶囊中紫丁香苷的含量 [J], 叶新;崔玉海;李绍铭;孙玉艳;李男2.RP-HPLC法测定刺五加注射液中紫丁香苷、紫丁香树脂苷的含量 [J], 焦正花;顾秀琰;杨小源;金录胜3.用HPLC法测定刺五加根叶中紫丁香苷的质量分数 [J], 张崇禧;周燕霞;鞠会艳;丛登立;郑友兰4.HPLC法测定紫丁香树叶中丁香苦苷的含量 [J], 尉小慧;翟卫峰;沈敏捷;张树军;吴斐华;王峥涛5.RP-HPLC法测定刺五加滴丸中紫丁香苷含量研究 [J], 史磊;张涛;李峰;郭琪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高效液相色谱法测定复方刺五加糖浆中紫丁香苷含量Determination of Syringin in Compound Ciwujia Syrup by HPLCCAI Xiao-min,HE Jie.The institude of drugscontrol,Hanzhong 723000,China【】 Objective To study determination method of Syringin in Compound Ciwujia Syrup by HPLC.Methods Using VP-ODS C18 column(5 μm 4．6×150 mm),the mobile phase was methanol-water(8:2)at the rate 1．0 ml/min,the wavelength of detector was 265 nm.Results The linear rang was 0．080 5~1．61 μg(r=0．999 7).The average recovery was 97．4%(RSD=0．55%，n=6).Conclusion The method is simple,rapid,reliable.It can be used for the quality control of Compound Ciwujia Syrup.复方刺五加糖浆为医院制剂，其处方中含有刺五加浸膏、五味子、蔗糖及苯甲酸钠。

其中有效成分之一的紫丁香苷(即刺五加苷B)具有抗疲劳的作用，对中枢神经的兴奋与抑制均有影响。

据文献报道刺五加的茎叶中紫丁香苷的含量大于刺五加苷D[1]，且紫丁香苷的对照品易于购得，故采用高效液相色谱法进行其含量测定[2]，结果发现此方法操作简便，快速，结果准确可靠，能有效的控制药品质量。

1 仪器与试药1．1 仪器日本岛津公司LC-2010 液相色谱仪； sartorius CP225D 电子天平。

应用ＨＰＬＣ法测定刺五加中紫丁香苷的含量作者：王晓鹏来源：《中国新技术新产品》2008年第16期摘要：目的：采用高效液相色谱法测定不同产地刺五加中紫丁香苷的含量。

方法：采用C18柱，流动相：甲醇-水（20：80），流速：1.0ml/min，检测波长：265nm。

结果：伊春产刺五加紫丁香苷含量最高；但五个产地中刺五加紫丁香苷含量均远高于2005年版《中华人民共和国药典》一部中关于刺五加紫丁香苷含量的要求。

关键词：高效液相色谱法；刺五加；紫丁香苷刺五加为五加科植物刺五加的干燥根及根茎或茎[1]。

国内外对刺五加的药理作用研究表明：刺五加可增强机体非特异性防御能力，除具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射损伤及抗疲劳等作用外，还可治疗心血管疾病、糖尿病及神经衰弱等症[2]。

本文以紫丁香苷含量为指标，采用高效液相色谱法对不同产地刺五加中紫丁香苷进行含量测定，研究紫丁香苷在不同产地的含量分布规律，为刺五加药材的优质供应提供理论依据及参考。

1 仪器与药品岛津LC-2010AHT型高效液相色谱仪；试剂：甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余试剂为分析纯。

紫丁香苷由中国药品生物制品检定所提供；样品分别在黑龙江尚志、林口、伊春、铁力、绥棱采集，阴干，粉碎，过60目筛。

2 色谱条件色谱柱：HYPERSIL C18 （4.6mm× 150mm5?m）；检测波长：265nm；流速：1.0ml/min；流动相：甲醇-水（20：80）。

3 线性关系考察3.1对照品溶液的制备精密称取紫丁香苷约3.15mg置25ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

3.2标准曲线绘制取紫丁香苷对照品溶液分别进样1、3、5、10、15、20?l ，以进样量与峰面积进行线性回归，线性研究结果见表-1。

以进样量（?滋g）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=2.354×105X+7675 (r=0.9999)；线性范围为0.126～2.520?滋g。

HPLC梯度洗脱法同时测定刺五加注射液中紫丁香苷与刺五加苷E含量【摘要】采用hplc梯度洗脱法测定刺五加注射液中紫丁香苷与刺五加苷e含量，表明：样品经cosmosil c18柱，使用紫外检测器（波长220nm），以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以0.1%磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱，样品中紫丁香苷、刺五加苷e与相邻杂质峰分离度大于1.5，平均回收率90.5-99.8%之间，变异系数rsd<4%。

【关键词】hplc 梯度洗脱；紫丁香苷；刺五加苷e1引言刺五加为五加科植物刺五加的干燥茎。

其味辛，具有益气健脾，补肾安神的作用。

质量标准中把紫丁香苷、刺五加苷e含量作为评价质量的重要指标。

黑龙江金九药业生产刺五加注射液近30年历史，长期以来一直对刺五加注射液有效成份进行深入的研究。

本实验采用高效液相色谱法中梯度洗脱方式对成份紫丁香苷与刺五加苷e进行含量测定。

2 实验部分2.1材料及方法2.1.1 仪器和试剂美国安捷伦1100系列液相色谱仪，安捷伦1100系列液相色谱仪专用工作站软件（安捷伦公司）；bp211d塞多利斯电子天平。

甲醇、乙腈（美国迪马公司）；对照品（中国食品药品生物制品检定所）2.1.2实验方法2.1.2.1对照品溶液的配制取紫丁香苷对照品、刺五加苷e对照品适量，精密称定，分别加50%甲醇制成每1ml各含紫丁香苷40μg、刺五加苷e40?g的溶液，即得。

3结果与讨论3.1紫丁香苷、刺五加苷e含量的测定3.1.1 色谱条件的选择色谱柱为以十八烷基键合硅胶为填充剂柱（2.1mm×150mm,5μm）；以乙腈为流动相a，以0.1%磷酸溶液为流动相b，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；检测波长为220nm。

理论板数按紫丁香苷峰计算不低于10000；刺五加苷e 峰与相邻杂质峰的分离度应不小于1.5。

3.1.2 线性关系的考察3.1.2.1考察项目以刺五加提取液紫丁香苷、刺五加苷e含量测定验证该检验方法的线性。

羁动态本栏目主要是及时报道国家批准的新兽药和企业内部研制的新产品（包括原料药、成品药、疫苗及各种检测试纸），为广大读者提供最新的兽药信息，着重介绍药物的特点、作用机理、作用用途及临床应用效果。

欢迎来稿！E_mail:sysc.**********引领兽药市场/直面兽药销售/沟通兽药产销/探索营销之道商丘爱己爱牧生物科技股份有限公司，2015年7月30日在新三板挂牌上市，河南省兽药行业首家登录新三板的动保企业，证券代码:833100。

累计申请专利31件；共授权23件，其中发明专利4项，实用新型专利19项；注册商标20件；获新兽药证书2项；获河南省科技进步奖1项；获教育厅科学技术奖1项。

目前已获得国家三类新兽药证书2项，在研新兽药项目4项。

国家三类新兽药——北芪五加颗粒陈五常赵留涛魏红艳韩志霞商丘爱己爱牧生物科技股份有限公司北罠五加颗粒（商品名：爱乐佳）为黄罠、刺五加复方中药提取物，2015年通过农业部审批获得国家三类新兽药证书（2015新兽药证字64号）。

本产品还荣获科学技术成果证书、教育厅科学技术二等奖、省政府科学技术进步三等奖、处方工艺双专利、爱己爱牧与郑大产学研结晶、质发证日期k日证号(2015)中华人民共和国新兽药注册证书新兽药名称：北苗五加颗粒注册分类：三类研制单位，郑州大学、商丘爱己爱牧生物科技股份有限公司、河南碧云天动物药业有限公司、津）生物药业有限公司、郑州百瑞动物药业有限公司、河南省兽药饲料监察所根据《兽药管理条例》，该兽药符合规定，准予注册，特发此证,70^分；刺五加具有免疫调节、抗肿瘤、抗疲劳、抗辐射等作用；刺五加主要含有刺五加总昔,包括紫丁香昔、异嗪皮噪和刺五加昔E等成分遥黄罠和刺五加功效各有特点,黄罠益肺固表,党参健脾补气；刺五加的功效与作用是益气健脾、补肾安量标准制定、发表应用论文7篇。

北罠五加颗粒有补中益气、扶正祛邪的功效,用于提高禽机体免疫力,配合疫苗使用提高疫苗免疫效果遥北罠五加颗粒处方由黄罠和刺五加两味药材组成,其中黄罠具有益气健脾、补肾、安神功效。

HPLC法同时测定五加芪菊颗粒中刺五加、菊花含量敖立实【摘要】目的：建立高效液相色谱法同时测定五加芪菊颗粒中刺五加（以紫丁香苷计）和菊花（以3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸计）含量的方法，为相关研究提供方法学参考。

方法采用DiamonsilC18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5µm），流动相：甲醇为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱。

检测波长为348 nm。

结果紫丁香苷和3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸的线性范围分别为0.10~40.0μg/mL（r=0.9984）、0.05~10.0μg/mL（r=0.9991），方法回收率分别为98.76%（n=6）、94.26%（n=6）。

结论所建立的方法准确、灵敏度高、重现性好，在同一试验过程中，同时测定五加芪菊颗粒中刺五加、菊花含量。

%ObjectiveTo establish a method for simultaneously determining the content of acanthopanax (as measured by syringin), Chrysanthemum(as measure by (-)-3,5-Dicaffeoyl quinic acid) in Wujia Qijugranule.MethodsSimultaneously determined by HPLC on DiamonsilC18 (250 mm×4.6 mm,5 µm) by mobile phase of methanol (A) and 0.1% phosphonic acid solution (B) with gradient elution. Detection wavelength is 348 nm.ResultsThe linear concentration ranges of the calibration curves for syringin and (-)-3,5-dicaffeoyl quinic acid were 0.10~40.0μg/mL(r=0.9984),0.05~10.0 μg/mL(r=0.9991), respectively. The average recoveries for syringin and (-)-3,5-dicaffeoyl quinic acid were 95.42%(n=6),91.73%(n=6), respectively.ConclusionThe method is accurate, highly sensitive and reproducible for simultaneously determination of content for acanthopanax and chrysanthemum in a single run by HPLC.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2014(000)020【总页数】2页(P35-36)【关键词】五加芪菊颗粒;高效液相色谱法;刺五加;菊花;紫丁香苷;3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸【作者】敖立实【作者单位】吉林省白城市食品药品检验所，吉林白城 137000【正文语种】中文【中图分类】R914.1五加芪菊颗粒具有益气健脾，消食导滞的功效，用于脾虚食滞所致的高血脂症的治疗[1]。